Перенесення гена біосинтезу інтерферону-α2b в рослини цикорію (Cichorium intybus L.) методом агробактеріальної трансформації
Генетична трансформація цикорію C. intybus L. становить інтерес з огляду на можливість створення рослин-імуномодуляторів, які містять ген інтерферону-α2b. Для отримання таких рослин оптимізовано умови регенерації цикорію сорту Пала росса та здійснено трансформацію за допомогою Agrobacterium tumefaci...
Збережено в:
| Дата: | 2009 |
|---|---|
| Автори: | , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Українська |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2009
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/5647 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Перенесення гена біосинтезу інтерферону-α2b в рослини цикорію (Cichorium intybus L.) методом агробактеріальної трансформації / Н.А. Матвєєва, А.М. Шаховський, І.М. Герасименко, О.Ю. Кваско, Н.В. Кучук // Біополімери і клітина. — 2009. — Т. 25, № 2. — С. 120-125. — Бібліогр.: 23 назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859646298879164416 |
|---|---|
| author | Матвєєва, Н.А. Шаховський, А.М. Герасименко, І.М. Кваско, О.Ю. Кучук, Н.В. |
| author_facet | Матвєєва, Н.А. Шаховський, А.М. Герасименко, І.М. Кваско, О.Ю. Кучук, Н.В. |
| citation_txt | Перенесення гена біосинтезу інтерферону-α2b в рослини цикорію (Cichorium intybus L.) методом агробактеріальної трансформації / Н.А. Матвєєва, А.М. Шаховський, І.М. Герасименко, О.Ю. Кваско, Н.В. Кучук // Біополімери і клітина. — 2009. — Т. 25, № 2. — С. 120-125. — Бібліогр.: 23 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| description | Генетична трансформація цикорію C. intybus L. становить інтерес з огляду на можливість створення рослин-імуномодуляторів, які містять ген інтерферону-α2b. Для отримання таких рослин оптимізовано умови регенерації цикорію сорту Пала росса та здійснено трансформацію за допомогою Agrobacterium tumefaciens. Показано, що частота регенерації насередо вищі з макроелементами MS, кінетином (0,5–2,5 мг/л) та α-нафтилоцтовою кислотою (0,5 мг/л) сягає 100 %. З використанням полімеразно-ланцюгової реакції встановлено, що ДНК усіх проаналізованих рослин містить як селективний ген nptII, так і цільовий ifn-α2b-ген. Таким чином, методика агробактеріальної трансформації може бути застосована для отри мання генетично модифікованих рослин цикорію з геном, що зумовлює синтез інтерферону-α2b.
An efficient method for the plant regeneration and Àgrobacterium mediated transformation with interferon-α2b gene has been developed for chicory C. intybus L. cv. Pala rossa. The regeneration with efficiency about 100 % was induced on the MS medium supplemented with 0.5–2.5 mg/l kinetin and 0.5 mg/l NAA. The transformed plantlets were recovered at a frequency 26,9 % on basal medium with 25 mg/l kanamycin. According to PCR-analysis the nptII and ifn-α2b genes were integrated into the genome of transformed plants.
|
| first_indexed | 2025-12-07T13:27:39Z |
| format | Article |
| fulltext |
Ïå ðå íå ñåí íÿ ãå íà á³îñèí òå çó ³íòåð ôå ðî íó-a2b â
ðîñ ëè íè öè êîð³þ (Cichorium intybus L.) ìå òî äîì
àã ðî áàê òåð³àëü íî¿ òðàíñôîðìàö³¿
Í. À. Ìàò⺺âà, À. Ì. Øà õî âñüêèé, ². Ì. Ãå ðà ñè ìåí êî,
Î. Þ. Êâàñ êî, Í. Â. Êó ÷óê
²íñòè òóò êë³òèí íî¿ á³îëî㳿 òà ãå íå òè÷ íî¿ ³íæå íå𳿠ÍÀÍ Óêðà¿ íè
Âóë. Àêàäåì³êà Çà áî ëîò íî ãî, 148, Êè¿â, Óêðà¿ íà, 03680
joyna56@gmail.com
Ãå íå òè÷ íà òðàíñ ôîð ìàö³ÿ öè êîð³þ C. intybus L. ñòà íî âèòü ³íòå ðåñ ç îãëÿ äó íà ìîæ ëèâ³ñòü ñòâî -
ðåí íÿ ðîñ ëèí-³ìó íî ìî äó ëÿ òîð³â, ÿê³ ì³ñòÿòü ãåí ³íòåð ôå ðî íó-a2b. Äëÿ îò ðè ìàí íÿ òà êèõ ðîñ ëèí
îïòèì³çî âà íî óìî âè ðå ãå íå ðàö³¿ öè êîð³þ ñî ðòó Ïàëà ðîñ ñà òà çä³éñíå íî òðàíñ ôîð ìàö³þ çà äî ïî ìî -
ãîþ Agrobacterium tumefaciens. Ïî êà çà íî, ùî ÷àñ òî òà ðå ãå íå ðàö³¿ íà ñå ðå äî âèù³ ç ìàê ðî å ëå ìåí òà -
ìè MS, ê³íå òè íîì (0,5–2,5 ìã/ë) òà a-íà ôòè ëîö òî âîþ êèñ ëî òîþ (0,5 ìã/ë) ñÿãຠ100 %. Ç
âè êî ðèñ òàí íÿì ïîë³ìå ðàç íî-ëàí öþ ãî âî¿ ðå àêö³¿ âñòà íîâ ëå íî, ùî ÄÍÊ óñ³õ ïðî à íàë³çî âà íèõ ðîñ ëèí
ì³ñòèòü ÿê ñå ëåê òèâ íèé ãåí nptII, òàê ³ ö³ëüî âèé ifn-a2b-ãåí. Òà êèì ÷è íîì, ìå òî äè êà àã ðî áàê -
òåð³àëü íî¿ òðàíñ ôîð ìàö³¿ ìîæå áóòè çàñòîñîâàíà äëÿ îò ðè ìàí íÿ ãå íå òè÷ íî ìî äèô³êî âà íèõ ðîñ -
ëèí öè êîð³þ ç ãå íîì, ùî çó ìîâ ëþº ñèí òåç ³íòåð ôå ðî íó-a2b.
Êëþ ÷îâ³ ñëî âà: òðàíñ ôîð ìàö³ÿ, Agrobacterium, Cichorium intybus, ³íòåð ôå ðîí.
