Роль неколагенових білків у in vitro мінералізації: дослідження зв'язування кальцію з остеокальцином методом наноспрей мас-спектрометрії
The NSI-MS technology is used to study the calcium-osteocalcin (OC) and calcium phosphate-OC interactions and the influence of the most abundant noncollagenous protein of bone on the in-vitro mineralization. NSI-FTICR mass spectra show peaks of osteocalcin in pure and oxygenated forms. Both forms ar...
Збережено в:
| Дата: | 2008 |
|---|---|
| Автори: | , , , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Українська |
| Опубліковано: |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
2008
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/5797 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Роль неколагенових білків у in vitro мінералізації: дослідження зв'язування кальцію з остеокальцином методом наноспрей мас-спектрометрії / Л.Ф. Суходуб, М. Гелiнскi, О.М. Калiнкевич, Р. Рюль, А. Шпрiнгер, М. Лiншайд, В. Помпе // Доп. НАН України. — 2008. — № 8. — С. 178-183. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860248437078884352 |
|---|---|
| author | Суходуб, Л.Ф. Гелінскі, М. Калінкевич, О.М. Рюль, Р. Шпрінгер, А. Ліншайд, М. Помпе, В. |
| author_facet | Суходуб, Л.Ф. Гелінскі, М. Калінкевич, О.М. Рюль, Р. Шпрінгер, А. Ліншайд, М. Помпе, В. |
| citation_txt | Роль неколагенових білків у in vitro мінералізації: дослідження зв'язування кальцію з остеокальцином методом наноспрей мас-спектрометрії / Л.Ф. Суходуб, М. Гелiнскi, О.М. Калiнкевич, Р. Рюль, А. Шпрiнгер, М. Лiншайд, В. Помпе // Доп. НАН України. — 2008. — № 8. — С. 178-183. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| description | The NSI-MS technology is used to study the calcium-osteocalcin (OC) and calcium phosphate-OC interactions and the influence of the most abundant noncollagenous protein of bone on the in-vitro mineralization. NSI-FTICR mass spectra show peaks of osteocalcin in pure and oxygenated forms. Both forms are shown to bind three Ca^²+ ions per one OC molecule. Binding with pure OC is characterized by much stronger interactions due to the possible ionic bridging with Gla residues of the OC molecule. The previous NSI-FTICR studies of the more complicated OC+ Ca/P system demonstrate the presence of small stable calcium-phosphate clusters bound with OC.
|
| first_indexed | 2025-12-07T18:39:54Z |
| format | Article |
| fulltext |
оповiдi
НАЦIОНАЛЬНОЇ
АКАДЕМIЇ НАУК
УКРАЇНИ
8 • 2008
БIОФIЗИКА
УДК 577.32
© 2008
Л.Ф. Суходуб, М. Гелiнскi, О. М. Калiнкевич, Р. Рюль,
А. Шпрiнгер, М. Лiншайд, В. Помпе
Роль неколагенових бiлкiв у in vitro мiнералiзацiї:
дослiдження зв’язування кальцiю з остеокальцином
методом наноспрей мас-спектрометрiї
(Представлено академiком НАН України С.В. Комiсаренком)
The NSI-MS technology is used to study the calcium-osteocalcin (OC) and calcium phosphate-
OC interactions and the influence of the most abundant noncollagenous protein of bone on
the in-vitro mineralization. NSI-FTICR mass spectra show peaks of osteocalcin in pure and
oxygenated forms. Both forms are shown to bind three Ca2+ ions per one OC molecule. Binding
with pure OC is characterized by much stronger interactions due to the possible ionic bridging
with Gla residues of the OC molecule. The previous NSI-FTICR studies of the more complicated
OC + Ca/P system demonstrate the presence of small stable calcium-phosphate clusters bound
with OC.
Остеокальцин (ОК) є основним, найбiльш поширеним неколагеновим бiлком мiжклiтинного
матриксу кiсткової тканини. Первинна структура ОК серед хребетних характеризується
високою консервативнiстю. ОК складаються з 46–50 амiнокислот (у людини — 49) та мiс-
тять три залишки γ-карбоксильованої глутамiнової кислоти (Gla) у позицiях 17, 21 та 24.
Точний молекулярний механiзм дiї цього бiлка досi не з’ясований. Вiдомо, однак, що ОК
впливає на бiомiнералiзацiю через його здатнiсть з високою спорiдненiстю зв’язуватись
з гiдроксилапатитом (ГА), що складає мiнеральну фазу кiсток та зубiв [1–4]. Крiм того, ОК
виконує сигнальну роль у взаємодiї остеокластiв та остеобластiв.
