К механизму осмотической протекции эритроцитов. I. Модель осмометра
Исследованы свойства простой модели осмотического баланса в эритроцитах, включающей вклады внутриклеточных электролитов и неидеальные осмотические свойства гемоглобина. На основании анализа этой модели предложены два механизма, которые могут участвовать в повышении устойчивости эритроцитов к гипотон...
Saved in:
| Published in: | Проблемы криобиологии |
|---|---|
| Date: | 2011 |
| Main Authors: | , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2011
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68460 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | К механизму осмотической протекции эритроцитов. I. Модель осмометра / С.В. Руденко, Е.М. Щетинина, Е.Л. Воловельская // Проблемы криобиологии. — 2011. — Т. 21, № 4. — С. 377-384. — Бібліогр.: 17 назв. — рос., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860147630853586944 |
|---|---|
| author | Руденко, С.В. Щетинина, Е.М. Воловельская, Е.Л. |
| author_facet | Руденко, С.В. Щетинина, Е.М. Воловельская, Е.Л. |
| citation_txt | К механизму осмотической протекции эритроцитов. I. Модель осмометра / С.В. Руденко, Е.М. Щетинина, Е.Л. Воловельская // Проблемы криобиологии. — 2011. — Т. 21, № 4. — С. 377-384. — Бібліогр.: 17 назв. — рос., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии |
| description | Исследованы свойства простой модели осмотического баланса в эритроцитах, включающей вклады внутриклеточных электролитов и неидеальные осмотические свойства гемоглобина. На основании анализа этой модели предложены два механизма, которые могут участвовать в повышении устойчивости эритроцитов к гипотоническим средам, индуцированной различными агентами. Один механизм связан с протектирующим сбросом внутриклеточных электролитов, в частности анионов хлора, другой - с изменением внутриклеточной осмолярности, предположительно, за счет деградации тетрамеров гемоглобина в димеры с одновременным перераспределением внутриклеточных электролитов. Показаны пути экспериментальной проверки предложенных механизмов.
У роботі досліджено властивості простої моделі осмотичного балансу в еритроцитах, яка включає внески внутрішньоклітинних електролітів і неідеальні осмотичні властивості гемоглобіну. На основі аналізу цієї моделі запропоновано два механізми, які можуть бути задіяні у збільшенні стійкості еритроцитів до гіпотонічних середовищ, індукованої різними агентами. Один механізм пов’язаний з протектуючим скиданням внутрішньоклітинних електролітів, зокрема аніонів хлору, другий –зі зміною внутрішньоклітинної осмолярності, можливо, за рахунок деградації тетрамерів гемоглобіну в дімери з одночасним перерозподілом внутрішньоклітинних електролітів. Показано шляхи експериментальної перевірки запропонованих механізмів.
The properties of simple model of osmotic balance in erythrocytes involving the contributions of intracellular electrolytes and non-ideal osmotic properties of hemoglobin were investigated. Analyzing this model we suggested two mechanisms that may take part in the rise of erythrocyte resistance to hypotonic media induced by different agents. One mechanism is associated with protecting release of intracellular electrolytes, in particular, chloride anions, the second one is associated with the change of intracellular osmolarity presumably due to degradation of hemoglobin tetramers into dimers with a simultaneous redistribution of intracellular electrolytes. The ways for experimental testing of the suggested mechanisms have been shown.
|
| first_indexed | 2025-12-07T17:50:21Z |
| format | Article |
| fulltext |
377
В условиях криоконсервирования эритроциты
подвергаются значительным осмотическим на-
грузкам, которые ведут к их повреждению и лизису.
