Возможные механизмы влияния церебрала на морфологические характеристики клеток феохромоцитомы крысы

Исследовали влияния недавно предложенного органопрепарата церебрала, эффективного при ряде сосудистых патологий головного мозга, на культуру клеток феохромоцитомы крысы РС-12....

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
Datum:	2011
Hauptverfasser:	Погорелая, Н.Х., Василенко, Д.А., Макаренко, А.Н., Савосько, С.И.
Format:	Artikel
Sprache:	Russian
Veröffentlicht:	Інститут фізіології ім. О.О. Богомольця НАН України 2011
Schriftenreihe:	Нейрофизиология
Online Zugang:	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68400
Tags:	Tag hinzufügen Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Назва журналу:	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Zitieren:	Возможные механизмы влияния церебрала на морфологические характеристики клеток феохромоцитомы крысы / Н.Х. Погорелая, Д.А. Василенко, А.Н. Макаренко, С.И. Савосько // Нейрофизиология. — 2011. — Т. 43, № 1. — С. 18-28. — Бібліогр.: 16 назв. — рос.

Institution

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine

id	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68400
record_format	dspace
spelling	nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-684002025-02-23T18:48:57Z Возможные механизмы влияния церебрала на морфологические характеристики клеток феохромоцитомы крысы Можливі механізми впливу церебралу на морфологічні характеристики клітин феохромоцитоми щура Погорелая, Н.Х. Василенко, Д.А. Макаренко, А.Н. Савосько, С.И. Исследовали влияния недавно предложенного органопрепарата церебрала, эффективного при ряде сосудистых патологий головного мозга, на культуру клеток феохромоцитомы крысы РС-12. Досліджували впливи нещодавно запропонованого органопрепарату церебралу, ефективного при низці судинних патологій головного мозку, на культуру клітин феохромоцитоми щура РС-12. Через 2011 Article Возможные механизмы влияния церебрала на морфологические характеристики клеток феохромоцитомы крысы / Н.Х. Погорелая, Д.А. Василенко, А.Н. Макаренко, С.И. Савосько // Нейрофизиология. — 2011. — Т. 43, № 1. — С. 18-28. — Бібліогр.: 16 назв. — рос. 0028-2561 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68400 577.352 ru Нейрофизиология application/pdf Інститут фізіології ім. О.О. Богомольця НАН України
institution	Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
collection	DSpace DC
language	Russian
description	Исследовали влияния недавно предложенного органопрепарата церебрала, эффективного при ряде сосудистых патологий головного мозга, на культуру клеток феохромоцитомы крысы РС-12.
format	Article
author	Погорелая, Н.Х. Василенко, Д.А. Макаренко, А.Н. Савосько, С.И.
spellingShingle	Погорелая, Н.Х. Василенко, Д.А. Макаренко, А.Н. Савосько, С.И. Возможные механизмы влияния церебрала на морфологические характеристики клеток феохромоцитомы крысы Нейрофизиология
author_facet	Погорелая, Н.Х. Василенко, Д.А. Макаренко, А.Н. Савосько, С.И.
author_sort	Погорелая, Н.Х.
title	Возможные механизмы влияния церебрала на морфологические характеристики клеток феохромоцитомы крысы
title_short	Возможные механизмы влияния церебрала на морфологические характеристики клеток феохромоцитомы крысы
title_full	Возможные механизмы влияния церебрала на морфологические характеристики клеток феохромоцитомы крысы
title_fullStr	Возможные механизмы влияния церебрала на морфологические характеристики клеток феохромоцитомы крысы
title_full_unstemmed	Возможные механизмы влияния церебрала на морфологические характеристики клеток феохромоцитомы крысы
title_sort	возможные механизмы влияния церебрала на морфологические характеристики клеток феохромоцитомы крысы
publisher	Інститут фізіології ім. О.О. Богомольця НАН України
publishDate	2011
url	https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68400
citation_txt	Возможные механизмы влияния церебрала на морфологические характеристики клеток феохромоцитомы крысы / Н.Х. Погорелая, Д.А. Василенко, А.Н. Макаренко, С.И. Савосько // Нейрофизиология. — 2011. — Т. 43, № 1. — С. 18-28. — Бібліогр.: 16 назв. — рос.
series	Нейрофизиология
work_keys_str_mv	AT pogorelaânh vozmožnyemehanizmyvliâniâcerebralanamorfologičeskieharakteristikikletokfeohromocitomykrysy AT vasilenkoda vozmožnyemehanizmyvliâniâcerebralanamorfologičeskieharakteristikikletokfeohromocitomykrysy AT makarenkoan vozmožnyemehanizmyvliâniâcerebralanamorfologičeskieharakteristikikletokfeohromocitomykrysy AT savosʹkosi vozmožnyemehanizmyvliâniâcerebralanamorfologičeskieharakteristikikletokfeohromocitomykrysy AT pogorelaânh možlivímehanízmivplivucerebralunamorfologíčníharakteristikiklítinfeohromocitomiŝura AT vasilenkoda možlivímehanízmivplivucerebralunamorfologíčníharakteristikiklítinfeohromocitomiŝura AT makarenkoan možlivímehanízmivplivucerebralunamorfologíčníharakteristikiklítinfeohromocitomiŝura AT savosʹkosi možlivímehanízmivplivucerebralunamorfologíčníharakteristikiklítinfeohromocitomiŝura
first_indexed	2025-11-24T11:51:23Z
last_indexed	2025-11-24T11:51:23Z
_version_	1849672423179288576
fulltext	НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2011.—T. 43, № 118 УДК 577.352 Н. Х. ПОГОРЕЛАЯ1, Д. А. ВАСИЛЕНКО1, А. Н. МАКАРЕНКО2, С. И. САВОСЬКО2 ВОЗМОЖНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ВЛИЯНИЯ ЦЕРЕБРАЛА НА МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ КЛЕТОК ФЕОХРОМОЦИТОМЫ КРЫСЫ Поступила 18.03.10 Исследовали влияния недавно предложенного органопрепарата церебрала, эффективно- го при ряде сосудистых патологий головного мозга, на культуру клеток феохромоцито- мы крысы РС-12. Через 24 ч после пассирования нормальная среда культивирования в шести группах культур из семи заменялась аналогичными средами с добавлением 0.2 и 2.0 мг/мл церебрала, 400 нг/мл фактора роста нервных клеток (NGF), 1.0 мкМ блокатора высокопороговых кальциевых каналов верапамила или комбинаций 0.2 и 2.0 мг/мл цере- брала с 1.0 мкМ верапамила. На протяжении шести суток тест-периода измеряли сред- ние значения плотности культивируемых клеток, относительные количества единиц, обладающих выраженными отростками, и проективную площадь тел клеток; согласно последнему показателю рассчитывали условные