Зображення обкладинки

Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L-1210 по углеводной структуре клеточной поверхности: иммуноцитохимический анализ связывания лектинов

Изучали гетерогенность углеводных детерминант клеточной поверхности в популяции асцитных клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L-1210 по признаку связывания лектинов чечевицы, пшеницы, арахиса и конканавалина А. Связанные с клетками лектины выявляли непрямым иммунохимическим методом с помощью полученных ав...

Повний опис

Збережено в:
Бібліографічні деталі
Опубліковано в: :Цитология и генетика
Дата:2011
Автори: Луцик, М.М., Ященко, А.М., Ковалишин, В.И., Придатко, О.Е., Стойка, Р.С., Луцик М.Д.
Формат: Стаття
Мова:Російська
Опубліковано: Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України 2011
Теми:
Оригинальные работы
Онлайн доступ:https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/66826
Теги: Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L-1210 по углеводной структуре клеточной поверхности: иммуноцитохимический анализ связывания лектинов / М.М. Луцик, А.М. Ященко, В.И. Ковалишин, О.Е. Придатко, Р.С. Стойка, М.Д. Луцик // Цитология и генетика. — 2011. — Т. 45, № 2. — С. 3-9. — Бібліогр.: 20 назв. — рос.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
_version_ 1859941480336982016
author Луцик, М.М.
Ященко, А.М.
Ковалишин, В.И.
Придатко, О.Е.
Стойка, Р.С.
Луцик М.Д.
author_facet Луцик, М.М.
Ященко, А.М.
Ковалишин, В.И.
Придатко, О.Е.
Стойка, Р.С.
Луцик М.Д.
citation_txt Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L-1210 по углеводной структуре клеточной поверхности: иммуноцитохимический анализ связывания лектинов / М.М. Луцик, А.М. Ященко, В.И. Ковалишин, О.Е. Придатко, Р.С. Стойка, М.Д. Луцик // Цитология и генетика. — 2011. — Т. 45, № 2. — С. 3-9. — Бібліогр.: 20 назв. — рос.
collection DSpace DC
container_title Цитология и генетика
description Изучали гетерогенность углеводных детерминант клеточной поверхности в популяции асцитных клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L-1210 по признаку связывания лектинов чечевицы, пшеницы, арахиса и конканавалина А. Связанные с клетками лектины выявляли непрямым иммунохимическим методом с помощью полученных авторами антилектиновых поликлональных антител, меченных коллоидным золотом, с последующей проявкой ацетатом серебра. Выявлены достоверные различия в уровне связывания конканавалина А клетками NK/Ly (67 % Con А+) и L-1210 (7,2 % Con А+). Различия между штаммами опухолевых клеток в связывании других лектинов не были статистически достоверными. Относительно высокое процентное содержание PNA+ клеток может свидетельствовать о значительной степени десиалирования мембранных гликопротеинов. Вивчали гетерогенність популяції асцитних клітин мишиної лімфоми Немета Кельнера (NK/Ly) і лейкозу L-1210 по зв’язуванню лектинів сочевиці, зародків пшениці, арахісу і конканаваліну А. Зв’язані з клітинами лектини виявляли непрямим імунохімічним методом за допомогою отриманих нами поліклональних антилектинових антитіл, мічених колоїдним золотом, з наступною проявкою ацетатом срібла. Виявлено достовірні відмінності у зв’язуванні конканаваліну А клітинами NK/Ly (67 % Con А+) і L-1210 (7,2 % Con А+), тоді як відмінності між штамами пухлинних клітин у зв’язуванні інших застосованих лектинів не були статистично достовірними. Зазначено порівняно високий вміст PNA+ клітин, що може свідчити про високий рівень десіалювання мембранних глікопротеїнів. The heterogeneity of tumor cell populations according to binding of lectins from lentil (LcL), wheat germs (WGA), peanut (PNA) and concanavalin A was investigated on a model of murine Nemeth-Kellner lymphoma (NK/Ly) and leukemia L-1210. Bound lectins were detected by indirect immunochemical method using home obtained polyclonal antilectin antibodies and immunogold silver staining (IGSS) technique. Significant differences in binding of Con A were revealed between NK/Ly (67 % Con A+) and L-1210 (7,2 % Con A+) cells, while the differences in binding of other lectins with both types of tumor cells were not significant. A relatively high percentage of PNA+ cells was registered that can indicate a high degree of desialization of membrane glycoproteins.
