Анализ мутаций H626R, A546T, T538R гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией стромы роговицы из Украины

Проведен анализ мутаций H626R (экзон 14), A546T, T538R (экзон 12) гена TGFBI с использованием метода полимеразной цепной реакции с последующей рестрикцией у 52 индивидов из 22 неродственных семей с клиническим диагнозом разных типов решетчатой дистрофии роговицы....

Full description

Saved in:

Bibliographic Details
Date:	2007
Main Authors:	Пампуха, В.Н., Дрожжина, Г.И., Лившиц, Л.А.
Format:	Article
Language:	Russian
Published:	Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України 2007
Series:	Цитология и генетика
Subjects:	Оригинальные работы
Online Access:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/66606
Tags:	Add Tag No Tags, Be the first to tag this record!
Journal Title:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Cite this:	Анализ мутаций H626R, A546T, T538R гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией стромы роговицы из Украины / В.Н. Пампуха, Г.И. Дрожжина, Л.А. Лившиц // Цитология и генетика. — 2007. — Т. 41, № 6. — С. 56-61. — Бібліогр.: 30 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-66606
record_format	dspace
spelling	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-666062025-02-09T20:40:35Z Анализ мутаций H626R, A546T, T538R гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией стромы роговицы из Украины Analysis of H626R, A546T, T538R mutations of the TGFBI gene in patients with lattice corneal dystrophies from Ukraine Пампуха, В.Н. Дрожжина, Г.И. Лившиц, Л.А. Оригинальные работы Проведен анализ мутаций H626R (экзон 14), A546T, T538R (экзон 12) гена TGFBI с использованием метода полимеразной цепной реакции с последующей рестрикцией у 52 индивидов из 22 неродственных семей с клиническим диагнозом разных типов решетчатой дистрофии роговицы. Проведено аналіз мутацій H626R (екзон 14), A546T, T538R (екзон 12) гена TGFBI з використанням методу полімеразної ланцюгової реакції з наступною рестрикцією у 52 осіб з 22 неспоріднених родин з клінічним діагнозом різних типів гратчастої дистрофії. In our study H626R (exon 14), A546T, T538R (exon 12) mutations of the TGFBI gene were analyzed using polymerase chain reaction followed by restriction digestion in 52 individuals from 22 unrelated families with different forms of lattice corneal dystrophy. 2007 Article Анализ мутаций H626R, A546T, T538R гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией стромы роговицы из Украины / В.Н. Пампуха, Г.И. Дрожжина, Л.А. Лившиц // Цитология и генетика. — 2007. — Т. 41, № 6. — С. 56-61. — Бібліогр.: 30 назв. — рос. 0564-3783 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/66606 575.11:577.21:576.31:617.713–007.17–02 ru Цитология и генетика application/pdf Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
topic	Оригинальные работы Оригинальные работы
spellingShingle	Оригинальные работы Оригинальные работы Пампуха, В.Н. Дрожжина, Г.И. Лившиц, Л.А. Анализ мутаций H626R, A546T, T538R гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией стромы роговицы из Украины Цитология и генетика
description	Проведен анализ мутаций H626R (экзон 14), A546T, T538R (экзон 12) гена TGFBI с использованием метода полимеразной цепной реакции с последующей рестрикцией у 52 индивидов из 22 неродственных семей с клиническим диагнозом разных типов решетчатой дистрофии роговицы.
format	Article
author	Пампуха, В.Н. Дрожжина, Г.И. Лившиц, Л.А.
author_facet	Пампуха, В.Н. Дрожжина, Г.И. Лившиц, Л.А.
author_sort	Пампуха, В.Н.
title	Анализ мутаций H626R, A546T, T538R гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией стромы роговицы из Украины
title_short	Анализ мутаций H626R, A546T, T538R гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией стромы роговицы из Украины
title_full	Анализ мутаций H626R, A546T, T538R гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией стромы роговицы из Украины
title_fullStr	Анализ мутаций H626R, A546T, T538R гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией стромы роговицы из Украины
title_full_unstemmed	Анализ мутаций H626R, A546T, T538R гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией стромы роговицы из Украины
title_sort	анализ мутаций h626r, a546t, t538r гена tgfbi у больных с решетчатой дистрофией стромы роговицы из украины
publisher	Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
publishDate	2007
topic_facet	Оригинальные работы
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/66606
citation_txt	Анализ мутаций H626R, A546T, T538R гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией стромы роговицы из Украины / В.Н. Пампуха, Г.И. Дрожжина, Л.А. Лившиц // Цитология и генетика. — 2007. — Т. 41, № 6. — С. 56-61. — Бібліогр.: 30 назв. — рос.
