Вплив препаратів нуклеїнових кислот на агрегацію тромбоцитів людини in vitro
In the model of aggregation of human thrombocytes induced by arachidonic acid, it has been shown that nucleic acid samples possess high antiaggregation activity. Particularly, it turned out that purified yeast RNA is highly effective and showed well-prominent characteristics in a wide range of conce...
Gespeichert in:
| Datum: | 2008 |
|---|---|
| 1. Verfasser: | |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Ukrainisch |
| Veröffentlicht: |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
2008
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/5805 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Вплив препаратів нуклеїнових кислот на агрегацію тромбоцитів людини in vitro / З.Ю. Ткачук // Доп. НАН України. — 2008. — № 8. — С. 164-168. — Бібліогр.: 9 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860147572698513408 |
|---|---|
| author | Ткачук, З.Ю. |
| author_facet | Ткачук, З.Ю. |
| citation_txt | Вплив препаратів нуклеїнових кислот на агрегацію тромбоцитів людини in vitro / З.Ю. Ткачук // Доп. НАН України. — 2008. — № 8. — С. 164-168. — Бібліогр.: 9 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| description | In the model of aggregation of human thrombocytes induced by arachidonic acid, it has been shown that nucleic acid samples possess high antiaggregation activity. Particularly, it turned out that purified yeast RNA is highly effective and showed well-prominent characteristics in a wide range of concentrations. Sodium salt of analogous yeast RNA turned out twice as less effective and operated in a much narrower range of concentrations. This is an evidence of the antiinflaminative activity of purified yeast RNA.
|
| first_indexed | 2025-12-07T17:50:40Z |
| format | Article |
| fulltext |
УДК 577.113;577.123;616-008.852;616.155.2
© 2008
З. Ю. Ткачук
Вплив препаратiв нуклеїнових кислот на агрегацiю
тромбоцитiв людини in vitro
(Представлено академiком НАН України О.О. Мойбенком)
In the model of aggregation of human thrombocytes induced by arachidonic acid, it has been
shown that nucleic acid samples possess high antiaggregation activity. Particularly, it turned
out that purified yeast RNA is highly effective and showed well-prominent characteristics in
a wide range of concentrations. Sodium salt of analogous yeast RNA turned out twice as less
effective and operated in a much narrower range of concentrations. This is an evidence of the
antiinflaminative activity of purified yeast RNA.
Лiкарськi засоби на основi нуклеїнових кислот все бiльше застосовуються для лiкування
рiзноманiтних захворювань. Зараз в Українi успiшно застосовується капсульна лiкарська
форма нового iмуномодулятора “Нуклеїнат” на основi високоочищеної дрiжджової РНК
компанiї ДП ”Бiосел”, яка пройшла державну реєстрацiю [1]. Дозволена до клiнiчних ви-
пробовувань 3% iн’єкцiйна лiкарська форма “Нуклеїнату”, яка виготовляється з аналогiчної
субстанцiї. На фармацевтичному ринку Росiї запропонованi у виглядi iн’єкцiйної лiкарської
форми новi препарати “Деринат” “,Феровiр” “,Нуклеоспермiн”, виготовленi на основi ДНК,
та препарат “Натрiю нуклеїнат”, виготовлений на основi натрiєвої солi дрiжджової РНК.
Розпочато реєстрацiю цих препаратiв в Українi.
В iнструкцiях для застосування i в лiтературi немає даних про вплив iн’єкцiйних лiкарсь-
ких форм нуклеїнових кислот на агрегатнi властивостi кровi [2]. У той же час вiдомо, що
один iз похiдних нуклеїнових кислот АТФ викликає агрегацiю тромбоцитiв при додаваннi
до плазми, багатої тромбоцитами.
Порушення агрегатного стану кровi вiдiграють важливу роль у патогенезi багатьох
захворювань, особливо це проявляється в патогенезi рiзних судинних захворювань люди-
ни [3–6]. Пiдвищена агрегацiя тромбоцитiв спостерiгається у здорових людей i з 30 до 50
рокiв зростає вiд 20 до 53%. Вона виявляється у хворих на цироз печiнки, гострi iнфекцiйнi
захворювання, дiабет, атеросклероз, рак, пiсля iнфаркту мiокарда i при тромбоемболiчних
ускладненнях. Пiдвищена агрегацiя при загрозi тромбозу служить показником до антико-
агуляцiйної терапiї, яку проводять для нормалiзацiї агрегацiї [6].