first_indexed 2025-12-07T16:11:31Z
format Article
fulltext УДК 576.31:577.112.85:576.385.5 М.М. ЛУЦИК 1, А.М. ЯЩЕНКО 1, В.И. КОВАЛИШИН 1, О.Е. ПРИДАТКО 3, Р.С. СТОЙКА 2, М.Д. ЛУЦИК 2 1 Львовский национальный медицинский университет им. Д. Галицкого 2 Институт биологии клетки НАН Украины, Львов 3 Институт экспериментальной патологии, онкологии и радиобиологии НАН Украины, Киев E0mail: lootsik@cellbiol.lviv.ua, stoika@cellbiol.lviv.ua ГЕТЕРОГЕННОСТЬ ПОПУЛЯЦИИ КЛЕТОК ЛИМФОМЫ NK/Ly И ЛЕЙКОЗА L�1210 ПО УГЛЕВОДНОЙ СТРУКТУРЕ КЛЕТОЧНОЙ ПОВЕРХНОСТИ: ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ СВЯЗЫВАНИЯ ЛЕКТИНОВ Изучали гетерогенность углеводных детерминант клеточной поверхности в популяции асцитных клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L�1210 по признаку связывания лектинов чечевицы, пшеницы, арахиса и конканавалина А. Связанные с клетками лектины выявляли непрямым иммунохимическим методом с помощью полученных ав� торами антилектиновых поликлональных антител, ме� ченных коллоидным золотом, с последующей проявкой ацетатом серебра. Выявлены достоверные различия в уровне связывания конканавалина А клетками NK/Ly (67 % Con А+) и L�1210 (7,2 % Con А+). Различия между штаммами опухолевых клеток в связывании других лек� тинов не были статистически достоверными. Относи� тельно высокое процентное содержание PNA+ клеток может свидетельствовать о значительной степени де� сиалирования мембранных гликопротеинов. Введение. Для выявления и идентификации углеводных детерминант на клеточной поверх� ности в качестве зондов применяют лектины и моноклональные антитела. Существующие методические подходы для выявления лекти� нов, связанных с тканевыми и клеточными структурами, можно разделить на две группы: прямые методы, в которых используют лекти� ны, меченные флюорохромами, биотином, фер� ментами и т.п. [1–3], и непрямые иммунохими� ческие методы, в которых для выявления свя� занного лектина применяют специфичные ме� ченые антитела или лиганды [4–6]. Вторая группа методов представляется более рацио� нальной, так как первичную обработку образца проводят нативным лектином, что исключает возможность изменения его углеводной специ� фичности при синтезе меченых производных. Новые возможности этого подхода открылись при использовании коллоидного золота в качес� тве метки с последующим выявлением микро� частиц золота с помощью солей серебра (im� munogold silver staining, IGSS), что позволяет проводить исследование с помощью светоопти� ческой и электронной микроскопии [7–10]. Применение названного метода ограничи� вается главным образом доступностью соот� ветствующих антилектиновых антител. Наибо� лее полный набор антител к лектинам произ� водит фирма «E.Y. Laboratories» (США). Анти� тела к нескольким лектинам также предлагает фирма «Sigma�Aldrich» (США). Цель настоящей работы состoяла в иссле� довании поверхностных углеводных детерми� нант клеток экспериментальных опухолей – лимфомы NK/Ly и лейкоза L�1210, а также их распределения в популяции с помощью не� прямого иммуноцитохимического метода де� текции связывания лектинов. Для этого нами были специально получены поликлональные антитела, меченные коллоидным золотом, к лектинам с хорошо охарактеризованной угле� водной специфичностью (LCL, WGA, PNA) [11–14]. В работе описан метод, который по� зволяет определять соотношение лектин�по� зитивных и негативных клеток в популяции с помощью светооптической микроскопии, а также определить локализацию метки на кле� точной поверхности с помощью электронной микроскопии. Материалы и методы. Исследование прово� дили на асцитных клетках лимфомы NK/Ly ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2011. № 2 3 Оригинальные работы © М.М. ЛУЦИК, А.М. ЯЩЕНКО, В.И. КОВАЛИШИН, О.Е. ПРИДАТКО, Р.С. СТОЙКА, М.Д. ЛУЦИК, 2011 и лейкоза L�1210 мышей. Штаммы опухолей получены из коллекции экспериментальных опухолей Института экспериментальной па� тологии, онкологии и радиобиологии НАН Украины. Перевивку опухолей осуществляли по стандартной методике [15]. Асцит лимфомы NK/Ly забирали в начальной (7–8�й день), развитой (13–14�й день) и терминальной (19– 23�й день) стадиях роста опухоли, асцитные клетки лейкоза L�1210 получали на 6–7�й день роста опухоли. В асцитической жидкости подсчитывали количество клеток и, в ряде слу� чаев, анализировали их распределение по раз� меру, используя для этого гемоцитометричес� кую камеру Горяева [16]. Антитела к лектинам чечевицы, арахиса и зародышей пшеницы получали иммунизацией кроликов соответствующим лектином в полном адъюванте Фрейнда: 0,5–1 мг антигена в 0,5 мл адъюванта вводили в три�четыре точки на спи� не животного, иммунизацию проводили трех� кратно с интервалом между введениями 1 мес. Через 2 нед после последнего введения анти� гена забирали пробы крови объемом 12–15 мл. Забор осуществляли несколько раз с интерва� лом 10 дней. Антитела изолировали аффинной хроматографией на Т�геле [17, 18]. Очищен� ные таким образом препараты антител обладали достаточно высокой чувствительностью выяв� ления лектинов, поэтому дальнейшей очистки с помощью иммуносорбции на иммобилизиро� ванном антигене не требовалось. Получение коллоидного золота и абсорбцию антител на частицах осуществляли по методу Geoghean et al. [19]. К 10 мл раствора коллоид� ного золота добавляли 100–130 мкг