Независимая от протеинкиназы А регуляция кавеолярных натриевых каналов кардиомиоцитов, опосредованная Gsα-белком

В электрофизиологических экспериментах в условиях фиксации потенциала в конфигурации «целая клетка» и регистрации активности одиночных каналов внеклеточное приложение 1 мM QX-314 (производного триэтиллидокаина) полностью и необратимо блокировало натриевую проводимость через каналы поверхностных мемб...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
Veröffentlicht in:	Нейрофизиология
Datum:	2009
1. Verfasser:	Палыгин, О.А
Format:	Artikel
Sprache:	Russisch
Veröffentlicht:	Інститут фізіології ім. О.О. Богомольця НАН України 2009
Online Zugang:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68271
Tags:	Tag hinzufügen Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:	Независимая от протеинкиназы А регуляция кавеолярных натриевых каналов кардиомиоцитов, опосредованная Gsα-белком / О.А. Палыгин // Нейрофизиология. — 2009. — Т. 41, № 1. — С. 10-18. — Бібліогр.: 22 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

_version_	1859619930003996672
author	Палыгин, О.А
author_facet	Палыгин, О.А
citation_txt	Независимая от протеинкиназы А регуляция кавеолярных натриевых каналов кардиомиоцитов, опосредованная Gsα-белком / О.А. Палыгин // Нейрофизиология. — 2009. — Т. 41, № 1. — С. 10-18. — Бібліогр.: 22 назв. — рос.
collection	DSpace DC
container_title	Нейрофизиология
description	В электрофизиологических экспериментах в условиях фиксации потенциала в конфигурации «целая клетка» и регистрации активности одиночных каналов внеклеточное приложение 1 мM QX-314 (производного триэтиллидокаина) полностью и необратимо блокировало натриевую проводимость через каналы поверхностных мембран вентрикулярных кардиомиоцитов крыс. После удаления QX-314 из внеклеточной среды в условиях активации бета-адренорецепторов изопротеренолом (10 мкM) в присутствии ингибитора протеинкиназы А (ПКА, 22 мкг/мкл) выявлялся только тетродотоксиннечувствительный компонент натриевого тока. При этом натриевые токи, активируемые под влиянием изопротеренола, полностью ингибировались в условиях внутриклеточной аппликации моноклональных антител к кавеолину-3. Данное наблюдение подтверждает предположение о том, что увеличение натриевой проводимости в таких случаях опосредовано активацией натриевых каналов кавеолярных пулов. Полученные результаты указывают на то, что субклеточная локализация каналов Nav1.5 в кавеолярных мембранных пулах кардиомиоцитов может играть особую функциональную роль в увеличении натриевой проводимости и модуляции потенциалов действия, генерируемых вентрикулярными кардиомиоцитами крыс. В електрофізіологічних експериментах в умовах фіксації потенціалу в конфігурації «ціла клітина» та реєстрації активності поодиноких каналів позаклітинне прикладання 1 мM QX-314 (похідного триетиллідокаїну) повністю та необоротно блокувало натрієву провідність через канали поверхневих мембран вентрикулярних кардіоміоцитів щура. Після видалення QX-314 із позаклітинного середовища в умовах активації бета-адренорецепторів ізопротеренолом (10 мкМ) у присутності інгібітора протеїнкінази А (ПКА, 22 мкг/мкл) виявлявся тільки тетродотоксиннечутливий компонент натрієвого струму. При цьому натрієві струми, активовані під впливом ізопротеренолу, повністю інгібувалися в умовах позаклітинної аплікації моноклональних антитіл до кавеоліну-3. Дане спостереження підтверджує припущення про те, що збільшення натрієвої провідності в таких випадках опосередковано активацією натрієвих каналів кавеолярних пулів. Отримані результати вказують на те, що субклітинна локалізація каналів Nav1.5 у кавеолярних мембранних пулах кардіоміоцитів відіграє особливу функціональну роль у збільшенні натрієвої провідності та модуляції потенціалів дії, генерованих вентрикулярними кардіоміоцитами щурів. In electrophysiological experiments using voltage clamp in the whole-cell configuration and recording of the activity of single channels, extracellular application of 1 mM QX-314 (a derivative of triethyllidocaine) completely and reversibly blocked the sodium conductance through channels in the superficial membranes of rat ventricular cardiomyocytes. After removal of QX-314 from the extracellular medium and in the presence of 22 μg/μl of an inhibitor of protein kinase A (PKA), only the tetrodotoxin-insensitive component of sodium currents was found under conditions of activation of β-adrenoreceptors by isoproterenol (10 μM). In this case, sodium currents activated by isoproterenol were completely inhibited under conditions of intracellular application of monoclonal antibodies against caveolin-3. This observation confirms the hypothesis that an increase in the sodium conductance is, in such cases, mediated by activation of sodium channels belonging to the caveolar pools. The obtained data indicate that subcellular localization of Nav1.5 channels in caveolar membrane pools of cardiomyocytes can play a special functional role in the enhancement of sodium conductance and modulation of action potentials in rat ventricular cardiomyocytes.