series	Цитология и генетика
work_keys_str_mv	AT pampuhavn analizmutaciih626ra546tt538rgenatgfbiubolʹnyhsrešetčatoidistrofieistromyrogovicyizukrainy AT drožžinagi analizmutaciih626ra546tt538rgenatgfbiubolʹnyhsrešetčatoidistrofieistromyrogovicyizukrainy AT livšicla analizmutaciih626ra546tt538rgenatgfbiubolʹnyhsrešetčatoidistrofieistromyrogovicyizukrainy AT pampuhavn analysisofh626ra546tt538rmutationsofthetgfbigeneinpatientswithlatticecornealdystrophiesfromukraine AT drožžinagi analysisofh626ra546tt538rmutationsofthetgfbigeneinpatientswithlatticecornealdystrophiesfromukraine AT livšicla analysisofh626ra546tt538rmutationsofthetgfbigeneinpatientswithlatticecornealdystrophiesfromukraine
first_indexed	2025-11-30T14:31:56Z
last_indexed	2025-11-30T14:31:56Z
_version_	1850226109036101632
fulltext	56 ISSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2007. № 6 Проведен анализ мутаций H626R (экзон 14), A546T, T538R (экзон 12) гена TGFBI с использованием метода полимеразной цепной реакции с последующей рестрик� цией у 52 индивидов из 22 неродственных семей с клини� ческим диагнозом разных типов решетчатой дистрофии роговицы. Мутация H626R была выявлена у пациентов в 12 из 17 обследованных семей с клиническим диагнозом решетчатой дистрофии с поздней манифестацией и у 6 человек, у которых еще не было клинических проявлений заболевания. Интересно отметить, что мутации T538R и H626R, которые ассоциированы с решетчатой дистро� фией с поздней манифестацией заболевания, были выяв� лены у двух пациентов с предварительным клиническим диагнозом решетчатой дистрофии (тип I), который ха� рактеризуется ранним проявлением заболевания. Мута� ция A546T не была выявлена ни у одного из наших паци� ентов. Обсуждаются также возможные особенности мутантного белка tgfbi и его вовлеченность в патогенез заболевания. Полученные результаты свидетельствуют о том, что анализ мутаций в гене TGFBI имеет важное значение в дифференциальной диагностике дистрофий роговицы с прогностическим и терапевтическим приме� нением, а также для генетического консультирования в семьях высокого риска. Введение. Наследственные дистрофии рого� вицы – гетерогенная группа прогрессирующих заболеваний, которые приводят к помутнению роговицы и существенному снижению зрения. Общим характерным признаком этих дистро� фий является наличие в строме аномальных депозитов, которые локализуются в кератоци� тах или среди фибрилл коллагена [1, 2]. Среди амилоидных дистрофий роговицы наиболее распространенной является решетчатая дис� трофия. Решетчатая дистрофия (тип І) – двусторон� нее прогрессирующее заболевание с аутосомно� доминантным типом наследования. Первые клинические признаки проявляются в первом� втором десятилетии жизни. Полная клиничес� кая картина наступает в третьем�четвертом десятилетии жизни, и для нее характерны прозрачные решетчатые структуры в передних и средних пластах стромы, точечные сероватые помутнения в поверхностных пластах и цент� ральное диффузное субэпителиальное помут� нение [3, 4]. Больные часто страдают от рециди� вов эрозионных процессов [5, 6]. При световой микроскопии срезов роговицы больных с ре� шетчатой дистрофией наблюдают фибрилляр� ные депозиты амилоида, которые расположены под боуменовою мембраной, а также в поверх� ностных и средних пластах стромы. В эндоте� лии и десцеметовой мембране амилоидные отложения отсутствуют. Депозиты имеют вид тонких (диаметр 8–10 нм) неразветвленных фибрилл, которые расположены параллельно волокнам коллагена. Количество кератоцитов уменьшено, и большинство из них имеют де� генеративные изменения [6, 7]. Кроме решет� чатой дистрофии I типа, различают по мень� шей мере еще пять клинических типов решетчатой дистрофии. Решетчатая дистрофия (тип ІІ) имеет аутосомно�рецессивный тип наследования и является одним из проявле� ний системного амилоидоза (синдрома Мере� тойя), при котором поражаются также кожа и нервы. Депозиты амилоида выявляют в рогови� це, а также в нервах и коже. Фибриллярные депозиты в роговице немногочисленны, то� чечные образования, как правило, отсутству� ют. Зрение остается довольно высоким до са� мой старости. Поражение нервной системы при упомянутом синдроме проявляется в виде полинейропатии, дефекты кожи – в виде ее сухости, блефарохолязиса, что предопределяет УДК 575.11:577.21:576.31:617.713–007.17–02 В.