иммуно� глобулина, рН 7,2–7,5, или 40 мкг высоко� очищенной пероксидазы, рН 7,2 (лиганд для выявления конканавалина А). Полученные рас� творы стабилизировали добавлением полиэти� ленгликоля (мол. масса 20 000 Да) до концент� рации 0,02 %, растворы хранили при 4 °С. Пе� ред использованием аликвоту раствора колло� идного золота концентрировали в 5 раз путем центрифугирования при 12–18 тыс. об/мин 30–40 мин, полученный осадок частиц колло� идного золота суспендировали в растворе TBS, содержащем 0,02 % полиэтиленгликоля [13]. Для исследования связывания лектинов ас� цитные клетки обрабатывали следующим об� разом: двукратная промывка аликвоты асцит� ных клеток холодным физраствором, забуфе� ренным фосфатом (ЗФР) путем центрифуги� рования 3 мин в пробирках типа Эппендорф при 1500 об/мин, фиксирование 0,1–0,2 % раствором глутарового альдегида в ЗФР в те� чение 15–20 мин при 4 °С, двукратное промы� вание холодным TBS, рН 7,4, суспендирование в 0,1 М растворе глицина в TBS и выдержива� ние при комнатной температуре 30 мин или в течение ночи при 4 °С, двукратное промывание холодным TBS, суспендирование в TBS. Даль� нейшую обработку клеток лектинами проводи� ли либо немедленно, либо, учитывая продол� жительность процесса, после хранения суспен� зии при 4 °С в присутствии 0,02 % азида натрия не более трех дней. Обработка лектинами: к 450 мкл раствора лектина в TBS, содержащем 1 мМ СаСl2 и 1 мM MnCl2, вносили 50 мкл 50%�ной суспензии кле� ток в TBS и инкубировали при 4 °С в течение 1,5–2 ч, периодически встряхивая. Конечная концентрация лектинов составляла для кон� канавалина А 100 мкг/мл, LcL – 200 мкг/мл, WGA – 10 мкг/мл, PNA – 200 мкг/мл. После двукратного промывания холодным TBS клет� ки суспендировали в 0,4 мл раствора коллоид� ного золота, сенсибилизированного соответ� ствующим антителом (для конканавалина А – пероксидазой хрена), инкубировали в течение 1,5–2 ч при 4 °С при периодическом переме� шивании. Затем клетки промывали два�три раза холодным TBS, из осадка клеток отбирали небольшую часть (5–10 мкл), к которой добав� ляли равный объем сыворотки крови мыши, и готовили мазки для светооптической мик� роскопии (фиксация метанолом). Для визуализации отложений коллоидного золота осуществляли физическую проявку мазков или клеточной суспензии ацетатом се� ребра по описанной ранее методике [10]. Маз� ки доводили до воды, наносили несколько ка� пель проявляющего раствора ацетата серебра и выдерживали при комнатной температуре, кон� тролируя процесс проявки микроскопически. Обычно время проявки составляло от 45–60 с для WGA до 10–15 мин для LcL. Мазки спо� ласкивали дистиллированной водой и высуши� вали. Микроскопирование и фотосъемку пре� паратов проводили в водной среде. ISSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2011. № 24 М.М. Луцик, А.М. Ященко, В.И. Ковалишин и др. Для проявки в суспензии клетки помещали в проявляющий раствор ацетата серебра в про� бирках Эппендорф на время, установленное для мазков. Процесс останавливали осаждением клеток центрифугированием в течение 1 мин при 1500 мин–1 и двукратным промыванием во� дой. Часть клеточной суспензии оставляли для подсчета в камере Горяева, остальную фикси� ровали 1%�ным глутаровым альдегидом и за� ливали в смолу Эпон�812 согласно инструк� ции производителя («Fluka», Швейцария) с целью приготовления ультратонких и полу� тонких (1 мкм) срезов для электронной и све� товой микроскопии (микротом фирмы LKB, Швеция). Электронную микроскопию осущес� твляли на микроскопе УЭМБ�100 (Сумы). Полутонкие срезы для световой микроско� пии окрашивали, как описано Уикли [20], с небольшой модификацией. Срез погружали в каплю 1%�ного раствора толуидинового сине� го в растворителе (15%�ный этанол, 15%�ный глицерин, 0,02 М трис), выдерживали в течение 60–70 мин во влажной камере. После удаления красящего раствора и промывания водой на срез наносили 50–100 мкл 0,5%�ного сафрани� на Т в 0,01 М трис и прокрашивали в течение 10–15 мин. После удаления красителя срез про� мывали водой, высушивали и заключали в кедровое масло. Эти операции осуществляли под бинокулярной лупой. Цитометрический анализ и количественную оценку результатов проводили на мазках и суспензии клеток в гемоцитометрической ка� мере Горяева. При анализе мазков несколько полей зрения фотографировали цифровой ка� мерой при определенном увеличении, монти� ровали кадры в программе «Photoshop» с общим количеством клеток не менее 300 и подсчиты� вали число лектин�положительных (связыва� ющих) и отрицательных клеток на фотографи� ях. При анализе суспензий водную взвесь кле� ток после проявки (см. выше) вносили в камеру Горяева и подсчитывали количество лектин�по� ложительных и лектин�отрицательных клеток (общее число не менее 500). Статистическую обработку результатов проводили в программе Excell, достоверность различий определяли, используя критерий t Стъюдента. Результаты исследований и их обсуждение. На рис. 1 представлены примеры цитологи� ческой картины после обработки клеток лек� тинами предложенным методом. Наиболее чет� ко различия между лектин�положительными и лектин�отрицательными клетками наблюда� лись после обработки PNA, что позволяет диф� ференцировать клетки по этому признаку с меньшей ошибкой. Интенсивность связыва� ния Con A и LcL была более вариабельной: до� статочно большая