Механизм, лежащий в основе этого повреждения,
имеет коллоидно-осмотическую природу и напоми-
нает гипотонический гемолиз эритроцитов. Извест-
но, что многие амфифильные соединения различ-
ной химической природы имеют протектирующее
влияние на гипотонический гемолиз, однако меха-
низм этого явления во многом остается неясным
[3]. Ранее установили [2], что некоторые офтальмо-
логические препараты, будучи экзогенными аген-
тами, встраиваются в мембрану эритроцитов и
изменяют их форму, а также уменьшают степень
гипотонического гемолиза клеток [3]. Анализ воз-
можных механизмов показал, что наблюдаемая
During cryopreservation the erythrocytes are expo-
sed to significant osmotic loads which cause their da-
mage and lysis. The mechanism being the basis of this
damage is of colloidal osmotic nature and resembles
erythrocyte hypotonic hemolysis. It is known that many
amphiphilic compounds of various chemical origin have
a protective effect in relation to hypotonic hemolysis
but the mechanism of this phenomenon has mainly re-
mained unclear [3]. Previously we established [2] that
some ophthalmologic preparations being exogenic
agents incorporate into erythrocyte membrane and
change their shape as well as decreased the rate of
hypotonic hemolysis of cells [3]. The analysis of pos-
sible mechanisms has shown that an observed protec-
tion can not be explained by the increase of cell
surface-to-volume ratio and the change of membrane
problems
of cryobiology
Vol. 21, 2011, №4
проблемы
криобиологии
Т. 21, 2011, №4
УДК 576.324:612.111
С.В. РУДЕНКО1, Е.М. ЩЕТИНИНА2, Е.Л. ВОЛОВЕЛЬСКАЯ1
К механизму осмотической протекции эритроцитов.
I. Модель осмометра
UDC 576.324:612.111
S.V. RUDENKO1, E.M. SHCHETININA2, E.L. VOLOVELSKAYA1
On the Mechanism of Osmotic Protection of Erythrocytes.
I. Model of Osmometer
Исследовали свойства простой модели осмотического баланса в эритроцитах, включающей вклады внутриклеточных
электролитов и неидеальные осмотические свойства гемоглобина. На основе анализа этой модели предложены два механизма,
которые могут участвовать в повышении устойчивости эритроцитов к гипотоническим средам, индуцированной различными
агентами. Один механизм связан с протектирующим сбросом внутриклеточных электролитов, в частности анионов хлора,
другой – с изменением внутриклеточной осмолярности, предположительно, за счет деградации тетрамеров гемоглобина в
димеры с одновременным перераспределением внутриклеточных электролитов. Показаны пути экспериментальной проверки
предложенных механизмов.
Ключевые слова: эритроциты, гипотонический гемолиз, осмотическая протекция, осмотическое поведение.
У роботі досліджено властивості простої моделі осмотичного балансу в еритроцитах, яка включає внески внут-
рішньоклітинних електролітів і неідеальні осмотичні властивості гемоглобіну. На основі аналізу цієї моделі запропоновано два
механізми, які можуть бути задіяні у збільшенні стійкості еритроцитів до гіпотонічних середовищ, індукованої різними агентами.
Один механізм пов’язаний з протектуючим скиданням внутрішньоклітинних електролітів, зокрема аніонів хлору, другий –зі
зміною внутрішньоклітинної осмолярності, можливо, за рахунок деградації тетрамерів гемоглобіну в дімери з одночасним
перерозподілом внутрішньоклітинних електролітів. Показано шляхи експериментальної перевірки запропонованих механізмів.
Ключові слова: еритроцити, гіпотонічний гемоліз, осмотична протекція, осмотична поведінка.
The properties of simple model of osmotic balance in erythrocytes involving the contributions of intracellular electrolytes and
non-ideal osmotic properties of hemoglobin were investigated. Analyzing this model we suggested two mechanisms that may take part
in the rise of erythrocyte resistance to hypotonic media induced by different agents. One mechanism is associated with protecting
release of intracellular electrolytes, in particular, chloride anions, the second one is associated with the change of intracellular osmolarity
presumably due to degradation of hemoglobin tetramers into dimers with a simultaneous redistribution of intracellular electrolytes.
The ways for experimental testing of the suggested mechanisms have been shown.
Key words: erythrocyte, hypotonic hemolysis, osmotic protection, osmotic behavior.
* Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015; тел.: (+38
057) 373-41-35, факс: (+38 057) 373-30-84, электронная почта:
rsv@kharkov.ua
* To whom correspondence should be addressed: 23,
Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 373
4135, fax: +380 57 373 3084, e-mail: rsv@kharkov.ua
1Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na-
tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
2V.N.Karazin Kharkov National University, Kharkov, Ukraine
1Институт проблем криобиологии и криомедицины
НАН Украины, г. Харьков
2Харьковский национальный университет им. В.Н. Каразина
378 problems
of cryobiology
Vol. 21, 2011, №4
проблемы
криобиологии
Т. 21, 2011, №4
протекция не может быть объяснена увеличением
поверхностно-объемного отношения клеток и из-
менением текучести мембран [3]. Можно предполо-
жить, что возникающая устойчивость эритроцитов
в гипотонической среде связана с изменением их
осмотического баланса. Цель данной работы – на
простой модели осмометра и ее реакции на изме-
нение осмотического давления внешней среды ус-
тановить роль осмотического баланса в механизме
осмотической протекции эритроцитов амфифиль-
ными соединениями, которую они проявляют в
отношении осмотического гемолиза.
