Ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин людини в умовах довгострокового культивування
Нами був досліджений мітогенний та диференціювальний потенціал, а також ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин в культурі. Через 1 місяць культивування у відсутності агентів диференціювання кількість CNP-позитивних клітин (мітотичноактивних попередників олігодендроцитів) збільшуєть...
Saved in:
| Published in: | Цитология и генетика |
|---|---|
| Date: | 2009 |
| Main Authors: | , , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Ukrainian |
| Published: |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
2009
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/66664 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин людини в умовах довгострокового культивування / В.І. Цимбалюк, І.Г. Васильєва, Н.П. Олексенко, Н.Г. Чопик, О.І. Цюбко, О.С. Галанта // Цитология и генетика. — 2009. — Т. 43, № 3. — С. 52-57. — Бібліогр.: 14 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860256863776407552 |
|---|---|
| author | Цимбалюк, В.І. Васильєва, І.Г. Олексенко, Н.П. Чопик, Н.Г. Цюбко, О.І. Галанта, О.С. |
| author_facet | Цимбалюк, В.І. Васильєва, І.Г. Олексенко, Н.П. Чопик, Н.Г. Цюбко, О.І. Галанта, О.С. |
| citation_txt | Ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин людини в умовах довгострокового культивування / В.І. Цимбалюк, І.Г. Васильєва, Н.П. Олексенко, Н.Г. Чопик, О.І. Цюбко, О.С. Галанта // Цитология и генетика. — 2009. — Т. 43, № 3. — С. 52-57. — Бібліогр.: 14 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Цитология и генетика |
| description | Нами був досліджений мітогенний та диференціювальний потенціал, а також ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин в культурі. Через 1 місяць культивування у відсутності агентів диференціювання кількість CNP-позитивних клітин (мітотичноактивних попередників олігодендроцитів) збільшується у 3,6 разу. В той же час кількість GalС-позитивних клітин (зрілих олігодендроцитів) залишається низькою. Таким чином, ремієлінізучі властивості ембріональних нервових клітин можуть бути пояснені високою концентрацією попередників олігодендроцитів. Клітинна популяція після культивування зберігає та підсилює цей потенціал завдяки збільшенню чисельності CNP-позитивних клітин, що і було показано в умовах експериментальної демієлінізаціїї.
Исследовали митотический и дифференцировочный потенциал, а также ремиелинизирующие свойства эмбриональных нервных клеток в культуре. Через 1 месяц культивирования в отсутствие агентов диффренцировки количество CNP-позитивных клеток (митотически-активных предшественников олигодендроцитов) возрастает в 3,6 раза. В то же время количество GalС-позитивных клеток (зрелых олигодендроцитов) остается низким. Таким образом, ремиелинизирующие свойства эмбриональных нервных клеток могут быть объяснены высокой концентрацией предшественников олигодендроцитов. Клеточная популяция после культивирования сохраняет и усиливает этот потенциал благодаря увеличению количества CNP-позитивных клеток, что и было показано в условиях экспериментальной демиелинизации.
We have examined the mitogenic and differentiation potential and remyelination properties of human embryonic nerve cells in culture. After 1 month of cultivation without differentiation agents CNP-positive cells (the mitotically-active precursors of olygodendrocytes) were expanded at 3,6 times. At the same time the amount of GalC-positive cells (mature oligodendrocyres) remained low. So, the remyelination properties of embryonic nerve cells can be explained by high concentration of olygodendrocyte precursors. Cell population after cultivation maintained the increased remielination potential by increasing the number of CNP-positive cells that was confirmed by using experimental demyelination.
|
| first_indexed | 2025-12-07T18:50:05Z |
| format | Article |
| fulltext |
УДК 616–013.7/.8:612.822:576.8.083.1
В.І. ЦИМБАЛЮК, І.Г. ВАСИЛЬЄВА, Н.П. ОЛЕКСЕНКО,
Н.Г. ЧОПИК, О.І. ЦЮБКО, О.С. ГАЛАНТА
Інститут нейрохірургії ім. А.П. Ромоданова АМН України, Київ
E-mail: pcr07@mail.ru
РЕМІЄЛІНІЗУЮЧІ ВЛАСТИВОСТІ
ЕМБРІОНАЛЬНИХ НЕРВОВИХ
КЛІТИН ЛЮДИНИ В УМОВАХ
ДОВГОСТРОКОВОГО
КУЛЬТИВУВАННЯ
Нами був досліджений мітогенний та диференцію�
вальний потенціал, а також ремієлінізуючі властивості
ембріональних нервових клітин в культурі. Через 1 мі�
сяць культивування у відсутності агентів диференцію�
вання кількість CNP�позитивних клітин (мітотично�
активних попередників олігодендроцитів) збільшується
у 3,6 разу. В той же час кількість GalС�позитивних клі�
тин (зрілих олігодендроцитів) залишається низькою. Та�
ким чином, ремієлінізучі властивості ембріональних нер�
вових клітин можуть бути пояснені високою концент�
рацією попередників олігодендроцитів. Клітинна популя�
ція після культивування зберігає та підсилює цей потен�
ціал завдяки збільшенню чисельності CNP�позитивних
клітин, що і було показано в умовах експериментальної
демієлінізаціїї.
