Индукция экспрессии гена репаративного энзима О⁶-метилгуанин-ДНК метилтрансферазы под влиянием цитокина EMAP II в клетках человека in vitro
Цель работы — определить влияние рекомбинантного цитокина EMAP II (эндотелиальный и моноцитактивирующий полипептид II) на уровень экспрессии гена MGMT, кодирующего репаративный энзим О⁶метилгуанинДНК метилтрансферазу (MGMT), в культурах клеток человека. Исследование влияния EMAP II на пролиферацию...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Цитология и генетика |
|---|---|
| Дата: | 2011 |
| Автори: | , , , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
2011
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/66873 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Индукция экспрессии гена репаративного энзима О⁶-метилгуанин-ДНК метилтрансферазы под влиянием цитокина EMAP II в клетках человека in vitro / В.В. Лыло, Л.Л. Мацевич, Е.В. Коцаренко, Л.А. Бабенко, А.И. Корнелюк, Е.М. Сухорада, Л.Л. Лукаш // Цитология и генетика. — 2011. — Т. 45, № 6. — С. 53-60. — Бібліогр.: 29 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860244438101524480 |
|---|---|
| author | Лыло, В.В. Мацевич, Л.Л. Коцаренко, Е.В. Бабенко, Л.А. Корнелюк, А.И. Сухорада, Е.М. Лукаш, Л.Л. |
| author_facet | Лыло, В.В. Мацевич, Л.Л. Коцаренко, Е.В. Бабенко, Л.А. Корнелюк, А.И. Сухорада, Е.М. Лукаш, Л.Л. |
| citation_txt | Индукция экспрессии гена репаративного энзима О⁶-метилгуанин-ДНК метилтрансферазы под влиянием цитокина EMAP II в клетках человека in vitro / В.В. Лыло, Л.Л. Мацевич, Е.В. Коцаренко, Л.А. Бабенко, А.И. Корнелюк, Е.М. Сухорада, Л.Л. Лукаш // Цитология и генетика. — 2011. — Т. 45, № 6. — С. 53-60. — Бібліогр.: 29 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Цитология и генетика |
| description | Цель работы — определить влияние рекомбинантного цитокина EMAP II (эндотелиальный и моноцитактивирующий полипептид II) на уровень экспрессии гена MGMT, кодирующего репаративный энзим О⁶метилгуанинДНК метилтрансферазу (MGMT), в культурах клеток человека. Исследование влияния EMAP II на пролиферацию клеток проводили с использованием стандартного МТТтеста. Белок MGMT в клеточном экстракте идентифицировали с помощью Вестернблот анализа. Использовались клеточные линии: А102 (фибробласты), ПК1 (стромальные клетки пуповинной крови) и 4BL6 (клетки, полученные из периферической крови). В серии экспериментов показано, что цитокин EMAP II вызывает индукцию экспрессии MGMT в клетках человека исследованных линий. При высоких концентрациях этого цитокина наблюдалось снижение количества клеток. Установлено, что присутствие цитокина EMAP II в бессывороточной культуральной среде приводит к возрастанию уровня экспрессии репаративного энзима MGMT в клетках человека in vitro.
Мета роботи – визначити вплив рекомбінантного цитокіну EMAP II (ендотеліальний та моноцитактивуючий поліпептид II) на рівень експресії гена MGMT, що кодує репаративний ензим О⁶-метилгуанін-ДНК метилтрансферазу (MGMT), в культурах клітин людини. Дослідження впливу EMAP II на виживання і проліферацію клітин проводили з використанням стандартного МТТ-тесту. Білок MGMT у клітинному екстракті ідентифікували за допомогою Вестерн-блот аналізу. Використовувались клітинні лінії: А102 (фібробласти), ПК-1 (стромальні клітини пуповинної крові) і 4BL6 (клітини, отримані з периферійної крові). В серії експериментів показано, що цитокін EMAP II спричиняє індукцію експресії MGMT в клітинах людини досліджуваних нами ліній. При високих концентраціях цього цитокіну спостерігалось зниження кількості клітин. Встановлено, що присутність цитокіну EMAP II в безсироватковому культуральному середовищі призводить до зростання рівня експресії репаративного ензиму MGMT в клітинах людини in vitro.
The aim of our study was to investigate the effect of recombinant human cytokine EMAP II (endothelial monocyte-activating polypeptide II) on the expression of MGMT gene, encoding repair enzyme O⁶-methylguanineDNA methyltransferase (MGMT) in human cell cultures. The influence of EMAP II on cell proliferation was performed using routine MTT assay. Identification of MGMT in cell extracts was performed using Western blot analysis. We used cell lines: A102 (fibroblasts), CB-1 (umbilical cord blood stromal cells), 4BL6 (cells derived from peripheral blood). It was shown that cytokine EMAP II caused induction of MGMT expression in studied human cell lines. There was a decrease in cell number at high concentrations of this cytokine. It was found that the presence of cytokine EMAP II in serum-free growth medium leads to increasing of repair enzyme MGMT expression level in human cells in vitro.
|
| first_indexed | 2025-12-07T18:34:43Z |
| format | Article |
| fulltext |
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2011. ¹ 6 53
УДК 575.224
В.В. ЛЫЛО 1, Л.Л. МАЦЕВИЧ 1, Е.В. КОЦАРЕНКО 1,
Л.А. БАБЕНКО 1, 2, А.И. КОРНЕЛЮК 1,
Е.М. СУХОРАДА 1, Л.Л. ЛУКАШ 1
1 Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины, Киев
E-mail: lukash@imbg.org.ua
2 Киевский национальный университет им. Т. Шевченко
E-mail: wbabenko_lesia@ukr.net
ИНДУКЦИЯ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА
РЕПАРАТИВНОГО ЭНЗИМА
О6-МЕТИЛГУАНИН-ДНК
МЕТИЛТРАНСФЕРАЗЫ ПОД
ВЛИЯНИЕМ ЦИТОКИНА EMAP II
В КЛЕТКАХ ЧЕЛОВЕКА IN VITRO
Öåëü ðàáîòû — îïðåäåëèòü âëèÿíèå ðåêîìáèíàíò-
íîãî öèòîêèíà EMAP II (ýíäîòåëèàëüíûé è ìîíîöèò-
àêòèâèðóþùèé ïîëèïåïòèä II) íà óðîâåíü ýêñïðåññèè
ãåíà MGMT, êîäèðóþùåãî ðåïàðàòèâíûé ýíçèì Î6-
ìåòèëãóàíèí-ÄÍÊ ìåòèëòðàíñôåðàçó (MGMT), â
êóëüòóðàõ êëåòîê ÷åëîâåêà. Èññëåäîâàíèå âëèÿíèÿ
EMAP II íà ïðîëèôåðàöèþ êëåòîê ïðîâîäèëè ñ èñïîëü-
çîâàíèåì ñòàíäàðòíîãî ÌÒÒ-òåñòà. Áåëîê MGMT â
êëåòî÷íîì ýêñòðàêòå èäåíòèôèöèðîâàëè ñ ïîìîùüþ
Âåñòåðí-áëîò àíàëèçà. Èñïîëüçîâàëèñü êëåòî÷íûå
ëèíèè: À102 (ôèáðîáëàñòû), ÏÊ-1 (ñòðîìàëüíûå êëåò-
êè ïóïîâèííîé êðîâè) è 4BL6 (êëåòêè, ïîëó÷åííûå èç
ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè).  ñåðèè ýêñïåðèìåíòîâ ïîêà-
çàíî, ÷òî öèòîêèí EMAP II âûçûâàåò èíäóêöèþ ýêñ-
ïðåññèè MGMT â êëåòêàõ ÷åëîâåêà èññëåäîâàííûõ
ëèíèé. Ïðè âûñîêèõ êîíöåíòðàöèÿõ ýòîãî öèòîêèíà
íàáëþäàëîñü ñíèæåíèå êîëè÷åñòâà êëåòîê. Óñòàíîâ-
ëåíî, ÷òî ïðèñóòñòâèå öèòîêèíà EMAP II â áåññû-
âîðîòî÷íîé êóëüòóðàëüíîé ñðåäå ïðèâîäèò ê âîçðàñ-
òàíèþ óðîâíÿ ýêñïðåññèè ðåïàðàòèâíîãî ýíçèìà MGMT
â êëåòêàõ ÷åëîâåêà in vitro.
Ââåäåíèå. Ãåíîìû æèâûõ îðãàíèçìîâ ïîä-
âåðãàþòñÿ ïîñòîÿííîìó âîçäåéñòâèþ ýêçî-
ãåííûõ è ýíäîãåííûõ ôàêòîðîâ, êîòîðûå ñ
îïðåäåëåííîé ÷àñòîòîé ïðèâîäÿò ê ïîâðåæäå-
íèþ ñòðóêòóðû ÄÍÊ. Â âîññòàíîâëåíèè ïåð-
âè÷íûõ ïîâðåæäåíèé ÄÍÊ, âûçâàííûõ àëêè-
ëèðóþùèìè ñîåäèíåíèÿìè (àëêèëÿòîðàìè),
êîòîðûå øèðîêî èñïîëüçóþòñÿ â ïðîèçâîä-
ñòâå è ìåäèöèíå, ðåøàþùóþ ðîëü èãðàåò ðå-
ïàðàòèâíûé ôåðìåíò Î6-ìåòèëãóàíèí-ÄÍÊ
ìåòèëòðàíñôåðàçà èëè Î6-àëêèëãóàíèí-ÄÍÊ
àëêèëòðàíñôåðàçà (MGMT èëè ÀÃÒ) [1–3].
