Молекулярні технології в детекції чутливих та стійких до ізоніазиду мікобактерій туберкульозу

• Date: 2011
• Main Authors: Лиманська, О.Ю., Лиманський, О.П.
• Format: Article
• Language: Ukrainian
• Published: Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України 2011
• Series: Цитология и генетика
• Subjects: Оригинальные работы
• Online Access: https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/66871
• Journal Title: Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
• Cite this: Молекулярні технології в детекції чутливих та стійких до ізоніазиду мікобактерій туберкульозу / О.Ю. Лиманська, О.П. Лиманський // Цитология и генетика. — 2011. — Т. 45, № 6. — С. 34-47. — Бібліогр.: 20 назв. — укр.

Розроблено два варіанти детекції однонуклеотидних поліморфізмів у кодоні 315 гена katG мікобактерій туберкульозу (МТБ), мутації в якому асоційовані з резистентністю до ізоніазиду – протитуберкульозного препарату першого ряду. Два набори праймерів, кожний з яких містить додатковий конкурентний блокуючий праймер з 3’­термінальною фосфатною групою (для елімінації неспецифічної ампліфікації), дозволяють у кодоні 315 гена katG виявляти точкові мутації AGC→ACC та AGC→AGA, що найчастіше зустрічаються. Проведення ПЛР з набором із двох праймерів, один з яких містить п’ять LNA­мономерів, дозволяє встановити наявність будь­якого з шести відомих варіантів мутацій у кодоні 315 гена katG, тобто диференціювати чутливі та резистентні до ізоніазиду МТБ. Чистоту та будову праймерів довжиною 17 нуклеотидів, що містять LNA­модифіковані нуклеотиди, охарактеризовано часопролітною мас-спектрометрією з матрично-активованою лазерною десорбцією/іонізацією, а 17­мірний дуплекс, утворений двома комплементарними олігонуклеотидами з LNA­мономерами, – методом термічної денатурації. Створені молекулярно­генетичні тест­системи для виявлення ізолятів дикого типу та резистентних МТБ до протитуберкульозного препарату першого ряду ізоніазиду можуть застосовуватися у клінічних лабораторіях зі стандартним ПЛР­обладнанням та дозволяють скоротити визначення резистентності МТБ до ізоніазиду з 1–3 місяців стандартними бактеріологічними методами до 1–3 днів шляхом ПЛР.