Молекулярні технології в детекції чутливих та стійких до ізоніазиду мікобактерій туберкульозу

Розроблено два варіанти детекції однонуклеотидних поліморфізмів у кодоні 315 гена katG мікобактерій туберкульозу (МТБ), мутації в якому асоційовані з резистентністю до ізоніазиду – протитуберкульозного препарату першого ряду. Два набори праймерів, кожний з яких містить додатковий конкурентний блокую...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
Datum:	2011
Hauptverfasser:	Лиманська, О.Ю., Лиманський, О.П.
Format:	Artikel
Sprache:	Ukrainian
Veröffentlicht:	Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України 2011
Schriftenreihe:	Цитология и генетика
Schlagworte:	Оригинальные работы
Online Zugang:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/66871
Tags:	Tag hinzufügen Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:	Молекулярні технології в детекції чутливих та стійких до ізоніазиду мікобактерій туберкульозу / О.Ю. Лиманська, О.П. Лиманський // Цитология и генетика. — 2011. — Т. 45, № 6. — С. 34-47. — Бібліогр.: 20 назв. — укр.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-66871
record_format	dspace
fulltext
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Ukrainian
topic	Оригинальные работы Оригинальные работы
spellingShingle	Оригинальные работы Оригинальные работы Лиманська, О.Ю. Лиманський, О.П. Молекулярні технології в детекції чутливих та стійких до ізоніазиду мікобактерій туберкульозу Цитология и генетика
description	Розроблено два варіанти детекції однонуклеотидних поліморфізмів у кодоні 315 гена katG мікобактерій туберкульозу (МТБ), мутації в якому асоційовані з резистентністю до ізоніазиду – протитуберкульозного препарату першого ряду. Два набори праймерів, кожний з яких містить додатковий конкурентний блокуючий праймер з 3’термінальною фосфатною групою (для елімінації неспецифічної ампліфікації), дозволяють у кодоні 315 гена katG виявляти точкові мутації AGC→ACC та AGC→AGA, що найчастіше зустрічаються. Проведення ПЛР з набором із двох праймерів, один з яких містить п’ять LNAмономерів, дозволяє встановити наявність будьякого з шести відомих варіантів мутацій у кодоні 315 гена katG, тобто диференціювати чутливі та резистентні до ізоніазиду МТБ. Чистоту та будову праймерів довжиною 17 нуклеотидів, що містять LNAмодифіковані нуклеотиди, охарактеризовано часопролітною мас-спектрометрією з матрично-активованою лазерною десорбцією/іонізацією, а 17мірний дуплекс, утворений двома комплементарними олігонуклеотидами з LNAмономерами, – методом термічної денатурації. Створені молекулярногенетичні тестсистеми для виявлення ізолятів дикого типу та резистентних МТБ до протитуберкульозного препарату першого ряду ізоніазиду можуть застосовуватися у клінічних лабораторіях зі стандартним ПЛРобладнанням та дозволяють скоротити визначення резистентності МТБ до ізоніазиду з 1–3 місяців стандартними бактеріологічними методами до 1–3 днів шляхом ПЛР.
format	Article
author	Лиманська, О.Ю. Лиманський, О.П.
author_facet	Лиманська, О.Ю. Лиманський, О.П.
author_sort	Лиманська, О.Ю.
title	Молекулярні технології в детекції чутливих та стійких до ізоніазиду мікобактерій туберкульозу
title_short	Молекулярні технології в детекції чутливих та стійких до ізоніазиду мікобактерій туберкульозу
title_full	Молекулярні технології в детекції чутливих та стійких до ізоніазиду мікобактерій туберкульозу
title_fullStr	Молекулярні технології в детекції чутливих та стійких до ізоніазиду мікобактерій туберкульозу
title_full_unstemmed	Молекулярні технології в детекції чутливих та стійких до ізоніазиду мікобактерій туберкульозу
title_sort	молекулярні технології в детекції чутливих та стійких до ізоніазиду мікобактерій туберкульозу
publisher	Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
publishDate	2011
topic_facet	Оригинальные работы
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/66871
citation_txt	Молекулярні технології в детекції чутливих та стійких до ізоніазиду мікобактерій туберкульозу / О.Ю. Лиманська, О.П. Лиманський // Цитология и генетика. — 2011. — Т. 45, № 6. — С. 34-47. — Бібліогр.: 20 назв. — укр.
series	Цитология и генетика
work_keys_str_mv	AT limansʹkaoû molekulârnítehnologíívdetekcííčutlivihtastíjkihdoízoníazidumíkobakteríjtuberkulʹozu AT limansʹkijop molekulârnítehnologíívdetekcííčutlivihtastíjkihdoízoníazidumíkobakteríjtuberkulʹozu AT limansʹkaoû molekulârnyetehnologiivdetekciičuvstvitelʹnyhiustojčivyhkizoniazidumikobakterijtuberkuleza AT limansʹkijop molekulârnyetehnologiivdetekciičuvstvitelʹnyhiustojčivyhkizoniazidumikobakterijtuberkuleza AT limansʹkaoû moleculartechnologiesindetectingsensitiveandisoniazidresistantmycobacteriumtuberculosis AT limansʹkijop moleculartechnologiesindetectingsensitiveandisoniazidresistantmycobacteriumtuberculosis
first_indexed	2025-11-24T15:43:06Z
last_indexed	2025-11-24T15:43:06Z
_version_	1849687001427607552