Н. ПАМПУХА 1, Г.И. ДРОЖЖИНА 2, Л.А. ЛИВШИЦ 1 1 Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины Ул. Академика Заболотного, 150, Киев, 03143, Украина 2 Институт глазных болезней и тканевой терапии им. В.П. Филатова АМН Украины Французский бульвар, 49/51, Одесса, 65061, Украина E;mail: livshits@imbg.org.ua АНАЛИЗ МУТАЦИЙ H626R, A546T, T538R ГЕНА TGFBI У БОЛЬНЫХ С РЕШЕТЧАТОЙ ДИСТРОФИЕЙ СТРОМЫ РОГОВИЦЫ ИЗ УКРАИНЫ © В.Н. ПАМПУХА, Г.И. ДРОЖЖИНА, Л.А. ЛИВШИЦ, 2007 57 маскоподобное лицо [8]. В 1987 г. Хида и соавт. [9] описали третий клинический тип дистро� фии стромы роговицы, для которой характерен аутосомно�рецессивный тип наследования. Для этого типа характерны решетчатые струк� туры, образованные толстыми радиально рас� положенными фибриллами. Рецидивы эрозий роговицы для этого типа не характерны. Ре� шетчатая дистрофия (тип ІІІ) начинает прояв� ляться в четвертой�пятой декаде жизни, и зре� ние существенно снижается после 60 лет. В 1991 г. Сток и соавт. [10] описали тип дистро� фии, для которой характерными являются позднее клиническое проявление и толстые решетчатые образования, но которая наследу� ется аутосомно�доминантно. Эрозии роговицы являются непостоянным признаком. Этот тип дистрофии определяют как решетчатая дистро� фия (тип ІІІА). В 1999 г. Стюарт и соавт. [11] описали асимметричную, с поздней манифес� тацией форму решетчатой дистрофии. В свою очередь Шмидт�Бернард и соавт. [12], проведя исследование клинических, гистопатологи� ческих и ультраструктурных особенностей за� болевания, пришли к заключению, что указан� ный тип дистрофии является отдельной группой решетчатых дистрофий – промежуточ� ным между типами І и ІІІА. Для промежуточно� го типа характерно более раннее проявление заболевания (третья�четвертая декада жизни) и более тонкие решеткоподобные линии, чем при типе ІІІА. Фуждики и соавт. [13] в 1998 г. описали так называемую глубокую форму ре� шетчатой дистрофии, которую выделили в IV тип. Первые клинические признаки проявляют� ся в пятой декаде жизни. Характерные депози� ты звездчатой формы размещаются в глубоких пластах стромы. Радиальные решеткоподобные структуры в средних пластах стромы появля� ются позже, а в верхних пластах стромы и эпи� телии депозиты отсутствуют. За последнее десятилетие был достигнут зна� чительный прогресс в установлении причин, которые предопределяют развитие дистрофий роговицы. На сегодня идентифицировано 12 генов�кандидатов, мутации в которых могут являться причиной патогенеза разных видов и типов дистрофий (TGFBI, STS, CHTS6, GSN, KRT3, KRT12, M1S1, GLA, ARSC1, COL8A2, DCN, PIP5K3) [14–16]. Предполагается, что му� тации в шести генах, а именно TGFBI, CHTS6, STS, GSN, M1S1, DCN, являются причиной дистрофий стромы роговицы. В 1997 г. был открыт ген, который индуци� руется трансформирующим фактором роста бета (TGFBI�ген или BIGH3�ген) и локализуется на длинном плече хромосомы 5 в области 5q31 [17]. Белковым продуктом гена TGFBI является ке� ратоэпителин – экстрацеллюлярный матрикс� ный белок, состоящий из 683 аминокислот [18]. Кератоэпителин в тканях выполняет адгезив� ную функцию. Он синтезируется в клетках эпи� телия роговицы, но также может синтезировать� ся и в клетках стромы при заживлении