часть клеток (около 10– 15 %) имели промежуточную между крайними ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2011. № 2 5 Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L&1210 Рис. 1. Цитоморфологическая картина связывания лек� тина чечевицы с асцитными клетками NK/Ly (а) и L�1210 (б) при детекции связанного лектина с помо� щью антител, меченных коллоидным золотом, с пос� ледующим усилением путем проявки ацетатом серебра Характеристика популяции асцитных клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L�1210 по связыванию лектинов Лектин NK/Ly, начальная стадия роста (n = 4) NK/Ly, терми� нальная стадия роста (n = 5) Лейкоз L�1210 (n = 5) Процентное содержание лектин� связывающих клеток, М ± σ Конканавалин А Лектин чечевицы Агглютинин пшеницы Лектин арахиса 67,0 ± 12,1 13,6 ± 2,2 81,8 ± 7,3 29,8 ± 5,9 70,6±14,2 9,2±1,9 78,4±7,6 24,5±4,9 7,2±1,4 8,5±1,7 95,7±9,4 25,3±5,6 Примечание. В контрольных образцах, где исклю� чалась инкубация с лектином, количество псевдопо� ложительных клеток не превышало 0,5 %, что намно� го меньше стандартного отклонения, поэтому по� правки на контроль не делали. значениями интенсивность связывания этих лектинов. Это может быть причиной расхожде� ний при субъективной оценке результатов раз� личными исследователями. Результаты опреде� ления процентного содержания лектин�поло� жительных клеток в асците лимфомы NK/Ly и лейкоза L�1210 представлены в таблице. Отме� чены достоверные различия в связывании Con A клетками исследованных опухолевых штаммов. Для клеток NK/Ly характерно связы� вание Con A с большей частью клеток популя� ции, что можно интерпретировать как экспони� рование двухантенных N�гликозильных угле� водных цепей на поверхности лектин�положи� тельных клеток [11, 14]. В популяции клеток L�1210 содержание углеводных цепей этого типа существенно меньше. Не выявлено достовер� ных различий в связывании лектинов клетками NK/Ly в начальной и терминальной стадиях роста опухоли. WGA связывался с большинством клеток обоих штаммов, более интенсивно с клетками L�1210, где практически все клетки являются WGA�положительными. Названный лектин проявлял высокое сродство к углеводам клеточ� ной поверхности, интенсивное связывание наб� людалось при его концентрации 10 мкг/мл, в то время как для остальных лектинов эффектив� ная концентрация составляла 100–200 мкг/мл. Интенсивное связывание WGA может быть обусловлено наличием большого количества терминальных остатков сиаловых кислот в уг� леводных цепях О� и N�типов [14]. Cравнительно высокий процент PNA�по� ложительных клеток наблюдали в обеих попу� ляциях, при этом он был большим у лимфомы NK/Ly. Это может быть обусловлено значи� тельной степенью десиалирования углеводных цепей гликопротеинов преимущественно О� типа на клеточной поверхности. Отмечена об� ратная зависимость между связыванием WGA и PNA, что можно объяснить соответственно наличием (WGA +) или отсутствием (PNA +) терминальных остатков сиаловой кислоты в углеводных цепях гликопротеинов. Особенность светооптического исследова� ния структуры клеток на полутонких срезах (1–1,5 мкм), получаемых по технологии под� готовки препаратов для электронной микро� скопии, состояла в том, что проводку и заливку материала в эпоксидную смолу проводили пос� ле обработки суспензии клеток проявляющим раствором ацетата серебра. На неокрашенных срезах клетки четко контурированы отложени� ями серебра на цитоплазматической мембране (рис. 2, а). По интенсивности ободка можно ISSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2011. № 26 М.М. Луцик, А.М. Ященко, В.И. Ковалишин и др. Рис. 2. Структура асцитных клеток NK/Ly в полутон� ких срезах (1,5 мкм) при различных способах их обра� ботки: а – клетки NK/Ly на стадии интенсивного рос� та опухоли, обработка агглютинином пшеницы (WGA) без дополнительной окраски среза. Темные дисковид� ные структуры представляют собой срез апикальной части клетки, в которой наружная поверхность мемб� раны заполнена отложениями серебра; б – клетки NK/Ly в терминальной фазе роста опухоли, обработка WGA, окраска среза толуидиновым голубым. Четко про� является структура ядер Рис. 3. Электронная микроскопия клетки NK/Ly после обработки WGA (проявку ацетатом серебра не прово� дили): а – увеличение �8000; б – фрагмент той же клетки после увеличения �70 000, полученного с помощью компьютерной обработки первичного изоб� ражения оценить содержание лектин�положительных клеток в популяции. После окрашивания сре� зов толуидиновым голубым или же в комбина� ции его с сафранином очень хорошо выявля� лась структура ядер (ядрышки, эухроматин и гетерохроматин) (рис. 2, б). Это позволяет осу� ществлять цитометрию структурных элементов ядер и анализировать их изменение при различ� ных воздействиях, в частности, под влиянием химиотерапевтических препаратов на опухо� левые клетки. При электронно�микроскопическом иссле� довании тонких срезов установлено, что доста� точную информацию о локализации частиц коллоидного золота на клетках можно полу� чить при увеличении 7000 раз, что позволяет получать изображение всей клетки. Дальнейшее увеличение изображения до 50–70 000 раз с помощью фото� или компьютерной технологии позволяет четко увидеть локализацию отдель� ных частиц коллоидного золота (рис. 3, а, б), при этом нет особой необходимости применять