Нещодавно методом рентгеноструктурного аналiзу на роздiльнiй здатностi 2,0 Å була
розшифрована структура свинячого ОК [5]. Показано, що свинячий ОК утворює щiльну
глобулярну структуру, яка складається з N-кiнця, трьох α-спiралей (α1 − α3) та коротко-
го витягнутого ланцюга. Три залишки Gla розташованi на поверхнi α1-спiралi, разом iз
залишком Arg-30 з цiєї самої спiралi вони координують п’ять iонiв Ca2+, з утворенням
сандвiч-структури з цих iонiв та двох молекул свинячого ОК (рис. 1). Цi зв’язанi iони Ca2+
вiдтворюють просторове розташування iонiв Ca2+ у площинi (100) ГА (у площинi, пара-
лельнiй до осi c кристала) [5]. Результати 1H-ЯМР дослiджень бичачого ОК та зв’язування
178 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2008, №8
Рис. 1. Угорi та внизу дiлянки α-спiралей двох рiзних молекул ОК. Iони Ca
2+ позначенi кульками, на
α-спiралях позначенi залишки Gla та Asp. Масштабна лiнiйка справа угорi дорiвнює 5 Å [5, 6]
з ним iонiв кальцiю [7] приводять до подiбного висновку про переважну взаємодiю мiж ОК
та площиною (100) кристалiту ГА, де вiдстань мiж iонами кальцiю дорiвнює 9,43 Å: один
атом кальцiю координований трьома атомами кисню з бокових ланцюгiв (два з Asp-30 та
один з Gla-24); другий атом кальцiю координований до чотирьох атомiв кисню (два з боко-
вого ланцюга Gla-24 та два з бокового ланцюга Gla-21); третiй атом кальцiю координований
до двох атомiв кисню з бокового ланцюга Gla-17.
Мас-спектрометрiя. Пiсля вiдкриття iонiзацiї електроспреєм (ESI) [8] та лазерної де-
сорбцiї з матрицi (MALDI) [9] мас-спектрометрiя (МС) стала вельми корисною методикою
у дослiдженнi бiополiмерiв, таких як нуклеїновi кислоти, бiлки та полiсахариди, комплемен-
тарною до бiльш традицiйних бiофiзичних методiв [10]. Новi м’якоiонiзацiйнi методики до-
зволяють детектувати лабiльнi бiохiмiчнi модифiкацiї бiомолекул, такi як глiкозилювання,
карбоксилювання, окиснення та фосфорилювання. Прикладом лабiльної посттрансляцiй-
ної модифiкацiї є утворення залишкiв Gla у ОК. Субформи ОК з рiзним числом залишкiв
Gla дослiджувалися за допомогою ВЕРХ (високоефективна рiдинна хроматографiя)/ESI
МС у комбiнацiї з тандемною МС з електронзахватною дисоцiацiєю (ECD) з метою лока-
лiзацiї залишкiв Gla у бичачому та людському ОК [11]. Методика MALDI також застосо-
вувалася для характеризацiї ОК у сучасних та давнiх зразках [12], але отриманi спектри
показали повне декарбоксилювання зразка пiд час iонiзацiї [13]. Для мас-спектрометрич-
ної iдентифiкацiї багатокомпонентних комплексiв найбiльш придатною методикою є ESI
у комбiнацiї з мас-спектрометрiєю iонно-циклотронного резонансу з перетвореннями Фур’є.
Останнiм часом за допомогою такої методики дослiджували зв’язування ОК з Ca2+, Mg2+
та La3+ [14].
Ми дослiджували комплексоутворення ОК-кальцiй та ОК-фосфат кальцiю за допомо-
гою наноспрей (NSI) FTICR мас-спектрометрiї, щоб отримати iнформацiю щодо гетероген-
ної нуклеацiї фосфату кальцiю на протеїнi.
Матерiали та методи. Приготування зразкiв. Бiлки були придбанi у формi розчину
в Calciobiochem (постачання в 10 мM Na2HPO4, pH 7,4, та 75 мM NaCl) та Biomol (постачан-
ня в 0,01 M Tris, 0,015 M хлорид натрiю, 2 мM хлорид кальцiю, pH 7,4, 50% глiцерин, хч).