1. Модель осмометра
В средах с пониженной осмолярностью эритро-
циты набухают, а с повышенной – сжимаются, т. е.
ведут себя подобно осмометрам [11, 13]. Это их
свойство определено необходимостью поддержи-
вать осмотический баланс, который предполагает,
что в любой среде осмотическое давление цитозо-
ля равно осмотическому давлению внешней сре-
ды. Это равенство используется во всех моделях,
описывающих осмотическое поведение эритро-
цитов [5, 9, 14], которые включают такие факторы,
как электронейтральность и равенство химических
потенциалов проникающих через мембрану компо-
нентов в условиях равновесия [9, 14]. В настоящей
работе мы рассматриваем простейшую модель
эритроцита как везикулы, содержащего гемоглобин
и KCl, находящегося в среде с NaCl и непроникаю-
щим компонентом, например сахарозой, что соот-
ветствует обычным экспериментальным усло-
виям.
Внутриклеточное осмотическое давление такой
везикулы можно представить в виде:
V
n
V
n
V
nC Hb
w
Cl
w
K ⋅ϕ++= , (1)
где nK, nCl, nHb – количество ионов калия, хлора и
гемоглобина, мМ; ϕ – осмотический коэффициент
гемоглобина; Vw – объем воды в клетке; V – сум-
марный объем клетки, л.
В изотонических условиях при осмотическом
давлении внешней среды, равной 300 мОсм, имеем:
С0 = СК0 + СCl0 + ϕ 0⋅СНb0, (2)
где индекс 0 соответствует значениям параметров
в условиях изотонии, которые рассматривают как
исходное состояние везикулы; CK и СCl – концентра-
ция ионов калия и хлора во внутриклеточной воде,
мМ; СHb – концентрация гемоглобина, мМ, отне-
сенная ко всему объему клетки.
fluidity [3]. One may suggest that an appearing resis-
tance of erythrocytes in hypotonic medium is associated
with the change of their osmotic balance. The aim of
this work was to determine the role of an osmotic
balance in erythrocyte osmotic protection mechanism
caused by amphiphilic compounds, which they manifest
in relation to osmotic hemolysis, using a simple model
of osmometer and its response to the change of osmotic
pressure of extracellular environment.
1. Model of osmometer
Erythrocytes swell in the media with a decreased
osmolarity and they shrink in the media with increased
one, i. e. they behave as osmometers [11, 13]. This
property is based on the necessity to maintain an
osmotic balance which suggests that in any medium
the osmotic pressure of cytosol is equal to osmotic
pressure of an environment. This equation is used in
all the models describing osmotic behavior of erythro-
cytes [5, 9, 14] which include such factors as electrical
neutrality and equation of chemical potentials penetra-
ting the membrane of components in equilibration
conditions [9, 14]. In this work we consider the simplest
model of erythrocyte as vesicle containing hemoglobin
and KCl being in the medium with NaCl and non-
penetrating component, for example with sucrose, cor-
responding to routine experimental conditions.
Intracellular osmotic pressure of this vesicle can
be represented as:
V
n
V
n
V
nC Hb
w
Cl
w
K ⋅ϕ++= , (1)
where nK, nCl, nHb are the amount of potassium, chlorine
and hemoglobin ions, mM; ϕ is an osmotic coefficient
of hemoglobin; Vw is volume of water in a cell; V is
total volume of cell, l.
In isotonic conditions at environmental osmotic
pressure of 300 mOsm we have:
С0 = СКо + СCl0 + ϕ 0⋅СНb0, (2)
where the subscript 0 conforms to the indices of
parameters in isotonia considered as initial vesicle state;
CK and СCl are concentrations of potassium and
chlorine in intracellular water, mM; CHb is concentration
of hemoglobin, mM, related to the whole cell volume.
At given initial concentration of hemoglobin the
equation (2) determines an initial value of potassium
and chlorine ions' concentration corresponding to initial
equilibration conditions.
Considering cell volume as V = VHb + Vwwe intro-
duce the definition of a relative volume as Vrel = V/V0
and initial fraction of hemoglobin in a cell as the para-
meter А = VHb/V0. Combining the equations (1) and
379 problems
of cryobiology
Vol. 21, 2011, №4
проблемы
криобиологии
Т. 21, 2011, №4
При заданной исходной концентрации гемогло-
бина уравнение (2) определяет исходное значение
концентраций ионов калия и хлора, которое соответ-
ствует начальным условиям равновесия.