Âñòóï. C. intybus L. – äâîð³÷íà ðîñ ëè íà, ÿêà íà ëå -
æèòü äî ðî äè íè Asteraceae. Öè êîð³é êóëü òè âó þòü ó
äî ñèòü øè ðî êî ìó ãå îã ðàô³÷íî ìó ðåã³îí³ – ó êðà¿ -
íàõ ªâðî ïè (Áåëüã³ÿ, ͳìå÷ ÷èíà, Ôðàíö³ÿ), ó ÑØÀ,
ϳâäåíí³é Àìåðèö³, ²í䳿. ²íòå ðåñ äî ö³º¿ êóëü òó ðè
ïî â’ÿ çà íèé ç òèì, ùî ¿¿ íå ëèøå âæè âà þòü ó ¿æó
(çîê ðå ìà, ñà ëàòí³ ñî ðòè), à é âè êî ðèñ òî âó þòü ÿê ñè -
ðî âèíó äëÿ âè ãî òîâ ëåí íÿ çàì³ííè êà êàâè. Âîíà òà -
êîæ ìຠë³êàðñüê³ âëàñ òè âîñò³ çà âäÿ êè íà ÿâ íîñò³
³íóë³íó, êó ìà ðèí³â, ôëà âî íî¿ä³â, â³òàì³í³â [1]. Öè -
êîð³é º àí òè ãå ïà òî òîê ñè÷ íèì, ïðè òè âè ðàç êî âèì,
ïðî òè çà ïàëü íèì, êàðä³îòîí³÷íèì, ä³óðå òè÷ íèì çà -
ñî áîì, ÿêèé çà ñòî ñî âó þòü ïðè ë³êó âàíí³ ä³àáå òó,
ÑͲÄó, ïóõ ëèí, òàõ³êàð䳿 òîùî [2–4]. Íà îñíîâ³
öè êîð³þ ðîçðîáëåíî íèç êó ë³êà ðñüêèõ ïðå ïà ðàò³â,
ñå ðåä ÿêèõ ˲Â52. Îòæå, çðî çóì³ëîþ º ö³êàâ³ñòü äî
íüîãî ÿê äî îá’ºêòà êë³òèí íî¿ ³íæå íåð³¿, çîê ðå ìà,
öåé âèä ìîæ íà âè êî ðèñ òî âó âà òè äëÿ ñòâî ðåí íÿ ðîñ -
ëèí ç ³ìó íî ìî äó ëþ þ ÷è ìè âëàñ òè âîñ òÿ ìè.
Îäí³ºþ ç óìîâ åôåê òèâ íî¿ òðàíñ ôîð ìàö³¿ ðîñ -
ëèí º íà ÿâí³ñòü ìå òî äèê ðå ãå íå ðàö³¿. Öå äຠìîæ -
ëèâ³ñòü îò ðè ìó âà òè ìàê ñè ìàëü íó ê³ëüê³ñòü ïà ãîí³â
ç ðîñ ëèí íèõ åêñïëàíò³â, ÿêè ìè ìî æóòü ñëó ãó âà òè
êî ðåí³, ëèñ òêè, ñòåá ëîâ³ áðóíü êè [1, 5, 6, ] ç ÷àñ òî -
òîþ ðåãåíåðàö³¿ äî 100 % [7].
Êî ëî äîñë³äæåíü ç ãå íå òè÷ íî¿ òðàíñ ôîð ìàö³¿
öè êîð³þ äî ñèòü îá ìå æå íå. Åêñïå ðè ìåí òè â îñíîâ -
íî ìó áóëî ñïðÿ ìî âàíî íà ñòâî ðåí íÿ ðîñ ëèí ç³ çì³-
íå íèì ôå íî òè ïîì, çîê ðå ìà, ç ïðè ñêî ðå íèì öâ³ò³í-
íÿì [8], ñò³éêèõ äî ãåðá³öèä³â [9], òà êèõ, ùî ñèí òå -
çó þòü ôðóê òàí [10]. Ðà çîì ç òèì, îñê³ëüêè öè êîð³é
âæè âà þòü ó ¿æó áåç òåð ìî îá ðîá êè, öÿ ðîñ ëè íà ìî -
120
ISSN 0233-7657. Á³îïîë³ìåðè ³ êë³òèíà. 2009. Ò. 25. ¹ 2
Ó ²íñòè òóò ìî ëå êó ëÿð íî¿ á³îëî㳿 ³ ãå íå òè êè ÍÀÍ Óêðà¿ íè, 2009
æå áó òè îá’ºêòîì ãå íå òè÷ íî¿ òðàíñ ôîð ìàö³¿, çîê ðå -
ìà, äëÿ ñòâî ðåí íÿ ðîñ ëèí ç ³ìó íî ìî äó ëþ þ ÷è ìè
âëàñ òè âîñ òÿ ìè. Íèí³ ðîç ðîá ëå íî ìå òî äè, ùî äîç âî -
ëÿ þòü ³í³ö³þâà òè â ðîñ ëè íàõ ñèí òåç á³îëîã³÷íî àê -
òèâ íèõ ðå ÷î âèí [11]. Ôàð ìà öåâ òè÷í³ ðå êîìá³íà íòí³
á³îëîã³÷íî àê òèâí³ á³ëêè ðîñ ëèí íî ãî ïî õîä æåí íÿ
ìà þòü íèç êó ïå ðå âàã ïå ðåä ïðå ïà ðà òà ìè ì³êðîá íî -
ãî ïî õîä æåí íÿ. ¯õíº íà ïðà öþ âàí íÿ òà çáåð³ãàí íÿ
ìàþòü â³äíîñ íî íå âå ëè êó âàðò³ñòü, âî íè ïðè äàòí³
äëÿ ìà ñî âî ãî âè ðîá íèö òâà [12].
a-²íòåð ôå ðîí º ðå ãó ëÿ òî ðîì ³ìóí íî¿ ñèñ òå ìè
ññàâö³â. ³í ï³äâè ùóº ôóíêö³þ öè òî òîê ñè÷ íèõ Ò-
ë³ìôî öèò³â òà ôà ãî öè òàð íó àê òèâí³ñòü ìàê ðî ôàã³â,
ñïðèÿº ë³çè ñó ³íô³êî âà íèõ êë³òèí, óïîâ³ëüíþº ðîç -
âè òîê â³ðóñ íèõ ³íôåêö³é. Òî ìó ðîç ðîá êà íî âèõ ñïî -
ñîá³â îò ðè ìàí íÿ ÷èñ òî ãî ïðå ïà ðà òó ³íòåð ôå ðî íó º
àê òó àëü íèì òà ïåð ñïåê òèâ íèì íà ïðÿì êîì á³îò åõ -
íî ëîã³é. Íèí³ ³ñíó þòü ôàð ìà öåâ òè÷í³ ïðå ïà ðà òè
ðå êîìá³íà íòíî ãî ³íòåð ôå ðî íó, ñòâî ðåí³ íà îñíîâ³
áàê òåð³é ìåòîäàìè ãå íå òè÷ íî¿ ³íæå íåð³¿.
Ãå íå òè÷ íî ìî äèô³êî âàí³ ðîñ ëè íè ç ãå íîì ³íòåð -
ôå ðî íó îò ðè ìà íî á³ëüøå 20 ðîê³â òî ìó [13]. Ìå òîþ
òèõ ðîá³ò áó ëî âè êî ðèñ òàí íÿ àí òèâ³ðóñ íî¿ ä³¿ ³íòåð -
ôå ðî íó äëÿ çà õèñ òó ðîñ ëèí â³ä çà õâî ðþ âàíü [14,
15]. Íàï ðÿì êîì äîñë³äæåíü, ùî àê òèâ íî ðîç âè -
âàºòüñÿ îñòàíí³ìè ðî êàìè, º ñòâî ðåí íÿ òðàíñ ãåí -
íèõ ðîñ ëèí ç ãå íîì ³íòåð ôå ðî íó. Õî ÷à íà ñüî ãîäí³
ìî äèô³êî âàí³ ðîñ ëè íè ùå íå ìà þòü ïðàê òè÷ íî ãî
çà ñòî ñó âàí íÿ, îäíàê âæå ïðî äå ìî íñòðî âà íî ìîæ -
ëèâ³ñòü åêñïðåñ³¿ ãå íà ³íòåð ôå ðî íó â ðîñ ëè íàõ êàð -
òîïë³ [16], ðè ñó [17], ñà ëà òó [18]. Ïî êà çà íî, ùî ðå -
êîìá³íà íòíèé ³íòåð ôå ðîí ìຠ³ìóíîãåííó àê-
òèâí³ñòü [19], îòæå, ìîæå áóòè çàñòîñîâàíèé ç ë³êó-
âàëü íîþ ìåòîþ.