first_indexed	2025-11-29T03:00:32Z
format	Article
fulltext	НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2009.—T. 41, № 110 УДК 612.014.42:612.173 О. А. ПАЛЫГИН1 НЕЗАВИСИМАЯ ОТ ПРОТЕИНКИНАЗЫ А РЕГУЛЯЦИЯ КАВЕОЛЯРНЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ КАРДИОМИОЦИТОВ, ОПОСРЕДОВАННАЯ Gsα-БЕЛКОМ Поступила 22.10.08 В электрофизиологических экспериментах в условиях фиксации потенциала в конфи- гурации «целая клетка» и регистрации активности одиночных каналов внеклеточное приложение 1 мM QX-314 (производного триэтиллидокаина) полностью и необрати- мо блокировало натриевую проводимость через каналы поверхностных мембран вен- трикулярных кардиомиоцитов крыс. После удаления QX-314 из внеклеточной среды в условиях активации бета-адренорецепторов изопротеренолом (10 мкM) в присутствии ингибитора протеинкиназы А (ПКА, 22 мкг/мкл) выявлялся только тетродотоксинне- чувствительный компонент натриевого тока. При этом натриевые токи, активируемые под влиянием изопротеренола, полностью ингибировались в условиях внутриклеточной аппликации моноклональных антител к кавеолину-3. Данное наблюдение подтверждает предположение о том, что увеличение натриевой проводимости в таких случаях опо- средовано активацией натриевых каналов кавеолярных пулов. Полученные результаты указывают на то, что субклеточная локализация каналов Nav1.5 в кавеолярных мембран- ных пулах кардиомиоцитов может играть особую функциональную роль в увеличении натриевой проводимости и модуляции потенциалов действия, генерируемых вентрику- лярными кардиомиоцитами крыс. КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: кардиомиоциты, натриевые каналы Nav1.5, кавеолярный пул, β-адренергическая активация, QX-314. 1 Институт физиологии им. А. А. Богомольца НАН Украины, Киев (Украина). Эл. почта: palygin@biph.kiev.ua (О. А. Палыгин). ВВЕДЕНИЕ Нейрогуморальный контроль функционирования натриевых каналов Nav1.5 в кардиомиоцитах, опо- средуемый активацией бета-адренорецепторов, яв- ляется важным регуляторным фактором; особо су- щественно его действие в условиях стресса и при болезнях сердца. Бета-адренергическая активация воздействует на Nav1.5-каналы через два основ- ных независимых пути. В обоих случаях действие опосредовано примембранными Gsα-протеина- ми, отделяющимися от Gβγ-комплекса в процес- се активации упомянутых рецепторов. Согласно общепринятой интерпретации, протеин Gsα сти- мулирует аденилатциклазу, которая и активиру- ет протеинкиназу А (ПКА). В свою очередь, ПКА обеспечивает фосфорилирование белков каналов Nav1.5, которые содержат в себе группировки се- рин – треонин (ПКА-зависимый путь). В резуль- тате ПКА-опосредованное фосфорилирование Nav1.5-каналов приводит к увеличению амплитуды и длительности натриевого тока (INa) через мембра- ну кардиомиоцитов; возрастание продолжительно- сти этого тока происходит за счет затягивания его спада [1–4]. С возрастанием количества активных натриевых каналов увеличивается скорость прове- дения потенциалов действия (ПД) при сокращении сердечной мышцы. В ряде работ было выдвинуто предположение, что функционирование натриевых каналов в вен- трикулярных кардиомиоцитах в существенной сте- пени связано с наличием мембранообразующего протеина кавеолина-3 [5, 6], который присутству- ет в динамических мембранных образованиях – ка- веолах. Кавеолы имеются в волокнах скелетных, гладких и сердечных мышц; это мембранные об- разования, насыщенные холестеролом и сфинголи- пидами. Было показано, что мутации, изменяющие НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2009.—T. 41, № 1 11 первичную структуру молекул кавеолина-3, непо- средственно модулируют характеристики INa в кар- диомиоцитах. Это, в свою очередь, является важ- нейшим фактором патогенеза ряда заболеваний, например, так называемого длительного QT-син- дрома сердца (LQTS9) и синдрома внезапной мла- денческой смерти (SIDS, LQTS3-like-syndrom) [7– 12]. В связи с данным обстоятельством выяснение фундаментальных механизмов функционирования кавеол кардиомиоцитов и кавеолярных натриевых каналов представляет собой весьма актуальную за- дачу. Результаты последних исследований пока- зали, что в динамических мембранных кавеолах кардиомиоцитов действительно локализованы на- триевые каналы Nav1.5 [5, 13, 14], а также кальцие- вые каналы L-типа (Cav1.2a) [5, 10, 15]. В васкуляр- ных кавеолах были обнаружены калиевые каналы Kv1.5, однако наличие таких каналов в аналогич- ных структурах кардиомиоцитов пока четко не до- казано [14, 16, 17]. Кавеолы неподвижны относительно плазматиче- ской мембраны. Их динамика аналогична таковой нейронных везикул и основывается на регуляции открывания/закрывания внеклеточных пор, опре- деляющих связь между вне- и внутриклеточным пространствами [14]. В нейронных везикулах от- ветственным за регуляцию данной динамики явля- ется комплекс SNARE; белковые же комплексы и механизмы, регулирующие динамику кавеолярных пор, пока неизвестны [9, 19]. Гипотеза о сигналь- ной роли кавеолина нашла подтверждение в клет- ках некоторых типов, в которых кавеолярные пулы опосредуют взаимодействия примембранных бел- ковых структур [18, 19]. Известно также, что каве- олы могут участвовать в процессе эндоцитоза или функционировать как трансцитозольные везикулы, обеспечивающие перенос крупных молекул [20]. Локализация натриевых каналов Nav1.5 и кавеоляр- ных пулов была выявлена с использованием мето- дик иммунопреципитации, непрямой иммунофлуо- ресценции и электронной микроскопии [14]. В наших предыдущих работах было пока- зано, что активация бета-адренорецепторов (и, со- ответственно, белка Gsα) может приводить к ак- тивации натриевых каналов, ассоциированных с кавеолярным пулом сарколеммы [6]. Как оказа- лось, такой эффект регистрируется в присутствии ингибитора ПКА. В качестве прямого доказатель- ства эффекта открывания кавеолярных пор может рассматриваться потенциалзависимое увеличение амплитуды INa в ответ на стимуляцию агонистом β-адренорецепторов кардиомиоцитов (например, изопротеренолом) в условиях блокирования ПКА- зависимого сигнального пути. С учетом подобных соображений и была выполнена настоящая работа, направленная на выяснение механизмов регуляции кавеолярных натриевых каналов вентрикулярных кардиомиоцитов. МЕТОДИКА Изоляция вентрикулярных кардиомиоцитов. Крыс- самцов линии Sprague-Dawley (масса 175–200 г) анестезировали с помощью изофлурана. Сердце крысы быстро извлекали и помещали в охлажден- ный до 0 °С модифицированный раствор Тироде, содержащий в себе 0.2 мМ CaCl2, с добавлением гепарина и инсулина. После закрепления аорты на канюле во влажной камере сердце перфузировали в течение 5 мин при температуре 37 ºC с помощью аппарата Лагендорфа модифицированным раство- ром Тироде, не содержащим в себе кальция, с до- бавлением альбумина BSA (“Sigma”, США). По- сле этого раствор заменяли модифицированным бескальциевым раствором Тироде с добавлением 0.33 мг/мл коллагеназы CLS-2 («Worthington», США) и альбумина BSA. Перфузия таким раство- ром при температуре 37 ºC длилась 12 мин. После этого желудочки сердца отделяли и помещали в 25 мл бескальциевого модифицированного раство- ра Тироде, содержащего в себе коллагеназу. Кусоч- ки ткани желудочков (объем приблизительно 1 мм3) пропускали через пастеровские пипетки; получен- ную клеточную суспензию отделяли и центрифу- гировали в растворе с высоким содержанием калия (KB); в этом растворе ее далее сохраняли на льду (не более 48 ч). Протокол электрофизиологических эксперимен- тов. Потенциалзависимые INa отводили с помощью стандартной методики «пэтч-клэмп» в конфигура- ции «целая клетка» с применением усилителя Axo- patch 200B. Аналоговые сигналы оцифровывали с использованием восьмиполюсного фильтра Бессела с частотой среза не менее 5 кГц. Пэтч-пипетки из- готавливали из боросиликатных стеклянных капил- ляров («VWR», США). Сопротивление таких ми- кроэлектродов варьировало от 0.8 до 1.2 МОм при сопротивлении пипетка–мембрана около 1–5 ГОм. Регистрацию трансмембранных INa в конфигурации «целая клетка» производили в условиях поддержи- ваемого потенциала –120 мВ и его изменений от НЕЗАВИСИМАЯ ОТ ПРОТЕИНКИНАЗЫ А РЕГУЛЯЦИЯ КАВЕОЛЯРНЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2009.—T. 41, № 112 –110 до + 30 мВ. Компенсация последовательного сопротивления во всех экспериментах составляла не менее 95 %. Токи регистрировали во внеклеточ- ном растворе следующего состава (в миллимолях на 1 л): NaCl – 10, холина хлорид – 130, KCl – 4.5, CaCl2 – 1.0, MgCl2 – 2.0, CoCl2 – 2.0, HEPES – 10.0 и глюкоза – 5.5 (pH доводили до 7.35 путем добав- ления KOH). Проводимость через кальциевые ка- налы L-типа блокировалась в результате наличия 2 мМ Со2+ во внеклеточном растворе. Внутрипипе- точный базовый раствор содержал в себе (в мил- лимолях на 1 л): CsCl– 130, CaCl2 – 0.5, MgCl2 – 2, Na2ATP – 5, GTP – 0.5, EGTA – 5, HEPES – 10 (pH доводили до 7.25 с помощью добавления CsOH). Рассчитанная внутриклеточная концентрация сво- бодных ионов натрия составляла около 5 мМ; со- ответственно, равновесный потенциал, определен- ный согласно уравнению Нернста, был равен +17.6 мВ (при 22 °C). Во всех экспериментах действие ПКА на INa полностью блокировалось за счет до- бавления 22 мг/мл ингибитора указанного фермен- та во внутрипипеточный раствор. Для стандартизации данных амплитудные харак- теристики INa обычно оценивались путем расчета плотности этого тока – отношения его регистри- руемой амплитуды к значению емкости мембраны исследуемого кардиомиоцита. Для отведения ак- тивности одиночных каналов использовали сте- клянные микроэлектроды (пирекс) с предвари- тельно оплавленным кончиком (сопротивление 1–10 MОм). Это позволяло получать гигаомные контакты с мембраной кардиомиоцита. Для умень- шения емкостных транзиентов кончики пипеток покрывали силгардом («WPI», США). Внеклеточ- ный раствор в опытах с регистрацией активности одиночных каналов содержал в себе (в миллимолях на 1 л): KCl – 140, MgCl2 – 2.0, CoCl2 – 2.0, EGTA – 5, HEPES – 10.0 и глюкозу – 5.5 (pH доводили до 7.35 путем добавления KOH). Внутрипипеточный рас твор имел следующий состав (в миллимолях на 1 л): NaCl – 140, CaCl2 – 2, KCl – 4, MgCl2 – 2.0, HEPES – 10.0 (pH доводили до 7.35, добавляя CsOH). Моноклональные антитела к кавеолину-3 (BD; «Transduction Laboratories», США) добавлялись во внутрипипеточный раствор в концентрации 0.34 мкМ. Для контроля специфичности антител к кавеолину-3 в некоторых экспериментах были ис- пользованы антитела к кавеолину-1 (BD; «Trans- duction Laboratories», США). Препараты антител не содержали в себе консервантов (таких, как азид натрия и подобные). Эксперименты в конфигурации «целая клетка» проводили при комнатной температуре (20–23 °С), а эксперименты с регистрацией активности оди- ночных каналов – при температуре 37 °C. Анализ экспериментальных данных. Регистра- ция и анализ результатов электрофизиологических опытов выполнялись с помощью программного па- кета «pCLAMP 9.0» («Axon Instruments», США); в ходе анализа применялся также программный про- дукт «OriginPro 7.5» («OriginLab Corp.», США). Для статистической обработки числовых данных использовался дисперсионный анализ (ANOVA). РЕЗУЛЬТАТЫ Как уже указывалось, исследования изменений ки- нетики INa в изолированных (диссоциированных) вентрикулярных кардиомиоцитах взрослых крыс производились в условиях бета-адренергической стимуляции, пэтч-клэмп-регистрации и в присут- ствии ингибитора ПКА во внутрипипеточном рас- творе. Под воздействием агониста бета-адреноре- цепторов изопротеренола в концентрации 10 мкМ амплитуда и пиковое значение плотности INa уве- личивались в среднем на 31 % по сравнению с кон- тролем (n = 25) (рис. 1, А; 2). В ряде экспериментов для выяснения влияния ак- тивации бета-адренорецепторов на проводимость через кальциевые каналы ионы Са2+ во внеклеточ- ном растворе после отмывания Со2+ заменяли на 5 мМ Ва2+. В подобных условиях пиковая плотность бариевого тока (аналога кальциевого тока) возрас- тала после приложения изопротеренола в среднем на 37 % (n = 7; рис. 2). Описанные процедуры поз- воляли с высокой достоверностью дифференциро- вать влияния изопротеренола на INa и кальциевый ток через мембрану кардиомиоцитов. Примеры за- писей упомянутых токов и регистрации их вольт- амперных характеристик приведены на рис. 1, а протокол смены растворов и результаты статисти- ческой обработки – на рис. 2. Необходимо подчер- кнуть, что аппликации Со2+ и Ва2+ не влияли на ам- плитуду INa (рис. 1, Б; 2). Компенсация последовательного сопротивления в опытах на кардиомиоцитах в конфигурации «це- лая клетка» представляет собой существенную про- блему. В связи с этим целесообразным было пере- йти к регистрации активности одиночных каналов, что позволило бы устранить ошибки, связанные с недостаточно качественной фиксацией потенциа- О. А. ПАЛЫГИН НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2009.