Àëêèëèðîâàíèå àçîòèñòûõ îñíîâàíèé ìîæåò
ïðîèñõîäèòü â ðàçíûõ ïîëîæåíèÿõ, îäíàêî
àëêèëèðîâàíèå ãóàíèíà â Î6-ïîçèöèè èìååò
íàèáîëåå âûðàæåííûé êàíöåðîãåííûé, öè-
òîòîêñè÷åñêèé è ìóòàãåííûé ïîòåíöèàë. Î6-
àëêèëãóàíèí ÿâëÿåòñÿ îäíèì èç ìóòàãåííî
îïàñíûõ àääóêòîâ, òàê êàê ñ âûñîêîé ÷àñòîòîé
ïðèâîäèò ê îøèáî÷íîìó ñïàðèâàíèþ àçîòè-
ñòûõ îñíîâàíèé ïðè ðåïëèêàöèè ÄÍÊ: âìå-
ñòî öèòîçèíà Î6-àëêèëãóàíèí ñïàðèâàåòñÿ ñ
òèìèíîì, è â ðåçóëüòàòå âîçíèêàåò òðàíçèöèÿ
òèïà G:C A:T. Äðóãèì ìåõàíèçìîì ðåàëèçà-
öèè ìóòàöèé, îáóñëîâëåííûõ âîçäåéñòâèåì
àëêèëÿòîðîâ, ÿâëÿåòñÿ îáðàçîâàíèå ïîïåðå÷-
íûõ ñøèâîê çà ñ÷åò õëîðýòèëüíûõ ãðóïï [4].
 ïðîöåññå ðåïàðàöèè ÄÍÊ MGMT ïåðå-
íîñèò àëêèëüíóþ ãðóïïó èç Î6-ïîçèöèè ãóà-
íèíà íà ñîáñòâåííûé öèñòåèíîâûé îñòàòîê,
ïðè ýòîì íåîáðàòèìî èíàêòèâèðóÿñü. Òàêèì
îáðàçîì MGMT çàùèùàåò êëåòêó îò ìóòàãåí-
íûõ è öèòîòîêñè÷åñêèõ ïîâðåæäåíèé [1, 5].
Óðîâåíü ýêñïðåññèè èññëåäóåìîé àëêèëòðàíñ-
ôåðàçû ðàçëè÷åí ó ðàçíûõ èíäèâèäóóìîâ, à
òàêæå â îòäåëüíûõ òêàíÿõ è îðãàíàõ îäíîãî è
òîãî æå îðãàíèçìà, â íîðìàëüíûõ è îïóõîëå-
âûõ êëåòêàõ îäíîãî îðãàíà [1, 5]. Áëàãîïðè-
ÿòíûé ýôôåêò ïðèñóòñòâèÿ MGMT â íîð-
ìàëüíûõ êëåòêàõ – çàùèòà îò àëêèëèðîâàíèÿ
ÄÍÊ – ñòàíîâèòñÿ íåáëàãîïðèÿòíûì ôàêòî-
ðîì ïðè ïðîâåäåíèè õèìèîòåðàïèè îïóõîëåé
ñ èñïîëüçîâàíèåì àëêèëèðóþùèõ ñîåäèíå-
íèé. Ïîýòîìó àêòóàëüíûì ÿâëÿåòñÿ èçó÷åíèå
âîçìîæíîñòè âëèÿíèÿ íà óðîâåíü ýêñïðåññèè
ãåíà MGMT: èíãèáèðîâàíèÿ – â îïóõîëåâûõ
êëåòêàõ è âîññòàíîâëåíèÿ – â çäîðîâûõ êëåò-
êàõ îðãàíèçìà.
Èçâåñòíî, ÷òî MGMT ìëåêîïèòàþùèõ
èìååò ìîëåêóëÿðíóþ ìàññó îêîëî 22–24 êÄà
[1], íî ðàíåå ñ ïîìîùüþ Âåñòåðí-áëîò àíà-
ëèçà íàìè áûëî ïîêàçàíî òàêæå ñóùåñòâî-
© Â.Â. ËÛËÎ, Ë.Ë. ÌÀÖÅÂÈ×, Å.Â. ÊÎÖÀÐÅÍÊÎ,
Ë.À. ÁÀÁÅÍÊÎ, À.È. ÊÎÐÍÅËÞÊ, Å.Ì. ÑÓÕÎÐÀÄÀ,
Ë.Ë. ËÓÊÀØ, 2011
54 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2011. ¹ 6
Â.Â. Ëûëî, Ë.Ë. Ìàöåâè÷, Å.Â. Êîöàðåíêî è äð.
âàíèå íîâîé ìîëåêóëÿðíîé ôîðìû ýòîãî
ðåïàðàòèâíîãî ýíçèìà ñ ìîëåêóëÿðíîé ìàñ-
ñîé 48–50 êÄà [6], ïðèðîäà êîòîðîé â íà-
ñòîÿùåå âðåìÿ èçó÷àåòñÿ.
Êàê èçâåñòíî, íà ýêñïðåññèþ ãåíà MGMT
ìîãóò âëèÿòü ðàçëè÷íûå ôàêòîðû, íàïðè-
ìåð, îäíîöåïî÷å÷íûå ðàçðûâû ÄÍÊ, àëêè-
ëèðóþùèå ñîåäèíåíèÿ, ñîñòîÿíèå ãèïåð-
ìåòèëèðîâàíèÿ ïðîìîòîðà. Ðåãóëÿöèÿ ýêñ-
ïðåññèè ýòîãî ãåíà òàêæå ìîæåò îñóùåñò-
âëÿòüñÿ ÷åðåç ðàçëè÷íûå ñèñòåìû âíóòðè-
êëåòî÷íûõ ñèãíàëüíûõ ïóòåé, íàïðèìåð,
îïîñðåäîâàííûå áåëêîì ð53 è äð. Â íàøèõ
áîëåå ðàííèõ ðàáîòàõ [6, 7] áûëî ïîêàçàíî,
÷òî â ñèñòåìàõ in vitro èíäóêòîðàìè ýêñ-
ïðåññèè ãåíà MGMT íà óðîâíå áåëêà âûñòó-
ïàëè íåêîòîðûå ëåêòèíû ðàñòèòåëüíîãî è
æèâîòíîãî ïðîèñõîæäåíèÿ. Â ëèòåðàòóðå
òàêæå âñå ÷àùå ïîÿâëÿþòñÿ äàííûå î âëèÿ-
íèè íà ýêñïðåññèþ ãåíà MGMT ðàçëè÷íûõ
öèòîêèíîâ [8–11].
Öèòîêèíû ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé ãðóïïó
ïîëèïåïòèäíûõ ìåäèàòîðîâ, ó÷àñòâóþùèõ â
ôîðìèðîâàíèè è ðåãóëÿöèè çàùèòíûõ ðåàê-
öèé îðãàíèçìà. Ê öèòîêèíàì îòíîñÿòñÿ èíòåð-
ôåðîíû, êîëîíèåñòèìóëèðóþùèå ôàêòîðû,
èíòåðëåéêèíû, õåìîêèíû, òðàíñôîðìèðóþ-
ùèå ðîñòîâûå ôàêòîðû, ãðóïïà ôàêòîðà íåê-
ðîçà îïóõîëåé è íåêîòîðûå äðóãèå. Áèî-
ëîãè÷åñêèå ýôôåêòû öèòîêèíîâ îïîñðåäó-
þòñÿ ÷åðåç ñïåöèôè÷åñêèå êëåòî÷íûå ðåöåï-
òîðíûå êîìïëåêñû [12]. Ïî ëèòåðàòóðíûì
äàííûì, èíòåðôåðîí (IFN- ) â îïðåäå-
ëåííûõ êîíöåíòðàöèÿõ ñïîñîáåí ñíèæàòü
óðîâåíü ýêñïðåññèè ãåíà MGMT â êëåòêàõ
ãëèîìû [8] è íåéðîáëàñòîìû [9] ÷åëîâåêà,
óñèëèâàÿ òåì ñàìûì ïðîòèâîîïóõîëåâîå äåé-
ñòâèå àëêèëèðóþùåãî ïðåïàðàòà òåìîçîëî-
ìèäà. Àíàëîãè÷íûå äàííûå ïîëó÷åíû â ðà-
áîòå Zheng et al. [10], ãäå óñòàíîâëåíî, ÷òî
èíòåðëåéêèí-24 (IL-24) ïðè îïðåäåëåííûõ
óñëîâèÿõ ñïîñîáåí ñíèæàòü óðîâåíü ýêñ-
ïðåññèè ãåíà MGMT â êëåòêàõ ìåëàíîìû
÷åëîâåêà ÷åðåç àêòèâàöèþ áåëêà p53. Êðîìå
òîãî, IL-24 ñïåöèôè÷åñêè èíãèáèðîâàë ýêñ-
ïðåññèþ ãåíà MGMT, îñóùåñòâëÿÿ âëèÿíèå
÷åðåç ðåöåïòîðû IL-20R/IL-22R â êëåòêàõ
ìåëàíîìû ÷åëîâåêà. Cardozo et al. [11] ïî-
êàçàëè, ÷òî êîìáèíàöèÿ äâóõ öèòîêèíîâ
IL-1 + IFN- îêàçûâàëà îáðàòíîå äåéñò-
âèå – ñòèìóëèðîâàëà ïîâûøåíèå ýêñïðåñ-
ñèè ãåíà MGMT ïðè êðàòêîâðåìåííîé îáðà-
áîòêå -êëåòîê ïîäæåëóäî÷íîé æåëåçû êðûñ.
Àâòîðû ñòàòüè îáúÿñíÿþò ýòî, â ÷àñòíîñòè,
îòâåòîì ðåïàðàòèâíîé ñèñòåìû íà ïîâðåæ-
äåíèÿ ÄÍÊ, âûçâàííûå ñîâìåñòíûì äåé-
ñòâèåì IL-1 è IFN- .