Ìà òåð³àëè ³ ìå òî äè. Âèõ³äíèì ìà òåð³àëîì ñëó -
ãó âà ëî íàñ³ííÿ öè êîð³þ C. intybus ñî ðòó Ïà ëà ðîñ ñà.
Íàñ³ííÿ ïî ñë³äîâ íî ñòå ðèë³çó âà ëè â 70 %-ìó åòà -
íîë³ (1 õâ) ³ 25 %-ìó ðîç ÷èí³ êî ìåðö³éíî ãî ïðå ïà -
ðà òó «Á³ëèç íà» (10 õâ), ï³ñëÿ ÷î ãî ïðî ìè âà ëè â äèñ -
òèëü î âàí³é âîä³ (60 õâ). Ïðî ðî ùó âà ëè íàñ³ííÿ íà
àãà ðè çî âà íî ìó ñå ðå äî âèù³ MS [20] ïðè 16-ãîä
ñâ³òëî âî ìó ôî òî ïåð³îä³ òà òåì ïå ðà òóð³ 24 °Ñ.
Äëÿ ðå ãå íå ðàö³¿ ïà ãîí³â ³ òðàíñ ôîð ìàö³¿ âè êî -
ðèñ òî âó âà ëè ñ³ì’ÿ äîëüí³ òà ñïðàâæí³ ëèñ òêè 10–
12-äåí íèõ ïðî ðîñòê³â. Íà íèõ ðî áè ëè ïî ïå ðå÷í³
íàäð³çè òà êóëü òè âó âà ëè ïðè 16-ãîä ñâ³òëî âî ìó ôî -
òî ïåð³îä³ òà òåì ïå ðà òóð³ 24 °Ñ.
×àñ òîòó ðå ãå íå ðàö³¿ ðîñ ëèí ³ç ñ³ì’ÿ äîëü íèõ òà
ëèñ òî âèõ åêñïëàíò³â âèç íà ÷à ëè, êóëü òè âó þ ÷è åêñ-
ïëàí òè íà ñå ðå äî âè ùàõ, ùî â³äð³çíÿ ëè ñÿ âì³ñòîì
ÿê ñî ëåé, òàê ³ ô³òî ãîð ìîí³â (òàáë. 1).
Òðàí ñôîð ìàö³þ çä³éñíþ âà ëè çà äî ïî ìî ãîþ Ag-
robacterium tumefaciens (øòàì GV3101) ç âåê òîð -
íîþ êî íñòðóêö³ºþ pCB124 (ðèñ. 1). Ò-ÄÍÊ âåê òî ðà
ðÑÂ124 ì³ñòè ëà ñå ëåê òèâ íèé ãåí nptII, ö³ëüî âèé ãåí
ifn-a2b òà êàëü ðå òè êóë³í – ë³äåð íó ïî ñë³äîâí³ñòü,
ùî çà áåç ïå ÷óº íà êî ïè ÷åí íÿ ö³ëüî âî ãî á³ëêà â åí -
äîï ëàç ìà òè÷ íî ìó ðå òè êó ëóì³.
Áàê òå𳿠âè ðî ùó âà ëè íà ñå ðå äî âèù³ LB [23] ç
àí òèá³îò è êà ìè (100 ìã/ë êàð áåí³öèë³íó, 50 ìã/ë ðè -
ôàìï³öè íó, 25 ìã/ë ãåí òàì³öè íó) ïðî òÿ ãîì 48 ãîä
çà òåì ïå ðà òóðè 27 °Ñ. Áàê òåð³àëüí³ êë³òè íè îñàä æó -
âà ëè öåí òðè ôó ãó âàí íÿì (300 g, 10 õâ), îñàä ðå ñóñ -
ïåí äó âà ëè â ðîç ÷èí³ 10 ìÌ MgSO4. Ëèñ òêè ç ïî ïå -
ðåä íüî çðîá ëå íè ìè íàäð³çà ìè ³íêó áó âà ëè â áàê -
òåð³àëüí³é ñóñ ïåí糿 óïðî äîâæ 30 õâ, ïðî ìî êà ëè
ô³ëüòðó âàëü íèì ïà ïå ðîì ³ êóëü òè âó âà ëè íà àãà ðè -
çî âà íî ìó ñå ðå äî âèù³ MS ïðî òÿ ãîì äâîõ ä³á. ϳñëÿ
öüî ãî åêñïëàí òè ïå ðå íî ñè ëè ïî ñë³äîâ íî íà ñå ðå äî -
âè ùå ¹ 1 (íà îäèí òèæ äåíü) òà ¹ 2 (òàáë. 1) ç äî äà -
âàí íÿì àí òèá³îò èê³â êà íàì³öè íó (25 ìã/ë) ³ öåôo-
òaêñè ìó (600 ìã/ë). Ïà ãî íè, ùî óòâî ðè ëè ñÿ,
óêîð³íþ âà ëè íà ñå ðå äî âèù³ MS áåç ãîð ìîí³â ç àí -
òèá³îò è êà ìè ó òà êèõ ñà ìèõ êîí öåí òðàö³ÿõ.
Ãå íîì íó ÄÍÊ âèä³ëÿ ëè ìå òî äîì ÑÒÀ ³ç çå ëå -
íèõ ëèñòê³â ñòå ðèëü íèõ ðîñ ëèí [24]. ÏËÐ ãå íîì íî¿
ÄÍÊ ïðî âî äè ëè íà àìïë³ô³êà òîð³ Mastercycler
personal 5332 (Eppendorf) ç òåð ìîñ òà òî âà íîþ êðèø -
121
ÏÅ ÐÅ ÍÅ ÑÅÍ Íßß ÃÅ ÍÀ Á²ÎÑÈÍ ÒÅ ÇÓ ²ÍÒÅÐ ÔÅ ÐÎ ÍÓ-a2b  ÐÎÑ ËÈ ÍÈ ÖÈ ÊÎвÞ
Ðèñ. 1. Ñõå ìà Ò-ÄÍÊ-âåê òî ðà ðÑÂ124 äëÿ àã ðî áàê òåð³àëü íî¿ òðàíñ ôîð ìàö³¿ Cichorium intybus: LB ³ RB – ë³âà ³ ïðà âà ìåæ³ Ò-ÄÍÊ;
nptII – ãåí íåîì³öèí ôîñ ôîò ðàí ñôå ðà çè II; ifn-a2b – ãåí ³íòåð ôå ðî íó-a2b; NOSpro ³ NOSter – ïðî ìî òîð ³ òåðì³íà òîð ãåíà íî -
ïàë³íñèí òà çè â³äïîâ³äíî; 35Spro – ïðî ìî òîð ãåíà 35S-á³ëêà ç ãå íî ìó â³ðóñó ìî çà¿ êè öâ³òíî¿ êà ïóñ òè; OCSter – òåðì³íà òîð ãåíà
îêòîï³íñèí òà çè; cal – êàëü ðå òè êóë³í
122
ÌÀÒªªÂÀ Í. À. ÒÀ ²Í.