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2008, №8 179
Рис. 2. Мас-спектр ESI ОК (973,28) i ОК + O (близько 975,95), ОК + Ca (979,77) та ОК + O + Ca (982,27)
Перед вимiрюваннями вихiдний розчин ОК дiалiзували (мембрана 2 кДа) проти ультрачис-
тої води (18,2 кОм) протягом 12 год та розводили до необхiдної концентрацiї за допомогою
ультраочищеної води, розчину CaCl2 (pH 7,4) та Na2HPO4 (з HCl до pH 7,4) i насичували
фосфатом кальцiю. Для полiпшення якостi мас-спектрiв додавали 0,1% розчин мурашиної
кислоти. Концентрацiя ОК була постiйною в усiх вимiрюваннях — 0,23 пмоль/мкл.
NSI-MS. Мас-спектрометричнi дослiдження ОК та його комплексiв з iонами кальцiю та
фосфатами кальцiю проводили на гiбриднiй установцi NSI-FTICR-MS (Finnigan LTQ FTMS,
Thermo Electron Co., Бремен). Параметри NSI: напруга спрею 1,1 кВ, статичнi наноголки;
параметри введення: напруга/температура вхiдного капiляра 40 В/210 ◦C; iншi параметри:
оптимiзовано по тетрапептиду (MRFA), параметри FTICR: масова точнiсть з використан-
ням зовнiшнього калiбрування 4 ppm, роздiльна здатнiсть близько 100 000 при m/z 400,
число iнжектованих iонiв 5 · 105.
Результати дослiдження та їх обговорення. Вимiрювання чистого ОК. На рис. 2
наведено область шестизарядних iонiв ОК. Молекулярнi iони (M + 6H)6+ вiдповiдають мо-
лекулi з середньою та моноiзотопною масою 5833,70 i 5830,68 вiдповiдно, що збiгається
з очiкуваними середньою та моноiзотопною молекулярними масами для ОК з трьома за-
лишками Gla: 5834,4 та 5830,6 вiдповiдно. На мас-спектрi також присутнiй iнший iзотопний
кластер пiкiв (з максимумом iнтенсивностi для пiка з m/z 975,9503), який дає масу моле-
кули, на 16,02 а. о. м. вищу вiд маси ОК. Ця група пiкiв має значно вищу iнтенсивнiсть
порiвняно з кластером чистого ОК при даних експериментальних умовах.
На нашу думку, розглянута група пiкiв пов’язана з iонами ОК+О. Позицiя атома кисню
у послiдовностi ОК не може бути визначена з чистого мас-спектрометричного експерименту,
для цього потрiбнi квантово-хiмiчнi розрахунки, якi розпочатi нашою групою. Ми може-
мо зробити висновок, що зразок “чистого” ОК показує вiдносно високий вмiст аддуктiв
з кальцiєм навiть пiсля дiалiзу ОК у буферi, що мiстить фосфати.
Ми також вивчали тi ж самi зразки ОК за допомогою MALDI-MS (рис. 3). На мас-спект-
рi спостерiгалися одно- та двозаряднi iони ОК. Однак дослiдження комплексоутворення ОК
за допомогою цiєї методики неможливе через декарбоксилювання залишкiв Gla молекул
ОК, що вiдбувається пiд час iонiзацiї.
180 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2008, №8
Рис. 3. Мас-спектр MALDI ОК та схема декарбоксилювання ОК пiд час iонiзацiї
На мас-спектрах NSI ми спостерiгаємо кiлька iнших цiкавих пiкiв. Можна розрiзнити
двi групи кластерiв: ОК + 40,28 а. о. м. (пiк з максимумом iнтенсивностi на m/z 979,7770)
та ОК–O + 40,6 а. о. м. (пiк з максимумом iнтенсивностi на m/z 982,2749). Виходячи зi
значення маси можна припустити, що цi кластери пов’язанi зi зв’язуванням одного iона
Ca2+ з молекулами ОК та ОК+O, яке супроводжується втратою двох протонiв у кожному
випадку. Щоб отримати бiльш iнтенсивнi спектри, ми провели серiї вимiрювань ОК з CaCl2
при рiзних спiввiдношеннях концентрацiй.