Èññëåäóåìûé íàìè öèòîêèí EMAP II
(endothelial monocyte-activating polypepti-
de-II) – ýòî ìóëüòèôóíêöèîíàëüíûé öèòî-
êèíîïîäîáíûé áåëîê, êîòîðûé îáðàçóåòñÿ
â çëîêà÷åñòâåííûõ îïóõîëÿõ ìëåêîïèòàþ-
ùèõ áëàãîäàðÿ àëüòåðíàòèâíîìó ñïëàéñèíãó
è ïîñòòðàíñëÿöèîííîìó ïðîöåññèíãó åãî
ïðåäøåñòâåííèêà – áåëêà ð43. Âïåðâûå îí
áûë âûäåëåí èç ôèáðîñàðêîìû ìûøåé, èíäó-
öèðóåìîé ìåòèëõîëàíòðåíîì [13, 14]. Îá-
íàðóæåíà ñïîñîáíîñòü EMAP II ïîäàâëÿòü
ìèãðàöèþ ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê, ñòèìó-
ëèðîâàòü èõ àïîïòîç, âëèÿòü íà àêòèâíîñòü
ìîíîöèòîâ, íåéòðîôèëîâ è ìàêðîôàãîâ,
ñïîñîáñòâóÿ âîñïàëèòåëüíûì ïðîöåññàì â
îïóõîëÿõ [14, 15]. Íà ýêñïåðèìåíòàëüíûõ
ìîäåëÿõ ãëèîìû, ñàðêîìû, ðàêà æåëóäêà è
ïîäæåëóäî÷íîé æåëåçû ïîëó÷åíû äîêàçà-
òåëüñòâà ïðîòèâîîïóõîëåâîé àêòèâíîñòè ýòî-
ãî öèòîêèíà. Àâòîðû îáúÿñíÿþò ýòî ïðåæäå
âñåãî àíòèàíãèîãåííûìè ñâîéñòâàìè [15–
17]. Ïðè ðàêå ïðîñòàòû îáíàðóæåí òàêæå ýô-
ôåêò òîðìîæåíèÿ ðåêîìáèíàíòíûì EMAP II
ðîñòà êñåíîãðàôòîâ ÷åëîâåêà, âæèâëåííûõ
ïîä êàïñóëó ïî÷êè ìûøåé, è âûñêàçàíî
ïðåäïîëîæåíèå îòíîñèòåëüíî âîçìîæíîñòè
ñòèìóëÿöèè àïîïòîçà êàê îäíîãî èç âåäó-
ùèõ ìåõàíèçìîâ äåéñòâèÿ óïîìÿíóòîãî ôå-
íîìåíà [18, 19].
Öåëü íàñòîÿùåé ðàáîòû – îïðåäåëèòü
âîçìîæíîñòè âëèÿíèÿ öèòîêèíà EMAP II
íà ýêñïðåññèþ ãåíà ðåïàðàòèâíîãî ýíçèìà
MGMT íà óðîâíå áåëêà â êóëüòóðàõ êëåòîê
÷åëîâåêà.
Ìàòåðèàëû è ìåòîäû. Ïðè ïðîâåäåíèè
ýêñïåðèìåíòàëüíîé ðàáîòû èñïîëüçîâàëè
ñëåäóþùèå êóëüòóðû êëåòîê: À102 – êëå-
òî÷íóþ ëèíèþ, ïîëó÷åííóþ èç ôèáðîáëà-
ñòîâ êîæè íîâîðîæäåííîãî ìàëü÷èêà è ëþ-
áåçíî ïðåäîñòàâëåííóþ â íàøå ðàñïîðÿæå-
íèå ïðîô. ÌàêÊîðìèêîì; ÏÊ-1 – ëèíèþ
ñòðîìàëüíûõ êëåòîê, âûäåëåííóþ íàìè èç
ïóïîâèííîé êðîâè ÷åëîâåêà, è 4BL6 – ëè-
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2011. ¹ 6 55
Èíäóêöèÿ ýêñïðåññèè ãåíà ðåïàðàòèâíîãî ýíçèìà Î6-ìåòèëãóàíèí-ÄÍÊ
íèþ ôèáðîáëàñòîïîäîáíûõ êëåòîê, ïîëó-
÷åííóþ íàìè èç êðîâè âçðîñëîãî äîíîðà. Â
êà÷åñòâå ïîçèòèâíîãî êîíòðîëÿ íà íàëè÷èå
MGMT èñïîëüçîâàëè ëèíèþ êëåòîê Hep-2
(ðàê ãîðòàíè), â êà÷åñòâå ñïåöèôè÷åñêîãî
èíäóêòîðà ýêñïðåññèè ãåíà MGMT – àëêè-
ëèðóþùèé àãåíò íèòðîçîãóàíèäèí.
Êëåòêè êóëüòèâèðîâàëè â ñòàíäàðòíîé
ðîñòîâîé ñðåäå DMEM ñ äîáàâëåíèåì 10 %
ýìáðèîíàëüíîé ñûâîðîòêè êðóïíîãî ðîãà-
òîãî ñêîòà («Sigma», ÑØÀ) è àíòèáèîòèêîâ
(ïåíèöèëëèí è ñòðåïòîìèöèí).
Ðåêîìáèíàíòíûé EMAP II ÷åëîâåêà ïîëó-
÷àëè â áàêòåðèàëüíîé ñèñòåìå Escherichia coli
BL21(DE3)pLysE/ðÅÒ30à-ÅÌÀÐ ²² ïî îïèñàí-
íîìó ðàíåå ìåòîäó [20]. Ôðàãìåíò ÄÍÊ, êî-
äèðóþùèé çðåëóþ ôîðìó EMAP II ÷åëîâåêà
(D146-K312), êëîíèðîâàëè â ïëàçìèäå pET30a
(«Novagen», Ãåðìàíèÿ), ïðèñóòñòâèå ñîîòâåò-
ñòâóþùåé âñòàâêè ÄÍÊ ïîäòâåðæäåíî ñåêâå-
íèðîâàíèåì íóêëåîòèäíîé ïîñëåäîâàòåëüíî-
ñòè. Ýêñïðåññèþ áåëêà ïðîâîäèëè â êëåòêàõ
E. coli BL21(DE3). Ïîëíîðàçìåðíûé ðåêîì-
áèíàíòíûé áåëîê EMAP IIfl, ñèíòåçèðîâàí-
íûé â áàêòåðèàëüíîé ñèñòåìå (212 àìèíîêèñ-
ëîòíûõ îñòàòêîâ, èç êîòîðûõ ïåðâûå 45 êîäèðó-
þòñÿ âåêòîðîì), î÷èùàëè õðîìàòîãðàôèåé íà
Ni-NTA àãàðîçå («Qiagen», Ãåðìàíèÿ). Çðåëûé
ðåêîìáèíàíòíûé áåëîê EMAP IIe ÷åëîâåêà (ñ
îòùåïëåííîé êîíñòàíòíîé ÷àñòüþ, 169 àìè-
íîêèñëîòíûõ îñòàòêîâ) ïîëó÷àëè ïîñëå ñïå-
öèôè÷åñêîãî ðàñùåïëåíèÿ ïîëíîðàçìåðíîãî
EMAP IIfl ýíòåðîêèíàçîé ñ ïîñëåäóþùåé õðî-
ìàòîãðàôè÷åñêîé î÷èñòêîé è èäåíòèôèöè-
ðîâàëè ïî ðåçóëüòàòàì ýëåêòðîôîðåòè÷åñêîãî
àíàëèçà [18]. ×èñòîòà áåëêà ñîñòàâèëà îêîëî
98 %, èçîýëåêòðè÷åñêàÿ òî÷êà – pI = 6.36,
êîýôôèöèåíò ïîãëîùåíèÿ – 8730 cì1ìîëü–1
(0,471 ìë/ìã) ïðè äëèíå âîëíû 280 íì.
Äëÿ îïðåäåëåíèÿ âëèÿíèÿ EMAP II íà
ýêñïðåññèþ MGMT áûëà ðàçðàáîòàíà ñëå-
äóþùàÿ ñõåìà îáðàáîòêè êëåòîê. Ïîñêîëüêó
èìåþòñÿ äàííûå îá èíäóêöèè öèòîêèíîì
EMAP II àïîïòîçà [18, 19, 21] è ãåííûõ ìó-
òàöèé [22], ìîæíî ïðåäïîëàãàòü, ÷òî âîçäåé-
ñòâèå íà êëåòêè ýòèì öèòîêèíîì ïðèâåäåò ê
ïîÿâëåíèþ ïåðâè÷íûõ ïîâðåæäåíèé ÄÍÊ,
êîòîðûå ÷åðåç íåêîòîðîå âðåìÿ ðåàëèçóþòñÿ â
ãåííûå ìóòàöèè. Âìåñòå ñ òåì ïåðâè÷íûå ïî-
âðåæäåíèÿ ÄÍÊ ÿâëÿþòñÿ îäíèì èç èíäóê-
òîðîâ MGMT. Ýòî ïîçâîëèëî íàì ïðåäïîëî-
æèòü, ÷òî ïîòåíöèàëüíîå âëèÿíèå EMAP II
íà ýêñïðåññèþ MGMT òàêæå ìîæåò áûòü îïî-
ñðåäîâàíî èíäóêöèåé ïåðâè÷íûõ ïîâðåæ-
äåíèé ÄÍÊ.  ýòîì ñëó÷àå ïðîÿâëåíèå ýô-
ôåêòà áóäåò îòñðî÷åíî âî âðåìåíè. Ïîýòîìó
äèçàéí ýêñïåðèìåíòà îñíîâûâàëñÿ íà ñòàí-
äàðòíîé ñõåìå, èñïîëüçóåìîé äëÿ ýêñïåðè-
ìåíòîâ ïî èçó÷åíèþ ìóòàãåíåçà è ïðåäóñìà-
òðèâàþùåé ïîñòèíêóáàöèþ êëåòîê (âðåìÿ
ýêñïðåññèè) â ðîñòîâîé ñðåäå ïîñëå çàâåð-
øåíèÿ îáðàáîòêè êëåòîê èññëåäóåìûì âå-
ùåñòâîì. Ïîñòèíêóáàöèÿ îñóùåñòâëÿåòñÿ â
ñòàíäàðòíîé ðîñòîâîé ñðåäå, ïîñêîëüêó äëè-
òåëüíîå ïðåáûâàíèå â áåññûâîðîòî÷íîé ñðåäå
ÿâëÿåòñÿ ñòðåññîðíûì ôàêòîðîì è íàðóøàåò
íîðìàëüíûå ôèçèîëîãè÷åñêèå ïðîöåññû â
êëåòêå.