ран. Установлено, что мутации в гене TGFBI пре� допределяют наследственные дистрофии с аутосомно�доминантным типом наследования, а именно узелковую дистрофию (тип I), решет� чатую дистрофию (типы I, ІІІА, IV), узелково� решетчатую (дистрофия Авеллино), дистро� фии Рейс�Бюклерса, Тиля�Бенке [17, 19–21]. У большинства пациентов с дистрофиями ро� говицы выявляют мутации, которые возникают в кодонах 124 и 555 гена TGFBI. Кроме того, наблюдается ассоциация определенных видов и типов дистрофий с определенными мутаци� ями. В наших исследованиях и работах других авторов показано, что специфической для ре� шетчатой дистрофии (тип I) является мутация R124C, для узелково�решетчатой – мутация R124H, для дистрофии Рейс�Бюклерса – му� тация R124L, для узелковой дистрофии (тип I) – мутация R555W, для дистрофии Тиля�Бенке – R555Q [17, 19–23]. На сегодняшний день в гене TGFBI иден� тифицировано около 30 мутаций. Поскольку большинство мутаций открыто в экзонах 4, 12, и 14, можно предположить, что они являются горячими точками мутаций. Исследование ассоциации определенных мутантных вариантов с клиническими прояв� лениями решетчатой дистрофии имеет важное значение как для выяснения функций самого кератоэпителина, так и для анализа механиз� мов патогенеза заболевания. В свою очередь результаты таких исследований позволят улучшить дифференциальную диагностику и прогноз заболевания. Целью настоящей работы было исследова� ние мутаций H626R (экзон 14), A546T (экзон ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2007. № 6 Анализ мутаций H626R, A546Т, T538R гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией 58 12), T538R (экзон 12) гена TGFBI у больных с разными клиническими формами решетчатой дистрофии стромы роговицы. Материалы и методы. Клинические и моле� кулярно�генетические исследования были про� ведены после информированного согласия у 31 индивида с наследственными дистрофиями стромы роговицы из 22 семей и среди 21 клини� чески здоровых членов семей больных. Среди обследованных были 26 пациентов и 19 здо� ровых индивидов из 17 семей с решетчатой дистрофией с поздней манифестацией заболе� вания, 5 пациентов и 2 здоровых индивида из 5 семей с типичной клинической картиной решетчатой дистрофии (тип I), у которых не была выявлена в наших предыдущих исследо� ваниях специфическая для данного типа мута� ция R124C [22, 23]. Материалом для молекулярно�генетическо� го исследования служили образцы периферий� ной крови индивидов из группы обследования, для морфологического и гистохимического исследования – диски роговицы, полученные после проведенной кератопластики. Гистохими� ческие и ультраструктурные исследования про� водили по методикам, описанным ранее [24]. Выделение и очистку препаратов ДНК из лей� коцитов периферической крови осуществляли стандартным методом фенол�хлороформной экстракции [25]. Для анализа мутантных вари� антов гена TGFBI проводили специфическую амплификацию in vitro ДНК последователь� ностей 12�го и 14�го экзонов методом полиме� разной цепной реакции (ПЦР) [26]. Полиме� разную цепную реакцию проводили в авто� матическом режиме на термоциклере Perkin Elmer (фирма «Cetus», США) по схеме: дена� турация ДНК – 45 с при 94 °С, отжиг прайме� ров – 45 с при 55 °С, элонгация – 1 мин при 72 °С. Были использованы следующие после� довательности олигонуклеотидных праймеров: для мутаций A546T, T538R, forward (5'� GGACTGACGGAGACCCTCAA�3'), reverse (5'�GGAGACGTGTACTTAAGTTGGTC�3'); для мутации H626R, forward (5'�GAAAAА CAATGTGGTGAGTGTC�3'), reverse (5'�CATG GAGAAAAGGACTGGCTG�3'). Для дифференциального анализа определен� ных типов мутаций проводили гидролиз амп� лифицированных последовательностей 12�го и 14�го экзонов эндонуклеазами рестрикции Hinf.I, MwoI, NlaIII для мутаций T538R, A546T, H626R