Учитывая, что объем клетки V = VHb + Vw, введем
определение относительного объема как Vrel = V/V0,
а исходной фракции гемоглобина в клетке – как
параметр А = VHb/V0. Комбинируя уравнения (1) и
(2), получаем окончательное выражение для внут-
риклеточной осмолярности в зависимости от отно-
сительного объема клетки:
rel
Hb
ClK
rel V
CC
V
AC 0
0
1 ⋅ϕ+⋅−= + , (3)
где CK+Cl0 – начальная суммарная концентрация
ионов калия и хлора в клетке.
Ранее было получено выражение для осмоти-
ческого коэффициента гемоглобина [9]:
ϕ = 1 + 0,0645⋅CHb + 0,0258⋅C2
Hb.
Концентрацию гемоглобина определяли по от-
ношению к объему внутриклеточной воды, а не ко
всему объему клетки. Поскольку мы рассчиты-
ваем концентрацию гемоглобина по отношению к
клеточному объему (уравнение (1)), то скорректи-
рованное выражение для осмотического коэффи-
циента имеет вид:
ϕ = 1,3947+ 0,1255⋅CHb + 0,07⋅C2
Hb,
где СHb – концентрация гемоглобина, мМ, на литр
клеток.
Если концентрация гемоглобина и соответст-
венно параметр А равны нулю, то уравнение (3)
трансформируется в классическое выражение для
идеального осмометра Vrel = C0/C, где С0 – стан-
дартная изотоническая осмолярность; С – теку-
щая осмолярность внеклеточной среды. Для такого
осмометра увеличение или уменьшение внешней
осмолярности в два раза приводит к двухкратному
уменьшению или увеличению клеточного объема.
Объект, описываемый уравнением (3), будем назы-
вать модельным осмометром (МОc).
2. Поведение модельного осмометра в
зависимости от концентрации гемоглобина
Установлено, что осмотическое поведение МОc
в координатах С0/С от Vrel зависит от концентрации
гемоглобина, если она существенно превышает
стандартную концентрацию для эритроцитов, рав-
ную 5 мМ. Для концентрации 5 мМ поведение МОc
(2) we obtain a final expression for intracellular osmo-
larity depending on relative cell volume:
rel
Hb
ClK
rel V
CC
V
AC 0
0
1 ⋅ϕ+⋅−= + , (3)
where CK+Cl0 is initial total concentration of potassium
and chlorine ions in the cell.
Previously the equation for hemoglobin osmotic
coefficient was obtained [9]:
ϕ = 1 + 0.0645⋅CHb + 0.0258⋅C2
Hb.
Hemoglobin concentration was estimated as the ra-
tio to the volume of intracellular water rather than the
whole volume of a cell. As we calculate a hemoglobin
concentration in respect of cell volume (equation (1)),
the corrected equation for osmotic coefficient is:
ϕ = 1.3947+ 0.1255⋅CHb + 0.07⋅C2
Hb,
where СHb is hemoglobin concentration, mM, per liter
of cells.
If hemoglobin concentration and correspondingly
the parameter A are zero, the equation (3) transforms
to a classic equation for an ideal osmometer Vrel = C0/C
where С0 is standard isotonic osmolarity; C is current
osmolarity of extracellular medium. For this osmometer
a two-fold increase or decrease of external osmolarity
induces two-fold decrease or increase of a cell volume.
The object described by equation (3) will be called as
a model osmometer (MO).
2. Behavior of model osmometer depending
on hemoglobin concentration
We have established that osmotic behavior of MO
in coordinates С0/С vs. Vrel depends on hemoglobin
concentration if it significantly exceeds a standard
concentration for erythrocytes which is 5 mM. For
5 mM concentration the behavior of MO almost does
not differ from its behavior at zero concentration of
hemoglobin, particularly in hypotonic region (Vrel > 1).
For evaluation of MO osmotic behavior and its diffe-
rences during varying the model parameters it is reaso-
nable to choose two reference points. The one corres-
ponds to a double osmolarity (600 mOsm) at which an
ideal MO has Vrel = 0.5, the second, in the case of
Vrel = 1.6, i. e. critical hemolytic volume of erythrocyte
[13, 14], is 187.5 mOsm and is considered to be critical
hemolytic osmolarity, when MO hemolysis occurs. This
value is close to experimentally calculated osmolarity
causing 50% hemolysis of erythrocytes, 174 mOsm [3],
and other experimental data [4].