Òàêèì îáðàçîì, â õîäå íàñòîÿùåãî ýêñïåðè-
ìåíòà êëåòî÷íûé ìîíîñëîé îòìûâàëè îò ðî-
ñòîâîé ñðåäû ðàñòâîðîì PBS è èíêóáèðîâàëè
íà ïðîòÿæåíèè 4–8 ÷ â áåññûâîðîòî÷íîé ñðå-
äå DMEM ñ äîáàâëåíèåì öèòîêèíà EMAP II.
 êà÷åñòâå êîíòðîëÿ âëèÿíèÿ óñëîâèé îáðà-
áîòêè èñïîëüçîâàëè êëåòî÷íóþ êóëüòóðó, ïîä-
âåðãàâøóþñÿ òåì æå âîçäåéñòâèÿì, íî áåç äî-
áàâëåíèÿ ÅÌÀÐ II. Ïîñëå îáðàáîòêè áåññûâî-
ðîòî÷íóþ ñðåäó óäàëÿëè, ïîâòîðíî ïðîìûâàëè
êëåòêè ðàñòâîðîì PBS è äîáàâëÿëè ê êëåòî÷-
íûì êóëüòóðàì ñòàíäàðòíóþ ðîñòîâóþ ñðåäó,
ñîäåðæàùóþ 10 % ñûâîðîòêè. Ïîñòèíêóáà-
öèþ êëåòîê â ñòàíäàðòíûõ óñëîâèÿõ êóëüòèâè-
ðîâàíèÿ îñóùåñòâëÿëè íà ïðîòÿæåíèè 24 ÷,
ïîñëå ÷åãî êëåòêè ñíèìàëè ñ ñóáñòðàòà ñ ïî-
ìîùüþ ðàñòâîðà âåðñåíà ñ äîáàâëåíèåì òðèï-
ñèíà, ïðîìûâàëè, öåíòðèôóãèðîâàëè è õðà-
íèëè ïðè –20 Ñ.
Áåëêîâûé ýêñòðàêò ïîëó÷àëè ñîãëàñíî îïè-
ñàííîìó ðàíåå ìåòîäó [23]. SDS-ýëåêòðîôîðåç
áåëêîâ ïðîâîäèëè â 12%-íîì ïîëèàêðèë-
àìèäíîì ãåëå ïî ìåòîäó Ëýììëè [24]. Äëÿ
ðàâíîìåðíîãî íàíåñåíèÿ áåëêà â êàæäîé ïðî-
áå îïðåäåëÿëè êîíöåíòðàöèþ îáùåãî áåëêà
ïî ìåòîäó Áðåäôîðä [25] è â êàæäóþ ëóíêó
íàíîñèëè ðàâíîå åãî êîëè÷åñòâî.
Ïðèìåíÿëè ñëåäóþùèå ìåòîäû êîíòðîëÿ
ðàâíîìåðíîñòè íàíåñåíèÿ: Âåñòåðí-áëîò ãè-
áðèäèçàöèþ ïî -àêòèíó, Âåñòåðí-áëîò ãèáðè-
äèçàöèþ ïî GAPDH è äåíñèòîìåòðè÷åñêèé
êîíòðîëü ñóììàðíîãî êîëè÷åñòâà áåëêà, ïåðå-
56 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2011. ¹ 6
Â.Â. Ëûëî, Ë.Ë. Ìàöåâè÷, Å.Â. Êîöàðåíêî è äð.
íåñåííîãî íà ìåìáðàíó. Ïðè ýòîì -àêòèí,
êàê âûÿâèëîñü, íå âñåãäà îòîáðàæàë äåé-
ñòâèòåëüíîå êîëè÷åñòâî áåëêà â ïðîáå, ïî-
ýòîìó â äàëüíåéøåì èñïîëüçîâàëñÿ ëèáî
êîíòðîëü ïî GAPDH, ëèáî äåíñèòîìåòðèÿ
îêðàøåííîé ãèáðèäèçàöèîííîé ìåìáðàíû,
ïîñêîëüêó, êàê áûëî ïîêàçàíî â ðàáîòå [26],
êîíòðîëü ïî ñòðóêòóðíûì áåëêàì, íåñìîòðÿ
íà øèðîêîå ðàñïðîñòðàíåíèå ýòîãî ïîä-
õîäà, íå âñåãäà äàåò àäåêâàòíûå ðåçóëüòàòû.
Èäåíòèôèêàöèþ MGMT â êëåòî÷íîì
ýêñòðàêòå ïðîâîäèëè ñ ïîìîùüþ Âåñòåðí-
áëîò àíàëèçà. Èñïîëüçîâàëè ìîíîêëîíàëü-
íûå àíòèòåëà ïðîòèâ MGMT ïðîèçâîäñòâà
«Novus Biologicals, Littleton, Co» (ÑØÀ). Â
êà÷åñòâå âòîðè÷íûõ èñïîëüçîâàëè âèäîñïå-
öèôè÷åñêèå êîíúþãèðîâàííûå ñ ïåðîêñè-
äàçîé õðåíà àíòèòåëà ïðîèçâîäñòâà «Jackson
ImmunoResearch» (ÑØÀ). Ïðîöåäóðû ïî
èäåíòèôèêàöèè MGMT â íàøèõ ïðîáàõ
îñóùåñòâëÿëè ñîãëàñíî ìåòîäè÷åñêèì óêà-
çàíèÿì ôèðìû – èçãîòîâèòåëÿ ìîíîêëî-
íàëüíûõ àíòèòåë [27].
Âëèÿíèå EMAP II íà ïðîëèôåðàöèþ è
âûæèâàåìîñòü êëåòîê ÷åëîâåêà èññëåäî-
âàëè ñ èñïîëüçîâàíèåì ðåàêöèè òðàíñôîð-
ìàöèè ìåòàáîëè÷åñêè àêòèâíûìè êëåòêàìè
3-(4,5-äèìåòèëòèàçîë-2-èë)-2,5-äèôåíèë-
òåòðàçîëèÿ áðîìèäà (ÌÒÒ) â ôîðìàçàí [28].
Ïðè ýòîì êëåòêè êóëüòèâèðîâàëè â ïðèñóò-
ñòâèè EMAP II â òå÷åíèå 72 ÷, ïîñëå ÷åãî
ïðîèçâîäèëè ñìåíó ñðåäû è îêðàøèâàíèå.
Íà îñíîâàíèè èíòåíñèâíîñòè ïîëó÷åííîãî
îêðàøèâàíèÿ îöåíèâàëè ïðèìåðíîå êîëè-
÷åñòâî æèâûõ, àêòèâíî ìåòàáîëèçèðóþùèõ
êëåòîê.
Ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèé è èõ îáñóæäåíèå.
Èññëåäîâàíèå âîçìîæíûõ ìîäóëèðóþùèõ
ñâîéñòâ EMAP II îòíîñèòåëüíî ýêñïðåññèè
MGMT áûëî ïðåäâàðåíî èçó÷åíèåì âëèÿíèÿ
ýòîãî öèòîêèíà íà ðîñò êëåòî÷íîé êóëüòóðû
ñ öåëüþ âûÿâëåíèÿ åãî ïîòåíöèàëüíîé öè-
òîòîêñè÷íîñòè èëè èíãèáèðóþùåãî äåéñòâèÿ
íà ïðîëèôåðàöèþ. Íà ðèñ. 1 ïðåäñòàâëåíû
ðåçóëüòàòû MTT-òåñòà äëÿ äâóõ èññëåäóåìûõ
ëèíèé êëåòîê – ÏÊ-1 è 4BL6.
Êàê ñâèäåòåëüñòâóþò äàííûå, ïðåäñòàâ-
ëåííûå íà äèàãðàììå, öèòîêèí EMAP II
ïðè âûñîêèõ êîíöåíòðàöèÿõ âûçûâàåò ñíè-
æåíèå êîëè÷åñòâà æèâûõ êëåòîê â ìîíî-
ñëîå, ÷òî ïîçâîëÿåò ïðåäïîëîæèòü íàëè÷èå ó
ýòîãî áåëêà ëèáî öèòîòîêñè÷åñêèõ ñâîéñòâ,
ëèáî ñïîñîáíîñòè èíãèáèðîâàòü êëåòî÷íóþ
ïðîëèôåðàöèþ. Êàê óæå óêàçûâàëîñü, èç-
âåñòíà ñïîñîáíîñòü öèòîêèíà EMAP II èí-
äóöèðîâàòü àïîïòîç [18, 19, 21] è ãåííûå
ìóòàöèè [22]. Äëÿ óòî÷íåíèÿ ïðèðîäû ïî-
ëó÷åííîãî ýôôåêòà íåîáõîäèìû äàëüíåé-
øèå èññëåäîâàíèÿ.