Комплекси ОК-Ca2+. На рис. 4 показано спектр NSI-FTICR сумiшi ОК + CaCl2, що
мiстить 0,025% мурашиної кислоти. На цьому спектрi розрiзняються двi групи кластерiв:
ОК + (Ca2+)n, де n = 0, 1, 2, — пiки максимальної iнтенсивностi з m/z 973,454; 979,611;
985,935, та ОК + O + (Ca2+)n, n=0, 1, 2, — пiки максимальної iнтенсивностi з m/z 975,951;
982,274; 988,598. Кластери, що дають найсильнiший сигнал у спектрi, вiдповiдають iонам
ОК+O+Ca2+. Вiдношення iнтенсивностей пiкiв ОК+O до пiкiв ОК становить 50 : 2. Однак
“чиста” форма ОК характеризується бiльш сильною взаємодiєю з iонами кальцiю. Вiдно-
шення iнтенсивностей пiкiв iонiв ОК до iнтенсивностей пiкiв iонiв ОК + Са2+ для випадку
з першим iоном кальцiю становить 12 : 2 (чистий ОК) та 100 : 50 (окиснена форма ОК)
(див. рис. 4). Таким чином, можна зробити висновок, що окиснена форма ОК має значно
меншу спорiдненiсть до iонiв кальцiю порiвняно з чистою формою. Неокиснена форма ОК
характеризується значно сильнiшим зв’язуванням з iонами кальцiю, оскiльки, вiрогiдно,
групи COO− залишкiв Gla включенi в специфiчне комплексоутворення.
Подальшi експерименти були проведенi зi значно бiльшими концентрацiями CaCl2 у су-
мiшах ОК+CaCl2. На всiх отриманих мас-спектрах розрiзняються двi групи пiкiв: окиснена
форма ОК з трьома iонами кальцiю та ОК з тим же числом iонiв кальцiю, але без додатко-
вого атома кисню. Спiввiдношення iнтенсивностей вiдповiдних пiкiв становить:
з O: 100 (0 Ca, 6 H) : 50 (1 Ca, 4 H) : 9 (2 Ca, 2 H) : 0,8 (3 Ca, 0 H);
без O: 60 (0 Ca, 6 H) : 100 (1 Ca, 4 H) : 100 (2 Ca, 2 H) : 60 (3 Ca, 0 H).
Це свiдчить про те, що третiй iон кальцiю також зв’язується переважно з чистим ОК по-
рiвняно з окисненою формою ОК. Причина такого сильного зв’язування, найiмовiрнiше,
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2008, №8 181
Рис. 4. Мас-спектр ESI ОК з CaCl2
пов’язана з тим, що всi три iони кальцiю стабiлiзованi iонними мiстками iз залишками
Gla-24, Gla-21 та Gla-17 пептиду ОК [5].
Комплекси ОК-Ca/P. Отриманi мас-спектри NSI-FTICR (не зображенi на рисунках) су-
мiшi ОК з насиченим розчином фосфату кальцiю з додаванням 0,02% МК та зарядовим ста-
ном +5 вiдображають найпершi кроки енуклеацiї фосфату кальцiю на ОК. Наприклад, пiки
в районi 1194 та 1203, найбiльш вiрогiдно, пов’язанi з комплексами [Ca2+. . .(HPO4)
2−]0 та
[Ca2+. . .(HPO4)
2−. . .Ca2+]2+ або [Ca2+. . .(PO4)
3−. . .Ca2+]+, що можна розглядати як най-
меншi агрегацiї при асоцiацiї iонiв фосфатiв кальцiю у водних розчинах, подiбнi до описаних
за допомогою квантово-хiмiчного та молекулярно-механiчного моделювання, що проводив
Zahn [15]. Ми припускаємо, що спостережуванi ефекти викликанi специфiчними некова-
лентими взаємодiями протеїну (ОК) з iонами кальцiю. Отже, завдяки високiй спорiднено-
стi ОК до фосфату кальцiю макромолекула ОК закрiплюється на поверхнi кристала, що
росте. У результатi ОК набуває здатностi покривати дiлянки росту i таким чином пере-
шкоджати подальшiй iнкорпорацiї кальцiю та фосфатiв у кристалiт нативних кiсток. На-
явнiсть iнших дiлянок кислих амiнокислот у молекулi ОК та характер комплексоутворення
[ОК–O — iон кальцiю] у мас-спектрометричному експериментi (див. рис. 4) наводять на
думку про додатковий вплив середньої частини бiлкової молекули ОК у iнгiбуваннi росту
мiнералу.