дополнительную проявку для визуализации частиц золота. Результаты электронно�микро� скопического исследования совпадают с дан� ными светооптической микроскопии о лока� лизации метки на клеточной поверхности и интенсивности связывания лектинов, однако определить количество лектин�связывающих клеток в популяции упомянутым методом не представляется возможным. Таким образом, выявление связывания лек� тинов непрямым иммуногистохимическим ме� тодом с помощью меченых антилектиновых ан� тител имеет следующие преимущества: а) пер� вичная обработка клеток нативными лектинами исключает возможность изменения их углевод� ной специфичности вследствие химической модификации при введении метки или других воздействиях; б) чистота контроля, достигаемая благодаря исключению обработки клеток лек� тином. В прямых методах с использованием меченых лектинов редко удается достигнуть блокирования связывания лектина с углевод� ными детерминантами при помощи сравни� тельно простых углеводов�ингибиторов вслед� ствие высокого сродства лектина к сложным углеводным группам гликопротеинов. Кроме этого, при использовании пероксидазы в ка� честве метки лектинов или антител сущест� венной проблемой является блокирование ак� тивности собственной пероксидазы объекта; в) метка коллоидным золотом с последующим усилением сигнала проявкой солями серебра позволяет проводить исследования параллель� но электронной и световой микроскопией на тонких и полутонких срезах. Влияние методики гистохимической «окраски» лектинами на ре� зультат анализа очень хорошо продемонстри� ровано в работе Brooks et al. [4]. При анализе 373 случаев первичного рака груди авторами установлена очень высокая степень положи� тельной корреляции между связыванием лек� тина улитки с опухолевой тканью и неблаго� приятным прогнозом при непрямом методе «окраски». В то же время при использовании прямого метода «окраски» конъюгатом лек� тин – пероксидаза обнаружена слабая корре� ляция между этими показателями. Существенной особенностью описанного нами метода является количественная оценка результата цитохимической реакции. При сра� внении двух способов подсчета клеток – на фотоотпечатках мазков или в суспензии кле� ток в гемоцитометрической камере – нами установлено, что второй способ точнее соот� ветствует действительности и дает меньшую ошибку. Это может быть обусловлено более равномерным распределением клеток в суспен� зии, чем на мазках в процессе их приготовле� ния. Кроме этого, подсчет клеток в камере Го� ряева технически намного проще и быстрее, чем на фотоотпечатках, даже если не учиты� вать время, необходимое для съемки, монтажа и фотопечати изображения. Суспензия клеток хорошо сохраняется после окончательной об� работки при 4 °С в присутствии 0,01 % азида натрия, и, кроме того, серебро является анти� септиком. Выводы. Оптимальным методом исследова� ния углеводных детерминант клеточной по� верхности является непрямой иммунохимичес� кий метод определения связывания лектинов с клетками при помощи антилектиновых анти� тел, меченных коллоидным золотом. Из приме� ненных нами лектинов более информативными в плане интерпретации структуры углеводных цепей являются конканавалин А, лектины че� чевицы и арахиса. Агглютинин пшеницы вслед� ствие высокого сродства к поверхности боль� ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2011. № 2 7 Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L&1210 шинства клеток слабо выявляет различия в популяции по углеводным детерминантам кле� точной поверхности. Разработанный нами ме� тод можно применять для изучения изменений углеводных детерминант поверхности опухоле� вых клеток под воздействием химиотерапев� тических препаратов, а также использовать для гистохимического выявления и характе� ристики углеводных групп тканевых структур. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ Сon A – конканавалин А LcL – лектин чечевицы PNA – лектин арахиса WGA – лектин зародышей пшеницы TBS – физиологический раствор + 10 мМ трис�буфер M.M. Lutsyk, A.M. Yashchenko, V.I. Kovalyshyn, O.E. Prydatko, R.S. Stoika, M.D. Lootsik HETEROGENEITY OF CELL POPULATION OF LYMPHOMA NK/Ly AND LEUKEMIA L�1210 ACCORDING TO CARBOHYDRATE STRUCTURE OF CELL SURFACE: IMMUNOCYTOCHEMICAL ANALYSIS OF LECTIN BINDING The heterogeneity of tumor cell populations according to binding of lectins from lentil (LcL), wheat germs (WGA), peanut (PNA) and concanavalin A was investigat� ed on a model of murine Nemeth�Kellner lymphoma (NK/Ly) and leukemia L�1210. Bound lectins were detect� ed by indirect immunochemical method using home obtained polyclonal antilectin antibodies and immunogold silver staining (IGSS) technique. Significant differences in binding of Con A were revealed between NK/Ly (67 % Con A+) and L�1210 (7,2 % Con A+) cells, while the differ� ences in binding of other lectins with both types of tumor cells were not significant. A relatively high percentage of PNA+ cells was registered that can indicate a high degree of desialization of membrane glycoproteins. М.М. Луцик, А.М. Ященко, В.І. Ковалишин, О.Ю. Придатко, Р.С. Стойка, М.