Оскiльки препарати нуклеїнових кислот рекомендуються при вказаних захворюваннях,
метою дослiдження було вивчення впливу нуклеїнових кислот рiзного походження та їх
натрiєвої солi, з домiшками бiлка та рiзного ступеня чистоти на агрегацiю тромбоцитiв,
iндукованою арахiдоновою кислотою.
Матерiали та методи. Дослiджували такi препарати нуклеїнових кислот: ДНК-Т
(з тимуса великої рогатої худоби) та ДНК-ЕК (з еритроцитiв курчат) фiрми “Reanal” (Угор-
щина), препарати ДНК мiстили близько 3% РНК та 2,5% бiлка; препарат тРНК з Escheri-
chia coli виробництва “Serva” (США) та сумарну дрiжджову РНК (РНК-Д) у кiнцевiй кон-
центрацiї 1·10
−2%. За стандарт протизапального препарату використовували аспiрин у кон-
центрацiї 0,06 мг на пробiрку iз збагаченою тромбоцитами плазмою.
164 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2008, №8
Видiлення РНК. З Saccharomyces cerevisiae була отримана РНК-Д, а з Candida utilis
видiлили РНК-П, її натрiєву сiль РНК-ПН та високоочищену РНК-Ф. Екстракцiю дрiжд-
жової РНК проводили за допомогою 10–12% розчину хлористого натрiю при 100–110 ◦C.
РНК вiддiляли вiд дрiжджових залишкiв, охолоджували до 0 ◦C та пiдкислювали соляною
кислотою до pH 1–2. Пiсля випадання в осад РНК промивали етиловим спиртом, висушу-
вали та розчиняли у водi. Гiдроокисом натрiю розчин доводили до pH 8,0–8,2. До розчину
додавали панкреатин та витримували близько 1 год при 37–40 ◦C. Фермент iнактивува-
ли кип’ятiнням, пiсля чого розчин фiльтрували. РНК осаджували охолодженим етиловим
спиртом, пiдкисленим соляною кислотою до pH 1–2 та висушували. Таким чином була отри-
мана сумарна РНК-Ф, що мiстила домiшки ДНК та бiлок (табл. 1). Далi осад РНК фiльт-
рували, промивали етиловим спиртом та розчиняли у водi, додаючи гiдроокис натрiю до
pH 6,2–6,5. РНК-ПН осаджували етиловим спиртом, осад фiльтрували та сушили. РНК-П
отримували з РНК-Ф шляхом додаткового очищення вiд бiлкiв за допомогою повторної iн-
кубацiї з панкреатином при 37–40 ◦C. Потiм фермент iнактивували кип’ятiнням протягом
10 хв. Розчин РНК-П фiльтрували та осаджували пiдкисленим до pH 1–2 спиртом, пiсля
чого осад РНК-П фiльтрували, промивали етиловим спиртом та сушили. Кiнцевий продукт
був доочищений вiд ДНК i бiлка та мав жовто-сiрий колiр. Результати хiмiчного аналiзу
препаратiв нуклеїнових кислот представленi в табл. 1. Електрофорез у 15%-му полiакрила-
мiдному гелi з DS-Na та 7 М сечовиною проводили за методикою, спецiально розробленою
для iдентифiкацiї малих РНК [7].
Вплив препаратiв нуклеїнових кислот на агрегацiю тромбоцитiв пiд впливом арахiдо-
нової кислоти вивчали за методом Born [8]. Статистичну обробку результатiв проводили,
використовуючи критерiй Стьюдента.
Арахiдонова кислота в значних кiлькостях мiститься в кров’яних пластинках. Вмiст
вiльної арахiдонової кислоти в плазмi незначний, а в тромбоцитах вона практично вiдсутня,
тому додавання її до збагаченої тромбоцитами плазми приводить не тiльки до синтезу
простагландинiв, але й до агрегацiї тромбоцитiв. Параметром агрегацiї було вибрано iндекс
агрегацiї клiтин (IA), який дорiвнював:
IA =
D1 − D2
D1
· 100%,
де D1 — оптична густина збагаченої тромбоцитами плазми з арахiдоновою кислотою як iн-
дуктором агрегацiї тромбоцитiв без iнкубацiї; D2 — оптична густина проiнкубованої з пре-
паратом нуклеїнової кислоти, збагаченої тромбоцитами плазми з арахiдоновою кислотою
як iндуктором агрегацiї тромбоцитiв.