диаметры клеток – диаметры круга, равновеликого их проективной площади. Выращивание клеток РС-12 в контрольных условиях не сопровождалось трансформацией их подавляющего большинства в нейро- ноподобные единицы. Воздействие церебрала в обеих использованных концентрациях обусловливало существенное подавление процесса пролиферации таких клеток, усиле- ние формирования отростков, часть которых имели типичную для нейритов структуру, и увеличение размеров клеток. В условиях воздействия NGF наблюдались аналогичные эффекты, но они были заметно более интенсивными. Проявления клеточной дифферен- цировки под влиянием церебрала развивались с несколько большей задержкой и сгла- живались раньше, чем эффекты действия NGF. Введение в среду культивирования 1.0 мкМ верапамила содействовало процессу клеточной дифференцировки; наблюдаемые эффекты были сопоставимы с результатами воздействия церебрала. Комбинации вера- памила с церебралом в обеих использованных концентрациях обеспечивали несколько более интенсивные модулирующие воздействия на клетки РС-12, чем изолированные аппликации церебрала, но эффекты не были аддитивными. Обсуждаются возможные механизмы изменений морфологических характеристик клеток РС-12 под влиянием церебрала и зависимость таких изменений от состояния системы кальциевой сигна- лизации. Полученные данные согласуются с предположением о том, что действующие начала церебрала являются трофинотропинами, инициирующими и/или усиливающими синтез NGF. КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: феохромоцитома РС-12, дифференцировка, пролиферация, церебрал, фактор роста нервных клеток (NGF), верапамил. 1 Институт физиологии им. А. А. Богомольца НАН Украины, Киев (Украина). 2 Киевский национальный университет им. Тараса Шевченко (Украина). Эл. почта: neu_nei@yahoo.com (Д. А. Василенко) alexandernmakarenko@gmail.com (А. Н. Макаренко). ВВЕДЕНИЕ Поражения сосудистой системы головного мозга (в частности, инсульты различного генеза) представ- ляют собой исключительно опасные заболевания. Ишемические инсульты более часты (их относи- тельное количество достигает 80–90 %); геморра- гические инсульты встречаются значительно реже, но они более опасны (смертность при этом виде за- болеваний заметно выше) [1, 2]. Риск церебрально- го инсульта существует почти во всех возрастных категориях. Эффективность современных методов лечения геморрагических инсультов недостаточно высока, и это заболевание, как правило, сопровож- дается последующей инвалидизацией. Поиск ле- карственных средств, проявляющих нейропротек- НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2011.—T. 43, № 1 19 ВОЗМОЖНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ВЛИЯНИЯ ЦЕРЕБРАЛА торные свойства и способствующих повышению выживаемости пациентов и снижению частоты и степени их инвалидизации в постинсультный пери- од, исключительно актуален. В качестве одного из таких средств был пред- ложен органопрепарат церебрал («Днепрофарм», Украина). Этот препарат представляет собой очи- щенную смесь пептидов и аминокислот, образу- ющихся в мозгу животных в условиях индукции острого аутогеморрагического инсульта. Результа- ты клинических испытаний показали, что цереб- рал дает положительный терапевтический эффект при ряде патологий мозговых сосудов, в том чис- ле и при геморрагическом инсульте. Наиболее ак- тивными действующими компонентами препарата, обеспечивающими такое влияние, вероятно, явля- ются пептиды, молекулы которых состоят из трех – двенадцати аминокислотных остатков. Высказано предположение, что подобные пептиды функцио- нируют как регуляторы продукции фактора роста нервных клеток (NGF). Последний, как известно, постоянно присутствует в мозгу животных и че- ловека (особенно на ранних стадиях онтогенети- ческого развития); в случаях повреждений тканей мозга продукция NGF существенно возрастает. Было показано, что введение церебрала в услови- ях экспериментального геморрагического инсульта приводило к повышению интенсивности синтеза и секреции NGF. Вместе с тем церебрал практически не влиял на синтез и секрецию данного ростового фактора у интактных животных; иными словами, действующие начала церебрала, видимо, являют- ся достаточно специфическими трофинотропина- ми [3]. Известно, что под действием NGF и ряда дру- гих факторов морфологическая дифференциров- ка незрелых нервных и нейроноподобных клеток в условиях их культивирования индуцируется и/или усиливается. Это выражается в замедлении или остановке процесса пролиферации подобных кле- ток и усилении формирования отростков (нейри- тов). Есть основания полагать, что данные процес- сы кальцийзависимы [4–9]. С учетом сказанного выше мы исследовали вли- яние церебрала на культивируемые клетки фео- хромоцитомы крысы PC-12. Клетки данной линии происходят от клеток кортикального слоя надпо- чечников; они обладают рядом свойств, приближа- ющих их к нейронам, и способны в определенных условиях трансформироваться в нейроноподобные клеточные единицы. Клетки PC-12 широко исполь- зуются в экспериментах, направленных на выяс- нение механизмов процессов клеточного роста и дифференцировки. Мы сопоставляли влияния церебрала, который добавляли в среду культивирования в двух концен- трациях, различающихся на порядок, с эффектами агента, в отношении которого церебрал, возмож- но, реализует свое регулирующее действие, т. е. NGF как такового. Анализировались также влия- ния, которые оказывает на культуру клеток PC-12 верапамил – блокатор кальциевых каналов L-типа. Кроме того, исследовались эффекты комбиниро- ванного действия церебрала и верапамила. Мы по- лагали, что полученные данные будут способство- вать выяснению механизмов действия церебрала на процессы пролиферации и дифференцировки ней- роноподобных клеточных элементов. Это, в свою очередь, может приблизить нас к пониманию ме- ханизмов терапевтического действия церебрала в условиях инсультного поражения мозга. МЕТОДИКА Опыты были проведены на клетках феохромоци- томы крысы линии PC-12, культура которых дли- тельное время поддерживается в Институте физио- логии им. А. А. Богомольца НАН Украины. Общая длительность периода культивирования данных клеток в условиях настоящего эксперимента