Д. Луцик ГЕТЕРОГЕННІСТЬ ПОПУЛЯЦІЇ КЛІТИН ЛІМФОМИ NK/Ly І ЛЕЙКОЗУ L�1210 ЗА ВУГЛЕВОДНОЮ СТРУКТУРОЮ КЛІТИННОЇ ПОВЕРХНІ: ІМУНОЦИТОХІМІЧНИЙ АНАЛІЗ ЗВ’ЯЗУВАННЯ ЛЕКТИНІВ Вивчали гетерогенність популяції асцитних клітин мишиної лімфоми Немета�Кельнера (NK/Ly) і лейко� зу L�1210 по зв’язуванню лектинів сочевиці, зародків пшениці, арахісу і конканаваліну А. Зв’язані з кліти� нами лектини виявляли непрямим імунохімічним ме� тодом за допомогою отриманих нами поліклональних антилектинових антитіл, мічених колоїдним золотом, з наступною проявкою ацетатом срібла. Виявлено до� стовірні відмінності у зв’язуванні конканаваліну А клітинами NK/Ly (67 % Con А + ) і L�1210 (7,2 % Con А + ), тоді як відмінності між штамами пухлинних клітин у зв’язуванні інших застосованих лектинів не були ста� тистично достовірними. Зазначено порівняно висо� кий вміст PNA + клітин, що може свідчити про висо� кий рівень десіалювання мембранних глікопротеїнів. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Roth J., Binder M., Gerhard J. Conjugation of lectins with fluorochromes, an approach to histochemical double labelling of carbohydrate components // Histochemistry. – 1978. – 56. – P. 265–273. 2. Луцик А.Д., Детюк Е.С., Луцик М.Д. Лектины в гис� тохимии. – Львов : Вища шк., 1989. – 141 с. 3. Шалай О.О., Логінський В.Є. Гліканові структури мембрани лімфоцитів у хворих на хронічну лімфо� їдну лейкемію // Онкология. – 2005. – 7, № 1. – C. 19–22. 4. Brooks S.A., Lymboura M., Schumacher U., Leathem A.J. Histochemistry to detect Helix pomatia lectin bind� ing in breast cancer: methodology makes a difference // J. Histochem. Cytochem. – 1996. – 44. – P. 519–524. 5. Dolapchieva S., Eggers R., Kuhnel W. N� and R�cad� herins expression in the rat sciatic nerve demonstrated by postembedding immunogold method on semi�thin sections // Ann. Anat. – 2001. – 183. – P. 405–411. 6. Helliot B., Panis B., Busogoro J.P., Sobry S., Poumay Y., Raes M., Swennen R., Lepoivre P. Immunogold silver staining associated with epi�fluorescence for cucumber mosaic virus localization on semi�thin sections of banana tissues // Eur. J. Histochem. – 2007. – 51. – P. 153–158. 7. Holgate C.S., Jackson P., Cowen P.N., Bird C.C. Immunogoldsilver staining: new method of immuno� staining with enhanced sensitivity // J. Histochem. Cytochem. – 1983. – 31. – P. 938–944. 8. Springall D.R., Hacker G.W., Grimelius L., Polak J.M. The potential of the immunogoldsilver method for paraffin sections // Histochemistry. – 1984. – 81. – P. 603–608. 9. Taatjes D.J., Schaub U., Roth J. Light microscopical detection of antigens and lectin binding sites with gold labelled reagents on semithin Lowicryl K4M sections: usefulness of the photochemical silver reaction for signal amplification // Histochem. J. – 1987. – 19. – P. 235–245. 10. Hacker G.W., Grimelius L., Danscher G., Bernatsky G., Muss W., Adam H., Thurner J. Silver acetate automet� allography: an alternative enhancement technique for immunogold� silver staining (IGSS) and silver amplifi� cation of gold, silver, mercury and zinc in tissues // J. Histotechnol. – 1988. – 11. – P. 213–221. ISSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2011. № 28 М.М. Луцик, А.М. Ященко, В.И. Ковалишин и др. 11. Лахтин В.М. Лектины в исследовании белков и углеводов. – М.: ВИНИТИ, 1987. – C. 25–28. (Итоги науки и техники, сер. Биотехнология; Т. 2). 12. Goldstein I., Hayes C. The lectins: carbohydrate�bind� ing proteins of plants and animals // Adv. Carbohydr. Chem. Biochem. – 1978. – 35. – P. 127–340. 13. Хомутовский О.А., Луцик М.Д., Передерей О.Ф. Угле� водная специфичность лектинов // Электронная гистохимия рецепторов клеточных мембран. – Киев : Наук. думка, 1986. – C. 8–33. 14. Osawa T., Tsuji T. Fractionation and structural assess� ment of oligosaccharides and glycopeptides by use of immobilized lectins // Ann. Rev. Biochem. – 1987. – 56. – P. 21–42. 15. Экспериментальная оценка противоопухолевых препаратов в СССР и США / Под ред. З.П. Со� фьиной и др. – М.: Медицина, 1980. – 295 с. 16. Луцик М.Д., Бойко Н.М., Панчук Р.Р., Стойка Р.С. Кореляція між зростанням розмірів клітин лімфо� ми NK/Ly і зниженням життєздатності клітин та ефективності прищеплення асциту // Експерим. та клін. фізіологія і біохімія. – 2006. – 4 (36). – C. 16–22. 17. Belew M., Junti N., Larsson A., Porath J. A one�step purification method for monoclonal antibodies based on salt�promoted adsorption chromatography on a «thiophillic» adsorbent // J. Immunol. Meth. – 1987. – 102. – P. 173–182. 18. Oscarsson S., Porath J. Covalent chromatography and salt�promoted thiophillic adsorption // Anal. Bio� chem. – 1989. – 176. – P. 330–337. 19. Geoghean W., Ackerman A. Adsorbtion of horseradish peroxidase, ovomucoid and anti�immunoglobulin to colloidal gold for the indirect detection of concanavalin A, WGA and immunoglobulin G on cell surface at the electron microscopic level // J. Histochem. Cytochem. – 1977. – 25. – P. 1187–1200. 20. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинаю� щих. – М.: Мир, 1975. – C. 298–301. Поступила 01.12.09 ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2011. № 2 9 Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L&1210
id nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-66826
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
issn 0564-3783
language Russian
last_indexed 2025-12-07T16:11:31Z
publishDate 2011
publisher Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
record_format dspace
spelling Луцик, М.М.