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
1,8
2
0,3 0,5 0,7 0,9 1,1 1,3 1,5 1,7
380 problems
of cryobiology
Vol. 21, 2011, №4
проблемы
криобиологии
Т. 21, 2011, №4
практически не отличается от его поведения при
нулевой концентрации гемоглобина, особенно в
гипотонической области (Vrel > 1). Для оценки ос-
мотического поведения МОс и его отличий при варьи-
ровании модельных параметров целесообразно
выбрать две референтные точки. Одна соответ-
ствует двойной осмолярности (600 мОсм), при
которой идеальный МОс Vrel = 0,5, другая – при
Vrel = 1,6, т. е. критическому гемолитическому объе-
му эритроцита [13, 14], имеет значение 187,5 мОсм
и ее можно считать критической гемолитической
осмолярностью, при которой происходит гемолиз
МОс. Это значение близко к экспериментально
оцененной величине осмолярности, вызывающей
50%-й гемолиз эритроцитов 174 мОсм [3], и другим
экспериментальным данным [4].
Приведенные данные свидетельствуют, что
увеличение концентрации гемоглобина делает МОc
осмотически устойчивым; в гипотонической среде
он набухает тем меньше, чем больше в нем кон-
центрация гемоглобина. Например, МОc с концент-
рацией гемоглобина 11 мМ не достигает критичес-
кого гемолитического объема 1,6 в гипотонической
среде 150 мОсм. Таким образом, теоретически
возможно увеличение осмотической стойкости
эритроцитов за счет регулирования внутриклеточ-
ной концентрации гемоглобина.
Данные, приведенные на рис. 1, были получены
исходя из предположениия, что внутри МОс содер-
жится гемоглобин, растворенный во внутриклеточ-
ной воде. При этом не предполагалось, что молеку-
лы гемоглобина могут занимать определенный
объем внутри клетки как твердые вещества, что
принимается во внимание в других моделях [5, 9,
14]. Данные на рис. 2 иллюстрируют, как учет
объема гемоглобина (VHb) влияет на осмотическое
поведение МОс при концентрации гемоглобина 5 и
9,68 мМ.
В обоих случаях увеличение параметра А ведет
к увеличению угла наклона кривых, значит МОс
становится менее чувствительным к изменению
тоничности. Кроме этого, при концентрации гемо-
глобина 5 мМ зависимости имеют линейный харак-
тер во всем диапазоне, а при 9,68 мМ – в гипото-
нической области. Можно отметить, что при неко-
торых значениях параметров зависимости имеют
одинаковый наклон. Установлено, что существует
множество комбинаций параметров СHb и А, при
которых эти зависимости фактически совпадают
с широким диапазоном значений относительного
объема. Это означает, что такие МОс являются
одинаковыми в своем осмотическом поведении,
т. е. в реакции их объема в ответ на изменение ос-
молярности среды.
Рис. 1. Зависимость относительной обратной внутри-
клеточной осмолярности от относительного объема
МОc при А = 0 и различных исходных концентрациях
гемоглобина, мМ: 1 – 0; 2 – 3; 3 – 5; 4 – 7; 5 – 9; 6 – 11; 7 –
13; 8 – 15,27.
Fig. 1. Dependence of relative reciprocal intracellular
osmolarity on MO relative volume at A=0 and different initial
hemoglobin concentrations, mM: 1 – 0; 2 – 3; 3 – 5; 4 – 7;
5 – 9; 6 – 11; 7 – 13; 8 – 15.27.
О
тн
ос
ит
ел
ьн
ая
о
бр
ат
на
я
вн
ут
ри
кл
ет
оч
на
я
ос
м
ол
яр
но
ст
ь
С
0/С
R
el
at
iv
e
re
ci
pr
oc
al
in
tra
ce
llu
la
r o
sm
ol
ar
ity
С
0/С
Относительный объем Vrel
Relative volume Vrel
Represented data attest to the fact that the increase
of hemoglobin concentration makes MO osmotically
resistant; in hypotonic medium the less it swells the
more hemoglobin concentration is. For example, MO
with 11 mM hemoglobin concentration does not reach
a critical hemolytic volume of 1.6 in 150 mOsm hypo-
tonic medium. So an increase of erythrocyte osmotic
resistance due to regulation of intracellular hemoglobin
concentration is theoretically possible.