êîþ â ïðîá³ðêàõ ç óëüòðà òîí êè ìè ñò³íêà ìè. Ðå -
àêö³éíà ñóì³ø ì³ñòè ëà îä íîðàçîâèé ÏËÐ-áó ôåð ³ç
ñóëü ôà òîì àìîí³þ, 0,2 ìêìîëü â³äïîâ³äíèõ ïðàé -
ìåð³â (òàáë. 2), 200 ìêìîëü êîæ íî ãî ç äåç îêñè íóê -
ëå î òèä òðè ôîñ ôàò³â, 0,5 îä. Taq-ïîë³ìå ðà çè, 10–
50 íã ÄÍÊ-ïðî áè. Çà ãàëü íèé îá’ºì ðå àêö³éíî¿
ñóì³ø³ ñòà íî âèâ 20 ìêë.
Óìî âè àìïë³ô³êàö³¿: ïåð âèí íà äå íà òó ðàö³ÿ –
90 îÑ, 3 õâ; 30 öèêë³â àìïë³ô³êàö³¿ (94 °Ñ, 30 ñ –
60 °Ñ, 30 ñ – 72 °Ñ, 30 ñ); îñòà òî÷ íà ïîë³ìå ðè çàö³ÿ –
72 °Ñ, 5 õâ.
Ðå çóëü òà òè i îá ãî âî ðåí íÿ. Åôåê òèâí³ñòü îò ðè -
ìàí íÿ ãå íå òè÷ íî ìî äèô³êî âà íèõ ðîñ ëèí ïðè çà ñòî -
ñó âàíí³ ìå òî äó àãî ðî áàê òåð³àëü íî¿ òðàíñ ôîð ìàö³¿
çà ëå æèòü â³ä ðå ãå íå ðàö³éíî¿ çäàò íîñò³ âè êî ðèñ òà -
íèõ åêñïëàíò³â. Ó çâ’ÿç êó ç öèì íà ìè âèâ ÷å íî îñîá -
ëè âîñò³ ðå ãå íå ðàö³¿ ðîñ ëèí öè êîð³þ íà ïî æèâ íèõ
ñå ðå äî âè ùàõ, ùî â³äð³çíÿ ëè ñÿ âì³ñòîì ÿê ìàê ðî-
Ñêëà äîâ³ ñå ðå äî âè ùà
Âì³ñò ó ñå ðå äî âèù³, ìã/ë
¹ 1 ¹ 2 ¹ 3 ¹ 4 ¹ 5 ¹ 6 ¹ 7 ¹ 8
Ìàê ðî å ëå ìåí òè MS* MS MS MS Â5** Â5 Â5 Â5
̳êðî å ëå ìåí òè MS MS MS MS MS MS MS MS
Ò³àì³í 1 1 1 1 1 1 1 1
ϳðè äîê ñèí 1 1 1 1 1 1 1 1
ͳêî òè íî âà êèñ ëî òà 1 1 1 1 1 1 1 1
Á³îò èí 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,01
Ñà-ïàí òî òå íàò 1 1 1 1 1 1 1 1
²íî çè òîë 100 100 100 100 100 100 100 100
ʳíå òèí 2,5 0,5 – – 2,5 0,5 – –
Áåí çè ëàì³íî ïó ðèí – – 2,5 0,5 – – 2,5 0,5
a-Íàô òè ëîö òî âà
êèñ ëî òà
0,5 0,05 0,5 0,05 0,5 0,05 0,5 0,05
Ìîð ôîë³íî å òàí ñóëü-
ôî íî âà êèñ ëî òà
1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000
óäðîë³çàò êà çå¿ íó 300 300 300 300 300 300 300 300
Öóê ðî çà 30000 30000 30000 30000 30000 30000 30000 30000
Àãàð 6000 6000 6000 6000 6000 6000 6000 6000
Ï ð è ì ³ ò ê à. *Ìàê ðî- òà ì³êðî å ëå ìåí òè çà MS [20]; **ìàê ðî å ëå ìåí òè çà Â5 [21].
Òàá ëè öÿ 1
Ñêëàä ïî æèâ íèõ ñå ðå äî âèù äëÿ äîñë³äæåí íÿ ðå ãå íå ðàö³¿ ðîñ ëèí ³ç ñ³ì’ÿ äîëü íèõ òà ëèñ òî âèõ åêñïëàíò³â öè êîð³þ
Ãåí Ïðàé ìåð
Ðîçì³ð
àìïë³ô³êî âà íî ãî
ôðàã ìåí òà, ï. í.
nptII
5'- cctgaatgaactccaggacgaggca-3'
5'- gctctagatccagagtcccgctcagaag-3'
622
ifn-a2b
5'-ctcctgcttgaaggacag-3'
5'-ggagtcctccttcatcag-3'
264
Òàá ëè öÿ 2
Ïðàé ìå ðè, âè êî ðèñ òàí³ äëÿ ï³äòâåð äæåí íÿ ïðè ñóò íîñò³ ãåí³â nptII òà ifn-a2b
åëå ìåíò³â, òàê ³ ô³òî ãîð ìîí³â (ñå ðå äî âè ùà
¹¹ 1–8, òàáë. 1).
Åñïå ðè ìåí òè âèÿâèëè â³äñóòí³ñòü çíà÷ íèõ
â³äì³ííîñ òåé ó ÷àñ òîò³ ðå ãå íå ðàö³¿ ïà ãîí³â ç
åêñïëàíò³â äâîõ òèï³â – ñ³ì’ÿ äîëü íèõ òà ñïðàâæí³õ
ëèñòê³â – íà âñ³õ ñå ðå äî âè ùàõ, çà âè íÿò êîì ñå ðå äî -
âè ùà ¹ 7, ïðè ÷î ìó óòâî ðåí íÿ ïà ãîí³â ñïîñ -
òåð³ãàëîñÿ óæå ÷åðåç 10–15 ä³á.
Ïîð³âíÿí íÿ ÷àñ òî òè ðå ãå íå ðàö³¿ íà ñå ðå äî âè -
ùàõ ç ð³çíèì âì³ñòîì ìàê ðî å ëå ìåíò³â ïî êà çà ëî, ùî
îïòè ìàëü íîþ óìî âîþ º íà ÿâí³ñòü ìàê ðî ñî ëåé MS.