Таким чином, нами дослiджено взаємодiю кальцiй-остеокальцин та фосфат кальцiю-ос-
теокальцин in vitro за допомогою мас-спектрометрiї NSI-FTICR. Показано, що мас-спектри
NSI-FTICR мiстять пiки остеокальцину в “чистiй” та окисненiй формах. Обидвi форми зв’я-
зують три iони Ca2+ на молекулу ОК. Зв’язування чистого ОК характеризується бiльш
182 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2008, №8
сильною взаємодiєю завдяки можливим iонним мiсткам iз залишками Gla у ОК. Першi до-
слiдження NSI-FTICR бiльш складної системи ОК + Ca/P свiдчать про наявнiсть малих
стабiльних кальцiйфосфатних кластерiв, зв’язаних з ОК.
Автори висловлюють вдячнiсть DFG Mercator та DFG-SPP за фiнансову пiдтримку гран-
ту Л.Ф. Суходуба, а також д-ру Д. Куклiнгу за вимiрювання за допомогою мас-спектрометрiї
MALDI та корисну дискусiю.
1. Hauschka P.V., Lian J. B., Cole D.E. C., Gundberg C.M. Osteocalcin and matrix Gla protein: vitamin
K-dependent proteins in bone // Physiol. Rev. – 1989. – 69. – P. 90–1047.
2. Hauschka P.V., Wians F.H. jr. Osteocalcin-hydroxyapatite interaction in the extracellular organic matrix
of bone // Anat. Rec. – 1989. – 224. – P. 180–188.
3. Bradt J. H., Mertig M., Teresiak A., Pompe W. Biomimetic mineralization of collagen by combined fibril
assembly and calcium phosphate formation // Chem. Mater. – 1999. – 11. – P. 2694–2701.
4. Flade K., Lau C, Mertig M., Pompe W. Osteocalcin-controlled dissolution-reprecipitation of calcium
phosphate under biomimetic conditions // Chem. Mater. – 2001. – 13. – P. 3596–3602.
5. Hoang Q.Q., Sicheri F., Howard A. J., Yang D. S. C. Bone recognition mechanism of porcine osteocalcin
from crystal structure // Nature. – 2003. – 425. – P. 977–980.
6. Pettersen E. F., Goddard T.D., Huang C.C. et al. UCSF Chimera – a visualization system for exploratory
research and analysis // J. Comput. Chem. – 2004. – 25. – P. 1605–1612.
7. Dowd T. L., Rosen J. F., Li L., Gundberg C.M. The three-dimensional structure of bovine calcium ion
bound osteocalcin using 1H NMR spectroscopy // Biochemistry. – 2003. – 42. – P. 7769–7779.
8. Yamashita M., Fenn J.B. Electrospray Ion Source. Another Variation on the Free-Jet Theme // J. Phys.
Chem. – 1984. – 88 (20). – P. 4451–4459.
9. Karas M., Hillenkamp F. Laser Desorption Ionization of Proteins with Molecular Masses Exceeding 10000
Daltons // Anal. Chem. – 1988. – 60. – P. 2299–2301.
10. Sukhodub L. F. Soft-ionization mass spectrometry study of deoxynucleoside bioclusters and desoxynucleosi-
de-antitumor medicinal preparation clusters // Mass Spectrom. Rev. – 1995. – 14. – P. 235–254.
11. Niiranen H., Budnik B.A., Zubarev R.A. et al. High-performance liquid chromatography-mass spect-
rometry and electron-capture dissociation tandem mass spectrometry of osteocalcin. Determination of
γ-carboxyglutamic acid residues // J. Chromatogr. A. – 2002. – 962. – P. 95–103.
12. Ostrom P.H., Schall M., Gandhi H. et al. New strategies for characterization ancient proteins using matrix-
assisted laser desorption ionization mass spectrometry // Geochim. et cosmochim. acta. – 2000. – 64 (6). –
P. 1043–1050.
13. Kelleher N. L., Zubarev R.A., Bush K. et al. Localization of labile posttranslational modifications by
electron capture dissociation: the case of γ-carboxyglutamic acid // Anal. Chem. – 1999. – 71. – P. 4250–
4253.
14. Nousiainen M., Derrick P. J., Kaartinen M.T. et al. A mass spectrometric study of metal binding to
osteocalcin // Chem. & Biolog. – 2002. – 9. – P. 195–202.
15. Zahn D. Mechanisms of calcium and phosphate ion association in aqueous solution // Z. anorg. und allg.
Chem. – 2004. – 630. – P. 1507–1511.