со- ставляла семь суток. Образцы культуры в виде сус- пензии в нормальной среде (85 % RPMI-1640, 10 % термоинактивированной лошадиной сыворотки и 5 % эмбриональной телячьей сыворотки с добав- лением 400 мкг/мл гентамицина; все компоненты производства «Sigma», США) пассировали в пла- стиковые флаконы Карреля, которые находились при 37 °C в атмосфере увлажненного воздуха, обо- гащенного CO2 до 5 %. Через 6–9 ч производилось измерение исходных морфометрических характе- ристик клеток, прикрепившихся к субстрату. Для этого участки культуры фотографировали с ис- пользованием инвертированного фазовоконтраст- ного микроскопа. Через 24 ч после пасссирования, т. е. в конце лаг-периода, среду культивирования в шести исследуемых группах из семи (за исклю- чением контрольной группы 1) заменяли модифи- цированными средами, содержащими в себе тест- агенты. В группе 1 среда после замены сохраняла исходный состав. В группах 2 и 3 к аналогичной среде добавляли 0.2 и 2.0 мг/мл церебрала («Дне- НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2011.—T. 43, № 120 Н. Х. ПОГОРЕЛАЯ, Д. А. ВАСИЛЕНКО, А. Н. МАКАРЕНКО, С. И. САВОСЬКО профарм», Украина) соответственно. Культивиро- вание клеток группы 4 производилось в среде, со- держащей в себе 400 нг/мл NGF («Sigma», США), группы 5 – 1.0 мкМ верапамила («Дарница», Укра- ина). Наконец, клетки групп 6 и 7 подвергали ком- бинированному действию 0.2 и 2.0 мг/мл церебра- ла + 1.0 мкМ верапамила соответственно. После замены сред (т. е. на второй день культиви- рования) исследуемые образцы культур вновь фото- графировали, и эта процедура повторялась каждые 24 ч вплоть до конца шестидневного тест-периода. На полученных фотоизображениях измеряли плот- ность культивируемых клеток (их количество на 1 мм2 субстрата), относительное количество кле- ток, обладающих выраженными отростками, и проективную площадь тел клеток (последний па- раметр – с использованием полуавтоматического анализатора изображений). РЕЗУЛЬТАТЫ Пролиферативная активность исследуемых кле- ток характеризовалась соответственно изменени- ям плотности их локализации на поверхности при- крепления в различные сроки культивирования. Поскольку вариабельность указанного параметра на различных участках данных поверхностей была заметной, рассчитывали средние величины плот- ности для каждой группы. Для этого на фотоизоб- ражениях культур измеряли количества клеток в пределах нескольких (до 15) случайно выбранных квадратных тест-участков 400 × 400 мкм2, после чего полученные значения пересчитывали на пло- щадь 1 мм2. Исходные усредненные значения плот- ности клеток, измеренные через 6–9 ч после их пас- сирования, в разных группах составляли от 73 ± 6 до 105 ± 7 мм–2. Для более объективной характери- стики процесса пролиферации в этих группах мы использовали не натуральные, а нормированные величины данного параметра, принимая упомяну- тые исходные значения в каждой группе за 100 %. После 24 ч культивирования, т. е. в начале тест- периода, средняя нормированная плотность клеток в различных группах варьировала от 130 до 94 % относительно исходных величин. Различия между исходными значениями плотности и упомянутыми величинами в каждой группе в большинстве случа- ев не достигали уровня достоверности. Межгруп- повое сравнение плотностей, измеренных в начале тест-периода, также не показало наличия досто- Р и с. 1. Примеры микрофотографий клеток феохромоцитомы в разные сроки культивирования в различных условиях. А – клетки в первый день культивирования (7 ч после пассирования) в нормальной среде; Б – на третий день тест-периода в присутствии 2.0 м г/мл церебрала (группа 3); В – на третий день тест-периода в присутствии 400 нг/мл NGF (группа 4). Р и с. 1. Приклади мікрофотографій клітин феохромоцитоми у різні терміни культивування у відмінних умовах. А В Б 40 мкм 40 мкм 40 мкм НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2011.—T. 43, № 1 21 ВОЗМОЖНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ВЛИЯНИЯ ЦЕРЕБРАЛА 0 100 200 300 400 500 1 2 3 4 5 6 0 100 200 300 400 500 1 2 3 4 5 6 0 100 200 300 400 500 1 2 3 4 5 6 Р и с. 2. Динамика пролиферативной активности клеток РС-12 в различных условиях культивирования. А–В – графики изменений нормированных средних значений плотности клеток на субстрате (ось ординат, %) в течение тест-периода (ось абсцисс, сутки); указаны также значения ошибок среднего. За 100 % во всех случаях приняты значения плотности клеток (мм–2) в различных группах до замены нормальной среды средами, содержащими в себе тест-агенты. Группа 1 – контроль, 2–7 – культивирование в присутствии 0.2 и 2.0 мг/мл церебрала (2 и 3 соответственно), 400 нг/мл NGF (4), 1.0 мкМ верапамила (5) и комбинаций 0.2 и 2.0 мг/мл церебрала с 1.0 мкМ верапамила (6 и 7 соответственно). Р и с. 2. Динаміка проліферативної активності клітин РС-12 у різних умовах культивування. верных различий (рис. 2, А–В). На протяжении первого–третьего дней тест-периода (т. е. второго– четвертого дней культивирования) плотность кле- ток PC-12 в контрольной группе 1 увеличивалась примерно в 4.5 раза. На четвертый день данный па- раметр сохранял значение, достаточно близкое к указанному выше. В конце периода культивирова- ния плотность клеток в группе контроля заметно уменьшалась, однако при этом она более чем втрое превышала исходное значение (А–В). Культивирование клеток PC-12 в среде, содер- жащей в себе 0.2 мг/мл церебрала (группа 2), обу- словливало значительное (в пределах четвертого– шестого дней тест-периода – высокодостоверное) подавление пролиферативной активности. На про- тяжении второго-четвертого дней тест-периода плотность единиц оставалась почти постоянной, составляя в среднем 179–190 % исходного значе- ния. После этого данный параметр начинал медлен- но возрастать, и в последний (шестой) день культи- вирования плотность достигала 255 % начальной величины (рис. 2, А). Добавление к культуральной среде церебрала в большем количестве (2.0 мг/мл; группа 3) обуслов- ливало еще более сильное подавление пролифера- тивной активности клеток PC-12. На третий день тест-периода плотность клеток превышала исход- ное значение менее чем на 40 %, и примерно такой же уровень данного параметра сохранялся на