Вступ. Широке використання ембріональних
клітин як засобу для відновлення ушкоджених
тканин реципієнта обумовлене вираженим
трофічним впливом, який здійснюється ними
при патологіях різної етіології. Зокрема, в нев$
рології останнім часом поширилася практика
використання ембріональних нервових клітин
при демієлінізуючих захворюваннях [1]. Отри$
мані позитивні ефекти підтверджують перс$
пективність застосування в даному разі мето$
дів клітинної терапії.
У зв’язку з вищесказаним, актуальним стає
дослідження ремієлінізуючих властивостей клі$
тин ембріонального мозку. Найбільш інформа$
тивним, на наш погляд, є проведення такого
дослідження в культурі, оскільки це дає мож$
ливість чітко дослідити взаємодію між кліти$
нами у відсутності впливів з боку інших сис$
тем організму.
В умовах дефіциту клітинного матеріалу дов$
гострокова перевивна культура ембріональних
клітин є одним з його потенціальних джерел.
Метою нашої роботи було дослідження мож$
ливості нарощування клітин мозку ембріонів
людини першого триместру вагітності та оцін$
ка перспективи їх застосування для ремієліні$
зації. В ході роботи ми вели довгострокову пе$
ревивну культуру ембріональних нервових
клітин людини, спостерігаючи за динамікою
росту чисельності та експресією імунологічних
маркерів CNP (фосфодіестераза циклічних
нуклеотидів) та GalC (галактоцереброзид), які
дозволяють оцінити наявність серед клітинного
матеріалу зрілих олігодендроцитів та їх попе$
редників. Крім цього, ми досліджували меха$
нізм взаємодії між цими клітинами та нерво$
вими волокнами, що підлягали штучній деміє$
лінізації.
Виконання такої роботи дозволить внести
свій вклад у пошук оптимального матеріалу
для клітинної терапії демієлінізуючих хвороб.
Матеріали та методи. В роботі використо$
вували солі та органічні розчинники кваліфі$
кацій ХЧ та ЧДА, Хенкса (Біо$Тест$Лаборато$
рія, Україна), cередовище Ігла (Інститут поліо$
мієліту та вірусних енцефалітів, Россія) та F$
12 («Sigma», Німеччина), сироватку крупного
рогатого скота (Конотопм’ясо, Україна), глі$
оксилову кислоту («Janssen Chemica», Бельгія),
параформальдегід («Janssen Chemica», Бель$
гія), гематоксилін («Janssen Chemica», Бель$
гія), гліцин («Реахім», Угорщина) та антитіла
ISSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2009. № 652
© В.І. ЦИМБАЛЮК, І.Г. ВАСИЛЬЄВА, Н.П. ОЛЕКСЕНКО,
Н.Г. ЧОПИК, О.І. ЦЮБКО, О.С. ГАЛАНТА, 2009
виробництва «Sigma» (Німеччина) та «Дако»
(Данія).
Для аналізу препаратів та фотографування
використовували систему аналізу зображення
IBAS$2000.
Забір абортивного матеріалу здійснювали на
підставі договору № 17 від 01.01.05 між Інсти$
тутом нейрохірургії АМН України та Київсь$
кою міською клінічною лікарнею № 16. Для
культивування в стерильних умовах виділяли
головний мозок ембріонів людини 5–12 тиж
гестації, промивали стерильним фізіологіч$
ним розчином, звільняли від оболонок [2].