Äëÿ ëèíèè ÏÊ-1 (ðèñ. 1, à) íå áûëî âû-
ÿâëåíî çíà÷èòåëüíîãî ñíèæåíèÿ êîëè÷å-
ñòâà êëåòîê ïîä âëèÿíèåì EMAP II â äèà-
ïàçîíå êîíöåíòðàöèé îò 0,04 äî 10 ìêã/ìë
âêëþ÷èòåëüíî, è ëèøü îáðàáîòêà êëåòîê öè-
òîêèíîì â êîíöåíòðàöèè 40 ìêã/ìë ïðèâî-
äèëà ê çàìåòíîìó ñíèæåíèþ ÷èñëà êëåòîê
(60 % ïî îòíîøåíèþ ê êîíòðîëþ). Ëèíèÿ
4BL6 (ðèñ. 1, á) îêàçàëàñü áîëåå ÷óâñòâè-
òåëüíîé ê äåéñòâèþ öèòîêèíà, òàê êàê óæå
ïðè êîíöåíòðàöèè EMAP II 0,8 ìêã/ìë
íàáëþäàëîñü âûðàæåííîå ñíèæåíèå ÷èñëà
Ðèñ. 1. Âëèÿíèå EMAP II íà ïðîëèôåðàöèþ è âûæè-
âàåìîñòü êëåòîê ÷åëîâåêà ÏÊ-1 (à) è 4BL6 (á): ïî âåð-
òèêàëè – êîëè÷åñòâî êëåòîê îòíîñèòåëüíî êîíòðî-
ëÿ, %; ïî ãîðèçîíòàëè – êîíöåíòðàöèÿ, ìêã/ìë
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2011. ¹ 6 57
Èíäóêöèÿ ýêñïðåññèè ãåíà ðåïàðàòèâíîãî ýíçèìà Î6-ìåòèëãóàíèí-ÄÍÊ
êëåòîê â ìîíîñëîå. Ïðè êîíöåíòðàöèè
öèòîêèíà 10 ìêã/ìë íàáëþäàëîñü ñíèæå-
íèå ÷èñëà èññëåäóåìûõ êëåòîê äî 60 % ïî
îòíîøåíèþ ê íåîáðàáîòàííîìó êîíòðîëþ.
Îáðàáîòêà êëåòîê EMAP II â êîíöåíòðà-
öèÿõ 0,04–0,2 ìêã/ìë íå ïðèâîäèëà ê ñòà-
òèñòè÷åñêè äîñòîâåðíîìó ñíèæåíèþ èññëå-
äóåìîãî ïîêàçàòåëÿ.
 äàëüíåéøèõ ýêñïåðèìåíòàõ íàìè áûëî
èçó÷åíî âëèÿíèå öèòîêèíà EMAP II íà ýêñ-
ïðåññèþ áåëêà MGMT â èññëåäóåìûõ êëå-
òî÷íûõ ëèíèÿõ.
Íà ðèñ. 2 ïðåäñòàâëåíû ðåçóëüòàòû Âåñ-
òåðí-áëîò àíàëèçà áåëêîâûõ ýêñòðàêòîâ,
êîòîðûå ïîëó÷åíû èç êëåòîê ÷åëîâåêà ëè-
íèé 4BL6, ÏÊ-1, À102, îáðàáîòàííûõ öè-
òîêèíîì EMAP II â ðàçíûõ êîíöåíòðàöèÿõ.
 êà÷åñòâå ïîçèòèâíîãî êîíòðîëÿ íà íàëè-
÷èå áåëêà MGMT èñïîëüçîâàëè ëèíèþ
Hep-2 (êàðöèíîìà ãîðòàíè ÷åëîâåêà). Ýòà
ëèíèÿ õàðàêòåðèçóåòñÿ âûñîêèì óðîâíåì
ýêñïðåññèè ðåïàðàòèâíîãî ýíçèìà MGMT,
êîòîðûé ïðèñóòñòâóåò â íåé êàê â òÿæåëîé
(50 êÄà), òàê è â îáû÷íîé (23 êÄà) ôîðìàõ.
 êà÷åñòâå ñïåöèôè÷åñêîãî èíäóêòîðà ýêñ-
ïðåññèè MGMT èñïîëüçîâàëè àëêèëèðóþ-
ùèé àãåíò N-ìåòèë-N'-íèòðî-N-íèòðîçî-
ãóàíèäèí (ÌÍÍÃ), êîòîðûé, êàê ïîêàçàíî
íàìè ðàíåå, âûçûâàë ñèëüíûé ìóòàãåííûé
ýôôåêò â êëåòêàõ ÷åëîâåêà in vitro [29].
Êàê ñâèäåòåëüñòâóþò äàííûå, ïðåäñòàâ-
ëåííûå íà ðèñ. 2, öèòîêèí EMAP II âûçû-
âàë ïîâûøåíèå óðîâíÿ ýêñïðåññèè MGMT
â êëåòêàõ ÷åëîâåêà âñåõ èññëåäîâàííûõ íà-
ìè ëèíèé.
 èíòàêòíûõ êëåòêàõ ëèíèè 4BL6 íà 138-ì
è 140-ì ïàññàæàõ, êîãäà ýêñïðåññèÿ MGMT
áûëà âûðàæåíà î÷åíü ñëàáî èëè ñîâñåì íå
âûÿâëÿëàñü, îáðàáîòêà êëåòîê öèòîêèíîì
EMAP II ïðèâîäèëà ê ïîÿâëåíèþ «òÿæå-
ëîé» ôîðìû MGMT ñ ìîëåêóëÿðíîé ìàñ-
ñîé 50 êÄà (ðèñ. 2, à, á). Ïðè ýòîì ýôôåêò
ïîâûøåíèÿ óðîâíÿ ýêñïðåññèè MGMT ïîä
âëèÿíèåì îáðàáîòêè êëåòîê öèòîêèíîì
EMAPII â ìàêñèìàëüíîé èç èññëåäóåìûõ
êîíöåíòðàöèé (20 ìêã/ìë) âïîëíå ñîïîñ-
òàâèì ñ èíäóêöèåé ýòîãî ýíçèìà ïîä äåéñò-
âèåì àëêèëèðóþùåãî àãåíòà ÌÍÍÃ (ðèñ. 2, á).
Ïîâûøåíèå óðîâíÿ ýêñïðåññèè MGMT
ïîä âëèÿíèåì èññëåäóåìîãî öèòîêèíà áûëî
âûÿâëåíî è â êëåòêàõ ëèíèè ÏÊ-1 (ðèñ. 2,
â). Äëÿ íåîáðàáîòàííûõ êëåòîê ýòîé ëèíèè
õàðàêòåðíî íàëè÷èå MGMT â ìîëåêóëÿð-
íîé ôîðìå 50 êÄà. Ïîñëå îáðàáîòêè êëåòîê
Ðèñ. 2. Äàííûå Âåñòåðí-áëîò àíàëèçà ïî âëèÿíèþ
öèòîêèíà ÅÌÀÐ II íà ýêñïðåññèþ MGMT â ðàçëè÷-
íûõ ëèíèÿõ êëåòîê ÷åëîâåêà in vitro (íà ãèñòîãðàììàõ
ïðåäñòàâëåíû ðåçóëüòàòû äåíñèòîìåòðèè ñèãíàëîâ):
à – ëèíèÿ 4BL6, 138-é ïàññàæ; á – ëèíèÿ 4BL6, 140-é
ïàññàæ; â – ëèíèÿ ÏÊ-1; ã – ëèíèÿ À102; ïî âåðòè-
êàëè – óðîâåíü ýêñïðåññèè MGMT, óñë. åä.
MGMT â ìîëåêóëÿðíîé ôîðìå 23 êÄà
MGMT â ìîëåêóëÿðíîé ôîðìå 50 êÄà
58 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2011. ¹ 6
Â.Â. Ëûëî, Ë.Ë. Ìàöåâè÷, Å.Â. Êîöàðåíêî è äð.
EMAP II ðåïàðàòèâíûé ýíçèì òàêæå âû-
ÿâëÿëñÿ â ìîëåêóëÿðíîé ôîðìå 50 êÄà, íî
êîëè÷åñòâî áåëêà, äåòåêòèðóåìîãî ñ ïîìî-
ùüþ Âåñòåðí-áëîò àíàëèçà, ïðè ýòîì ñóùå-
ñòâåííî âîçðàñòàëî.
Äëÿ êëåòî÷íîé ëèíèè À102 õàðàêòåðíî
ïðèñóòñòâèå MGMT â èíòàêòíûõ êëåòêàõ
êàê â ôîðìå ñ ìîëåêóëÿðíîé ìàññîé 50 êÄà,
òàê è 24 êÄà (ðèñ. 2, ã). Îáðàáîòêà êëåòîê
EMAP II ïðèâîäèëà ê çíà÷èòåëüíîìó âîç-
ðàñòàíèþ óðîâíÿ MGMT, îäíàêî â îáðàáî-
òàííûõ êëåòêàõ, â îòëè÷èå îò êîíòðîëüíûõ,
ðåïàðàòèâíûé ýíçèì áûë âûÿâëåí òîëüêî â
ìîëåêóëÿðíîé ôîðìå 50 êÄà.