Òàê, ÷å ðåç 3 òèæí³ ÷àñ òî òà ðå ãå íå ðàö³¿ ïà ãîí³â íà
öèõ ñå ðå äî âè ùàõ ñòà íî âè ëà 60–100 %, ó òîé ÷àñ ÿê
ó ïðè ñóò íîñò³ ìàê ðî å ëå ìåíò³â çà Â5 öåé ïî êàç íèê
äîð³âíþ âàâ 0–50 %. (ðèñ. 2, 3). Ñå ðå äî âè ùà MS òà
Â5 â³äð³çíÿ þòü ñÿ âì³ñòîì àçî òó (ó ôîðì³ êàò³îí³â
NH4
+ òà àí³îí³â NO3
–), êîí öåí òðàö³ÿ ÿêî ãî â ñå ðå äî -
âèù³ MS çíà÷ íî âè ùà. Ìîæ ëè âî, ï³äâè ùåí íÿ êîí -
öåí òðàö³¿ àçîòó ñòèìóëþº ïðîöåñ ðåãåíåðàö³¿
ðîñ ëèí öèêîð³þ.
Ïðè ïîð³âíÿíí³ âïëè âó ô³òî ãîð ìîí³â íà ïðî öåñ
ðå ãå íå ðàö³¿ ïà ãîí³â âñòà íîâ ëå íî, ùî âè êî ðèñ òàí íÿ
ñå ðå äî âè ùà, ÿêå ì³ñòèòü ê³íå òèí, ï³äâè ùóº ÷àñ òî òó
ðå ãå íå ðàö³¿ â³äíîñíî ñå ðå äî âè ùà ç áåí çè ëàì³íî ïó -
ðèíîì (ÁÀÏ). Çîê ðå ìà, ÷àñ òî òà ðå ãå íå ðàö³¿ íà ñå ðå -
äî âèù³ ¹ 2 (MS, 0,5 ìã/ë ê³íå òè íó) ïå ðå âè ùó âà ëà
òà êó äëÿ ñå ðå äî âè ùà ¹ 4 (MS, 0,5 ìã/ë ÁÀÏ) òà ñòà -
íî âè ëà â³äïîâ³äíî 100 ³ 70 %. Êð³ì òî ãî, ÷àñ, ïî -
òð³áíèé äëÿ ³í³ö³þâàí íÿ ðå ãå íå ðàö³¿, íà ñå ðå äî âè -
ùàõ ¹ 1 òà ¹ 2 ç ê³íå òè íîì âè ÿ âèâ ñÿ çíà÷ íî ìåí -
øèì (7–10 ä³á), í³æ íà ñå ðå äî âè ùàõ ¹ 3 òà ¹ 4 ç
ÁÀÏ (14–20 ä³á). Çá³ëüøåí íÿ êîí öåí òðàö³¿ öè -
òîê³í³í³â (ÿê ê³íå òè íó, òàê ³ ÁÀÏ) ç 0,5 äî 2,5 ìã/ë íå
ïðè çâî äè ëî äî çðîñ òàí íÿ ÷àñ òî òè ðå ãå íå ðàö³¿.
Òà êèì ÷è íîì, ïî êà çà íî, ùî âè êî ðèñ òàí íÿ ïî -
æèâ íî ãî ñå ðå äî âè ùà ç ìàê ðî å ëå ìåí òà ìè MS òà
ê³íå òè íîì äîç âî ëÿº îò ðè ìà òè ðå ãå íå ðàö³þ ðîñ ëèí
öè êîð íî ãî ñà ëà òó ç ìàê ñè ìàëü íîþ ÷àñ òî òîþ (äî
100 %). Îñê³ëüêè âè ñî êà åôåê òèâí³ñòü ðå ãå íå ðàö³¿
ïà ãîí³â º îäí³ºþ ç ãî ëîâ íèõ óìîâ óñï³øíî¿ òðàíñ -
ôîð ìàö³¿, òà êå ñå ðå äî âè ùå ³ âè êî ðèñ òàíå â åê ñïå -
ðè ìåí òàõ ç³ ñòâîðåííÿ ãåíåòè÷íî ìîäèô³êîâàíèõ
ðîñëèí.
Òðàí ñôîð ìàö³þ ïðî âî äè ëè çà äîïîìîãîþ A. tu-
mefaciens ç âåê òîð íîþ êî íñòðóêö³ºþ pCB124, Ò-
ÄÍÊ ÿêî¿ ì³ñòè ëà ñå ëåê òèâ íèé ãåí nptII òà ö³ëüî -
âèé – ifn-a2b. Åêñïðåñ³ÿ ãå íà nptII íàäຠïå ðå âàã
òðàíñ ôîð ìî âà íèì êë³òè íàì, ïðîë³ôå ðàö³ÿ ÿêèõ
123
ÏÅ ÐÅ ÍÅ ÑÅÍ Íßß ÃÅ ÍÀ Á²ÎÑÈÍ ÒÅ ÇÓ ²ÍÒÅÐ ÔÅ ÐÎ ÍÓ-a2b  ÐÎÑ ËÈ ÍÈ ÖÈ ÊÎвÞ
Ðèñ. 2. Âïëèâ ì³íå ðàëü íèõ
êîì ïî íåíò³â ñå ðå äî âè ùà íà
ðå ãå íå ðàö³þ ðîñ ëèí öè -
êîð³þ: à – ìàê ðî å ëå ìåí òè
MS, 0,5 ìã/ë ê³íå òè íó, 0,5
ìã/ë íà ôòè ëîö òî âî¿ êèñ ëî òè
(ÍÎÊ); á – ìàê ðî å ëå ìåí òè
Â5, 0,5 ìã/ë ê³íå òè íó, 0,5
ìã/ë ÍÎÊ
Ðèñ. 3. ×àñ òî òà ðå ãå íå ðàö³¿ ïà ãîí³â ³ç ñ³ì’ÿ äîëü íèõ (1) òà
ñïðàâæí³õ ëèñòê³â (2) öè êîð³þ íà ð³çíèõ ñå ðå äî âè ùàõ
â³äáó âàºòüñÿ çà ïðè ñóò íîñò³ ñå ëåê òèâ íî¿ êîí öåí -
òðàö³¿ êà íàì³öè íó. Äëÿ âèç íà ÷åí íÿ îñòàí íüî¿ ïðî -
òåñ òî âà íî ï’ÿòü êîí öåí òðàö³é àí òèá³îò èêà – 10, 25,
50, 100 òà 150 ìã/ë. Ïðè êîí öåí òðàö³¿ êà íàì³öè íó
25 ìã/ë ³ âè ùå çå ëåí³ ïà ãî íè, ùî ðå ãå íå ðóþòü ç
ñ³ì’ÿ äîëü íèõ ëèñòê³â, áó ëè â³äñóòí³ìè, åêñïëàí òè
ãè íóëè. Òà êèì ÷è íîì, êîí öåí òðàö³þ 25 ìã/ë âèç íà -
÷å íî ÿê ñå ëåê òèâ íó.
Ïðè êóëü òè âó âàíí³ åêñïëàíò³â íà ñå ðå äî âè ùàõ
¹¹ 1 ³ 2 ç êà íàì³öè íîì (25 ìã/ë) òà öåôoòaêñè ìîì
(600 ìã/ë) äëÿ åë³ì³íàö³¿ áàê òåð³é óæå ÷å ðåç 7–14
ä³á ñïîñ òåð³ãà ëè óòâî ðåí íÿ ïà ãîí³â (ðèñ. 4, à).