Тканину суспендували у розчині Хенкса (Біо$
Тест$Лабораторія, Україна) шляхом піпетуван$
ня, доводили концентрацію клітин до 0,5–1,5 ·
107 в 1 мл. Суспензію розливали у стерильні
чашки Петрі. Культивування проводили на су$
міші середовищ DMEM (Інститут поліомієлі$
ту та вірусних енцефалітів, Россія) та F$12
(«Sigma», Германія) з додаванням сироватки
крупного рогатого скота (Конотопм’ясо, Укра$
їна) в інкубаторі при 37 °С та 5 % СО2. Пере$
саджували клітини один раз на 2–3 тиж в за$
лежності від темпів ділення та встановлення
контактів.
Для дослідження процесів мієлінізації ви$
користовували також довгострокову культуру
середнього мозку і стріатуму новонароджено$
го щура. Культивування проводили у вигляді
експлантатів на середовищі стандартного скла$
ду. Демієлінізацію індукували короткостроко$
вим впливом бромистого етидію [3].
Гістофлуоресцентне виявлення катехоламі$
нів здійснювали за методом Фалька$Хілларпа
[4]. Препарати досліджували під флуоресцент$
ним мікроскопом.
Загальну кількість клітин підраховували
за допомогою гемоцитометра [5].
Розчин 0,5%$ного вітального барвника
2307 SL готували на ДМСО (диметилсульфок$
сид) («Lachema», Чехія). Клітинну суспензію
розводили розчином барвника 4 : 1. Забарв$
лення проводили при 37 °С впродовж 2 год.
Клітини набували стійкого малиново$черво$
ного кольору.
Для імуногістохімічного виявлення CNP+
та GalC+$клітин культуру відмивали розчином
Хенкса (Біо$Тест$Лабораторія, Україна) та
фіксували 30 хв 0,4%$ним розчином глютар$
альдегіда на PBS [6]. Після цього зразки інку$
бували 45 хв у 100 мМ розчині гліцину («Реа$
хім», Угорщина) на PBS з pH 10. Двічі проми$
вали PBS та інкубували 30 хв у PBTA (0,1 %
Трітон Х$100 та 0,3 % БСА на PBS). Після
цього здійснювали інкубацію з першими ан$
титілами – анти$CNP (1 : 500) («Sigma», Ні$
меччина) та анти$GC (1 : 40) («Sigma», Німеч$
чина) впродовж 1 год. Тричі промивали PBTA.
Потім інкубували з відповідними другими ан$
титілами (IgG помічені ФІТЦ, («Дако», Данія)
і знов тричі промивали PBTA.
Скельця висушували при кімнатній темпе$
ратурі та заключали у суміш гліцерин – PBS
(9 : 1).
Результати досліджень та їх обговорення.
Останнім часом актуальним напрямком медич$
них досліджень є пошук засобів клітинної те$
рапії, здатних ефективно здійснювати реміє$
лінізацію ушкоджених нервових волокон. На
цю роль пропонується цілий ряд клітинних
популяцій: поліпотентні та мультипотентні
клітини ембріона, попередники олігодендро$
цитів та шваннівських клітин, мультипотентні
клітини гермінальних зон дорослого організму
та деякі інші [7]. Дослідники порівнюють їх
проліферативний потенціал та здатність прий$
мати участь у мієлогенезі. На сьогоднішній
день питання остаточно не вирішене. Ведуть$
ся пошуки найбільш перспективної з цієї точ$
ки зору популяції клітин, які можливо було б
застосовувати у клінічній практиці.
Ембріональні клітини є одним з найбільш
перспективних потенціальних джерел матеріа$
лу для клітинної трансплантації. Вони відріз$
няються значною функціональною пластичніс$
тю, здатністю до міграції і інтенсивного поділу
в культурі. Мієлінізуючий потенціал ембріо$
нальної нервової тканини забезпечується на$
явністю CNP$позитивних клітин – первинних
попередників олігодендроцитів, здатних до
міграції та поділу.
Можливість отримання зрілих нервових клі$
тин всіх типів із стовбурових клітин в культурі
неодноразово підтверджена даними літерату$
ри. Нервові клітини ембріонального мозку лю$
дини 5–12 тиж гестації на 95 % є нестін$пози$
тивними, тобто нейроепітеліальними стовбу$
ровими клітинами, здатними до довгостроко$
вого ділення in vitro [7, 8]. Carpenter et al. [8] за$
ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2009. № 6 53
Ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин людини
значили, що всі клітинні лінії, отримані з моз$
ку ембріонів людини 6–10 тиж гестації, проду$
кували невелику кількість GalC$позитивних
клітин, чисельність яких варіювала між лінія$
ми [9]. Темпи розмноження в культурі для різ$
них типів клітин нервової системи відрізня$
ються. За даними Svedensen et al. [8], макси$
мальне збільшення чисельності олігодендро$
цитів відбувається під час ранніх пасажів (при$
близно до 50 днів культивування). Дослідники
вважають, що попередники олігодендроцитів
діляться в культурі впродовж обмеженого пе$
ріоду, а потім відмирають.