Результати та обговорення. На першому етапi вивчали вплив препаратiв нуклеїнових
кислот рiзного походження i природи на iндекс агрегацiї тромбоцитiв людини пiд впливом
арахiдонової кислоти. У дослiдi разом з РНК кишкової палички та дрiжджiв вивчали ДНК,
Таблиця 1. Хiмiчний аналiз препаратiв дрiжджової РНК
Тип препарату Вмiст азоту, % Вмiст фосфору, % Вмiст бiлка, % Вмiст ДНК, %
РНК-Ф 14,16 8,20 < 2 1,2
РНК-П 15,49 9,05 — 1,0
РНК-ПН 14,65 8,54 — 1,0
РНК-Д 15,16 8,60 — 1,1
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2008, №8 165
видiлену з птахiв та великої рогатої худоби. Для порiвняння служив вiдомий препарат
“Аспiрин”. Результати дослiдження наведенi в табл. 2.
Результати дослiдiв показали, що препарати рибонуклеїнових кислот у концентрацiї
1 ·10
−2% iстотно пригнiчують агрегацiю тромбоцитiв, iндукованих арахiдоновою кислотою.
Так, РНК, видiлена з дрiжджiв S. cerevisiae (РНК-Д), майже в два рази сильнiше (59,7%)
пригнiчує агрегацiю iндукованих тромбоцитiв, нiж препарат “Аспiрин” (38,6%); тРНК E. coli
також iстотно (на 52,23%) пригнiчує агрегацiю тромбоцитiв. Препарат ДНК тимуса вели-
кої рогатої худоби (ДНК-Т) пригнiчував агрегацiю тромбоцитiв на 54,45%, що майже на
рiвнi дрiжджової РНК, а препарат ДНК еритроцитiв курчат (ДНК-ЕК) дiяв на рiвнi аспi-
рину (36,93%). Таким чином, препарати нуклеїнових кислот рiзного походження i природи
виявили чiткий антиагрегацiйний ефект на моделi агрегацiї тромбоцитiв людини пiд впли-
вом арахiдонової кислоти. Оскiльки в препаратах ДНК-Т мiститься до 3% РНК, можна
припустити, що виявлений ефект виникає за рахунок наявної в нiй РНК.
Ранiше японськими дослiдниками було показано згубну дiю iн’єкцiй ДНК у кров, що
призводить до полiартриту [9], тому ми виключили з вивчення препарати ДНК i вивчали
вплив РНК на агрегацiю iндукованих тромбоцитiв.
Як випливає з даних табл. 3, дрiжджова РНК дiє в широкому дiапазонi концентра-
цiй вiд 0,1% до 1 · 10
−5%, пригнiчуючи агрегацiю тромбоцитiв вiд 78,5 до 14,2% вiдповiд-
но. Однак збiльшення концентрацiї РНК до 0,5% приводить до рiзкого зменшення iндексу
агрегацiї, що може вказувати на змiни властивостей мембрани тромбоцитiв. Отже, макси-
мальною для iнфузiйних розчинiв РНК є концентрацiя 0,1%, а оптимальна концентрацiя
знаходиться в межах мiж 0,1 та 0,01%.
Ефект пригнiчення агрегацiї тромбоцитiв залежить вiд чистоти препарату РНК i її нат-
рiєвої солi. Данi, наведенi у табл. 4, свiдчать про те, що препарат РНК, очищений вiд бiлка
на третину, покращує її антиагрегатнi властивостi та розширює межi оптимальної концент-
рацiї iнфузiйного розчину. У той же час недостатньо очищена РНК-Ф з домiшками бiлка
i меншим вмiстом азоту та фосфору дiяла значно слабше в дiапазонi концентрацiй вiд 0,1
Таблиця 2. Вплив нуклеїнових кислот у концентрацiї 1 · 10
−2% та аспiрину на iндекс агрегацiї тромбоцитiв,
iндукованих арахiдоновою кислотою
Препарат IA, % P
Аспiрин 38,66 ± 6,71 < 0,02
РНК-Д 59,73 ± 4,24 < 0,01
ДНК-Т 54,45 ± 3,76 < 0,2
ДНК-ЕК 36,93 ± 1,88 < 0,01
тРНК 52,23 ± 8,13 > 0,5
Таблиця 3. Вплив рiзних концентрацiй дрiжджової РНК (РНК-Д) на iндекс агрегацiї тромбоцитiв, iндуко-
ваних арахiдоновою кислотою
Концентрацiя РНК-Д, % Iндекс агрегацiї, %
0,5 12,20 ± 3,91
∗
0,1 78,58 ± 7,51
∗∗
1 · 10
−2
53,08 ± 3,23
∗∗
1 · 10
−3
28,88 ± 1,63
∗
1 · 10
−4
43,35 ± 10,30
∗∗
1 · 10
−5
14,23 ± 4,98
∗
∗
P > 0,001. ∗∗
P < 0,01.