чет- вертый день. Лишь на шестой день среднее значение плотности несколько возрастало, достигая 240 % исходного (рис. 2, Б). Введение в среду культивирования 400 нг/мл NGF в группе 4 практически полностью подавляло про- лиферативную активность культивируемых клеток PC-12. На вторые сутки после начала воздействия указанного фактора плотность клеток не только не возрастала; она уменьшалась более чем вдвое (в среднем до 49 % исходного значения). На протяже- нии последующих трех дней культивирования ука- занный параметр сохранялся на уровне ниже исхо- дного (58–76 %). Только на шестой день значение средней плотности клеток PC-12 превышало началь- ную величину, однако лишь на 13 % (рис. 2, В). Добавление к среде 1.0 мкМ верапамила (груп- па 5) в целом приводило к некоторому снижению пролиферативной активности по сравнению с кон- тролем, но оно было далеко не полным, как в слу- чае действия NGF. На второй день тест-периода плотность клеток PC-12 по сравнению с исходной почти не увеличилась; затем этот параметр начи- нал возрастать, но заметно менее интенсивно, чем в контрольной группе 1. На шестой день плот- ность клеток превышала начальное значение при- мерно в 2.8 раза. При этом снижения плотности на пятый-шестой дни тест-периода культивирования (что было характерно для контрольной группы 1) в группе 5 не наблюдалось (рис. 2, В). % сутки 1 1 1 5 4 2 3 76 % % А Б В НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2011.—T. 43, № 122 Н. Х. ПОГОРЕЛАЯ, Д. А. ВАСИЛЕНКО, А. Н. МАКАРЕНКО, С. И. САВОСЬКО 0 10 20 30 40 50 60 1 2 3 4 5 6 0 10 20 30 40 50 60 1 2 3 4 5 6 0 10 20 30 40 50 60 1 2 3 4 5 6 Р и с. 3. Динамика относительных количеств (%) клеток РС-12, обладающих хорошо выраженными отростками, в течение тест- периода (сутки). Обозначения групп те же, что и на рис. 2. Р и с. 3. Динаміка відносних кількостей (%) клітин РС-12 з добре вираженими відростками впродовж тест-періоду (доби). Комбинированное воздействие церебрала и ве- рапамила на культуру клеток PC-12 в целом обу- словливало несколько более интенсивные эффек- ты подавления пролиферации, чем изолированное влияние церебрала в обеих тестированных дозах. Оба графика, отражающих динамику влияний 0.2 и 2.0 мг/мл церебрала + 1.0 мкМ верапамила (группы 6 и 7), располагались в основном ниже кривых, со- ответствующих эффектам изолированного добав- ления церебрала в указанных дозах (группы 2 и 3; рис. 2, А, Б), хотя различия между соответственны- ми значениями в те или иные дни наблюдения были в основном недостоверными. Таким образом, в об- щем можно прийти к заключению, что верапамил в дозе 1.0 мкМ в некоторой степени потенцирует ан- типролиферативные эффекты церебрала. Динамика количества клеток, обладающих от- ростками. Перед началом культивирования клет- ки PC-12, находясь в суспензии, выглядели шаро- образными или эллипсоидальными. Через 6–9 ч после пассирования клетки, осевшие на субстрат, в большинстве сохраняли подобную форму (рис. 1, А). Однако через 24 ч такие клетки, прикрепившие- ся к субстрату, достаточно часто проявляли первич- ные признаки морфологической дифференцировки. Подобные единицы распластывались по субстрату, их тела приобретали полигональную форму, и ци- топлазма многих из них формировала выступы, со- измеримые по длине с размером тела клетки или превышающие его. Подобные образования, не име- ющие типичной нейритоподобной структуры, обыч- но квалифицируются как псевдоотростки [7–9]. В дальнейшем относительное количество клеток, ко- торые обладали такими отростками, в контрольной группе 1 прогрессивно уменьшалось, а доля кле- ток сфероидной или эллипсоидальной формы воз- растала. В первый день тест-периода среди клеток контрольной группы 1 единицы, обладающие вы- раженными отростками, составляли более трети; в конце же упомянутого периода их количество лишь несколько превышало 7 % (рис. 3, А–В). Тест-культивирование клеток PC-12 в средах, ко- торые содержали в себе факторы, способствующие процессу клеточной дифференцировки, обусловли- вало существенное усиление образования отрост- ков. У многих клеток такие отростки имели значи- тельную длину и приобретали нейритоподобную форму. В части случаев на них наблюдались ветв- ления второго, а у небольшой части клеток (обыч- но менее 1–0.5 %) – даже третьего порядка (рис. 1, Б, В). У других единиц характеристики цитоплаз- матических выступов (даже тех, которые имели довольно значительную длину) соответствовали таковым псевдоотростков (Б). Многие же клет- ки вообще были лишены длинных отростков и со- храняли сглаженную полигональную или округлую форму. Подобная гетерогенность наблюдаемой кар- тины заставила нас при подсчете соответствующих групп клеток учитывать все единицы, у которых длина отростков превышала размеры клеточного тела, независимо от того, были такие отростки по- добны нейритам или нет. В различных экспериментальных группах отно- сительные количества клеток, обладающих отрост- % сутки % % А Б В 1 1 1 2 3 4 6 7 5 НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2011.—T. 43, № 1 23 ВОЗМОЖНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ВЛИЯНИЯ ЦЕРЕБРАЛА Р и с. 4. Динамика нормированных средних значений (%) условного диаметра (Dусл) тел клеток РС-12 в течение тест-периода. За 100 % во всех случаях приняты значения средних Dусл в разных группах до замены сред (перед началом действия тест-агентов). Остальные обозначения те же, что и на рис. 2. Р и с. 4. Динаміка нормованих середніх значень (%) умовного діаметра тіл клітин РС-12 впродовж тест-періоду. ками, в первый день тест-периода (т. е. после заме- ны нормальной среды тест-средами) варьировали от 32.2 до 27.8 %. Иначе говоря, они были впол- не сопоставимы с соответствующими значениями в группе 1. В группе 2, подвергнутой воздействию церебрала в концентрации 0.2 мг/мл, доля клеток с отростками поддерживалась примерно постоянной до третьего дня тест-периода. На четвертый день этого периода количество клеток с отростками воз- растало до 36.1 %. Затем количество клеток группы 2, имевших отростки, заметно уменьшалось (рис. 3, А). Динамика количества подобных клеток в груп- пе 3, в которой в среду культивирования добавляли 2.0 мг/мл церебрала, демонстрировала определен- ное