Актуальним завданням нашого дослідження
у зв’язку з вищесказаним є з’ясувати, як пере$
бування в довгостроковій перевивній культурі
впливає на мієлінізуючі властивості клітин.
Відомо, що для ефективного розмноження
недиференційованих клітин в культурі небхід$
ні такі умови: відсутність в середовищі факто$
рів диференціювання, мітогенний вплив та
підтримання низької концентрації клітин [8, 9].
Відсутність біологічно активних молекул, що
можуть бути індукторами диференціювання,
досягається використанням середовища без
сироватки або термоінактивованої сироватки.
Мітогенний ефект здійснюється факторами
ФРЕ та ФРФb.
Низька концентрація клітин підтримується
режимом перевивань. Існує концентраційно
залежний механізм зворотної регуляції інтен$
сивності поділу попередників олігодендроци$
тів [10]. Зменшення інтенсивності поділів в
культурі при зростанні чисельності клітин ви$
никає внаслідок виникнення численних між$
клітинних контактів, під час встановлення
яких запускаються складні сигнальні механізми.
Гальмування швидкості проліферації in vitro
при зростанні кількості клітин відбувається за
участю молекул – регуляторів клітинного циклу.
Зменшення інтенсивності мітотичних поділів
в культурі попередників олігодендроцитів ко$
релює із підвищенням рівня експресії інгібітора
р27 (Kip1) та зниженням рівня експресії циклі$
ну А [11]. При цьому значно зменшується чутли$
вість олігодендроцитів до ростових факторів.
Р27 є циклін$залежним інгібітором кіназних
ферментів. Він регламентує перехід з фази G1
до фази G0 клітин – попередників олігодендро$
цитів О$2А [11]. Ці сигнали у своїй сукупності
стимулюють кінцеве диференціювання клітин$
попередників в зрілі олігодендроцити.
Швидке нарощування попередників оліго$
дендроцитів пов’язано з експресією генів
Olig1 та Olig2 [12]. Остаточно роль продуктів
генів Olig1 та Olig2 в генезі гліальних клітин не
з’ясовано, але вважається, що вони важливі
для стимуляції самооновлення стовбурових
клітин нервової системи. Додавання FGF$2 в
культуральне середовище в умовах in vitro ви$
кликає індукцію Olig2, що пояснює стимуля$
цію цим фактором мітозів в клітинах [12].
Експериментальним шляхом нами було
встановлено, що оптимальний інтервал між
перевиваннями становить в середньому 2 тиж,
але залежить від темпів зростання чисельності
клітин, що можуть змінюватися впродовж куль$
тивування. При цьому слід підтримувати
низьку концентрацію клітин (0,5–1,0 млн/мл
поживного середовища) для запобігання вста$
новленню міжклітинних контактів, які є сиг$
налом для гальмування клітинного поділу і
початку процесів диференціювання поперед$
ників олігодендроцитів.
У відсутності агентів диференціювання за
1 міс культивування збільшення чисельності
клітин у контрольних зразках становить 13,2–
17,1 разу, а під впливом факторів$мітогенів –
17,5–25,4 (рис. 1, а, б).
Серед загального числа клітин нас цікавило
збільшення насамперед попередників оліго$
дендроцитів – СNP$позитивних клітин. CNP$
аза (2'3'$циклічних нуклеотидів 3'$фосфодіес$
тераза ЕС 3.1.4.37) – один з найбільш ранніх
мієлін$асоційованих білків, який експресуєть$
ся у клітинах – попередниках олігодендроци$
тарного ряду, що здатні до міграції та активно$
го мітотичного поділу [13].
Відомо, що CNP$аза накопичується в клі$
тинах у період найбільш інтенсивного синтезу
мієлінових мембран [13], отже вміст СNP$по$
зитивних клітин відображає потенційну здат$
ність клітинної популяції до здійснення реміє$
лінізації. Цей фермент переважно концентру$
ється на цитоплазматичному боці поверхне$
вих мембран клітини за виключенням зон ком$
пактного мієліну, де CNP$аза відсутня [14].