166 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2008, №8
Рис. 1. Електрофорез для малих РНК у 15%-му ПААГ, який мiстив DS-Na та 7 М сечовину, препара-
тiв: тРНК E. сoli (смужка 1, сектор а), 25-членний олiгонуклеотид (смужка 1, сектор б ), високоочищена
дрiжджова РНК (смужка 2 ), натрiєва сiль дрiжджової РНК (смужка 3 )
до 1 · 10
−3%. Наприклад, у найвищiй концентрацiї препарат РНК-Ф пригнiчував агрегацiю
тромбоцитiв на 57,9%, а в найнижчiй концентрацiї — на 18,3%. Високоочищена РНК-П
пригнiчувала агрегацiю тормбоцитiв на третину сильнiше — на 84 та 29,7% вiдповiдно.
Досить важливими виявилися результати вивчення натрiєвої солi РНК, яка є субстан-
цiєю для вiдомого препарату “Натрiю нуклеїнат”. Переведення препарату з рибонуклеїно-
вої кислоти в її сiль досить радикально гасить її антиагрегатнi властивостi. Цей препарат
РНК-ПН у найвищiй концентрацiї дiяв у два рази слабше (45,9%), а в найнижчiй концентра-
цiї взагалi не виявляв антиагрегатних властивостей, хоч за чистотою вiн мало вiдрiзнявся
вiд РНК-П (див. табл. 1). Iстотно, що межа оптимальної концентрацiї для iнфузiйного роз-
чину цього препарату також у десять разiв вужча.
Подальше електрофоретичне вивчення препаратiв РНК за допомогою особливо розроб-
леного методу для малих РНК в 15% полiакриламiдному гелi (ПААГ), який мiстив DS-Na
та 7 М сечовину, показало значну вiдмiннiсть у структурi даних РНК (рис. 1). Коли були
використанi як маркери молекулярної маси тРНК E. coli та олiгонуклеотид завдовжки 25
членiв, то в умовах електрофорезу для малих РНК високоочищена дрiжджова РНК руха-
Таблиця 4. Вплив рiзних концентрацiй i ступеня очищення РНК та її натрiєвої солi на iндекс агрегацiї
тромбоцитiв, iндукованих арахiдоновою кислотою, %
Концентрацiя
препарату, %
РНК-П,
високоочищена
РНК-ПН,
натрiєва сiль
РНК-Ф,
недостатньо очищена
0,1 84,09 ± 3,77
∗
45,96 ± 8,96
∗
57,90 ± 9,58
∗2
1 · 10
−2
71,91 ± 8,45
∗
55,44 ± 8,04
∗4
60,90 ± 10,39
∗5
1 · 10
−3
29,76 ± 5,36
∗
3,72 ± 2,40
∗3
18,26 ± 5,46
∗4
∗
P < 0,001. ∗2
P < 0,02. ∗3
P < 0,1. ∗4
P < 0,2. ∗5
P < 0,5.
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2008, №8 167
лася гомогенною смужкою в зонi 25 нуклеотидiв, тодi як натрiєва сiль дрiжджової РНК
рухалася гетерогенною смугою починаючи вiд маркера тРНК з молекулярною масою 19000
аж до смужки 25-членного олiгонуклеотиду з молекулярною масою 7000.
Отже, на моделi агрегацiї тромбоцитiв, iндукованих арахiдоновою кислотою, показано,
що препарати нуклеїнових кислот i особливо високоочищенi РНК дрiжджiв, на вiдмiну вiд
її натрiєвої солi, мають добре вираженi антиагрегатнi властивостi з широкою межею опти-
мальної концентрацiї. Високоочищена дрiжджова РНК своєю гомогеннiстю та низькою мо-
лекулярною масою, що дозволяє зарахувати її до малих РНК, також вигiдно вiдрiзняється
вiд гетерогенної натрiєвої солi дрiжджової РНК.
Описанi вище позитивнi властивостi високоочищеної дрiжджової РНК у порiвняннi з її
натрiєвою сiллю були реалiзованi при створеннi рiзних лiкарських форм iмуномодуляторiв
пiд комерцiйною назвою “Нуклеїнат” i в тому числi iн’єкцiйної форми даного препарату.