сходство с описанной выше с той разницей, что достаточно резкое (до 37.2 %) увеличение количе- ства единиц, обладавших отростками, происходило раньше – на третий день тест-периода (Б). В культуре, находящейся в среде, которая содер- жала в себе NGF (группа 4), резкое увеличение числа клеток, обладавших отростками, происхо- дило уже через одни сутки после начала действия данного фактора. В этой группе относительное ко- личество таких единиц на протяжении второго- третьего дней тест-периода превышало 50 %. Затем данный показатель заметно уменьшался, но даже в конце периода культивирования более трети на- блюдаемых клеток имели отростки значительной длины (рис. 3, В). Воздействие 1.0 мкМ верапамила (группа 5) также обусловливало существенное уве- личение количества культивируемых клеток, обла- дающих отростками. Однако данный эффект был не столь интенсивным, как в условиях влияния NGF, и максимум достигался лишь на четвертые сутки по- сле смены среды. К концу тест-периода упомяну- тый показатель заметно падал, но продолжал зна- чительно превышать таковой в контрольной группе 1 (В). В условиях культивирования в среде, содержа- щей в себе комбинацию 0.2 мг/мл церебрала с вера- памилом (группа 6), количество клеток с отростка- ми на протяжении первых двух дней тест-периода несколько превышало аналогичный показатель в условиях изолированного действия церебрала в указанной концентрации. Позднее подобной раз- ницы в общем не наблюдалось (рис. 3, А). Если же верапамил добавлялся к 2.0 мг/мл церебрала (груп- па 7), превышения количества клеток с отростка- ми по сравнению с соответствующим показателем при изолированном действии церебрала в указан- ной концентрации не отмечалось (Б). Динамика размеров клеток PC-12. Как упомина- лось в Методике, непосредственно измеряемым па- раметром, характеризующим размеры культивируе- мых клеток, была проективная площадь их тел. При измерении данного показателя из рассмотрения ис- ключались отростки, толщина которых была ме- нее 0.2–0.15 размера тела клетки. Метод измерения проективной площади клеточной единицы, широ- ко используемый в морфометрических исследова- ниях и применявшийся в нашей лаборатории ранее [7–9], позволяет достаточно объективно характе- ризовать величины двумерных объектов сложной гео метрической формы. Тем не менее он не вполне удобен, поскольку получаемые значения пропорци- ональны квадрату линейных размеров объекта. По- 100 120 140 160 1 2 3 4 5 6 100 120 140 160 1 2 3 4 5 6 100 120 140 160 1 2 3 4 5 6 % сутки % % А Б В 1 1 1 2 3 4 6 7 5 НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2011.—T. 43, № 124 Н. Х. ПОГОРЕЛАЯ, Д. А. ВАСИЛЕНКО, А. Н. МАКАРЕНКО, С. И. САВОСЬКО пытки же непосредственно определять линейные размеры (например, диаметры аппроксимирующего эллипса, периметр профиля), как правило, не поз- воляют обеспечить удовлетворительную точность. Поэтому в настоящей работе мы использовали под- ход, применявшийся ранее, – вычисление условно- го диаметра (Dусл) тела рассматриваемой единицы, т. е. диаметра круга, равновеликого измеренной проективной площади. Такой прием позволяет све- сти характеристики линейных размеров объектов сложной формы к единственному параметру, хотя и условному, что существенно упрощает статисти- ческую обработку. Подобный метод весьма прост и в то же время продемонстрировал свою достаточно высокую валидность [10]. Значения Dусл, рассчитан- ные соответственно значениям проективных пло- щадей, в первый день культивирования (через 6–9 ч после пассирования) составляли в различных груп- пах от 20.8 ± 0.4 до 22.0 ± 0.3 мкм. Эти величины в каждом случае принимали за 100 %, и динамика размеров культивируемых клеток, соответственно, характеризовалась изменениями нормированных средних значений Dусл. В первый день тест-периода средние значения Dусл тел клеток PC-12 различных групп варьирова- ли от 106.7 до 113.9 % исходных величин. Напом- ним, что в первый день указанного периода клет- ки, прикрепившиеся к субстрату, распластывались по нему (т. е. уплощались), причем многие из них обладали псевдоотростками. Проективная площадь последних при измерениях не учитывалась. В кон- трольной группе 1 средний Dусл, несущественно уменьшившийся на второй день, в течение двух по- следующих суток возрастал (до 114.4 % исходно- го; различие недостоверно, P > 0.05), а к концу пе- риода культивирования практически возвращался к начальному значению (рис. 4). В группе 2 при дей- ствии церебрала в концентрации 0.2 мг/мл средний Dусл клеток на третий день тест-периода значимо (P < < 0.05) увеличивался, составляя 128.2 % исходно- го, после чего следовало падение этого параметра (А). Добавление к среде 2.0 мг/мл церебрала обу- словливало в группе 3 весьма значительное воз- растание размеров исследуемых клеток (средний Dусл достигал 138.0 %; P < 0.01) уже на второй день тест-периода. Практически то же значение сохра- нялось и на третий день, но затем, как и в группе 2, значения Dусл уменьшалось (Б). Воздействие NGF приводило к быстрому и очень существенному увеличению Dусл культивируемых клеток PC-12 в течение первых трех дней тест- периода. Средняя величина данного параметра на третий день достигала 166.4 % исходной (это от- ражало увеличение среднего значения проектив- ной площади почти в 2.8 раза). Затем такое увели- чение сменялось достаточно быстрым падением. В конце периода культивирования средний Dусл кле- ток группы 5, однако, все еще превышал исходную величину почти на 20 %. Воздействие 1.0 мкМ ве- рапамила (группа 5) приводило к не очень значи- тельному (примерно на 25 %) увеличению Dусл кле- ток PC-12 на третий день тест-периода, после чего этот показатель уменьшался (рис. 4, В). Если к церебралу в концентрации 0.2 мг/мл до- бавляли 1.0 мкМ верапамила (группа 6), последний агент заметно усиливал влияние церебрала, обу- словливая более значительное увеличение разме- ров культивируемых клеток. На второй и четвертый дни тест-периода разница между эффектами изоли- рованного действия 0.2 мг/мл церебрала и комби- нации последнего с верапамилом была достовер- ной (рис. 4, А). Добавление же верапамила к 2.0 мг/мл церебрала практически не изменяло влияния последнего на размеры культивируемых