Встановлено, що він приймає участь у наро$
щуванні мієлінових мембран олігодендроци$
тів під час мієлогенезу, зокрема у приєднанні
ISSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2009. № 654
В.І. Цимбалюк, І.Г. Васильєва, Н.П. Олексенко та ін.
основного білка мієліну до компактного міє$
ліну. Остаточно його функція на даний час не
з’ясована, але, як показано в експериментах із
трансгенними тваринами, порушення нор$
мального синтезу CNP$ази викликає появу в
клітинах дефектних мієлінових мембран, на$
самперед з аномальним вмістом МВР [14].
Встановлено, що чисельність CNP+ клітин
зростає в культурі значно швидше у присутнос$
ті в культуральному середовищі ФРФ2 та
ФРЕ. На препаратах дослідних культур вони у
більшості випадків розташовані невеликими
групами по 5–10 клітин на відміну від конт$
рольних зразків, де вони здебільшого спосте$
рігаються окремо. Через 1 місяць перевивань
чисельність таких клітин в дослідних культу$
рах перевищує їх кількість у контрольних
зразках, які зростали на середовищі стандарт$
ного складу, у 3,6 разу. При цьому загальна чи$
сельність клітин у дослідній популяції більше
контрольної у 2,5 разу.
Застосування активаторів проліферації
в умовах відсутності агентів диференціювання
збільшує вміст клітин, здатних до активного
поділу, до яких належать і CNP+ клітини. При
цьому вміст галактоцереброзид (GalC)$пози$
тивних клітин, тобто зрілих олігодендроцитів,
що втрачають здатність до міграції і значно
рідше поділяються, залишається незмінним
і дуже низьким. Отже, усунення агентів дифе$
ренціювання та підтримання низької концен$
трації в культурі призводить до збагачення по$
пуляції мітотично активними попередниками
олігодендроцитів.
Для дослідження здатності нарощених в
культурі клітин приймати участь у процесах ре$
мієлінізації нервових відростків ми викорис$
товували довгострокову тканинну культуру се$
реднього мозку новонародженого щура, яку
піддавали демієлінізації шляхом короткостро$
кового впливу бромистого етидію.
Морфологічно вплив бромистого етидію
виявлявся у появі подекуди деформованих
відростків та нейритно$гліальних пучків. Во$
ни виглядають «пунктирними», на них нали$
пає багато деструктурованого матеріалу (рис. 2
і 3, див. вклейку в кінці номера).
Зменшується чисельність CNP$позитивних
клітин, та значно знижується інтенсивність
реакції в тих, що залишилися. GalC$позитив$
ні клітини, які в контрольній довгостроковій
культурі розташовані вздовж нейритно$гліаль$
них пучків та окремих нейрональних відрост$
ків, часто утворюючи ланцюжки, також ушкод$
жуються. Контури відростків стають менш чіт$
кими, розмитими. Гістохімічне виявлення ка$
техоламінів свідчить про те, що локальна демі$
єлінізація в культурі порушує функціонування
встановлених нейрональних зв’язків (рис. 3,
а). Флуоресцентні гранули у відростках клітин
майже відсутні, спостерігаються лише окремі
невеликі клітини округлої форми з флуорес$
ценцією в цитоплазмі. Це свідчить про пору$
шення транспорту нейромедіаторів при деміє$
лінізації.
Отримані нами результати показали, що
підсадка в демієлінізовану культуру ембріо$
нальних попередників олігодендроцитів, які
нарощувалися in vitro у присутності факторів$
мітогенів, сприяє морфологічному і функціо$
нальному відновленню ушкоджених клітин.
Попереднє вітальне забарвлення дозволило
прослідкувати за тенденціями розміщення емб$
ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2009. № 6 55
Ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин людини
Рис. 1. Динаміка чисельності клітин в культурі головно$
го мозку ембріонів людини: по вертикалі – млн/мл;
по горизонталі – тижні гестації; а – 6 тиж; б – 10 тиж
ріональних клітин (рис. 3, б). Переважно вони
спостерігалися у зонах росту експлантатів і
мали виражену тропність до регенеруючих
клітин, їх відростків та нейритно$гліальних
пучків. Визначалися контакти як окремих клі$
тин, так і цілих груп. Отже, нарощені в культу$
рі ембріональні клітини, серед яких є і попе$
редники олігодендроцитів, зберігають здат$
ність до міграції.
Паралельно проведена аналогічна контроль$
на серія експериментів із ембріональними нер$
вовими клітинами, підсадженими безпосеред$
ньо після отримання, показала, що клітини, які
нарощувалися в культурі, мають не менший
регенераторний потенціал і набувають більшої
тропності до зон ушкодження, можливо, за
рахунок підвищеної чисельності клітин – по$
передників мієлогенезу.