—T. 41, № 1 13 ла. В рамках данной экспериментальной парадиг- мы отводились токи через одиночные натриевые каналы, которые возникали в ответ на короткие (10 мс) деполяризующие толчки тока, смещающие по- тенциал на мембране до –40 мВ от поддерживае- мого потенциала –100 мВ. Обычно мы усредняли эффекты срабатывания одиночных натриевых ка- налов, вызванные изменением мембранного потен- циала длительностью 10 мс, по 486–500 реализаци- ям. Добавление изопротеренола в указанной выше концентрации во внеклеточный раствор приводило к существенному обратимому увеличению ампли- туд таких усредненных токов через одиночные ка- налы во всех экспериментах (n = 10) (рис. 3). Для дальнейшего исследования природы натри- евых каналов кавеол некавеолярные натриевые ка- налы поверхностной мембраны были фармаколо- гически изолированы от каналов, локализованных в кавеолярных пулах. Для этого было использова- но производное местного анестетика лидокаина QX-314 [21]. Молекулы данного блокатора натри- евых каналов обладают постоянным зарядом и не- способны проходить через клеточную мембрану. Натриевые каналы клеток сердечной мышцы бло- кируются при внеклеточной аппликации QX-314, тогда как натриевые каналы в мембранах нейро- нов ингибируются в условиях внутриклеточного приложения этого агента [21, 22]. Характерно, что для данного вещества свойственна длительная ки- нетика диссоциации (время половинного восста- новления из блокированного состояния превышает 1.5 ч). Рис. 4 иллюстрирует изменения нормирован- ных амплитуд INa в двух кардиомиоцитах в присут- Р и с. 1. Бета-адренергическая модуляция токов через натриевые и кальциевые каналы в мембранах кардиомиоцитов крысы. А, Б – трансмембранные токи в конфигурации «целая клетка» в контроле и при аппликации 10 мкМ изопротеренола. A – натриевый ток в условиях добавления во внеклеточный раствор 2 мМ блокатора кальциевых каналов Co2+ (1), добавления 5 мМ Ва2+ после отмывания Со2+ (2), при аппликации 10 мкМ изопротеренола в указанных выше условиях (3) и после отмывания изопротеренола (4). Токи вызывались путем приложения деполяризующего импульса, смещающего потенциал до –30 мВ от поддерживаемого потенциала –120 мВ. Б – бариевые токи через кальциевые каналы в указанных выше условиях (1–4). Токи вызывались путем приложения деполяризующего импульса, смещающего потенциал до 0 мВ от поддерживаемого потенциала –70 мВ. В, Г – вольт-амперные характеристики натриевого (В) и бариевого (аналога кальциевого, Г) токов. По оси абсцисс – потенциал, мВ; по оси ординат – максимальная амплитуда тока, пА (в данных случаях плотность тока с учетом емкости мембраны кардиомиоцита не рассчитывалась). 1 – контроль; 2 – при аппликации 10 мкМ изопротеренола; 3 – после отмывания. Р и с. 1. Бета-адренергічна модуляція струмів через натрієві та кальцієві канали в мембранах кардіоміоцитів щура. A Б Г В –30 мВ 1 2 3 4 –100 мВ –70 мВ 20 мс 2 нА 300 пА 20 мс 0 мВ –70 мВ –100 мВ мВ –140 –120 –100 –80 –60 –40 –20 20 40 мВ –120 –80 –40 40 –2500 –5000 –7500 –10000 –100 –200 –300 –400 –500 –600 пА пА 100 0 0 1 2 21 3 3 НЕЗАВИСИМАЯ ОТ ПРОТЕИНКИНАЗЫ А РЕГУЛЯЦИЯ КАВЕОЛЯРНЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2009.—T. 41, № 114 ствии ПКА во внутриклеточном растворе во вре- мя аппликации QX-314 в концентрации 1.0 мМ, что приводило к блокированию упомянутого тока. Ре- зультаты данного эксперимента показывают, что внеклеточная аппликация использованного блока- тора натриевых каналов обусловливала практиче- ски полное блокирование INa через 8–10 мин после начала такой аппликации; отмывание от QX-314 в течение 20 мин не приводило к какому-либо вос- становлению INa, возникавших в ответ на прикла- дываемую деполяризацию. Если же производилась стимуляция бета-адренорецепторов в условиях приложения 10 мкМ изопротеренола после 15-ми- нутного периода отмывания QX-314, происходило частичное восстановление амплитуды INa, в сред- нем до 24 % исходного значения (n = 10; рис. 4). Интервалы в ходе наблюдения изменений пиковой амплитуды INa (пробелы на диаграмме) были ис- пользованы для измерения вольт-амперных харак- теристик исследуемых токов. Некоторые различия в скорости блокирования натриевых каналов под действием QX-314 в разных экспериментах были, видимо, обусловлены флуктуациями скорости про- тока раствора в регистрационной камере. Время полного блокирования INa при поддерживаемых по- тенциалах от –110 до –70 мВ и деполяризации до –40 мВ в условиях стимуляции с частотой 1 c–1 было примерно постоянным (как уже указывалось, порядка 8–10 мин). Величина токов, вызываемых в условиях приложения изопротеренола (рис. 4), до- статочно хорошо согласовывалась с нашими опи- санными выше данными, полученными в стандарт- ных экспериментах на целой клетке. Пропранолол (антагонист β-адренорецепто- ров) и антитела к кавеолину-3 были использова- ны в контрольных экспериментах. Частичное вос- становление амплитуды INa в условиях приложения изопротеренола после блокирования β-адреноре- цепторов могло бы быть вызвано изменением аф- финности QX-314 по отношению к натриевым ка- налам. Для экспериментальной