×àñ òî òó òðàíñ ôîð ìàö³¿ (òîá òî ÷àñ òî òó ðå ãå íå -
ðàö³¿ çå ëå íèõ ðîñ ëèí çà ïðè ñóò íîñò³ ñå ëåê òèâ íî¿
êîí öåí òðàö³¿ êà íàì³öè íó) âèç íà ÷à ëè çà â³äíî øåí -
íÿì ê³ëüêîñò³ åêñïëàíò³â ³ç çå ëå íè ìè íà ñå ëåê òèâ -
íî ìó ñå ðå äî âèù³ ïà ãî íà ìè äî çà ãàëü íî¿ ê³ëüêîñò³
åêñïëàíò³â ó â³äñîò êàõ. Âî íà ñòà íî âè ëà 26,9 %.
Î÷å âèä íî, äî ñèòü âè ñî êèé ïî êàç íèê ïî â’ÿ çà íèé ç
âè ñî êîþ ðå ãå íå ðàö³éíîþ çäàòí³ñòþ ðîñ ëèí öüî ãî
ñî ðòó (äî 100 %). Ïðè ñå ëåêö³¿ åêñïëàíò³â íà ñå ðå -
äî âèù³ ç àíòèá³îòèêàìè á³ë³ ðîñëèíè áóëè â³äñóòí³.
ÏËÐ-àíàë³çîì òî òàëü íî¿ ÄÍÊ âîñü ìè ðîñ ëèí,
ðå ãå íå ðî âà íèõ íà ñå ëåê òèâ íî ìó ñå ðå äî âèù³, âèç íà -
÷å íî ïðè ñóòí³ñòü ÿê ñå ëåê òèâ íî ãî ãå íà nptII, òàê ³
ö³ëüî âî ãî ãå íà ifn-a2b (ðèñ. 4, á).
Òà êèì ÷è íîì, âñòà íîâ ëå íî, ùî íà é âè ùó ÷àñ òî -
òó ðå ãå íå ðàö³¿ ðîñ ëèí (äî 100 %) ñïîñ òåð³ãà ëè ïðè
êóëü òè âó âàíí³ ñ³ì’ÿ äîëü íèõ òà ñïðàâæí³õ ëèñòê³â
öè êîð³þ íà ñå ðå äî âèù³, ùî ì³ñòè ëî ìàê ðî å ëå ìåí òè
MS, ê³íå òèí (0,5–2,5 ìã/ë) òà a-ÍÎÊ (0,5 ìã/ë).
ϳñëÿ àã ðî áàê òåð³àëü íî¿ òðàíñ ôîð ìàö³¿ êî íñòðóê-
ö³ºþ ðÑÂ124 îò ðè ìà íî òðàíñ ôîð ìî âàí³ ðîñ ëè íè ç
÷àñ òî òîþ 26,9 %. ÏËÐ-àíàë³çîì ïî êà çà íî, ùî ÄÍÊ
³ç âñ³õ äîñë³äæó âà íèõ ðîñ ëèí ìà ëà ÿê ñå ëåê òèâ íèé
nptII, òàê ³ ö³ëüî âèé ifn-a2b-ãåí. Âè êî ðèñ òàí íÿ ãå íà
nptII â êî íñòðóêö³¿ ðÑÂ124 º åôåê òèâ íèì, îñê³ëüêè
äຠìîæ ëèâ³ñòü â³äáî ðó ñà ìå òðàíñ ôîð ìî âà íèõ
ðîñ ëèí. Îòæå, ìå òîä àã ðî áàê òåð³àëü íî¿ òðàíñ ôîð -
ìàö³¿ ìî æå áóòè çà ñòî ñî âà íèé äëÿ îò ðè ìàí íÿ
òðàíñ ãåí íèõ ðîñ ëèí öè êîð³þ ç ãå íîì ³íòåð ôå ðî íó-
a2b.
N. A. Matvieieva, A. M. Shachovsky, I. M. Gerasymenko,
O. Yu. Kvasko, N. V. Kuchuk
Agrobacterium-mediated transformation of Cichorium intybus L.
with interferon-a2b gene
An efficient method for the plant regeneration and Àgrobacterium
mediated transformation with interferon-a2b gene has been
developed for chicory C. intybus L. cv. Pala rossa. The rege-
neration with efficiency about 100 % was induced on the MS
medium supplemented with 0.5–2.5 mg/l kinetin and 0.5 mg/l NAA.
The transformed plantlets were recovered at a frequency 26,9 % on
basal medium with 25 mg/l kanamycin. According to PCR-analysis
the nptII and ifn-a2b genes were integrated into the genome of
transformed plants.
Keywords: transformation, Agrobacterium, Cichorium intybus,
interferon.
Í. À. Ìàò âå å âà, À. Ì. Øà õîâ ñêèé, È. M. Ãå ðà ñè ìåí êî,
Å. Þ. Êâàñ êî, Í. Â. Êó ÷óê
Ïå ðå íîñ ãåíà áè î ñèí òå çà èí òåð ôå ðî íà-a2b â ðàñ òå íèÿ
öè êî ðèÿ (Cichorium intybus L.) ìå òî äîì àã ðî áàê òå ðè àëü íîé
òðàíñ ôîð ìà öèè
Ðå çþ ìå
Ãå íå òè ÷åñ êàÿ òðàíñ ôîð ìà öèÿ öè êî ðèÿ C. intybus L. ïðåä ñòàâ -
ëÿ åò èí òå ðåñ ñ òî÷ êè çðå íèÿ âîç ìîæ íîñ òè ñî çäà íèÿ ðàñ òå -
íèé-èì ìó íî ìî äó ëÿ òî ðîâ, ñî äåð æà ùèõ ãåí áè î ñèí òå çà èí òåð-
ôå ðî íà-a2b. Äëÿ ïî ëó ÷å íèÿ òà êèõ ðàñ òå íèé îïòè ìè çè ðî âà íû
óñëî âèÿ ðå ãå íå ðà öèè ðàñ òå íèé ñî ðòà Ïàëà ðîñ ñà è ïðî âå äå íà
124
ÌÀÒªªÂÀ Í. À. ÒÀ ²Í.