Åñëè ñðàâíèòü äàííûå ïî èíäóêöèè ýêñ-
ïðåññèè MGMT ïîä âëèÿíèåì öèòîêèíà
EMAP II è ðåçóëüòàòû èññëåäîâàíèÿ åãî
âëèÿíèÿ íà ïðîëèôåðàöèþ è âûæèâàåìîñòü
êëåòîê, òî ìîæíî âèäåòü, ÷òî âîçðàñòàíèå
ýêñïðåññèè MGMT ïîä âëèÿíèåì EMAP II
â èññëåäóåìîì äèàïàçîíå êîíöåíòðàöèé íå
íàõîäèòñÿ â î÷åâèäíîé ñâÿçè ñ èíäóöèðîâàí-
íûì ñíèæåíèåì êîëè÷åñòâà êëåòîê. Âîçðàñ-
òàíèå ýêñïðåññèè MGMT íàáëþäàëîñü êàê
ïîä âëèÿíèåì öèòîêèíà â êîíöåíòðàöèÿõ, íå
ïðîÿâëÿâøèõ äîñòîâåðíîãî öèòîòîêñè÷åñêîãî
èëè öèòîñòàòè÷åñêîãî ýôôåêòîâ (0,2 ìêã/ìë
äëÿ êëåòî÷íîé ëèíèè 4BL6 è 10 ìêã/ìë äëÿ
êëåòî÷íîé ëèíèè ÏÊ-1), òàê è ïðè åãî äåé-
ñòâèè â êîíöåíòðàöèÿõ, ïðèâîäèâøèõ ê ñíè-
æåíèþ èíòåíñèâíîñòè îêðàøèâàíèÿ êëåòî÷-
íîãî ìîíîñëîÿ â ÌÒÒ-òåñòå.
Òàêèì îáðàçîì, áûëî ïîäòâåðæäåíî íàøå
ïðåäïîëîæåíèå î ñïîñîáíîñòè åùå îäíîãî
öèòîêèíà, EMAP II, îêàçûâàòü âëèÿíèå íà
ýêñïðåññèþ MGMT íà óðîâíå áåëêà; ïî ñó-
ùåñòâó â èññëåäîâàííîì äèàïàçîíå êîíöåí-
òðàöèé ýòîò öèòîêèí âûçûâàåò èíäóêöèþ
èññëåäóåìîãî ðåïàðàòèâíîãî ýíçèìà â «òÿ-
æåëîé ôîðìå» 50 êÄà. Äëÿ áîëåå äåòàëüíîãî
èçó÷åíèÿ êîíöåíòðàöèîííîé çàâèñèìîñòè
è ïðèðîäû áåëêà ñ ìîëåêóëÿðíîé ìàññîé
50 êÄà ïëàíèðóåòñÿ ïðîâåäåíèå äàëüíåéøèõ
ýêñïåðèìåíòîâ.
Îñòàåòñÿ, îäíàêî, îòêðûòûì âîïðîñ, ÿâëÿ-
åòñÿ ëè îïîñðåäîâàííîå äåéñòâèå åäèíñòâåí-
íûì ìåõàíèçìîì âîçäåéñòâèÿ EMAP II íà
ýêñïðåññèþ MGMT è êàê ñîîòíîñÿòñÿ ìåæäó
ñîáîé ïðåäïîëàãàåìûå íåïîñðåäñòâåííûé è
îïîñðåäîâàííûé ìåõàíèçìû òàêîãî âëèÿíèÿ.
Äëÿ âûÿñíåíèÿ ýòîãî âîïðîñà íà÷àòà ñåðèÿ
ýêñïåðèìåíòîâ, ïðåäóñìàòðèâàþùàÿ èçó÷åíèå
âëèÿíèÿ EMAP II íà ýêñïðåññèþ MGMT ïðè
ðàçëè÷íûõ ñðîêàõ îáðàáîòêè è ïîñòèíêóáàöèè.
Âûâîäû. Ïîêàçàíî íàëè÷èå ïðÿìîé ñâÿ-
çè ìåæäó ïðèñóòñòâèåì öèòîêèíà EMAP II â
áåññûâîðîòî÷íîé êóëüòóðàëüíîé ñðåäå è
âîçðàñòàíèåì ýêñïðåññèè ðåïàðàòèâíîãî ýí-
çèìà MGMT â êëåòêàõ ÷åëîâåêà. Îäíàêî
ìåõàíèçìû, ëåæàùèå â îñíîâå ÿâëåíèÿ
èíäóêöèè MGMT ïîä âëèÿíèåì öèòîêèíà
EMAP II, ïîêà íåÿñíû. Íå èñêëþ÷åíî,
÷òî âûÿâëåííûé íàìè ýôôåêò îáóñëîâ-
ëåí îòâåòîì ðåïàðàòèâíîé ñèñòåìû íà ïî-
âðåæäåíèÿ ÄÍÊ, âûçâàííûå èññëåäóåìûì
öèòîêèíîì, ïîñêîëüêó èçâåñòíà åãî ñïî-
ñîáíîñòü èíäóöèðîâàòü àïîïòîç è ãåííûå
ìóòàöèè. Ïðåäñòàâëÿåòñÿ öåëåñîîáðàçíûì
èçó÷åíèå ìîëåêóëÿðíûõ ìåõàíèçìîâ äåé-
ñòâèÿ EMAP II êàê ïîòåíöèàëüíîãî èí-
äóêòîðà ýêñïðåññèè ðåïàðàòèâíîãî ýíçèìà
MGMT â êëåòêàõ ÷åëîâåêà, ïîñêîëüêó ýòî
îòêðûâàåò íîâûå ïóòè âîññòàíîâëåíèÿ ðå-
ïàðàòèâíîé àêòèâíîñòè MGMT ïîñëå õè-
ìèîòåðàïèè ñ èñïîëüçîâàíèåì àëêèëèðó-
þùèõ ñîåäèíåíèé.
V.V. Lylo, L.L. Macewicz,
K.V. Kotsarenko, L.A. Babenko, A.I. Kornelyuk,
E.M. Suhorada, L.L. Lukash
INDUCTION OF REPAIR ENZYME
O6-METHYLGUANINE-DNA
METHYLTRANSFERASE GENE EXPRESSION
UNDER THE INFLUENCE OF CYTOKINE EMAP II
IN HUMAN CELLS IN VITRO
The aim of our study was to investigate the effect of
recombinant human cytokine EMAP II (endothelial
monocyte-activating polypeptide II) on the expression of
MGMT gene, encoding repair enzyme O6-methylguanine-
DNA methyltransferase (MGMT) in human cell cultures.
The influence of EMAP II on cell proliferation was per-
formed using routine MTT assay. Identification of MGMT
in cell extracts was performed using Western blot analysis.
We used cell lines: A102 (fibroblasts), CB-1 (umbilical cord
blood stromal cells), 4BL6 (cells derived from peripheral
blood). It was shown that cytokine EMAP II caused in-
duction of MGMT expression in studied human cell lines.
There was a decrease in cell number at high concentrations
of this cytokine. It was found that the presence of cytokine
EMAP II in serum-free growth medium leads to increasing
of repair enzyme MGMT expression level in human cells
in vitro.
ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2011. ¹ 6 59
Èíäóêöèÿ ýêñïðåññèè ãåíà ðåïàðàòèâíîãî ýíçèìà Î6-ìåòèëãóàíèí-ÄÍÊ
Â.Â. Ëèëî, Ë.Ë. Ìàöåâè÷,
Ê.Â. Êîöàðåíêî, Ë.À. Áàáåíêî, Î.². Êîðíåëþê,
Î.Ì. Ñóõîðàäà, Ë.Ë. Ëóêàø
²ÍÄÓÊÖ²ß ÅÊÑÏÐÅѲ¯ ÃÅÍÀ ÐÅÏÀÐÀÒÈÂÍÎÃÎ
ÅÍÇÈÌÓ Î6-ÌÅÒÈËÃÓÀͲÍ-ÄÍÊ
ÌÅÒÈËÒÐÀÍÑÔÅÐÀÇÈ Ï²Ä ÂÏËÈÂÎÌ
ÖÈÒÎʲÍÓ ÅMAP II  Ê˲ÒÈÍÀÕ ËÞÄÈÍÈ
IN VITRO
Ìåòà ðîáîòè – âèçíà÷èòè âïëèâ ðåêîìá³íàíòíîãî
öèòîê³íó EMAP II (åíäîòåë³àëüíèé òà ìîíîöèòàêòè-
âóþ÷èé ïîë³ïåïòèä II) íà ð³âåíü åêñïðåñ³¿ ãåíà MGMT,
ùî êîäóº ðåïàðàòèâíèé åíçèì Î6-ìåòèëãóàí³í-ÄÍÊ
ìåòèëòðàíñôåðàçó (MGMT), â êóëüòóðàõ êë³òèí ëþ-
äèíè. Äîñë³äæåííÿ âïëèâó EMAP II íà âèæèâàííÿ
³ ïðîë³ôåðàö³þ êë³òèí ïðîâîäèëè ç âèêîðèñòàííÿì
ñòàíäàðòíîãî ÌÒÒ-òåñòó. Á³ëîê MGMT ó êë³òèííîìó
åêñòðàêò³ ³äåíòèô³êóâàëè çà äîïîìîãîþ Âåñòåðí-áëîò
àíàë³çó. Âèêîðèñòîâóâàëèñü êë³òèíí³ ë³í³¿: À102
(ô³áðîáëàñòè), ÏÊ-1 (ñòðîìàëüí³ êë³òèíè ïóïîâèí-
íî¿ êðîâ³) ³ 4BL6 (êë³òèíè, îòðèìàí³ ç ïåðèôåð³éíî¿
êðîâ³).  ñå𳿠åêñïåðèìåíò³â ïîêàçàíî, ùî öèòî-
ê³í EMAP II ñïðè÷èíÿº ³íäóêö³þ åêñïðåñ³¿ MGMT
â êë³òèíàõ ëþäèíè äîñë³äæóâàíèõ íàìè ë³í³é. Ïðè
âèñîêèõ êîíöåíòðàö³ÿõ öüîãî öèòîê³íó ñïîñòåð³ãà-
ëîñü çíèæåííÿ ê³ëüêîñò³ êë³òèí. Âñòàíîâëåíî, ùî
ïðèñóòí³ñòü öèòîê³íó EMAP II â áåçñèðîâàòêîâîìó
êóëüòóðàëüíîìó ñåðåäîâèù³ ïðèçâîäèòü äî çðîñòàí-
íÿ ð³âíÿ åêñïðåñ³¿ ðåïàðàòèâíîãî åíçèìó MGMT â
êë³òèíàõ ëþäèíè in vitro.