соответственно. Результаты исследований и их обсуждение. При клинико�генеалогическом анализе у всех пациентов с решетчатой дистрофией установ� лен аутосомно�доминантный тип наследования. Гистохимические исследования осуществляли на материале роговицы тех больных, у которых была проведена кератопластика. У больных с клиническими диагнозами решетчатая дис� трофия роговицы (типы І, IIIA, IV) были выяв� лены характерные для упомянутых типов мор� фологические и ультраструктурные признаки, описанные нами ранее [24]. В результате молекулярно�генетического анализа мутация A546T гена TGFBI не выявле� на ни у одного из пациентов с поздним клини� ческим проявлением решетчатой дистрофии. Следует отметить, что указанная мутация была выявлена у пациентов с решетчатой дистро� фией (тип IIIA) из Франции [27]. В результате проведенных нами исследова� ний мутация H626R была выявлена у пациентов из 12 семей, и лишь в одной семье с предва� рительным клиническим диагнозом решетча� той дистрофии (тип IIIA) данная мутация не выявлена (рис. 1). Кроме того, упомянутая му� тация была выявлена у 6 лиц, у которых еще не наблюдались клинические признаки заболева� ния. Интересно отметить, что мутация H626R была также выявлена у одного пациента с кли� ническим диагнозом решетчатая дистрофия (тип I), что заставляет задуматься о недоста� точности данных клинического исследования для постановки точного диагноза и идентифи� кации формы заболевания. В пользу такого за� ключения свидетельствуют результаты анализа мутации T538R гена TGFBI в обследуемой груп� пе пациентов. Мутация T538R не была выяв� лена ни у одного из пациентов с предваритель� ным клиническим диагнозом (тип IIIA), тем не менее была обнаружена у одного пациента, ко� торому был поставлен клинический диагноз решетчатой дистрофии І типа (рис. 2). В рабо� те Муньер и соавт. [28] было высказано пред� положение, что указанная мутация, впервые идентифицированная Отенин�Жирардом и соавт. [29], как и мутация H626R, могут быть ассоциированы с промежуточным типом І/ІІІА. ISSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2007. № 6 В.Н. Пампуха, Г.И. Дрожжина, Л.А. Лившиц 59ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2007. № 6 Анализ мутаций H626R, A546Т, T538R гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией ... Важно отметить, что мутация H626R выяв� лена в исследованиях других авторов у пациен� тов с решетчатой дистрофией, основными кли� ническими признаками которой являются начало заболевания в третьей�пятой декаде жизни, решеткоподобные линии определен� ной толщины, ярко выраженная асимметрич� ность клинической картины, наблюдаемой в разных глазах, широкая вариабельность за� болевания даже в границах одной семьи [12]. Среди семей с поздним клиническим про� явлением решетчатой дистрофии стромы рого� вицы было четыре семьи, которые имели харак� терные симптомы решетчатой дистрофии (тип IV). Ни в одной из этих семей исследуемые на� ми мутации не выявлены. Исходя из результатов моделирования тре� тичной структуры домена 4 белка кератоэпи� телина, было высказано предположение, что мутация T538R, приводящая к замене треонина на аргинин, обусловливает нарушение фолдин� га белкового продукта, что в свою очередь де� лает невозможным секрецию белка [30]. Авторы исследования прогнозируют, что у пациентов с упомянутой мутацией амилоидные депозиты должны возникать в первой декаде жизни. Однако в нашем исследовании мутация T538R была выявлена у пациента, у которого первые признаки заболевания были отмечены лишь в третьей декаде жизни. Исходя из результатов моделирования, при мутации A546T секреция белка становится невозможной или же мута� ция приводит к существенной дестабилизации самого белка. Мутация H626R приводит к де� стабилизации водородных связей. Кроме