клеток. Соответствующие графики были очень близки друг к другу, и значения Dусл во все дни тест-периода не отличались значимо от аналогичных величин в условиях изолированного действия церебрала в упомянутой высокой дозе (Б). ОБСУЖДЕНИЕ Полученные в нашей работе данные можно резю- мировать следующим образом. Культивирование клеток феохромоцитомы линии PC-12 в контроль- ных условиях (с использованием одной из модифи- каций стандартной методики [11]) сопровождалось весьма интенсивной пролиферацией примерно до пятого дня тест-периода, после чего этот про- цесс заметно подавлялся. Значительная часть (бо- лее трети) контрольных клеток после завершения лаг-периода и прикрепления к субстрату имели хо- рошо выраженные отростки. Структура послед- них, однако, соответствовала структуре так назы- ваемых псевдоотростков (несмотря на то, что у небольшой части из них даже могли иметься ветв- ления второго порядка). В ходе культивирования в контрольных условиях типичные нейритоподоб- ные отростки у клеток PC-12 за редчайшими ис- ключениями не развивались. Относительное коли- чество единиц, обладающих отростками, к концу НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2011.—T. 43, № 1 25 ВОЗМОЖНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ВЛИЯНИЯ ЦЕРЕБРАЛА периода культивирования уменьшалось примерно в пять раз. Следует полагать, что во всяком случае частично это обусловливалось ретракцией отрост- ков. Размеры клеточных тел исследуемых единиц контрольной группы в ходе культивирования из- менялись сравнительно слабо. Таким образом, вы- ращивание клеток PC-12 в контрольных условиях не сопровождалось дифференцировкой подавляю- щего большинства этих клеток и их трансформа- цией в нейроноподобные единицы (хотя какая-то часть данных клеток сохраняли признаки первич- ной дифференцировки и в конце тест-периода). Добавление к среде культивирования 400 нг/мл NGF полностью подавляло пролиферацию клеток PC-12 и весьма быстро вызывало интенсивное об- разование отростков у таких клеток. Относитель- ное количество клеток, обладающих отростками значительной длины, на второй-третий дни тест- периода в условиях воздействия NGF превышало 50 %. У многих подобных клеток отростки по сво- им морфологическим характеристикам полностью соответствовали нейритам. Их длина значительно превышала размеры тел клеток, а часть таких от- ростков обладали ветвлениями второго и даже тре- тьего порядков. Вместе с тем у другой части кле- ток NGF-группы 4 морфологические особенности отростков (значительная относительная толщина, нечеткая ограниченность от клеточного тела) соот- ветствовали таковым псевдоотростков. У осталь- ных же клеток псевдоотростки цитоплазмы были небольшими, а заметная часть клеток в услови- ях действия NGF сохраняли сферическую или эл- липсоидную форму и вообще не имели отростков. Подобная гетерогенность наблюдаемых морфоло- гических характеристик и обусловила то обстоя- тельство, что в пределах экспериментальных групп 2–7 мы не дифференцировали клетки, имеющие или нейриты, или псевдоотростки, а подсчитывали лишь общее количество единиц, у которых отрост- ки были выражены в достаточной степени (превы- шали размеры тела). Кроме того, мы в настоящей работе не анализировали подробно динамику дли- ны отростков, понимая, что изменения данного по- казателя в значительной мере субъективны и по- добные оценки будут весьма приблизительными. Наиболее вероятной основной причиной отмечен- ной гетерогенности морфологических характери- стик клеток PC-12, у которых индуцировалась диф- ференцировка, является недостаточная степень синхронизации культуры в процессе ее выращива- ния, предшествующего пассированию и тестирова- нию эффектов исследуемых агентов. Другим отчетливым аспектом влияния NGF на культивируемые клетки PC-12 являлось значитель- ное (в среднем более чем полуторакратное) уве- личение линейных размеров исследуемых единиц, отчетливо выраженное на протяжении почти всего тест-периода. Таким образом, наши данные полно- стью согласуются с полученными ранее многочис- ленными свидетельствами того, что NGF является мощным индуктором процесса клеточной диффе- ренцировки [4, 5]. Церебрал в обеих исследованных тест-дозах зна- чительно подавлял пролиферацию клеток PC-12 и существенно модифицировал кривые роста. После кратковременного этапа увеличения плотность кле- ток соответствующих групп на протяжении опре- деленных отрезков тест-периода поддерживалась на более или менее постоянных уровнях, достовер- но меньших, чем в контроле. Под воздействием це- ребрала формирование отростков заметно усили- валось (хотя и не в такой степени, как в условиях прямого влияния NGF). У известной части клеток PC-12, подвергнутых влиянию церебрала в обеих тестируемых концентрациях, отростки имели ти- пичную нейритоподобную структуру (рис. 1, Б). Влияние церебрала сказывалось и на размерах клеток соответствующих групп (их Dусл), причем отличия от контроля в пределах основной части тест-периода были достоверными. В действии це- ребрала проявлялась определенная зависимость от дозы. И подавление пролиферации, и стимуляция развития отростков, и увеличение размеров клеток РС-12 были заметно более значительными в случае более высокой концентрации данного препарата в среде культивирования (2.0 мг/мл). Помимо меньшей интенсивности эффектов це- ребрала по сравнению с таковыми NGF, видимо, следует отметить их несколько бóльшую ограни- ченность во времени. Эти эффекты проявлялись с более длительной задержкой относительно момен- та смены сред, а сглаживались в целом несколько раньше, чем проявления действия NGF. Таким образом, результаты нашей работы вполне согласуются с представлениями о том, что эффек- ты церебрала, включающего в себя, очевидно, ряд трофинотропных факторов пептидной природы, в значительной степени основываются на усиле- нии синтеза NGF под влиянием данного препарата. Очевидно, церебрал способен индуцировать повы- шение продукции NGF и проявление соответству- ющих феноменов не только in vivo, но и в услови- НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2011.