Висновки. Отримані дані дозволяють зро$
бити висновок про те, що умови нарощування
клітин в культурі, які запобігають передчасно$
му диференціюванню (наявність мітогенів,
режим перевивання та низька концентрація
клітин), сприяють збільшенню чисельності
CNP$позитивних клітин – мітотично актив$
них попередників олігодендроцитів. Нароще$
ні в культурі попередники олігодендроцитів
зберігають здатність до міграції в зону демієлі$
нізації та приймають участь у ремієлінізації
нервових відростків, відновлюючи їх функціо$
нальну активність. Таким чином, популяція
ембріональних нервових клітин в культурі
не втрачає своїх ремієлінізуючих властивос$
тей, що відкриває потенціальну можливість
використовувати їх для нейротрансплантації.
V.I. Tsymbaluk, I.G. Vasilyeva, N.P. Olexenko,
N.G. Chopic, O.I. Tsybko, E.S. Galanta
REMYELINATION PROPERTIES
OF HUMAN EMBRYONIC
NERVE CELLS IN THE COURSE
OF LONG$TERM CULTURE
We have examined the mitogenic and differentiation
potential and remyelination properties of human embryon$
ic nerve cells in culture. After 1 month of cultivation with$
out differentiation agents CNP$positive cells (the mitoti$
cally$active precursors of olygodendrocytes) were expand$
ed at 3,6 times. At the same time the amount of GalC$pos$
itive cells (mature oligodendrocyres) remained low. So, the
remyelination properties of embryonic nerve cells can be
explained by high concentration of olygodendrocyte pre$
cursors. Cell population after cultivation maintained the
increased remielination potential by increasing the number
of CNP$positive cells that was confirmed by using experi$
mental demyelination.
В.И. Цымбалюк, И.Г. Васильева, Н.П. Олексенко,
Н.Г. Чопик, О.И. Цюбко, Е.С. Галанта
РЕМИЕЛИНИЗИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА
ЭМБРИОНАЛЬНЫХ НЕРВНЫХ КЛЕТОК
ЧЕЛОВЕКА В УСЛОВИЯХ ДЛИТЕЛЬНОГО
КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
Исследовали митотический и дифференцировоч$
ный потенциал, а также ремиелинизирующие свойст$
ва эмбриональных нервных клеток в культуре. Через
1 месяц культивирования в отсутствие агентов диф$
френцировки количество CNP$позитивных клеток
(митотически$активных предшественников олиго$
дендроцитов) возрастает в 3,6 раза. В то же время ко$
личество GalС$позитивных клеток (зрелых олигоден$
дроцитов) остается низким. Таким образом, ремиели$
низирующие свойства эмбриональных нервных кле$
ток могут быть объяснены высокой концентрацией
предшественников олигодендроцитов. Клеточная по$
пуляция после культивирования сохраняет и усилива$
ет этот потенциал благодаря увеличению количества
CNP$позитивных клеток, что и было показано в усло$
виях экспериментальной демиелинизации.
СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ
1. Цымбалюк В.И., Маркова О.В., Пичкур Л.Д., Соко�
лова Л.И., Лисяный Н.И., Вербовская С.А. Лечение
рассеянного склероза аллогенными эмбриональ$
ными нейроклетками // Трансплантология. –
2007. – 9, № 12.– С. 305.
2. Roy N.S., Wang S., Harrison�Rostelli C. et al.
Identification, isolation, and promoter$defined separa$
tion of mitotic oligodendrocytes progenitors cell from
adult human white matter // J. Neurosci. – 1999. – 9,
№ 22. – Р. 9986–9995.
3. Shields S.A., Blakemore W.F., Franklin R. Schwann cell
remyelination is restricted to astrocyte$deficient areas
after transplantation into demyelinated adult rat brain //
J. Neurosci Res. – 2000. – 60, № 5. – P. 571–578.
4. Луппа. Х. Основы гистохимии. – М.: Мир, 1980. –
С. 252–266.
5. Божкова В.П. и др. Руководство по культивирова$
нию нервной ткани. – М.: Наука, 1988. – С. 318.
6. McFerran B.W., Burgoune R.D. 2',3'$Cyclic nucleotide
3'$phosphoddiesteraseis associated with mitochondrion
diverse adrenal cell types // J. Сell Sci. – 1997. – 110. –
Р. 2979–2985.