Ященко, А.М.
Ковалишин, В.И.
Придатко, О.Е.
Стойка, Р.С.
Луцик М.Д.
2014-07-23T05:57:59Z
2014-07-23T05:57:59Z
2011
Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L-1210 по углеводной структуре клеточной поверхности: иммуноцитохимический анализ связывания лектинов / М.М. Луцик, А.М. Ященко, В.И. Ковалишин, О.Е. Придатко, Р.С. Стойка, М.Д. Луцик // Цитология и генетика. — 2011. — Т. 45, № 2. — С. 3-9. — Бібліогр.: 20 назв. — рос.
0564-3783
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/66826
576.31:577.112.85:576.385.5
Изучали гетерогенность углеводных детерминант клеточной поверхности в популяции асцитных клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L-1210 по признаку связывания лектинов чечевицы, пшеницы, арахиса и конканавалина А. Связанные с клетками лектины выявляли непрямым иммунохимическим методом с помощью полученных авторами антилектиновых поликлональных антител, меченных коллоидным золотом, с последующей проявкой ацетатом серебра. Выявлены достоверные различия в уровне связывания конканавалина А клетками NK/Ly (67 % Con А+) и L-1210 (7,2 % Con А+). Различия между штаммами опухолевых клеток в связывании других лектинов не были статистически достоверными. Относительно высокое процентное содержание PNA+ клеток может свидетельствовать о значительной степени десиалирования мембранных гликопротеинов.
Вивчали гетерогенність популяції асцитних клітин мишиної лімфоми Немета Кельнера (NK/Ly) і лейкозу L-1210 по зв’язуванню лектинів сочевиці, зародків пшениці, арахісу і конканаваліну А. Зв’язані з клітинами лектини виявляли непрямим імунохімічним методом за допомогою отриманих нами поліклональних антилектинових антитіл, мічених колоїдним золотом, з наступною проявкою ацетатом срібла. Виявлено достовірні відмінності у зв’язуванні конканаваліну А клітинами NK/Ly (67 % Con А+) і L-1210 (7,2 % Con А+), тоді як відмінності між штамами пухлинних клітин у зв’язуванні інших застосованих лектинів не були статистично достовірними. Зазначено порівняно високий вміст PNA+ клітин, що може свідчити про високий рівень десіалювання мембранних глікопротеїнів.
The heterogeneity of tumor cell populations according to binding of lectins from lentil (LcL), wheat germs (WGA), peanut (PNA) and concanavalin A was investigated on a model of murine Nemeth-Kellner lymphoma (NK/Ly) and leukemia L-1210. Bound lectins were detected by indirect immunochemical method using home obtained polyclonal antilectin antibodies and immunogold silver staining (IGSS) technique. Significant differences in binding of Con A were revealed between NK/Ly (67 % Con A+) and L-1210 (7,2 % Con A+) cells, while the differences in binding of other lectins with both types of tumor cells were not significant. A relatively high percentage of PNA+ cells was registered that can indicate a high degree of desialization of membrane glycoproteins.
ru
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
Цитология и генетика
Оригинальные работы
Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L-1210 по углеводной структуре клеточной поверхности: иммуноцитохимический анализ связывания лектинов
Гетерогенність популяції клітин лімфоми NK/Ly і лейкозу L-1210 за вуглеводною структурою клітинної поверхні: імуноцитохімічний аналіз зв’язування лектинів
Heterogeneity of cell population of lymphoma NK/Ly and leukemia L-1210 according to carbohydrate structure of cell surface : immunocytochemical analysis of lectin binding
Article
published earlier
spellingShingle Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L-1210 по углеводной структуре клеточной поверхности: иммуноцитохимический анализ связывания лектинов
Луцик, М.М.
Ященко, А.М.