—T. 43, № 126 Н. Х. ПОГОРЕЛАЯ, Д. А. ВАСИЛЕНКО, А. Н. МАКАРЕНКО, С. И. САВОСЬКО ях культивирования клеточных линий, способных к дифференцировке и трансформации в нейроно- подобные элементы (к таким линиям относятся и клетки РС-12). В числе общепринятых критериев морфологиче- ской дифференцировки обычно упоминается триа- да признаков – угнетение митотической активно- сти клеток, изменение их размеров и образование нейритов [4, 8]. Результаты настоящих эксперимен- тов свидетельствуют о том, что в исследованной культуре процессы индуцированной дифференци- ровки протекали далеко не синхронизированно и однозначно и наблюдаемая в динамике морфоло- гическая картина характеризовалась существенной гетерогенностью. Трансформация значительной ча- сти клеток РС-12 в нейроноподобные единицы про- исходила в определенных временны́х интервалах фактически параллельно с продолжающейся ин- тенсивной пролиферацией, а динамика изменений размеров исследуемых единиц проявляла лишь от- даленное сходство с динамикой количества клеток, обладающих выраженными отростками. Среди по- следних далеко не все можно было рассматривать как соответствующие по своим характеристикам нейритам. Подобная гетерогенность морфологиче- ской картины и дивергенция процессов клеточно- го роста и дифференцировки были в общем доста- точно отчетливо выражены и в других предыдущих исследованиях, проведенных на клетках феохромо- цитомы крысы [8, 9, 12, 13] и в работах на ином объекте – клетках нейробластомы мыши N1E-115 [7], однако внимание на этом аспекте не всегда ак- центировалось. В наших экспериментах выявилась некоторая за- висимость наблюдаемых эффектов церебрала от действия агента, влияющего на кальциевую сиг- нализацию, – блокатора высокопоговых кальцие- вых каналов верапамила. Процессы роста и диффе- ренцировки клеток в высокой степени зависимы от уровня свободного кальция в их цитоплазме ([Ca2+]i), причем такая зависимость достаточно сложна [6, 8, 9, 14]. Сопоставление результатов различных ис- следований заставило прийти к выводу, что подавле- ние процесса пролиферации и развитие клеточных отростков у клеток, способных к дифференциров- ке, обеспечиваются лишь в пределах достаточно узких диапазонов [Ca2+]i [15]. Поэтому применение блокаторов кальциевых каналов в опытах на одних объектах стимулировало рост нейритов, тогда как на других объектах данный процесс в указанных условиях либо подавлялся, либо не испытывал из- менений (см. [8, 9]). Предполагается, что сдвиги [Ca2+]i могут тормозить либо активировать клеточ- ную дифференцировку в зависимости от исходно- го значения названного показателя в тех или иных клетках. Кроме того, эффекты упомянутых блока- торов, естественно, зависят от их концентрации, а чувствительность клеток к данным агентам в ходе культивирования существенно изменяется. В предыдущих работах, проведенных в нашей лаборатории, было показано, что воздействия бло- каторов кальциевых каналов нифедипина и вера- памила на клетки феохромоцитомы крысы и ней- робластомы мыши могут приводить к весьма различным эффектам. В частности, было обнару- жено, что верапамил в концентрации 1.0 мкМ су- щественно усиливал признаки морфологической дифференцировки клеток нейробластомы N1E-115, тогда как концентрация этого блокатора 0.01 мкМ была неэффективной, а 100 мкМ обусловливали существенное общее угнетение жизнедеятельно- сти упомянутых клеток [7]. Результаты настоящих опытов на другом объекте (клетках феохромоци- томы РС-12) вполне согласуются с приведенными данными. Вполне сопоставимыми оказались и ре- зультаты ранее выполненных опытов на культуре клеток феохромоцитомы с использованием другого кальциевого блокатора – нифедипина [8]. В настоящих опытах верапамил в концентрации 1.0 мкМ в некоторой степени подавлял пролифе- рацию клеток РС-12 на протяжении тест-периода, поддерживал относительное количество клеток, обладающих отростками, на сравнительно посто- янном уровне (более высоком, чем в контроле) и обеспечивал некоторое увеличение размеров ис- следуемых клеток на определенном отрезке упомя- нутого периода. Таким образом, можно заключить, что верапамил в указанной дозе в общем содей- ствует процессу дифференцировки клеток РС-12, хотя и не в такой степени, как NGF. Эффекты вера- памила были в целом сопоставимы по интенсивно- сти с влияниями 0.2 мг/мл церебрала, но несколько слабее, чем эффекты последнего в более высокой концентрации. Предполагается, что действие блокаторов каль- циевых каналов в определенных концентрациях способно ограничивать избыточное поступление кальция в клетку и содействовать поддержанию неких значений [Ca2+]i, оптимальных для про- цесса дифференцировки [7, 8, 15]. Как показано, сам этот процесс усиливает экспрессию кальцие- вых каналов (в том числе и низкопороговых, LVA), НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2011.—T. 43, № 1 27 ВОЗМОЖНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ВЛИЯНИЯ ЦЕРЕБРАЛА что должно приводить к увеличению [Ca2+]i и мо- жет вывести данный показатель из оптимального диапазона [6–8, 15]. Воздействие блокаторов вы- сокопороговых кальциевых каналов приводит к заметной модуляции не только высоко-, но и низко- пороговых компонентов кальциевого тока; измене- ния данных компонентов на ранних этапах культи- вирования могут оказывать решающее воздействие на процесс дифференцировки [7, 8]. Таким обра- зом, механизмы воздействия блокаторов кальци- евых токов на процессы клеточного роста и диф- ференцировки весьма сложны, тем более что роли высоко- и низкопороговых кальциевых каналов и характер взаимоотношений активности этих кана- лов, уровня внутриклеточного кальция и состояния цитоскелета (т. е. ключевых факторов, влияющих на упомянутые процессы) на разных стадиях раз- вития нейроноподобных клеток могут существен- но различаться [4, 6, 12, 16]. Анализируя полученные нами данные, очевид- но, следует подчеркнуть не только выявленную за- висимость эффектов церебрала от модуляции по- ступления кальция в клетки РС-12, обусловленной влиянием блокатора кальциевых каналов, но и опре- деленную ограниченность такой зависимости. Мож- но констатировать, что эффекты церебрала в обе- их использованных концентрациях и верапамила в дозе 1.0 мкМ не были аддитивными. Уже упомина- лось, что совместное действие указанных агентов несколько (обычно статистически недостоверно) усиливало антипролиферативную активность по сравнению с таковой при изолированном действии церебрала. В то же время подобная комбинация обу- словливала повышение количества единиц, облада- ющих отростками, и некоторое увеличение раз- меров клеток РС-12 только в случае использования церебрала в меньшей концентрации (0.2 мг/мл). При более высокой дозе этого препарата верапамил уже не усиливал данных аспектов его действия. Н. Х. Погорєла1, Д. А. Василенко1, О. М. Макаренко2, С. І. Савосько2 МОЖЛИВІ МЕХАНІЗМИ ВПЛИВУ ЦЕРЕБРАЛУ НА МОРФОЛОГІЧНІ ХАРАКТЕРИСТИКИ КЛІТИН ФЕОХРОМОЦИТОМИ ЩУРА 1 Інститут фізіології ім. О. О. Богомольця НАН України, Київ (Україна). 