7. Blakemore W.F., Franklin R. Transplantation options
for terapeutic central nervous system remyelination //
Cell Transplant. – 2000. – 9, № 2. – Р. 289–294.
ISSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2009. № 656
В.І. Цимбалюк, І.Г. Васильєва, Н.П. Олексенко та ін.
8. Svedensen C.N., Borg M.G. Armstrong R.E. et al. A new
method for the rapid and long$term growth of human
neural precursor cells // J. Neurosci. Meth. – 1998. –
85. – Р. 141–152.
9. Carpenter M.K., Cui X., Hu Z. et al. In vitro expansion
of a multipotent population of human neural precursor
cells // Exp. Neurol. – 1999. – 158. – Р. 265–278.
10. Nakatsuji Y., Miller R.H. Control of oligodendrocytes
precursor proliferation mediated by density$depended
cell cycle protein expression // Dev. Neurocsi. – 2001. –
23, № 4/5. – P. 356–363.
11. Cassaccia�Bonnefil P., Tikoo R., Kiyokawa H. et al.
Oligodendrocytes precursor differentiation is perturbed
in the absence of the cycline$depended kinase inhibitor
p27 Kip1 // Genes Dev. – 1997. –11, № 18. – P. 1335–
1346.
12. Gabay L., Lowell S., Rubin L.L. Anderson D.J. Deregula$
tion of dorsoventral patterning by FGF confers trilin$
eage differentiation capacity on CNS stem cells in vitro //
Neuron. – 2003. – 40, № 3. – Р. 447–449.
13. Roy N.S., Wang S., Harrison�Rostelli C. et al. Identifica$
tion, isolation and promoter defined separation of
mitotic oligodendrocyte progenitor cells from the adult
human subcortical white matter // J. Neurosci. – 1999. –
19, № 22. – P. 9986–9999.
14. Yin X., Peterson J., Gravel M. et al. CNP overexpression
induce aberrant oligodendrocytes membranes and
inhibits MBP accumulation in the myelin compaction //
J. Neurosci. Res. – 1997. – 50, № 2. – P. 238–247.
Надійшла 12.11.08
ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2009. № 6 57
Ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин людини
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-66664 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0564-3783 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T18:50:05Z |
| publishDate | 2009 |
| publisher | Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Цимбалюк, В.І. Васильєва, І.Г. Олексенко, Н.П. Чопик, Н.Г. Цюбко, О.І. Галанта, О.С. 2014-07-20T10:27:45Z 2014-07-20T10:27:45Z 2009 Ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин людини в умовах довгострокового культивування / В.І. Цимбалюк, І.Г. Васильєва, Н.П. Олексенко, Н.Г. Чопик, О.І. Цюбко, О.С. Галанта // Цитология и генетика. — 2009. — Т. 43, № 3. — С. 52-57. — Бібліогр.: 14 назв. — укр. 0564-3783 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/66664 616–013.7/.8:612.822:576.8.083.1 Нами був досліджений мітогенний та диференціювальний потенціал, а також ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин в культурі. Через 1 місяць культивування у відсутності агентів диференціювання кількість CNP-позитивних клітин (мітотичноактивних попередників олігодендроцитів) збільшується у 3,6 разу. В той же час кількість GalС-позитивних клітин (зрілих олігодендроцитів) залишається низькою. Таким чином, ремієлінізучі властивості ембріональних нервових клітин можуть бути пояснені високою концентрацією попередників олігодендроцитів. Клітинна популяція після культивування зберігає та підсилює цей потенціал завдяки збільшенню чисельності CNP-позитивних клітин, що і було показано в умовах експериментальної демієлінізаціїї. Исследовали митотический и дифференцировочный потенциал, а также ремиелинизирующие свойства эмбриональных нервных клеток в культуре. Через 1 месяц культивирования в отсутствие агентов диффренцировки количество CNP-позитивных клеток (митотически-активных предшественников олигодендроцитов) возрастает в 3,6 раза. В то же время количество GalС-позитивных клеток (зрелых олигодендроцитов) остается низким. Таким образом, ремиелинизирующие свойства эмбриональных нервных клеток могут быть объяснены высокой концентрацией предшественников олигодендроцитов. Клеточная популяция после культивирования сохраняет и усиливает этот потенциал благодаря увеличению количества CNP-позитивных клеток, что и было показано в условиях экспериментальной демиелинизации. We have examined the mitogenic and differentiation potential and