Надiйшло до редакцiї 15.01.2008Iнститут прикладної фiзики НАН України, Суми
Дрезденський технiчний унiверситет, Нiмеччина
Берлiнський унiверситет iм. Гумбольдта, Нiмеччина
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2008, №8 183
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-5797 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 1025-6415 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T18:39:54Z |
| publishDate | 2008 |
| publisher | Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Суходуб, Л.Ф. Гелінскі, М. Калінкевич, О.М. Рюль, Р. Шпрінгер, А. Ліншайд, М. Помпе, В. 2010-02-08T13:10:53Z 2010-02-08T13:10:53Z 2008 Роль неколагенових білків у in vitro мінералізації: дослідження зв'язування кальцію з остеокальцином методом наноспрей мас-спектрометрії / Л.Ф. Суходуб, М. Гелiнскi, О.М. Калiнкевич, Р. Рюль, А. Шпрiнгер, М. Лiншайд, В. Помпе // Доп. НАН України. — 2008. — № 8. — С. 178-183. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. 1025-6415 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/5797 577.32 The NSI-MS technology is used to study the calcium-osteocalcin (OC) and calcium phosphate-OC interactions and the influence of the most abundant noncollagenous protein of bone on the in-vitro mineralization. NSI-FTICR mass spectra show peaks of osteocalcin in pure and oxygenated forms. Both forms are shown to bind three Ca^²+ ions per one OC molecule. Binding with pure OC is characterized by much stronger interactions due to the possible ionic bridging with Gla residues of the OC molecule. The previous NSI-FTICR studies of the more complicated OC+ Ca/P system demonstrate the presence of small stable calcium-phosphate clusters bound with OC. uk Видавничий дім "Академперіодика" НАН України Біофізика Роль неколагенових білків у in vitro мінералізації: дослідження зв'язування кальцію з остеокальцином методом наноспрей мас-спектрометрії Article published earlier |
| spellingShingle | Роль неколагенових білків у in vitro мінералізації: дослідження зв'язування кальцію з остеокальцином методом наноспрей мас-спектрометрії Суходуб, Л.Ф. Гелінскі, М. Калінкевич, О.М. Рюль, Р. Шпрінгер, А. Ліншайд, М. Помпе, В. Біофізика |
| title | Роль неколагенових білків у in vitro мінералізації: дослідження зв'язування кальцію з остеокальцином методом наноспрей мас-спектрометрії |
| title_full | Роль неколагенових білків у in vitro мінералізації: дослідження зв'язування кальцію з остеокальцином методом наноспрей мас-спектрометрії |
| title_fullStr | Роль неколагенових білків у in vitro мінералізації: дослідження зв'язування кальцію з остеокальцином методом наноспрей мас-спектрометрії |
| title_full_unstemmed | Роль неколагенових білків у in vitro мінералізації: дослідження зв'язування кальцію з остеокальцином методом наноспрей мас-спектрометрії |
| title_short | Роль неколагенових білків у in vitro мінералізації: дослідження зв'язування кальцію з остеокальцином методом наноспрей мас-спектрометрії |
| title_sort | роль неколагенових білків у in vitro мінералізації: дослідження зв'язування кальцію з остеокальцином методом наноспрей мас-спектрометрії |
| topic | Біофізика |
| topic_facet | Біофізика |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/5797 |
| work_keys_str_mv | AT suhodublf rolʹnekolagenovihbílkívuinvitromíneralízacíídoslídžennâzvâzuvannâkalʹcíûzosteokalʹcinommetodomnanospreimasspektrometríí AT gelínskím rolʹnekolagenovihbílkívuinvitromíneralízacíídoslídžennâzvâzuvannâkalʹcíûzosteokalʹcinommetodomnanospreimasspektrometríí AT kalínkevičom rolʹnekolagenovihbílkívuinvitromíneralízacíídoslídžennâzvâzuvannâkalʹcíûzosteokalʹcinommetodomnanospreimasspektrometríí AT rûlʹr rolʹnekolagenovihbílkívuinvitromíneralízacíídoslídžennâzvâzuvannâkalʹcíûzosteokalʹcinommetodomnanospreimasspektrometríí AT špríngera rolʹnekolagenovihbílkívuinvitromíneralízacíídoslídžennâzvâzuvannâkalʹcíûzosteokalʹcinommetodomnanospreimasspektrometríí AT línšaidm rolʹnekolagenovihbílkívuinvitromíneralízacíídoslídžennâzvâzuvannâkalʹcíûzosteokalʹcinommetodomnanospreimasspektrometríí AT pompev rolʹnekolagenovihbílkívuinvitromíneralízacíídoslídžennâzvâzuvannâkalʹcíûzosteokalʹcinommetodomnanospreimasspektrometríí |