проверки данного предположения мы использовали антитела к кавео- лину-3, которые, как было установлено, блокируют кавеолинзависимый ток. На рис. 4, А график 2 по- казывает изменение амплитуды INa в присутствии антител к кавеолину-3 в условиях, аналогичных контрольным (график 1; следует упомянуть, что регистрации 1 и 2 были получены на разных клет- ках). Итоговая статистика результатов данных экс- периментов иллюстрируется рис. 4, Б. В условиях аппликации 10 мкМ изопротеренола и присутствия антител к кавеолину-3 во внутриклеточном рас- творе INa не появлялся. Следовательно, частичное, но достаточно существенное восстановление этих токов было опосредовано задействованием кавео- лярных каналов и не вызывалось непосредственно отмыванием блокатора QX-314. Данный результат подтверждает гипотезу об увеличении поверхност- ной плотности натриевых каналов в кардиомиоци- тах за счет вовлечения кавеолярных пулов таких каналов. Следует упомянуть, что изоляция кавео- лярных кальциевых или калиевых каналов с приме- нением аналогичного подхода пока невозможна по причине отсутствия ингибиторов, необратимо бло- кирующих некавеолярные каналы. Р и с. 2. Диаграммы среднегрупповых значений нормированных плотностей (%) натриевого и бариевого токов (заштрихованные и светлые столбики соответственно) через мембрану кардиомиоцитов. За 100 % приняты плотности токов в контрольных условиях. Под диаграммами приведена схема, иллюстрирующая наличие веществ-анализаторов во внеклеточной среде (Со2+, изопротеренол – ISO и Ва2+) и ингибитора протеинкиназы А (ПКА) в пипетке, а также указаны их концентрации. Количество наблюдений для натриевого тока n = 25, для бариевого – n = 7. Звездочками отмечены случаи достоверных (P < 0.05) отличий средних плотностей токов от контрольных значений, крестиками – от значений при аппликации ISO. P и с. 2. Діаграми середньогрупових значень нормованих щільностей (%) натрієвого та барієвого струмів (заштриховані та світлі стовпчики відповідно) через мембрану кардіоміоцитів. % 37% 120 100 0 31% + + * 140 Co2+ – 2 мМ ISO – 10 мкМ Ba2+ – 5 мМ Ингибитор ПКА в пипетке О. А. ПАЛЫГИН Отм НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2009.—T. 41, № 1 15 0 3 6 9 27 30 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0 10 20 95 100 Р и с. 3. Модуляция токов через одиночные натриевые каналы в мембране кардиомиоцитов при активации бета- адренорецепторов. А – записи токов через одиночный потенциалуправляемый натриевый канал, которые возникали в ответ на приложение деполяризующего импульса, смещающего потенциал до –40 мВ от поддерживаемого уровня –100 мВ (1), и усредненный ток через одиночный натриевый канал в ответ на смещение потенциала длительностью 10 мс (по данным примерно 500 реализаций; 2). Б – обратимое увеличение амплитуды усредненных токов через одиночные натриевые каналы (по данным 486–500 реализаций) при аппликации 1 мкМ изопротеренола – ISO (2) по сравнению с таковой в контроле – Контр. (1) и аналогичный эффект 10 мкМ ISO (4) после отмывания – Отм. (3). Р и с. 3. Модуляція струмів через поодинокі натрієві канали в мембрані кардіоміоцитів при активації бета-адренорецепторів. Р и с. 4. Влияние антител к кавеолину-3 на чувствительный к изопротеренолу (ISO) натриевый ток после полного блокирования натриевой проводимости через плазматическую мембрану вентрикулярных кардиомиоцитов крысы, обусловленного аппликацией QX-314. A – временнóе течение уменьшения нормированной пиковой амплитуды натриевого тока в результате аппликации 1 мМ QX-314 и частичное восстановление этого тока после отмывания (Отм.) от блокатора под действием 10 мкМ ISO (1); показано также отсутствие подобного восстановления под действием ISO в условиях дополнительной внутриклеточной аппликации антитела к кавеолину-3 (2). Б – диаграмма средних нормированных значений амплитуды натриевого тока в контроле (Контр.), при аппликации QX-314 и аппликации ISO после отмывания от блокатора в условиях дополнительной аппликации антитела к кавеолину-3 и без такой аппликации (заштрихованные и светлые столбики соответственно). Количество наблюдений указано в скобках над столбиками; звездочками отмечены случаи достоверных (P < 0.05) отличий от контрольных значений, крестиками – отличий значений в условиях действия ISO от значений в условиях аппликации QX-314. Р и с. 4. Вплив антитіл до кавеоліну-3 на чутливий до ізопротеренолу (ISO) натрієвий струм після повного блокування натрієвої провідності через плазматичну мембрану вентрикулярних кардіоміоцитів щура, зумовленого аплікацією QX-314. A Б 2 мс 2 1 2 2 пА 500 фА 2 мс 5 мс 1 –40 мВ –100 мВ –40 мВ –100 мВ Контр. Отм. 3 4 ISO – 1 мкМ ISO – 10 мкМ A Б QX-314 – 1 мМ ISO – 10 мкМ мин Отм. % + * (5)(5)(10) (10) Контр. QX-314 – 1 мМ ISO – 10 мкМ 500 фА 2 1 24% НЕЗАВИСИМАЯ ОТ ПРОТЕИНКИНАЗЫ А РЕГУЛЯЦИЯ КАВЕОЛЯРНЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2009.—T. 41, № 116 Далее в наших исследованиях природы кавео- лярных пулов мы применяли блокатор QX-314 и использовали технику регистрации активности одиночных натриевых каналов. Генерация потен- циалов действия и инициация сокращений изоли- рованных с помощью ферментативной обработки вентрикулярных кардиомиоцитов взрослых крыс обеспечивались путем стимуляции с частотой 1 c–1 через пару электродов, находящихся во внеклеточ- ном растворе («полевая» стимуляция). Подбором параметров стимуляции достигался режим, при ко- тором начиналось синхронизированное сокраще- ние клеток, после чего интенсивность тока стиму- ляции увеличивалась на 20 %. Сокращения клеток (и, соответственно, активация натриевых каналов мембраны кардиомиоцитов) инициировались на протяжении как минимум 10 мин в присутствии 1 мМ QX-314; затем клетки отмывались в течение 5 мин в растворе, не содержащем данного блокатора. В этих условиях QX-314 блокировал все мембран- ные натриевые каналы, но не препятствовал акти- вации кавеолярных натриевых каналов, обуслов- ленной внеклеточной аппликацией изопротеренола или внутриклеточной – Gsα-протеина. Именно в данной конфигурации проводилась регистрация активности одиночных каналов. Результаты подобного эксперимента представле- ны на рис. 5. Клетка подвергалась «полевой» сти- муляции в присутствии 1 мМ QX-314 в течение 10 мин; после отмывания блокатора устанавли- вались условия фиксации потенциала на участке мембраны под отверстием пипетки. На рис. 5, А приведен пример регистрации активности одиноч- ных натриевых каналов в таких условиях (филь- трация с частотой среза 5 кГц). Деполяризующий импульс относительно поддерживаемого потенци- ала –100 до уровня –40 мВ длился 10 мс (протокол показан на вставке вверху). Во всех контрольных записях открывания одиночных каналов не наблю- далось (рис. 5, А; показаны 10 пробегов из 60). Дан- ный результат полностью соответствует данным, ранее полученным на целой клетке, когда QX-314 необратимо блокировал все мембранные натрие- вые каналы. На Б показаны аналогичные отведения от участка мембраны при идентичном протоколе стимуляции, но после добавления во внеклеточный раствор 10 мкМ изопротеренола. Как видно, при- ложение деполяризующего импульса в большин- стве случаев вызывало возникновение отчетливых токов через исследуемый участок мембраны. В по- добных условиях количество нулевых ответов (ког- да токи не возникали) составляло порядка 20 % (в данном конкретном случае 14 из 72). Таким обра- зом, можно полагать, что нам удалось выделить и зарегистрировать «чистый» компонент кавеоляр- ного INa через одиночные каналы. Использование подобной методики в будущем может дать доста- точно подробные сведения о природе кавеолярных Р и с. 5. Натриевые токи через одиночные каналы вентри- кулярных кардиомиоцитов. A – отсутствие токов через одиночный канал в условиях блокирования натриевой проводимости через плазматическую мембрану в результате аппликации QX-314 и приложения деполяризующего тест-импульса. Б – токи через кавеолярный канал после отмывания QX-314 и аппликации 10 мкМ изопротеренола. Р и с. 5. Натрієві струми через поодинокі канали вентрикулярних кардіоміоцитів. –100 мВ A Б –40 мВ –40 мВ –100 мВ 2 пА 2 мс О. А. ПАЛЫГИН НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2009.—T. 41, № 1 17 натриевых каналов (об их количестве, проводимо- сти, механизмах действия и др.). ОБСУЖДЕНИЕ Натриевые каналы Nav1.5 в вентрикулярных кардио- миоцитах сердца присутствуют не только в плазма- тической мембране таких клеток, но и в динамиче- ских внутриклеточных мембранных образованиях − пулах, называемых кавеолами. Встраивание ка- веол в поверхностную мембрану и последующее их открывание во внеклеточное пространство су- щественно влияют на функциональные свойства резидентных потенциалуправляемых натриевых каналов. В кардиомиоцитах динамическое откры- вание кавеолярных пулов может быть модулиро- вано приложением агониста β-адренорецепторов, инициирующего взаимодействие примембранных субъединиц G-белков Gsα и кавеолина-3. Бета- адренергическая регуляция управляет процессами перехода встроенных в мембрану кавеолярных пу- лов из закрытого состояние в открытое. Субпопу- ляция каналов Nav1.5, локализованных в кавеоляр- ном пуле вентрикулярных кардиомиоцитов крысы, представляет собой неотъемлемую часть сигналь- ного комплекса, прямо и непосредственно регу- лируемого β-адренергическими влияниями. Такой регуляторный путь опосредован Gsα-белком, не- зависим от ПКА, определяется процессом взаимо- действия протеина Gsα с мембранообразующим протеином кавеолином-3 и способен эффективно обеспечить быстрое увеличение поверхностной плотности каналов в плазматических мембранах вентрикулярных клеток сердца. В функциональном аспекте кавеолярные пулы – это плотно упакованные сигнальные комплексы, посредством которых сигнальные протеины взаи- модействуют с молекулами кавеолярных протеи- нов или внеклеточно ориентированными молеку- лами кавеолярных липидов. В сердечной мышце взаимосвязь ряда сигнальных путей в существен- ной степени обеспечивается именно кавеолярными пулами. Размещение сигнальных молекул в кавеоле и/или их диффузия из кавеолы определяют указан- ную функцию данных пулов. В контексте наших экспериментов кавеолярные комплексы рассматриваются как носители функци- ональных потенциалуправляемых натриевых кана- лов. Как уже упоминалось, активация этих каналов опосредована сложным механизмом взаимодей- ствия протеина Gsα с кавеолином-3; последний, в свою очередь, определяет состояние и функцио- нирование кавеолярных пор. Результаты нашей ра- боты подтверждают гипотезу о функциональном взаимодействии протеин Gsα – кавеолин-3, в ре- зультате чего происходят открывание кавеолярных пулов и возрастание натриевой проводимости за счет увеличения количества (плотности) активных натриевых каналов в плазматической мембране. В ряде исследований было показано, что экс- прессия кавеолина-3 явно повышена в условиях различных видов сердечной гипертрофии, сопря- женных с нарушением работы натриевых каналов. Ключевой фактор, определяющий сигнальную роль кавеолярного пула – собственно механизм открыва- ния кавеолярных пор, – пока неизвестен. В закры- тых кавеолах каналы и рецепторы, локализованные в кавеолярном пуле, практически не функциониру- ют. Это обусловливает электрическую изоляцию ка- веолярного пространства от внеклеточной среды и невозможность воздействия лигандов на внутрика- веолярные рецепторы. Данные нашего исследова- ния свидетельствуют о потенциально важной роли ПКА-независимого пути открывания кавеолярных пулов посредством стимуляции бета-адренорецеп- торов. Этот процесс способен приводить к резкому увеличению натриевой проводимости через плаз- матическую мембрану кардиомиоцитов. Вопросы о функциональной роли изменений состояния каве- олярного пула натриевых каналов в условиях нор- мы и патологии заслуживают серьезного внимания и требуют дальнейшего изучения. О. О. Палигін1 НЕЗАЛЕЖНА ВІД ПРОТЕЇНКІНАЗИ А РЕГУЛЯЦІЯ КАВЕОЛЯРНИХ НАТРІЄВИХ КАНАЛІВ КАРДІОМІОЦИТІВ, ОПОСЕРЕДКОВАНА Gsα-БІЛКОМ 1Інститут фізіології ім. О. О. Богомольця НАН України, Київ (Україна). Р е з ю м е В електрофізіологічних експериментах в умовах фіксації потенціалу в конфігурації «ціла клітина» та реєстрації ак- тивності поодиноких каналів позаклітинне прикладання 1 мM QX-314 (похідного триетиллідокаїну) повністю та не- оборотно блокувало натрієву провідність через канали по- верхневих мембран вентрикулярних кардіоміоцитів щура. Після видалення QX-314 із позаклітинного середовища в умовах активації бета-адренорецепторів ізопротеренолом НЕЗАВИСИМАЯ ОТ ПРОТЕИНКИНАЗЫ А РЕГУЛЯЦИЯ КАВЕОЛЯРНЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2009.