1. Нуклеїнат. Реєстрацiйне посвiдчення на лiкарський засiб. № UA/2885/01/02 вiд 17.03.2005. – № 112.
2. Пащук Л.К., Апрышко Г.Н., Трещалина Е.М. Препараты ДНК как потенциальные терапевтические
средства // Химико-фармацевт. журн. – 1995. – 29, № 6. – С. 61–64.
3. Zhou Q., Hellermann G.R., Solomonson L. P. Nitric oxide release from resting human platelets // Thromb.
Res. – 1995. – 77, No 1. – P. 87–86.
4. Сalver A., Collier J., Moncada S., Vallance P. Effect of local intra-arterial NG-monomethyl-L-arginin in
patients with hypertension: the nitric oxide dilator mechanism appears abnormal // J. Hypertens. – 1990. –
10, № 9. – P. 1025–1031.
5. Calver A., Collier J., Valance P. Inhibition and stimulation of nitric oxide synthesis in the human foream
arterial bed of patients with insulin-dependent diabet // J. Clin. Invest. – 1992. – 90, No 6. – P. 2548–2554.
6. Drexler H., Zeiher A.M., Meinzer K., Just H. Correction of endothelial dysfunction in coronary mi-
crocirculation of hypercholesterolaemic patient by L-arginine // Lancet. – 1991. – 21–28, No 338. –
P. 8782–8783; 1546–1550.
7. Mette M.F., Autsatz W., van der Winden J. et al. Transcriptional silencing and promoter methylation
triggered by double-stranded // EMBO J. – 2000. – 19. – P. 5194–5201.
8. Born L.V.R. The aggregation of blood platelets by diphosphate and its reversal // Nature. – 1962. – 94. –
P. 327.
9. Kohki Kawane, Mayumi Ohtani, Keiko Miwa et al. Chronic polyarthritis caused by mammalian DNA that
escapes from degradation in macrophages // Nature. – 2006. – 443. – P. 998–1002.
Надiйшло до редакцiї 15.02.2008Iнститут молекулярної бiологiї
i генетики НАН України, Київ
ДП “БiоСел”, Київ
168 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2008, №8
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-5805 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 1025-6415 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T17:50:40Z |
| publishDate | 2008 |
| publisher | Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Ткачук, З.Ю. 2010-02-08T13:23:48Z 2010-02-08T13:23:48Z 2008 Вплив препаратів нуклеїнових кислот на агрегацію тромбоцитів людини in vitro / З.Ю. Ткачук // Доп. НАН України. — 2008. — № 8. — С. 164-168. — Бібліогр.: 9 назв. — укр. 1025-6415 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/5805 577.113;577.123;616-008.852;616.155.2 In the model of aggregation of human thrombocytes induced by arachidonic acid, it has been shown that nucleic acid samples possess high antiaggregation activity. Particularly, it turned out that purified yeast RNA is highly effective and showed well-prominent characteristics in a wide range of concentrations. Sodium salt of analogous yeast RNA turned out twice as less effective and operated in a much narrower range of concentrations. This is an evidence of the antiinflaminative activity of purified yeast RNA. uk Видавничий дім "Академперіодика" НАН України Біологія Вплив препаратів нуклеїнових кислот на агрегацію тромбоцитів людини in vitro Article published earlier |
| spellingShingle | Вплив препаратів нуклеїнових кислот на агрегацію тромбоцитів людини in vitro Ткачук, З.Ю. Біологія |
| title | Вплив препаратів нуклеїнових кислот на агрегацію тромбоцитів людини in vitro |
| title_full | Вплив препаратів нуклеїнових кислот на агрегацію тромбоцитів людини in vitro |
| title_fullStr | Вплив препаратів нуклеїнових кислот на агрегацію тромбоцитів людини in vitro |
| title_full_unstemmed | Вплив препаратів нуклеїнових кислот на агрегацію тромбоцитів людини in vitro |
| title_short | Вплив препаратів нуклеїнових кислот на агрегацію тромбоцитів людини in vitro |
| title_sort | вплив препаратів нуклеїнових кислот на агрегацію тромбоцитів людини in vitro |
| topic | Біологія |
| topic_facet | Біологія |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/5805 |
| work_keys_str_mv | AT tkačukzû vplivpreparatívnukleínovihkislotnaagregacíûtrombocitívlûdiniinvitro |