spelling	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-668712025-02-23T19:16:12Z Молекулярні технології в детекції чутливих та стійких до ізоніазиду мікобактерій туберкульозу Молекулярные технологии в детекции чувствительных и устойчивых к изониазиду микобактерий туберкулеза Molecular technologies in detecting sensitive and isoniazidresistant mycobacterium tuberculosis Лиманська, О.Ю. Лиманський, О.П. Оригинальные работы Розроблено два варіанти детекції однонуклеотидних поліморфізмів у кодоні 315 гена katG мікобактерій туберкульозу (МТБ), мутації в якому асоційовані з резистентністю до ізоніазиду – протитуберкульозного препарату першого ряду. Два набори праймерів, кожний з яких містить додатковий конкурентний блокуючий праймер з 3’термінальною фосфатною групою (для елімінації неспецифічної ампліфікації), дозволяють у кодоні 315 гена katG виявляти точкові мутації AGC→ACC та AGC→AGA, що найчастіше зустрічаються. Проведення ПЛР з набором із двох праймерів, один з яких містить п’ять LNAмономерів, дозволяє встановити наявність будьякого з шести відомих варіантів мутацій у кодоні 315 гена katG, тобто диференціювати чутливі та резистентні до ізоніазиду МТБ. Чистоту та будову праймерів довжиною 17 нуклеотидів, що містять LNAмодифіковані нуклеотиди, охарактеризовано часопролітною мас-спектрометрією з матрично-активованою лазерною десорбцією/іонізацією, а 17мірний дуплекс, утворений двома комплементарними олігонуклеотидами з LNAмономерами, – методом термічної денатурації. Створені молекулярногенетичні тестсистеми для виявлення ізолятів дикого типу та резистентних МТБ до протитуберкульозного препарату першого ряду ізоніазиду можуть застосовуватися у клінічних лабораторіях зі стандартним ПЛРобладнанням та дозволяють скоротити визначення резистентності МТБ до ізоніазиду з 1–3 місяців стандартними бактеріологічними методами до 1–3 днів шляхом ПЛР. Разработаны два варианта детекции однонуклеотидных полиморфизмов в кодоне 315 гена katG микобактерий туберкулеза (МТБ), мутации в котором ассоциированы с устойчивостью к изониазиду – противотуберкулезному препарату первого ряда. Два набора праймеров, каждый из которых содержит дополнительный конкурентный блокирующий праймер с 3’-терминальной фосфатной группой (для элиминации неспецифической амплификации), позволяют выявлять наличие наиболее часто встречающихся точечных мутаций AGC→ACC и AGC→AGA в кодоне 315 гена katG. Проведение ПЦР с набором из двух праймеров, один из которых содержит пять LNA-мономеров, позволяет определить наличие любого из шести известных вариантов мутаций в кодоне 315 гена katG, т.е. дифференцировать чувствительные и резистентные к изониазиду МТБ. Чистота и строение праймеров длиной 17 нуклеотидов, содержащих LNA-модифицированные нуклеотиды, охарактеризованы времяпролетной масс спектрометрией с матрично активированной лазерной десорбцией/ионизацией (MALDI-TOF), а 17-мерный дуплекс, образованный двумя комплементарными олигонуклеотидами с LNA-мономерами, – методом термической денатурации. Two types of techniques for detection of single nucleotide polymorphism in 315 codon of katG gene of MTB are developed. Isoniazid resistance of MTB is associated with point mutations in the mentioned codon. Two primer sets with additional competitive blocking primer containing 3’-terminal phosphate group (for elimination of unspecific amplification) allow detecting the most frequent point mutations AGC 􀁯􀀃ACC and AGC 􀁯􀀃AGA in 315 codon of katG gene. PCR with primer set of two primers one of which contains five LNA-monomers allows to determine an occurrence of any type from six known mutations in 315 codon of katG gene, i.e. to differentiate wild type and isoniazid-resistant MTB. Purity and structure of 17 bp long primers with LNA-modified nucleotides were characterized by time-of-flight MALDI-mass spectrometry. Duplex of 17 bp length formed by two complementary oligonucleotides with LNA-monomers was studied using melting. Робота частково підтримана грантом АМН 95/2010 від Національної академії медичних наук України, а також Центром колективного користування приладом «Мас-спектрометричний комплекс з лазерною десорбцією та іонізацією Autoflex II» НАН України. Автори висловлюють подяку д-ру В.М. Степаншиній (Державний науковий центр прикладної мікробіології та біотехнолог ії, РФ), проф. X. Wu (Інститут дослідження туберкульозу, Китай), Т.В. Фесенко (Інститут хімії поверхні ім. О.О. Чуйка НАН України) за допомогу в проведенні досліджень. 2011 Article Молекулярні технології в детекції чутливих та стійких до ізоніазиду мікобактерій туберкульозу / О.Ю. Лиманська, О.П. Лиманський // Цитология и генетика. — 2011. — Т. 45, № 6. — С. 34-47. — Бібліогр.: 20 назв. — укр. 0564-3783 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/66871 579:579.873.2:615.015.8 uk Цитология и генетика application/pdf Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України

Молекулярні технології в детекції чутливих та стійких до ізоніазиду мікобактерій туберкульозу

Institution

Ähnliche Einträge