того, консервативность гистидина в данном положе� нии, наблюдаемая в доменах всех белков fas1� суперсемейства, свидетельствует о ее важнос� ти для процесса фолдинга, и поэтому мало� вероятно, что белок с мутацией H626R будет подвергаться фолдингу и секретироваться. Исходя из предполагаемых функций мутантных белков, спрогнозированных по результатам моделирования третичной структуры, можно было предположить, что у всех пациентов с обнаруженными нами мутациями, должно наб� людаться раннее проявление заболевания. Одна� ко полученные нами результаты не позволяют подтвердить данное предположение. Так, у па� циента, у которого выявлена мутация T538R, начало манифестации заболевания было в третьей декаде жизни. В свою очередь у подав� ляющего числа пациентов (за исключением одного пациента с предполагаемым клиничес� ким типом I решетчатой дистрофии и ранней Рис. 1. Анализ мутации H626R в экзоне 14 гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией роговицы (ПЦР + NlaIII; 10 % ПААГ): 1 – маркер молекулярной массы Gene Ruler 50bp DNA Ladder; 2–4 – больные индивиды; 5, 6 – здоровые Рис. 2. Анализ мутации T538R в экзоне 12 гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией роговицы (ПЦР + Hinf.I; 10 % ПААГ): 1, 2 – больные индивиды; 3–5 – здоровые индивиды; 6 – маркер молекулярной массы pUC19DNA/MspI 60 ISSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2007. № 6 В.Н. Пампуха, Г.И. Дрожжина, Л.А. Лившиц манифестацией заболевания), у которых была выявлена мутация H626R, первые признаки заболевания проявились в позднем возрасте. Особый интерес представляет тот факт, что у пациентов, исследованных другими авторами, и у одного из пациентов в наших исследовани� ях наблюдалась так называемая асимметрия проявления клинических признаков. Это про� являлось в том, что патологические депозиты наблюдались в одном глазу, и лишь спустя про� должительное время слабое проявление решет� чатой дистрофии можно было обнаружить во втором глазу. На сегодняшний день мы не можем пред� положить возможный механизм таких процес� сов, и, возможно, дальнейшие более детальные исследования структуры и свойств мутантного белка и его взаимодействия с белками�партне� рами прольют свет на природу феномена асим� метрии. Выводы. Результаты проведенных нами ис� следований свидетельствуют о том, что для постановки правильного диагноза дистрофии роговицы клинических и морфологических данных может быть недостаточно. Анализ му� тантных вариантов гена TGFBI у больных с наследственными дистрофиями стромы ро� говицы является высокоинформативным для точной дифференциальной диагностики раз� ных видов дистрофий роговицы, что в свою очередь дает возможность подобрать соответ� ствующую тактику лечения. Молекулярно�ге� нетическое обследование всех членов семей больных уже на ранних этапах заболевания позволяет прогнозировать развитие болезни. SUMMARY. In our study H626R (exon 14), A546T, T538R (exon 12) mutations of the TGFBI gene were ana� lyzed using polymerase chain reaction followed by restric� tion digestion in 52 individuals from 22 unrelated families with different forms of lattice corneal dystrophy. H626R mutation was detected in patients from 12/17 families with late onset lattice corneal dystrophies and in 6 unaffected individuals. Interestingly, T538R and H626R mutations, associated with late onset of lattice corneal dystrophy, were found in two patients with preliminary clinical diagnosis of lattice corneal dystrophy (type I) with early onset of dis� ease. A546T mutation was not detected in our patients. The possible properties of mutant tgfbi protein and its involve� ment in pathogenesis are discussed. The results show that TGFBI gene mutation analysis is important for differential diagnosis of corneal dystrophies with