ÑÏÈÑÎÊ ËÈÒÅÐÀÒÓÐÛ
1. Mitra S. MGMT: A personal perspective // DNA
Rep. – 2007. – 6, ¹ 8. – P. 1064–1070.
2. Pegg A. E. Repair of O6-alkylguanine by alkyltransfera-
ses // Mutat. Res. – 2000. – 462, ¹ 2/3. – P. 83–
100.
3. Lukash L.L., Man'ko V.G., Lylo V.V. Role of
O-alkylguanine-DNA alkyltransferase in repairing
lesions, induced by alkylating compounds // Bio-
polymers and Cell. – 2001. – 17, ¹ 4. – P. 265–277.
4. Kaina B., Christmann M., Naumann S., Roos W.P.
MGMT: Key node in the battle against geno-
toxicity, carcinogenicity and apoptosis induced by
alkylating agents // DNA Rep. – 2007. – 6, ¹ 8. –
P. 1079–1099.
5. Kyrtopoulos S.A. O6-alkylguanine-DNA alkyltransfera-
se: influence of susceptibility to the genetic effects of
alkylating agents // Toxic. Lett. – 1998. – 102/103. –
P. 53–57.
6. Lylo V.V. Revealing the modified form of repair enzyme
O6-alkylguanine-DNA alkyltransferase // Actual prob-
lems of obstetrics and gynecology, clinical immuno-
logy and medical genetics. Collected Works. Kyiv-
Lugansk, 2010. – 19. – P. 299–305.
7. Lylo V.V., Piven’ O.O., Serebryakova K.V., Mace-
wicz L.L., Lukash L.L. The influence of lectins on
some repair processes in mammalian cells in vitro //
Ukr. Biochem. J. – 2008. – 80, ¹ 6. – P. 60–65.
8. Natsume A., Ishii D., Wakabayashi T., Tsuno T., Hata-
no H., Mizuno M., Yoshida J. IFN- Down-Regulates
the Expression of DNA Repair Gene MGMT and
Sensitizes Resistant Glioma Cells to Temozolomide //
Cancer Res. – 2005. – 65, ¹ 17. – P. 7573–7579.
9. Rosati S.F., Williams R.F., Nunnally L.C., McGee M.C.,
Sims T.L., Tracey L., Zhou J., Fan M., Ng C.Y., Nathwa-
ni A.C., Stewart C.F., Pfeffer L.M., Davidoff A.M. IFN-
sensitizes neuroblastoma to the antitumor activity of
temozolomide by modulating O6-methylguanine DNA
methyltransferase expression // Mol. Cancer Ther. –
2008. – 7, ¹ 12. – P. 3852–3858.
10. Zheng M., Bocangel D., Ramesh R., Ekmekcioglu S.,
Poindexter N., Grimm E.A., Chada S. Interleukin-24
overcomes temozolomide resistance and enhances cell
death by down-regulation of O6-methylguanine-DNA
methyltransferase in human melanoma cells // Mol.
Cancer Ther. – 2008. – 7, ¹ 12. – P. 3842–3851.
11. Cardozo A.K., Kruhoffer M., Leeman R., Orntoft T.,
Eizirik D.L. Identification of novel cytokine-induced
genes in pancreatic -cells by high-density oligo-
nucleotide arrays // Diabetes. – 2001. – 50, ¹ 5. –
P. 909–920.
12. Simbirtsev A.S. Cytokines as a new system, regu-
lating body defense reactions // Cytokin. and
Inflam. – 2002. – 1, ¹ 1. – P. 9–16.
13. Kao J., Ryan J., Brett G., Chen J., Shen H., Fan Y.G.,
Godman G., Familletti P.C., Wang F., Pan Y.C.
Endothelial monocyte-activating polypeptide II.
A novel tumour-derived polypeptide that activates
host-response mechanisms // J. Biol. Chem. –
1992. – 267, ¹ 28. – P. 20239–20247.
14. Ivakhno S.S., Kornelyuk A.I. Cytokine-like activities
of some aminoacyl-tRNA synthetases and auxiliary
p43 cofactor of aminoacylation reaction and their role
in oncogenesis // Exp. Oncol. – 2004. – 26, ¹ 4. –
P. 250–255.
15. Schwarz M.A., Kandel J., Brett J., Li J., Hayward J.,
Schwarz R.E., Chappey O., Wautier J.L., Chabot J.,
Gerfo P.L., Stern D. Endothelial-monocyte activating
polypeptide II. A novel antitumour cytokine that
suppresses primary and metastatic tumour growth and
induces apoptosis in growing endothelial cells // J.
Exp. Med. – 1999. – 190, ¹ 3. – P. 341–354.
16. Schwarz R.E., Schwarz M.A. In vivo therapy of
local tumour progression by targeting vascular
endhothelium with EMAP II // J. Surg. Res. –
2004. – 120, ¹ 1. – P. 64–72.
17. Schwarz R.E., Awasthi N., Konduri S., Cafasso D.,
Schwarz M.A. EMAP II-based antiangiogenic-anti-
endothelial in vivo combination therapy of pancreatic
60 ISSN 0564–3783. Öèòîëîãèÿ è ãåíåòèêà. 2011. ¹ 6
Â.Â. Ëûëî, Ë.Ë. Ìàöåâè÷, Å.Â. Êîöàðåíêî è äð.
cancer // Amer. Surg. Oncol. – 2010. – 17, ¹ 5.–
P. 1442–1452.
18. Reznikov A.G., Chaykovskaya L.V., Polyakova L.I.,
Kornelyuk A.I. Antitumor effect of endothelial mono-
cyte-activating polypeptide-II on human prostate
adenocarcinoma in mouse xenograft model // Exp.
Oncol. – 2007. – 29, ¹ 4. – P. 267–271.
19. Vozianov A.F., Reznikov A.G., Kornelyuk A.I.,
Romanenko A.M., Chaikovskaya L.V., Polyakova L.I.,
Grigorenko V.N. Effects of recombinant protein
ÅÌÀÐ_II on the growth, histological and histo-
chemical features of the heterotransplants of
human prostate cancer // J. Acad. Med. Sci.
Ukraine. – 2008. – 14, ¹ 4. – P. 719–730.
20. Dubrovsky A.L., Brown J.N, Kornelyuk A.I., Mur-
ray J.C., Matsuka G.Kh. Bacterial expression of full-
length and truncated forms of cytokine EMAP-2
and cytokine-like domain of mammalian tyrosyl-
tRNA synthetase // Biopolymers and Ñell. – 2000. –
16, ¹ 3. – P. 229–235.
21. Van Horssen R., Eggermont A. M., ten Hagen T.L.
Endothelial monocyte-activating polypeptide-II
and its functions in (patho)physiological processes //
Cytokine Growth Factor Rev. – 2006. – 17, ¹ 5. –
P. 339–348.
22. Kovalenko O.O., Lukash L.L., Lukash S.I. Induction
of gene mutations by lectins of different origin and
cytokine EMAPII in somatic mammalian cells in
vitro // Biopolymers and Ñell. – 2007. – 23, ¹ 5. –
P. 410–415.
23. Morton E.N., Margison G.P. Increased O6-alkylguanine-
DNA alkyltransferase activity in Chinese hamster V-79
cells following selection with chloroethylating agents //
Carcinogenesis. – 1988. – 9, ¹ 1. – P. 45–49.
24. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during
the assembly of the head of bacteriophage T4 //
Nature. – 1970. – 227, ¹ 5259. – P. 680–685.
25. Bradford M.M. A rapid and sensitive method
for the quantitation of microgram quantities of
protein-dye binding // Anal. Biochem. – 1976. –
72, ¹ 1/2. – P. 248–254.
26. Aldridge G.M., Podrebarac D.M., Greenough W.T.,
Weiler I.J. The use of total protein stains as load-
ing controls: an alternative to high-abundance
single-protein controls in semi-quantitative im-
munoblotting // J. Neurosci. Meth. – 2008. –
172, ¹ 2. – Ð.250–254.
27. http://www.novusbio.com/support/protocols/
protocol-specific-for-mgmt-antibody-nb100-168.
html
28. Twentyman P.R., Luscombe M. A study of some
variables in a tetrazolium dye (MTT) based assay
for cell growth and chemosensitivity // Brit. J.
Cancer. – 1987. – 56, ¹ 3. – P. 279–285.