—T. 41, № 118 (10 мкМ) у присутності інгібітора протеїнкінази А (ПКА, 22 мкг/мкл) виявлявся тільки тетродотоксиннечутливий компонент натрієвого струму. При цьому натрієві струми, активовані під впливом ізопротеренолу, повністю інгібу- валися в умовах позаклітинної аплікації моноклональних антитіл до кавеоліну-3. Дане спостереження підтверджує припущення про те, що збільшення натрієвої провідності в таких випадках опосередковано активацією натрієвих кана- лів кавеолярних пулів. Отримані результати вказують на те, що субклітинна локалізація каналів Nav1.5 у кавеолярних мембранних пулах кардіоміоцитів відіграє особливу функ- ціональну роль у збільшенні натрієвої провідності та моду- ляції потенціалів дії, генерованих вентрикулярними кардіо- міоцитами щурів. CПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. T. Lu, H. C. Lee, J. A. Kabat, and E. F. Shibata, “Modulation of rat cardiac sodium channel by the stimulatory G protein alpha subunit,” J. Physiol., 518, Part 2, 371-384 (1999). 2. J. J. Matsuda, H. Lee, and E. F. Shibata, “Enhancement of rabbit cardiac sodium channels by beta-adrenergic stimulation,” Circ. Res., 70, 199-207 (1992). 3. W. Schreibmayer, “Isoform diversity and modulation of sodium channels by protein kinases,” Cell Physiol. Biochem., 9, 187-200 (1999). 4. K. Ono, H. A. Fozzard, and D. A. Hanck, “Mechanism of cAMP-dependent modulation of cardiac sodium channel current kinetics,” Circ. Res., 72, 807-815 (1993). 5. T. L. Yarbrough, T. Lu, H. C. Lee, and E. F. Shibata, “Localization of cardiac sodium channels in caveolin-rich membrane domains: regulation of sodium current amplitude,” Circ. Res., 90, 443-449 (2002). 6. O. A. Palygin, J. M. Pettus, and E. F. Shibata, “Regulation of caveolar cardiac sodium current by a single Gsalpha histidine residue,” Am. J. Physiol. (Heart Circ. Physiol.), 294, H1693- H1699 (2008). 7. R. Cagliani, N. Bresolin, A. Prelle, et al., “A CAV3 microdeletion differentially affects skeletal muscle and myocardium,” Neurology, 61, 1513-1519 (2003). 8. P. F. de M. Vainzof, A. L. Bernardino, E. McNally, et al., “Mutations in the caveolin-3 gene: When are they pathogenic?” Am. J. Med. Gen., 99, 303-307 (2001). 9. R. Hnasko and M. P. Lisanti, “The biology of caveolae: lessons from caveolin knockout mice and implications for human disease,” Mol. Interv., 3, 445-464 (2003). 10. A. Maguy, T. E. Hebert, and S. Nattel, “Involvement of lipid rafts and caveolae in cardiac ion channel function,” Cardiovascul. Res., 69, 798-807 (2006). 11. D. S. Park, S. E. Woodman, W. Schubert, et al., “Caveolin-1/3 double-knockout mice are viable, but lack both muscle and non-muscle caveolae, and develop a severe cardiomyopathic phenotype,” Am. J. Pathol., 160, 2207-2217 (2002). 12. M. Vatta, M. J. Ackerman, B. Ye, et al., “Mutant caveolin-3 induces persistent late sodium current and is associated with long-QT syndrome,” Circulation, 114, 2104-2112 (2006). 13. D. R. Scriven, A. Klimek, P. Asghari, et al., “Caveolin-3 is adjacent to a group of extradyadic ryanodine receptors,” Biophys. J., 89, 1893-1901 (2005). 14. E. F. Shibata, T. L. Brown, Z. W. Washburn, et al., “Autonomic regulation of voltage-gated cardiac ion channels,” J. Cardiovascul. Electrophysiol., 17, Suppl. 1, S34-S42 (2006). 15. R. C. Balijepalli, J. D. Foell, D. D. Hall, et al., “Localization of cardiac L-type Ca2+ channels to a caveolar macromolecular signaling complex is required for beta(2)-adrenergic regulation,” Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103, 7500-7505 (2006). 16. J. Eldstrom, D. R. Van Wagoner, E. D. Moore, and D. Fedida, “Localization of Kv1.5 channels in rat and canine myocyte sarcolemma,” FEBS Lett., 580, 6039-6046 (2006). 17. E. J. Folco, G. X. Liu, and G. Koren, “Caveolin-3 and SAP97 form a scaffolding protein complex that regulates the voltage- gated potassium channel Kv1.5,” Am. J. Physiol. (Heart Circ. Physiol.), 287, H681-H690 (2004). 18. A. W. Cohen, R. Hnasko, W. Schubert, and M. P. Lisanti, “Role of caveolae and caveolins in health and disease,” Physiol Rev., 84, 1341-1379 (2004). 19. R. S. Ostrom and P. A. Insel, “The evolving role of lipid rafts and caveolae in G protein-coupled receptor signaling: implications for molecular pharmacology,” Br. J. Pharmacol., 143, 235-245 (2004). 20. R. G. Parton and K. Simons, “The multiple faces of caveolae,” Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 8, 185-194 (2007). 21. L. A. Alpert, H. A. Fozzard, D. A. Hanck, and J. C. Makielski, “Is there a second external lidocaine binding site on mammalian cardiac cells?” Am. J. Physiol., 257, H79-H84 (1989). 22. Y. Qu, J. Rogers, T. Tanada, et al., “Molecular determinants of drug access to the receptor site for antiarrhythmic drugs in the cardiac Na+ channel,” Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92, 11839- 11843 (1995). О. А. ПАЛЫГИН
id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68271
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
issn	0028-2561
language	Russian
last_indexed	2025-11-29T03:00:32Z
publishDate	2009
publisher	Інститут фізіології ім. О.О. Богомольця НАН України
record_format	dspace