prognostic and ther� apeutic implications and for genetic consulting in high risk families. PЕЗЮМЕ. Проведено аналіз мутацій H626R (екзон 14), A546T, T538R (екзон 12) гена TGFBI з використан� ням методу полімеразної ланцюгової реакції з наступ� ною рестрикцією у 52 осіб з 22 неспоріднених родин з клінічним діагнозом різних типів гратчастої дистро� фії. Мутація H626R була виявлена у пацієнтів в 12 із 17 обстежених родин з клінічним діагнозом гратчастої дистрофії з пізньою маніфестацією і в 6 осіб, у яких ще не було клінічних проявів захворювання. Цікаво зазна� чити, що мутації T538R та H626R, асоційовані з грат� частою дистрофією з пізньою маніфестацією захворю� вання, були виявлені у двох пацієнтів з попереднім клінічним діагнозом гратчастої дистрофії (тип I), для якого характерним є ранній прояв захворювання. Му� тація A546T не була виявлена в жодного з наших паці� єнтів. Обговорюються також можливі особливості му� тантного білка tgfbi та його роль в патогенезі за� хворювання. Отримані результати показують, що аналіз мутацій в гені TGFBI має важливе значення в дифе� ренційній діагностиці дистрофій рогівки з прогностич� ним і терапевтичним застосуванням, а також для гене� тичного консультування в родинах високого ризику. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Waring G., Rodrigues M., Laibson R. Corneal dystrophy. Dystrophies of the epithelium, Bowman layer and stro� mas // Surv. Ophthalmol. – 1978. – 23, № 2. – P. 97–101. 2. Weidle E. Epitheliale und stromale Hornhautdyst� rophien // Ophthalmologe. – 1996. – 93. – P. 754–767. 3. Майчук Ю.Ф., Орловская Л.Э. Стромальные дис� трофии: клинические формы и лечение // Офталь� мол. журн. – 1993. – № 4. – С. 224–232. 4. Witschel H. Hornhautdystrophien und Molekularge� netik // Ophthalmologe. – 2002. – 99, № 6. – P. 415–417. 5. Luchs J.I., D’Adversa I., Udel I.J. Ulcerative keratitis associated with spontaneous corneal erosions // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.(Suppl.). – 1995. – 36. – Р. 40. 6. Zechner E.M., Croxatto J.O., Malbran E.S. Superficial involvement in lattice corneal dystrophy // Ophthalmologica. – 1986. – 193. – P. 193–199. 7. Thiel H. Dystrophien des Stromas in Augenheilkunde in Klinik und Praxis. Band 2.–Stuttgart; New York: Thieme Verlag, 1981. – P. 90–97. 8. Meretoja J. Comparative histopathological and clinical findings in eyes with lattice corneal dystrophy of two different types // Ophthalmologica. – 1972. – 165. – P. 15–31. 9. Hida T., Tsubota K., Kigasawa F., Murata H., Ogata T., Akiya S. Clinical features of a newly recognized type of lattice corneal dystrophy // Amer. J. Ophtalmol. – 1987. – 104. – P. 241–248. 61ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2007. № 6 Анализ мутаций H626R, A546Т, T538R гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией 10. Stock E., Feder R., O’Grady R., Sugar J., Roth S. Lattice corneal dystrophy type III�A: clinical and histopatho� logic correlations // Arch. Ophthalmol. – 1991. – 109. – P. 354–358. 11. Stewart H., Black G.C., Donnai D., Bonshek R.E., McCarthy J., Morgan S., Dixon M.J., Ridgway A.A. A mutation within exon 14 of the TGFBI (BIGH3) gene on chromosome 5q31 causes an asymmetric, late�onset form of lattice corneal dystrophy // Ophthalmology. – 1999. – 106. – P. 964–970. 12. Schmitt�Bernard C., Guittard C., Arnaud B., Demaille J., Argiles A., Claustres M., Tuffery�Giraud S. BIGH3 exon 14 mutations lead to intermediate type I/IIIA of lattice corneal dystrophies // Invest. Opthalmol. Vis. Sci. – 2000. – 41. – P. 1302–1308. 13. Fujiki K., Hotta Y., Nakayasu H., Yokoyama T., Takano T., Yamaguchi T., Kanai A. A new L527R mutation of the betaIGH3 gene in patients with lattice corneal dys� trophy with deep stromal opacities // Hum. Genet. – 1998. – 103. – P. 286–289. 