2 Київський національний університет ім. Тараса Шевчен- ка (Україна). Р е з ю м е Досліджували впливи нещодавно запропонованого органо- препарату церебралу, ефективного при низці судинних па- тологій головного мозку, на культуру клітин феохромоцито- ми щура РС-12. Через 24 год після пасирування нормальне середовище культивування в шести групах культур із семи замінювалось аналогічними середовищами з додаванням 0.2 та 2.0 мг/мл церебралу, 400 нг/мл фактора росту нер- вових клітин (NGF), 1.0 мкМ блокатора високопорогових кальцієвих каналів верапамілу і комбінацій 0.2 та 2.0 мг/мл церебралу з 1.0 мкМ верапамілу. Протягом шести діб тест- періоду вимірювали середні значення щільності культивова- них клітин, відносні кількості одиниць, які мають виражені відростки, та площу тіл клітин; згідно з останнім показни- ком розраховували умовні діаметри клітин – діаметри кола, рівновеликого їх проективній площі. Вирощування клітин РС-12 у контрольних умовах не супроводжувалося транс- формацією їх переважної більшості в нейроноподібні оди- ниці. Дія церебралу в обох використаних концентраціях зу- мовлювала істотне пригнічення процесу проліферації таких клітин, посилення формування відростків, частина котрих мала типову для нейритів структуру, та збільшення розмірів клітин. В умовах дії NGF спостерігались аналогічні ефекти, але вони були помітно більш інтенсивними. Прояви клітин- ного диференціювання під впливом церебралу розвивали- ся з дещо більшою затримкою і згладжувалися раніше, ніж ефекти дії NGF. Уведення в середовище культивування 1.0 мкМ верапамілу сприяло процесу клітинного диференцію- вання; спостережувані ефекти були співставними з резуль- татами дії церебралу. Комбінація верапамілу із церебралом в обох використаних концентраціях забезпечувала дещо ін- тенсивніші модулюючі дії на клітини РС-12, ніж ізольова- ні аплікації церебралу, проте ефекти не були адитивними. Обговорюються можливі механізми змін морфологічних ха- рактеристик клітин РС-12 під впливом церебралу і залеж- ність таких змін від стану системи кальцієвої сигналізації. Отримані дані узгоджуються з припущенням про те, що ді- ючі основи церебралу є трофінотропінами, що ініціюють та/або посилюють синтез NGF. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. В. И. Гузева, М. Л. Чухловина, Е. М. Мацукатова, “Иммунологические аспекты патогенеза геморрагических инсультов”, Юбилейн. Х конф. по нейроиммунологии, 2, № 49, 223-297 (2001). 2. Е. И. Гусев, В. И. Скворцова, Ишемия головного мозга, Медицина, Москва (2001). 3. А. Н. Макаренко, И. Г. Васильева, “Нейроактивирующий механизм действия трофинотропина церебрала”, Эксперим. и клин. фармакология, 67, № 4, 12-15 (2004). 4. J. D. Pollock, M. Krepnin, and B. Rudy, “Differential effects of NGF, FGF, EGF, cAMP and dexamethasone on neurite outgrowth and sodium channel expression in PC-12 cells,” J. Neurosci., 10, 2626-2637 (1990). 5. K. Tatsuro, “Molecular and cellular mechanisms of neuronal degeneration caused by nerve growth factor НЕЙРОФИЗИОЛОГИЯ / NEUROPHYSIOLOGY.—2011.—T. 43, № 128 Н. Х. ПОГОРЕЛАЯ, Д. А. ВАСИЛЕНКО, А. Н. МАКАРЕНКО, С. И. САВОСЬКО deprivation approached through PC-12 cell culture,” Prog. Neuropsychopharm. Biol. Psychiat., 16, 95-106 (1992). 6. M. Nattson and S. Kater, “Calcium regulation of neurite elongation and growth cone motility,” J. Neurosci. Res., 7, 4034-4043 (1987). 7. С. В. Вятченко-Карпинский, Н. Х. Погорелая, А. Е. Тохтуев, М. Б. Седова, “Влияние верапамила на морфологическую дифференцировку и низкопороговый кальциевый ток клеток нейробластомы мыши”, Нейрофизиология / Neurophysiology, 27, № 4, 261-267 (1995). 8. A. M. Starikova, M. A. Chavanov, N. Ch. Pogorelaya, and P. G. Kostyuk, “Nifedipine-induced morphological differentiation of rat pheochromocytoma cells,” Neuroscience, 86, No. 2, 611-617 (1998). 9. A. M. Starikova, N. Ch. Pogorelaya, and P. G. Kostyuk, “Long-term depolarization changes morphological parameters of PC12 cells,” Neuroscience, 95, No. 3, 923-926 (1999). 10. Д. А. Василенко, Л. П. Войтенко, У. Вуттиг, М. Мюллер, “Сравнительные размеры проприоспинальных нейронов различных структурно-функциональных групп у кошки”, Нейрофизиология, 16, № 2, 238-247 (1984). 11. L. A. Greene and A. S. Tischler, “PC12 pheochromocytoma cultures in neurobiological research,” Adv. Cell. Neurobiol., 3, 373-414 (1982). 12. А. М. Старікова, Н. Х. Погорєла, “Вплив тривалої деполяризації на морфологічні характеристики клітин феохромоцитоми щура”, Нейрофизиология / Neurophysiology, 31, № 2, 144-149 (1999). 13. A. L. Hughes, L. Gollapudi, T. L. Sladek, et al., “Mediation of nerve growth factor-driven cell cycle arrest in PC12 cells by p53. Simultaneous differentiation and proliferation subsequent to p53 functional inactivation,” J. Biol. Chem., 48, No. 275, 37829-37837 (2000). 14. M. Mattson, A. Taylor-Hurter, and S. Kater, “Neurite outgrowth in individual neurons of a neuronal population is differentially regulated by calcium and cyclic AMP,” J. Neurosci., 8, 1704- 1711 (1988). 15. F. A. Al-Mohanna, J. Cave, and S. R. Bolsover, “A narrow window of intracellular calcium concentration is optimal for neurite outgrowth in rat sensory neurons,” Dev. Brain Res., 70, 282-290 (1992). 16. D. Vaudry, P. J. Stork, P. Lazarovici, et al., “Signaling pathways for PC12 cell differentiation” making the right connections,” Science, 5573, No. 296, 1648-1649 (2002).

Возможные механизмы влияния церебрала на морфологические характеристики клеток феохромоцитомы крысы

Institution

Ähnliche Einträge