Ðèñ. 4. Ðå ãå íå ðàö³ÿ ñò³éêèõ äî êà íàì³öèíó ðîñ ëèí öè êîð³þ ñî ðòó Ïàëà ðîñ ñà (à) òà ÏËÐ-àíàë³ç òî òàëü íî¿ ÄÍÊ ç ðîñ ëèí, òðàíñ ôîð -
ìî âà íèõ êî íñòðóêö³ºþ pCB124, íà ïðè ñóòí³ñòü ãåí³â nptII òà ifn-a2b (á: 1, 2, 5, 6 – òðàíñ ôîð ìî âàí³ ðîñ ëè íè; 3, 7 – êîí òðîëüí³ ðîñ ëè -
íè; 4, 8 – ÄÍÊ ïëàçì³äè pCB124; Ì – ìàð êåð)
òðàíñ ôîð ìà öèÿ ñ ïî ìîùüþ Agrobacterium tumefaciens. Ïî êà çà -
íî, ÷òî ÷àñ òî òà ðå ãå íå ðà öèè íà ñðå äå ñ ìàê ðî ý ëå ìåí òà ìè ÌS,
êè íå òè íîì (0,5–2,5 ìã/ë) è a-íà ôòè ëóê ñóñ íîé êèñ ëî òîé
(0,5 ìã/ë) äîñ òè ãà åò 100 %. Ñ èñ ïîëü çî âà íè åì ïî ëè ìå ðàç íîé
öåï íîé ðå àê öèè óñòà íîâ ëå íî, ÷òî ÄÍÊ âñåõ ïðî à íà ëè çè ðî âàí -
íûõ ðàñ òå íèé âêëþ ÷à åò êàê ñå ëåê òèâ íûé ãåí nptII, òàê è öå ëå -
âîé ifn-a2b-ãåí. Òà êèì îá ðà çîì, ìå òî äè êà àã ðî áàê òå ðè àëü íîé
òðàíñ ôîð ìà öèè ìî æåò áûòü èñïîëüçîâàíà äëÿ ïî ëó ÷å íèÿ ãå -
íå òè ÷åñ êè ìî äè ôè öè ðî âàí íûõ ðàñ òå íèé öè êî ðèÿ ñ ãå íîì, îáó-
ñëîâ ëè âà þ ùèì ñèí òåç èí òåð ôå ðî íà-a2b.
Êëþ ÷å âûå ñëî âà: òðàíñ ôîð ìà öèÿ, Agrobacterium, Cichorium
intybus, èí òåð ôå ðîí.
ÏÅÐÅË²Ê Ë²ÒÅÐÀÒÓÐÈ
1. Rehman R. U., Israr M., Srivastava P. S., Bansal K. C., Abdin
M. Z. In vitro regeneration of witloof chicory (Cichorium
intybus L.) from leaf explants and accumulation of esculin //
In vitro Cell. Develop. Biol.–2003.–39, N 2.–P. 142–146.
2. Gadgoli C., Mishra S. H. Antihepatotoxic activity of Cicho-
rium intybus // Ethanopharmacology.–1997.–58, N 2.–
P. 131–134.
3. Hughes R., Rowland I. R. Stimulation of apoptosis by two
prebiotic Chicory fructans in the rat colon // Carcinogenesis.–
2001.–22, N 1.–P. 43–47.
4. Ahmad K. D., Gilani S. N., Akhtar A. H., Khan L. Anti-
ulcerogenic evaluation of aqueous extracts of Cichorium
intybus and Phyllanthus emblica in normal and aspirin-
treated rats // Pakistan J. Sci. and Indust. Res.–1998.–41,
N 2.–P. 92–96.
5. Profumo P., Gastaldo P., Caffaro L., Dameri R. M., Roti Mi-
chelozzi G., Bennici A. Callus induction and plantlet rege-
neration in Cichorium intybus L.: II. Effect of different hor-
monal treatments // Protoplasma.–1985.–126, N 3.–P. 215–
220.
6. Yucesan B., Turker A. U., Gurel E. TDZ-induced high fre-
quency plant regeneration through multiple shoot formation
in witloof chicory (Cichorium intybus L.) // Plant Cell, Tissue
and Organ Culture.–2007.–91, N 3.–P. 243–250.
7. Velayuthan P., Ranjithakumari B. D., Baskaran P. An effi-
cient in vitro plant regeneration system for Cichorium intybus
L. – an important medicinal plant // J. Agricult. Technol.–
2006.–2, N 2.–Ð. 287–298.
8. Bais H. P., Venkatesh R. T., Chandrashekar A., Ravishankar
G. A. Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation of
Witloof chicory – in vitro shoot regeneration and induction of
flowering // Curr. Sci.–2001.–80, N 1.–P. 83–87.
9. Vermeulen A., Vaucheret H., Pautot V., Chupeau Y. Agrobac-
terium mediated transfer of a mutant Arabidopsis acetolactate
synthase gene confers resistance to chlorsulfuron in chicory
(Cichorium intybus L.) // Plant Cell Rep.–1992.–11, N 5–6.–
Ð. 243–247.
10. Vijn I., van Dijken A., Sprenger N., van Dun K., Weisbeek P.,
Wiemken A., Smeekens S. Fructan of the inulin neoseries is
synthesized in transgenic chicory plants (Cichorium intybus
L.) harbouring onion (Allium cepa L.) fructan:fructan 6G-
fructosyltransferase // The Plant J.–1997.–11, N 3.–P. 387–
398.
11. Rice J., Ainley W. M., Shewen P. Plant-made vaccines: bio-
technology and immunology in animal health // Anim. Res.
Rev.–2005.–6, N 2.–Ð. 199–209.
12. Daniell H., Streatfield S. J., Wycoff K. Medical molecular
farming: production of antibodies, biopharmaceuticals and
edible vaccines in plants // Trends Plant Sci.–2001.–6, N 5.–
P. 219–226.
13. Orchansky P., Rubinstein M., Sela I. Human interferons pro-
tect plants from virus infection // Proc. Nat. Acad. Sci. USA.–
1982.–79, N 7.–Ð. 2278–2280.
14. Antoniw J. F., White R. F., Carr J. P. An examination of the
effect of human a-interferons on the infection and multi-
plication of tobacco mosaic virus in tobacco // Phytopath. Z.–
1984.–109, N 4.–P. 367–371.
15. Rudas V. A., Piven’ N. M., Rivkin M. I ., Vershinin A. V., In-
fante D. C. The genetic transformation of Lycopersicon peru-
vianum var. dentatum by using Agrobacterium tumefaciens
carrying a plasmid with the human beta-interferon gene //
Tsitol. Genet.–1997.–31, N 2.–P. 17–22.
16. Ohya K., Matsumura T., Ohashi K., Onuma M., Sugimoto C.
Expression of two subtypes of human IFN-a in transgenic po-
tato plants // J. Int. and Cytokine Res.–2001.–21, N 8.–
Ð. 595–602.
17. Masumura T., Morita S., Miki Y., Kurita A., Morita S., Shi-
rono H., Koga J., Tanaka K. Production of biologically acti-
ve human interferon-a in transgenic rice // Plant Biotechnol.–
2006.–23, N.1.–Ð. 91–97.
18. Li J., Chen M., Liu X.-W., Zhang H.-Ch., Shen F. F., Peng G.
W. Transient expression of an active human interferon-beta in
lettuce // Scientia Horticult.–2007.–112, N 3.–P. 258–265.
19. Chen T.-L., Lin Y.-L., Lee Y.-L., Yang N.-S., Chan M.-T. Exp-
ression of bioactive human interferon-gamma in transgenic
rice cell suspension cultures // Transgen. Res.–2004.–13,
N 5.–P. 499–510.
20. Murashige T., Skoog, F. A revised medium for rapid growth
and bio-assays with tobacco tissue cultures // Physiol. Plant.–
1962.–15, ¹ 3.–P. 473–497.
21. Gamborg O. L., Miller R. A., Ojim, K. Nutrient requirements
of suspension cultures of soybean root cells // Exp. Cell Res.–
1968.–50, ¹ 1.–P. 148–151.
22. Maniatis T., Sambrook J., Fritsch E. F. Molecular cloning: A
laboratory manual.–New York: Cold Spring Harbor Lab.
publ., 1982.–545 p.