14. Auw�Handrich H., Witschel Y. Hornhautdystrophien im Licht moderner molekular genetischer Forschung // Ophthalmologe. – 2002. – 99. – P. 418–426. 15. Klinworth G. Advances in the molecular genetics of corneal dystrophies // Amer. J. Ophthalmol. – 1999. – 128. – P. 747–754. 16. Bron A. Genetics of the corneal dystrophies what we have learned in the past twenty�five years // Cornea. – 2000. – 19. – P. 699–711. 17. Munier L.F., Korvatska E., Djemai A., Palsier D.L., Zografos L., Pescia G., Schorderet D.F. Keratoepithelin mutation in four 5g31�linked corneal dystrophies // Nat. Genet. – 1997. – 15. – P. 247–251. 18. Le Baron R.G., Bezverkov K.I., Zimber M.P., Pavelec R., Skonier J., Purchio A.F. Beta IG�H3, a novel secretory protein inducible by transforming growthfactor�beta, is present in normal skin and promotes the adhesion and spreading of dermal fibroblasts in vitro // J. Invest Dermatol. – 1995. – 104. – P. 844–849. 19. Dighiero P., Niel F., Ellies P., D’Hermies F., Savoldelli M., Renard G., Delpech M., Valleix S. Histologic phe� notype�genotype correlation of corneal dystrophies associated with eight distinct mutations in the TGFBI gene // Ophthalmology. – 2001. – 108. – P. 818–823. 20. Korvatska E., Munier F.L., Djemai A., Wang M.X., Frueh B., Chiou A., Uffer S., Ballestrazzi E., Braunstein R.E., Forster R.K., Culbertson W.W., Boman H., Zografos L., Schorderet D.F. Mutation hot spots in 5q31�linked corneal dystrophies // Amer. J. Hum.Genet. – 1998. – 62. – P. 320–324. 21. Maschima Y., Nakamura Y., Noda K., Konishi M., Yamada M., Kudoh J., Shimizu N. A novel mutation at codon 124 (R124L) in the BGIH3 gene associated with superficial variant of granular corneal dystrophy // Arch. Ophthalmol. – 1999. – 117. – P. 90–93. 22. Pampukha V.M., Drozhyna G.I., Livshits L.A. TGFBI gene mutation analysis in families with hereditary corneal dystrophies from Ukraine // Ophthalmologica. – 2004. – 218. – P. 411–414. 23. Пампуха В.М., Дрожжина В.М., Лившиць Л.А. До� слідження мутацій в 4�му та 12�му екзонах гена TGFBI у хворих із спадковими формами дистрофії рогівки з України // Доп. НАН України. – 2004. – № 3. – С. 186–190. 24. Дрожжина Г.И., Вит В.В., Думброва Н.Э. Молеку� лярно�генетический и клинико�морфологический анализ больных с решетчатой наследственной дис� трофией роговицы // Офтальмол. журн. – 2002. – № 2.–С. 37–41. 25. Маниатис Т., Фрич Э.Э., Сэмбрук Ж. Молекуляр� ное клонирование. – М.: Мир, 1984. – 420 с. 26. Saiki R.K., Gelfand D.H., Stoffel S., Scharf S.J., Higuchi R., Horn G.T., Mullis K.B., Erlich H.A. Primer directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase // Science. – 1988. – 239, № 8580. – P. 487–491. 27. Dighiero P.Drunat S., Ellies P., D’Hermies F., Savoldelli M., Renard G., Delpech M., Valleix S. A new mutation (A546T) of the big�h3 gene responsible for French lat� tice corneal dystrophy typeIIIA // Amer. J. Ophthalmol. – 2000. – 129. – P. 248–251. 28. MunierF.L., FruehB.E., Othenin�GirardP., UfferS., Cou� sin P., Wang M.X., H on E., Black G.C.M., Blasi M.A., Balestrazzi E., Lorenz B., Escoto R., Barraquer R. et al. BIGH3 Mutation spectrum in corneal dystrophies // Invest. Opthalmol. Vis. Sci. – 2002. – 43. – P. 949–954. 29. Othenin�Girard P., Frueh�Epstein B., Gloor B. Identification of mutations in autosomal dominant corneal dystrophies // Invest. Opthalmol. Vis. Sci. – 1999. – 40 (Suppl). – P. 563. 30. Clout N.J., Hohenester E. A model of FAS1 domain 4 of the corneal protein beta (ig)�h3 gives a clearer view on corneal dystrophies // Mol. Vis. – 2003. – 11. – P. 440–448. Поступила 05.02.07

Анализ мутаций H626R, A546T, T538R гена TGFBI у больных с решетчатой дистрофией стромы роговицы из Украины

Institution

Similar Items