spelling	Палыгин, О.А 2014-09-20T11:38:22Z 2014-09-20T11:38:22Z 2009 Независимая от протеинкиназы А регуляция кавеолярных натриевых каналов кардиомиоцитов, опосредованная Gsα-белком / О.А. Палыгин // Нейрофизиология. — 2009. — Т. 41, № 1. — С. 10-18. — Бібліогр.: 22 назв. — рос. 0028-2561 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68271 612.014.42:612.173 В электрофизиологических экспериментах в условиях фиксации потенциала в конфигурации «целая клетка» и регистрации активности одиночных каналов внеклеточное приложение 1 мM QX-314 (производного триэтиллидокаина) полностью и необратимо блокировало натриевую проводимость через каналы поверхностных мембран вентрикулярных кардиомиоцитов крыс. После удаления QX-314 из внеклеточной среды в условиях активации бета-адренорецепторов изопротеренолом (10 мкM) в присутствии ингибитора протеинкиназы А (ПКА, 22 мкг/мкл) выявлялся только тетродотоксиннечувствительный компонент натриевого тока. При этом натриевые токи, активируемые под влиянием изопротеренола, полностью ингибировались в условиях внутриклеточной аппликации моноклональных антител к кавеолину-3. Данное наблюдение подтверждает предположение о том, что увеличение натриевой проводимости в таких случаях опосредовано активацией натриевых каналов кавеолярных пулов. Полученные результаты указывают на то, что субклеточная локализация каналов Nav1.5 в кавеолярных мембранных пулах кардиомиоцитов может играть особую функциональную роль в увеличении натриевой проводимости и модуляции потенциалов действия, генерируемых вентрикулярными кардиомиоцитами крыс. В електрофізіологічних експериментах в умовах фіксації потенціалу в конфігурації «ціла клітина» та реєстрації активності поодиноких каналів позаклітинне прикладання 1 мM QX-314 (похідного триетиллідокаїну) повністю та необоротно блокувало натрієву провідність через канали поверхневих мембран вентрикулярних кардіоміоцитів щура. Після видалення QX-314 із позаклітинного середовища в умовах активації бета-адренорецепторів ізопротеренолом (10 мкМ) у присутності інгібітора протеїнкінази А (ПКА, 22 мкг/мкл) виявлявся тільки тетродотоксиннечутливий компонент натрієвого струму. При цьому натрієві струми, активовані під впливом ізопротеренолу, повністю інгібувалися в умовах позаклітинної аплікації моноклональних антитіл до кавеоліну-3. Дане спостереження підтверджує припущення про те, що збільшення натрієвої провідності в таких випадках опосередковано активацією натрієвих каналів кавеолярних пулів. Отримані результати вказують на те, що субклітинна локалізація каналів Nav1.5 у кавеолярних мембранних пулах кардіоміоцитів відіграє особливу функціональну роль у збільшенні натрієвої провідності та модуляції потенціалів дії, генерованих вентрикулярними кардіоміоцитами щурів. In electrophysiological experiments using voltage clamp in the whole-cell configuration and recording of the activity of single channels, extracellular application of 1 mM QX-314 (a derivative of triethyllidocaine) completely and reversibly blocked the sodium conductance through channels in the superficial membranes of rat ventricular cardiomyocytes. After removal of QX-314 from the extracellular medium and in the presence of 22 μg/μl of an inhibitor of protein kinase A (PKA), only the tetrodotoxin-insensitive component of sodium currents was found under conditions of activation of β-adrenoreceptors by isoproterenol (10 μM). In this case, sodium currents activated by isoproterenol were completely inhibited under conditions of intracellular application of monoclonal antibodies against caveolin-3. This observation confirms the hypothesis that an increase in the sodium conductance is, in such cases, mediated by activation of sodium channels belonging to the caveolar pools. The obtained data indicate that subcellular localization of Nav1.5 channels in caveolar membrane pools of cardiomyocytes can play a special functional role in the enhancement of sodium conductance and modulation of action potentials in rat ventricular cardiomyocytes. ru Інститут фізіології ім. О.О. Богомольця НАН України Нейрофизиология Независимая от протеинкиназы А регуляция кавеолярных натриевых каналов кардиомиоцитов, опосредованная Gsα-белком Незалежна від протеїнкінази A регуляція кавеолярних натрієвих каналів кардіоміоцитів, опосередкована Gsa-білком Gsα Protein-Mediated and Protein Kinase A-Independent Regulation of Caveolar Sodium Channels in Rat Cardiomyocytes Article published earlier
spellingShingle	Независимая от протеинкиназы А регуляция кавеолярных натриевых каналов кардиомиоцитов, опосредованная Gsα-белком Палыгин, О.А
title	Независимая от протеинкиназы А регуляция кавеолярных натриевых каналов кардиомиоцитов, опосредованная Gsα-белком
title_alt	Незалежна від протеїнкінази A регуляція кавеолярних натрієвих каналів кардіоміоцитів, опосередкована Gsa-білком Gsα Protein-Mediated and Protein Kinase A-Independent Regulation of Caveolar Sodium Channels in Rat Cardiomyocytes
title_full	Независимая от протеинкиназы А регуляция кавеолярных натриевых каналов кардиомиоцитов, опосредованная Gsα-белком
title_fullStr	Независимая от протеинкиназы А регуляция кавеолярных натриевых каналов кардиомиоцитов, опосредованная Gsα-белком
title_full_unstemmed	Независимая от протеинкиназы А регуляция кавеолярных натриевых каналов кардиомиоцитов, опосредованная Gsα-белком
title_short	Независимая от протеинкиназы А регуляция кавеолярных натриевых каналов кардиомиоцитов, опосредованная Gsα-белком
title_sort	независимая от протеинкиназы а регуляция кавеолярных натриевых каналов кардиомиоцитов, опосредованная gsα-белком
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68271
work_keys_str_mv	AT palyginoa nezavisimaâotproteinkinazyaregulâciâkaveolârnyhnatrievyhkanalovkardiomiocitovoposredovannaâgsαbelkom AT palyginoa nezaležnavídproteínkínaziaregulâcíâkaveolârnihnatríêvihkanalívkardíomíocitívoposeredkovanagsabílkom AT palyginoa gsαproteinmediatedandproteinkinaseaindependentregulationofcaveolarsodiumchannelsinratcardiomyocytes

Независимая от протеинкиназы А регуляция кавеолярных натриевых каналов кардиомиоцитов, опосредованная Gsα-белком

Institution

Ähnliche Einträge