23. Draper J., Scott R. The isolation of plant nucleic acids // Plant
Genetic Transformation and Gene Expression: A Laboratory
Manual / Eds J. Draper et al.–Oxford etc.: Blackwell Sci.
Publ., 1988.–355 p.
ÓÄÊ 575.222.7:581.1
Íàä³éøëà äî ðå äàêö³¿ 12.12.08
ÏÅ ÐÅ ÍÅ ÑÅÍ Íßß ÃÅ ÍÀ Á²ÎÑÈÍ ÒÅ ÇÓ ²ÍÒÅÐ ÔÅ ÐÎ ÍÓ-a2b  ÐÎÑ ËÈ ÍÈ ÖÈ ÊÎвÞ
125
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-5647 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7657 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T13:27:39Z |
| publishDate | 2009 |
| publisher | Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Матвєєва, Н.А. Шаховський, А.М. Герасименко, І.М. Кваско, О.Ю. Кучук, Н.В. 2010-02-01T14:17:08Z 2010-02-01T14:17:08Z 2009 Перенесення гена біосинтезу інтерферону-α2b в рослини цикорію (Cichorium intybus L.) методом агробактеріальної трансформації / Н.А. Матвєєва, А.М. Шаховський, І.М. Герасименко, О.Ю. Кваско, Н.В. Кучук // Біополімери і клітина. — 2009. — Т. 25, № 2. — С. 120-125. — Бібліогр.: 23 назв. — укр. 0233-7657 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/5647 575.222.7:581.1 Генетична трансформація цикорію C. intybus L. становить інтерес з огляду на можливість створення рослин-імуномодуляторів, які містять ген інтерферону-α2b. Для отримання таких рослин оптимізовано умови регенерації цикорію сорту Пала росса та здійснено трансформацію за допомогою Agrobacterium tumefaciens. Показано, що частота регенерації насередо вищі з макроелементами MS, кінетином (0,5–2,5 мг/л) та α-нафтилоцтовою кислотою (0,5 мг/л) сягає 100 %. З використанням полімеразно-ланцюгової реакції встановлено, що ДНК усіх проаналізованих рослин містить як селективний ген nptII, так і цільовий ifn-α2b-ген. Таким чином, методика агробактеріальної трансформації може бути застосована для отри мання генетично модифікованих рослин цикорію з геном, що зумовлює синтез інтерферону-α2b. An efficient method for the plant regeneration and Àgrobacterium mediated transformation with interferon-α2b gene has been developed for chicory C. intybus L. cv. Pala rossa. The regeneration with efficiency about 100 % was induced on the MS medium supplemented with 0.5–2.5 mg/l kinetin and 0.5 mg/l NAA. The transformed plantlets were recovered at a frequency 26,9 % on basal medium with 25 mg/l kanamycin. According to PCR-analysis the nptII and ifn-α2b genes were integrated into the genome of transformed plants. uk Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Молекулярна і клітинна біотехнології Перенесення гена біосинтезу інтерферону-α2b в рослини цикорію (Cichorium intybus L.) методом агробактеріальної трансформації Перенос гена биосинтеза интерферона-α2b в растения цикория (Cichorium intybus L.) методом агробактериальной трансформации Agrobacterium-mediated transformation of Cichorium intybus L. with interferon-α2b gene Article published earlier |
| spellingShingle | Перенесення гена біосинтезу інтерферону-α2b в рослини цикорію (Cichorium intybus L.) методом агробактеріальної трансформації Матвєєва, Н.А. Шаховський, А.М. Герасименко, І.М. Кваско, О.Ю. Кучук, Н.В. Молекулярна і клітинна біотехнології |
| title | Перенесення гена біосинтезу інтерферону-α2b в рослини цикорію (Cichorium intybus L.) методом агробактеріальної трансформації |
| title_alt | Перенос гена биосинтеза интерферона-α2b в растения цикория (Cichorium intybus L.) методом агробактериальной трансформации Agrobacterium-mediated transformation of Cichorium intybus L. with interferon-α2b gene |
| title_full | Перенесення гена біосинтезу інтерферону-α2b в рослини цикорію (Cichorium intybus L.) методом агробактеріальної трансформації |
| title_fullStr | Перенесення гена біосинтезу інтерферону-α2b в рослини цикорію (Cichorium intybus L.) методом агробактеріальної трансформації |
| title_full_unstemmed | Перенесення гена біосинтезу інтерферону-α2b в рослини цикорію (Cichorium intybus L.) методом агробактеріальної трансформації |
| title_short | Перенесення гена біосинтезу інтерферону-α2b в рослини цикорію (Cichorium intybus L.) методом агробактеріальної трансформації |
| title_sort | перенесення гена біосинтезу інтерферону-α2b в рослини цикорію (cichorium intybus l.) методом агробактеріальної трансформації |
| topic | Молекулярна і клітинна біотехнології |
| topic_facet | Молекулярна і клітинна біотехнології |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/5647 |
| work_keys_str_mv | AT matvêêvana perenesennâgenabíosintezuínterferonuα2bvroslinicikoríûcichoriumintybuslmetodomagrobakteríalʹnoítransformacíí AT šahovsʹkiiam perenesennâgenabíosintezuínterferonuα2bvroslinicikoríûcichoriumintybuslmetodomagrobakteríalʹnoítransformacíí AT gerasimenkoím perenesennâgenabíosintezuínterferonuα2bvroslinicikoríûcichoriumintybuslmetodomagrobakteríalʹnoítransformacíí AT kvaskooû perenesennâgenabíosintezuínterferonuα2bvroslinicikoríûcichoriumintybuslmetodomagrobakteríalʹnoítransformacíí AT kučuknv perenesennâgenabíosintezuínterferonuα2bvroslinicikoríûcichoriumintybuslmetodomagrobakteríalʹnoítransformacíí AT matvêêvana perenosgenabiosintezainterferonaα2bvrasteniâcikoriâcichoriumintybuslmetodomagrobakterialʹnoitransformacii AT šahovsʹkiiam perenosgenabiosintezainterferonaα2bvrasteniâcikoriâcichoriumintybuslmetodomagrobakterialʹnoitransformacii AT gerasimenkoím perenosgenabiosintezainterferonaα2bvrasteniâcikoriâcichoriumintybuslmetodomagrobakterialʹnoitransformacii AT kvaskooû perenosgenabiosintezainterferonaα2bvrasteniâcikoriâcichoriumintybuslmetodomagrobakterialʹnoitransformacii AT kučuknv perenosgenabiosintezainterferonaα2bvrasteniâcikoriâcichoriumintybuslmetodomagrobakterialʹnoitransformacii AT matvêêvana agrobacteriummediatedtransformationofcichoriumintybuslwithinterferonα2bgene AT šahovsʹkiiam agrobacteriummediatedtransformationofcichoriumintybuslwithinterferonα2bgene AT gerasimenkoím agrobacteriummediatedtransformationofcichoriumintybuslwithinterferonα2bgene AT kvaskooû agrobacteriummediatedtransformationofcichoriumintybuslwithinterferonα2bgene AT kučuknv agrobacteriummediatedtransformationofcichoriumintybuslwithinterferonα2bgene |