29. Lukash L.L., Boldt J., Pegg F.E., Dolan M.E., Maher
V.M., McCormick J.J. Effect of O6-alkylguanine-
DNA-alkyltransferase on the frequency and spectrum
of mutations induced by N-methyl-N’-nitro-N-
nitrosoguanidine in the HPRT gene of diploid human
fibroblasts // Mutat. Res. – 1991. – 250, ¹ 1/2. –
P. 397–409.
Ïîñòóïèëà 18.05.10
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-66873 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0564-3783 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T18:34:43Z |
| publishDate | 2011 |
| publisher | Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Лыло, В.В. Мацевич, Л.Л. Коцаренко, Е.В. Бабенко, Л.А. Корнелюк, А.И. Сухорада, Е.М. Лукаш, Л.Л. 2014-07-24T10:17:47Z 2014-07-24T10:17:47Z 2011 Индукция экспрессии гена репаративного энзима О⁶-метилгуанин-ДНК метилтрансферазы под влиянием цитокина EMAP II в клетках человека in vitro / В.В. Лыло, Л.Л. Мацевич, Е.В. Коцаренко, Л.А. Бабенко, А.И. Корнелюк, Е.М. Сухорада, Л.Л. Лукаш // Цитология и генетика. — 2011. — Т. 45, № 6. — С. 53-60. — Бібліогр.: 29 назв. — рос. 0564-3783 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/66873 575.224 Цель работы — определить влияние рекомбинантного цитокина EMAP II (эндотелиальный и моноцитактивирующий полипептид II) на уровень экспрессии гена MGMT, кодирующего репаративный энзим О⁶метилгуанинДНК метилтрансферазу (MGMT), в культурах клеток человека. Исследование влияния EMAP II на пролиферацию клеток проводили с использованием стандартного МТТтеста. Белок MGMT в клеточном экстракте идентифицировали с помощью Вестернблот анализа. Использовались клеточные линии: А102 (фибробласты), ПК1 (стромальные клетки пуповинной крови) и 4BL6 (клетки, полученные из периферической крови). В серии экспериментов показано, что цитокин EMAP II вызывает индукцию экспрессии MGMT в клетках человека исследованных линий. При высоких концентрациях этого цитокина наблюдалось снижение количества клеток. Установлено, что присутствие цитокина EMAP II в бессывороточной культуральной среде приводит к возрастанию уровня экспрессии репаративного энзима MGMT в клетках человека in vitro. Мета роботи – визначити вплив рекомбінантного цитокіну EMAP II (ендотеліальний та моноцитактивуючий поліпептид II) на рівень експресії гена MGMT, що кодує репаративний ензим О⁶-метилгуанін-ДНК метилтрансферазу (MGMT), в культурах клітин людини. Дослідження впливу EMAP II на виживання і проліферацію клітин проводили з використанням стандартного МТТ-тесту. Білок MGMT у клітинному екстракті ідентифікували за допомогою Вестерн-блот аналізу. Використовувались клітинні лінії: А102 (фібробласти), ПК-1 (стромальні клітини пуповинної крові) і 4BL6 (клітини, отримані з периферійної крові). В серії експериментів показано, що цитокін EMAP II спричиняє індукцію експресії MGMT в клітинах людини досліджуваних нами ліній. При високих концентраціях цього цитокіну спостерігалось зниження кількості клітин. Встановлено, що присутність цитокіну EMAP II в безсироватковому культуральному середовищі призводить до зростання рівня експресії репаративного ензиму MGMT в клітинах людини in vitro. The aim of our study was to investigate the effect of recombinant human cytokine EMAP II (endothelial monocyte-activating polypeptide II) on the expression of MGMT gene, encoding repair enzyme O⁶-methylguanineDNA methyltransferase (MGMT) in human cell cultures. The influence of EMAP II on cell proliferation was performed using routine MTT assay. Identification of MGMT in cell extracts was performed using Western blot analysis. We used cell lines: A102 (fibroblasts), CB-1 (umbilical cord blood stromal cells), 4BL6 (cells derived from peripheral blood). It was shown that cytokine EMAP II caused induction of MGMT expression in studied human cell lines. There was a decrease in cell number at high concentrations of this cytokine. It was found that the presence of cytokine EMAP II in serum-free growth medium leads to increasing of repair enzyme MGMT expression level in human cells in vitro. ru Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України Цитология и генетика Оригинальные работы Индукция экспрессии гена репаративного энзима О⁶-метилгуанин-ДНК метилтрансферазы под влиянием цитокина EMAP II в клетках человека in vitro Індукція експресії гена репаративного ензиму О⁶-метилгуанін-ДНК метилтрансферази під впливом цитокіну ЕMAP II в клітинах людини in vitro Induction of repair enzyme O⁶methylguanineDNA methyltransferase gene expression under the influence of cytokine EMAP II in human cells in vitro Article published earlier |
| spellingShingle | Индукция экспрессии гена репаративного энзима О⁶-метилгуанин-ДНК метилтрансферазы под влиянием цитокина EMAP II в клетках человека in vitro Лыло, В.В. Мацевич, Л.Л. Коцаренко, Е.В. Бабенко, Л.А. Корнелюк, А.И. Сухорада, Е.М. Лукаш, Л.Л. Оригинальные работы |
| title | Индукция экспрессии гена репаративного энзима О⁶-метилгуанин-ДНК метилтрансферазы под влиянием цитокина EMAP II в клетках человека in vitro |
| title_alt | Індукція експресії гена репаративного ензиму О⁶-метилгуанін-ДНК метилтрансферази під впливом цитокіну ЕMAP II в клітинах людини in vitro Induction of repair enzyme O⁶methylguanineDNA methyltransferase gene expression under the influence of cytokine EMAP II in human cells in vitro |
| title_full | Индукция экспрессии гена репаративного энзима О⁶-метилгуанин-ДНК метилтрансферазы под влиянием цитокина EMAP II в клетках человека in vitro |
| title_fullStr | Индукция экспрессии гена репаративного энзима О⁶-метилгуанин-ДНК метилтрансферазы под влиянием цитокина EMAP II в клетках человека in vitro |
| title_full_unstemmed | Индукция экспрессии гена репаративного энзима О⁶-метилгуанин-ДНК метилтрансферазы под влиянием цитокина EMAP II в клетках человека in vitro |
| title_short | Индукция экспрессии гена репаративного энзима О⁶-метилгуанин-ДНК метилтрансферазы под влиянием цитокина EMAP II в клетках человека in vitro |
| title_sort | индукция экспрессии гена репаративного энзима о⁶-метилгуанин-днк метилтрансферазы под влиянием цитокина emap ii в клетках человека in vitro |
| topic | Оригинальные работы |
| topic_facet | Оригинальные работы |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/66873 |
| work_keys_str_mv | AT lylovv indukciâékspressiigenareparativnogoénzimao6metilguanindnkmetiltransferazypodvliâniemcitokinaemapiivkletkahčelovekainvitro AT macevičll indukciâékspressiigenareparativnogoénzimao6metilguanindnkmetiltransferazypodvliâniemcitokinaemapiivkletkahčelovekainvitro AT kocarenkoev indukciâékspressiigenareparativnogoénzimao6metilguanindnkmetiltransferazypodvliâniemcitokinaemapiivkletkahčelovekainvitro AT babenkola indukciâékspressiigenareparativnogoénzimao6metilguanindnkmetiltransferazypodvliâniemcitokinaemapiivkletkahčelovekainvitro AT kornelûkai indukciâékspressiigenareparativnogoénzimao6metilguanindnkmetiltransferazypodvliâniemcitokinaemapiivkletkahčelovekainvitro AT suhoradaem indukciâékspressiigenareparativnogoénzimao6metilguanindnkmetiltransferazypodvliâniemcitokinaemapiivkletkahčelovekainvitro AT lukašll indukciâékspressiigenareparativnogoénzimao6metilguanindnkmetiltransferazypodvliâniemcitokinaemapiivkletkahčelovekainvitro AT lylovv índukcíâekspresíígenareparativnogoenzimuo6metilguaníndnkmetiltransferazipídvplivomcitokínuemapiivklítinahlûdiniinvitro AT macevičll índukcíâekspresíígenareparativnogoenzimuo6metilguaníndnkmetiltransferazipídvplivomcitokínuemapiivklítinahlûdiniinvitro AT kocarenkoev índukcíâekspresíígenareparativnogoenzimuo6metilguaníndnkmetiltransferazipídvplivomcitokínuemapiivklítinahlûdiniinvitro AT babenkola índukcíâekspresíígenareparativnogoenzimuo6metilguaníndnkmetiltransferazipídvplivomcitokínuemapiivklítinahlûdiniinvitro AT kornelûkai índukcíâekspresíígenareparativnogoenzimuo6metilguaníndnkmetiltransferazipídvplivomcitokínuemapiivklítinahlûdiniinvitro AT suhoradaem índukcíâekspresíígenareparativnogoenzimuo6metilguaníndnkmetiltransferazipídvplivomcitokínuemapiivklítinahlûdiniinvitro AT lukašll índukcíâekspresíígenareparativnogoenzimuo6metilguaníndnkmetiltransferazipídvplivomcitokínuemapiivklítinahlûdiniinvitro AT lylovv inductionofrepairenzymeo6methylguaninednamethyltransferasegeneexpressionundertheinfluenceofcytokineemapiiinhumancellsinvitro AT macevičll inductionofrepairenzymeo6methylguaninednamethyltransferasegeneexpressionundertheinfluenceofcytokineemapiiinhumancellsinvitro AT kocarenkoev inductionofrepairenzymeo6methylguaninednamethyltransferasegeneexpressionundertheinfluenceofcytokineemapiiinhumancellsinvitro AT babenkola inductionofrepairenzymeo6methylguaninednamethyltransferasegeneexpressionundertheinfluenceofcytokineemapiiinhumancellsinvitro AT kornelûkai inductionofrepairenzymeo6methylguaninednamethyltransferasegeneexpressionundertheinfluenceofcytokineemapiiinhumancellsinvitro AT suhoradaem inductionofrepairenzymeo6methylguaninednamethyltransferasegeneexpressionundertheinfluenceofcytokineemapiiinhumancellsinvitro AT lukašll inductionofrepairenzymeo6methylguaninednamethyltransferasegeneexpressionundertheinfluenceofcytokineemapiiinhumancellsinvitro |