remyelination properties of human embryonic nerve cells in culture. After 1 month of cultivation without differentiation agents CNP-positive cells (the mitotically-active precursors of olygodendrocytes) were expanded at 3,6 times. At the same time the amount of GalC-positive cells (mature oligodendrocyres) remained low. So, the remyelination properties of embryonic nerve cells can be explained by high concentration of olygodendrocyte precursors. Cell population after cultivation maintained the increased remielination potential by increasing the number of CNP-positive cells that was confirmed by using experimental demyelination. uk Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України Цитология и генетика Оригинальные работы Ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин людини в умовах довгострокового культивування Ремиелинизирующие свойства эмбриональных нервных клеток человека в условиях длительного культивирования Remyelination properties of human embryonic nerve cells in the course of long-term culture Article published earlier |
| spellingShingle | Ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин людини в умовах довгострокового культивування Цимбалюк, В.І. Васильєва, І.Г. Олексенко, Н.П. Чопик, Н.Г. Цюбко, О.І. Галанта, О.С. Оригинальные работы |
| title | Ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин людини в умовах довгострокового культивування |
| title_alt | Ремиелинизирующие свойства эмбриональных нервных клеток человека в условиях длительного культивирования Remyelination properties of human embryonic nerve cells in the course of long-term culture |
| title_full | Ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин людини в умовах довгострокового культивування |
| title_fullStr | Ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин людини в умовах довгострокового культивування |
| title_full_unstemmed | Ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин людини в умовах довгострокового культивування |
| title_short | Ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин людини в умовах довгострокового культивування |
| title_sort | ремієлінізуючі властивості ембріональних нервових клітин людини в умовах довгострокового культивування |
| topic | Оригинальные работы |
| topic_facet | Оригинальные работы |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/66664 |
| work_keys_str_mv | AT cimbalûkví remíêlínízuûčívlastivostíembríonalʹnihnervovihklítinlûdinivumovahdovgostrokovogokulʹtivuvannâ AT vasilʹêvaíg remíêlínízuûčívlastivostíembríonalʹnihnervovihklítinlûdinivumovahdovgostrokovogokulʹtivuvannâ AT oleksenkonp remíêlínízuûčívlastivostíembríonalʹnihnervovihklítinlûdinivumovahdovgostrokovogokulʹtivuvannâ AT čopikng remíêlínízuûčívlastivostíembríonalʹnihnervovihklítinlûdinivumovahdovgostrokovogokulʹtivuvannâ AT cûbkooí remíêlínízuûčívlastivostíembríonalʹnihnervovihklítinlûdinivumovahdovgostrokovogokulʹtivuvannâ AT galantaos remíêlínízuûčívlastivostíembríonalʹnihnervovihklítinlûdinivumovahdovgostrokovogokulʹtivuvannâ AT cimbalûkví remieliniziruûŝiesvoistvaémbrionalʹnyhnervnyhkletokčelovekavusloviâhdlitelʹnogokulʹtivirovaniâ AT vasilʹêvaíg remieliniziruûŝiesvoistvaémbrionalʹnyhnervnyhkletokčelovekavusloviâhdlitelʹnogokulʹtivirovaniâ AT oleksenkonp remieliniziruûŝiesvoistvaémbrionalʹnyhnervnyhkletokčelovekavusloviâhdlitelʹnogokulʹtivirovaniâ AT čopikng remieliniziruûŝiesvoistvaémbrionalʹnyhnervnyhkletokčelovekavusloviâhdlitelʹnogokulʹtivirovaniâ AT cûbkooí remieliniziruûŝiesvoistvaémbrionalʹnyhnervnyhkletokčelovekavusloviâhdlitelʹnogokulʹtivirovaniâ AT galantaos remieliniziruûŝiesvoistvaémbrionalʹnyhnervnyhkletokčelovekavusloviâhdlitelʹnogokulʹtivirovaniâ AT cimbalûkví remyelinationpropertiesofhumanembryonicnervecellsinthecourseoflongtermculture AT vasilʹêvaíg remyelinationpropertiesofhumanembryonicnervecellsinthecourseoflongtermculture AT oleksenkonp remyelinationpropertiesofhumanembryonicnervecellsinthecourseoflongtermculture AT čopikng remyelinationpropertiesofhumanembryonicnervecellsinthecourseoflongtermculture AT cûbkooí remyelinationpropertiesofhumanembryonicnervecellsinthecourseoflongtermculture AT galantaos remyelinationpropertiesofhumanembryonicnervecellsinthecourseoflongtermculture |