Ковалишин, В.И.
Придатко, О.Е.
Стойка, Р.С.
Луцик М.Д.
Оригинальные работы
title Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L-1210 по углеводной структуре клеточной поверхности: иммуноцитохимический анализ связывания лектинов
title_alt Гетерогенність популяції клітин лімфоми NK/Ly і лейкозу L-1210 за вуглеводною структурою клітинної поверхні: імуноцитохімічний аналіз зв’язування лектинів
Heterogeneity of cell population of lymphoma NK/Ly and leukemia L-1210 according to carbohydrate structure of cell surface : immunocytochemical analysis of lectin binding
title_full Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L-1210 по углеводной структуре клеточной поверхности: иммуноцитохимический анализ связывания лектинов
title_fullStr Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L-1210 по углеводной структуре клеточной поверхности: иммуноцитохимический анализ связывания лектинов
title_full_unstemmed Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L-1210 по углеводной структуре клеточной поверхности: иммуноцитохимический анализ связывания лектинов
title_short Гетерогенность популяции клеток лимфомы NK/Ly и лейкоза L-1210 по углеводной структуре клеточной поверхности: иммуноцитохимический анализ связывания лектинов
title_sort гетерогенность популяции клеток лимфомы nk/ly и лейкоза l-1210 по углеводной структуре клеточной поверхности: иммуноцитохимический анализ связывания лектинов
topic Оригинальные работы
topic_facet Оригинальные работы
url https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/66826
work_keys_str_mv AT lucikmm geterogennostʹpopulâciikletoklimfomynklyileikozal1210pouglevodnoistrukturekletočnoipoverhnostiimmunocitohimičeskiianalizsvâzyvaniâlektinov
AT âŝenkoam geterogennostʹpopulâciikletoklimfomynklyileikozal1210pouglevodnoistrukturekletočnoipoverhnostiimmunocitohimičeskiianalizsvâzyvaniâlektinov
AT kovališinvi geterogennostʹpopulâciikletoklimfomynklyileikozal1210pouglevodnoistrukturekletočnoipoverhnostiimmunocitohimičeskiianalizsvâzyvaniâlektinov
AT pridatkooe geterogennostʹpopulâciikletoklimfomynklyileikozal1210pouglevodnoistrukturekletočnoipoverhnostiimmunocitohimičeskiianalizsvâzyvaniâlektinov
AT stoikars geterogennostʹpopulâciikletoklimfomynklyileikozal1210pouglevodnoistrukturekletočnoipoverhnostiimmunocitohimičeskiianalizsvâzyvaniâlektinov
AT lucikmd geterogennostʹpopulâciikletoklimfomynklyileikozal1210pouglevodnoistrukturekletočnoipoverhnostiimmunocitohimičeskiianalizsvâzyvaniâlektinov
AT lucikmm geterogennístʹpopulâcííklítinlímfominklyíleikozul1210zavuglevodnoûstrukturoûklítinnoípoverhníímunocitohímíčniianalízzvâzuvannâlektinív
AT âŝenkoam geterogennístʹpopulâcííklítinlímfominklyíleikozul1210zavuglevodnoûstrukturoûklítinnoípoverhníímunocitohímíčniianalízzvâzuvannâlektinív
AT kovališinvi geterogennístʹpopulâcííklítinlímfominklyíleikozul1210zavuglevodnoûstrukturoûklítinnoípoverhníímunocitohímíčniianalízzvâzuvannâlektinív
AT pridatkooe geterogennístʹpopulâcííklítinlímfominklyíleikozul1210zavuglevodnoûstrukturoûklítinnoípoverhníímunocitohímíčniianalízzvâzuvannâlektinív
AT stoikars geterogennístʹpopulâcííklítinlímfominklyíleikozul1210zavuglevodnoûstrukturoûklítinnoípoverhníímunocitohímíčniianalízzvâzuvannâlektinív
AT lucikmd geterogennístʹpopulâcííklítinlímfominklyíleikozul1210zavuglevodnoûstrukturoûklítinnoípoverhníímunocitohímíčniianalízzvâzuvannâlektinív
AT lucikmm heterogeneityofcellpopulationoflymphomanklyandleukemial1210accordingtocarbohydratestructureofcellsurfaceimmunocytochemicalanalysisoflectinbinding
AT âŝenkoam heterogeneityofcellpopulationoflymphomanklyandleukemial1210accordingtocarbohydratestructureofcellsurfaceimmunocytochemicalanalysisoflectinbinding
AT kovališinvi heterogeneityofcellpopulationoflymphomanklyandleukemial1210accordingtocarbohydratestructureofcellsurfaceimmunocytochemicalanalysisoflectinbinding
AT pridatkooe heterogeneityofcellpopulationoflymphomanklyandleukemial1210accordingtocarbohydratestructureofcellsurfaceimmunocytochemicalanalysisoflectinbinding
AT stoikars heterogeneityofcellpopulationoflymphomanklyandleukemial1210accordingtocarbohydratestructureofcellsurfaceimmunocytochemicalanalysisoflectinbinding
AT lucikmd heterogeneityofcellpopulationoflymphomanklyandleukemial1210accordingtocarbohydratestructureofcellsurfaceimmunocytochemicalanalysisoflectinbinding

Схожі ресурси