Data in Fig. 1 were obtained suggesting that hemo-
globin being inside MO is dissolved in intracellular
water. It was not considered that hemoglobin molecules
could occupy a certain volume in a cell as solid sub-
stances, that is taken in account in other models [5, 9,
14]. The data in Fig. 2. show how taking into account
the hemoglobin volume (VHb) affect an osmotic behavior
of MO at hemoglobin concentration of 5 and 9.68 mM.
In both cases an increase of the parameter A leads
to increase of curves' slope so MO becomes less sen-
sitive to a tonicity change. Moreover, at hemoglobin
concentration of 5 mM the dependences are of linear
character in the whole range, and at 9.68 mM they
are linear only in hypotonic region. We may note that
at some values of parameters the dependences have
the same slope. It has been established that there are
many combinations of parameters СHb and A, at which
these dependences almost coincide with a wide range
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
1,8
2
0,3 0,5 0,7 0,9 1,1 1,3 1,5 1,7
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
1,8
2
0,3 0,5 0,7 0,9 1,1 1,3 1,5 1,7
381 problems
of cryobiology
Vol. 21, 2011, №4
проблемы
криобиологии
Т. 21, 2011, №4
3. Поведение модельного осмометра в
зависимости от концентрации внутриклеточ-
ных электролитов
Для дальнейшего изучения мы выбрали два
близких МОc: один с концентрацией гемоглобина
5 мМ и А = 0,3, что соответствует параметрам
нормального эритроцита в изотонических условиях
(обозначен С5А03) [9, 14], другой – с концентра-
цией гемоглобина 9,68 мМ и А = 0 (обозначен
С9,68А0). На рис. 3 показано осмотическое пове-
дение этих МОc при изменении в них концентрации
внутриклеточного калия. Во втором случае МОc
С9,68А0 моделируется как идеальный раствор
белка без учета того, что сами молекулы белка
занимают некий физический пространственный
объем в растворе. Видно, что при одной и той же
концентрации ионов калия С5А03 имеет значитель-
но меньший объем, чем С9,68А0. Это объясняется
тем, что при высоких концентрациях гемоглобина
его нелинейный вклад во внутриклеточную осмо-
лярность сильнее, чем при малых. Таким образом,
хотя между этими МОс отсутствует разница в их
ответе на изменение внешней осмолярности в ус-
ловиях, когда МОс не теряют электролиты, их по-
ведение существенно отличается в условиях утеч-
ки электролитов.
Исходя из приведенных выше свойств МОс,
можно предложить два возможных механизма ос-
мотической протекции эритроцитов в гипотоничес-
кой среде. Один из них включает “протектирую-
щий” сброс внутриклеточных электролитов, дру-
гой – повышение концентрации внутриклеточного
of relative volume indices occur. This means that these
MOs are identic in their osmotic behavior, i. e. in their
volume response to the change of medium osmolarity.
3. Behavior of model osmometer depending
on concentration of intracellular electrolytes
For further investigation we chose two close MOs:
one had 5 mM hemoglobin concentration and A = 0.3
that corresponded to the parameters of normal erythro-
cyte in isotonic conditions (denoted as C5A03) [9, 14],
another one had 9.68 mM hemoglobin concentration
and A = 0 (denoted as C9.68A0). Fig. 3 shows an os-
motic behavior of these MOs following the change of
intracellular potassium concentration inside them. In
the second case MO C9.68AO is modelled as an ideal
solution of protein without considering the fact that
protein molecules occupy a certain physical spatial
volume in the solution. It is seen that at the same con-
centration of potassium ions C5A03 has significantly
less volume than C9.68AO. It is due to non-linear cont-
ribution of hemoglobin into the intracellular osmolarity
which is stronger at high concentrations than at low
ones. Thus, although there is no difference between
these MOs in their response for a change of external
osmolarity, in the case if they do not loose electrolytes,
their behavior significantly differs during leakage of
electrolytes.
On the basis of previously mentioned MO proper-
ties we can suggest two possible mechanisms of eryth-
rocyte osmotic protection in hypotonic medium. One
of them includes ‘protecting’ release of intracellular
electrolytes, another one involves a rise of intracellular
Рис. 2. Зависимость относительной обратной внутриклеточной осмолярности от относительного объема МОс при
разном объеме гемоглобина (параметр А: 1 – 0; 2 – 0,1; 3 – 0,2; 4 – 0,3; 5 – 0,4; 6 – 0,5; 7 – 0,6) и при концентрации
гемоглобина 5 мМ (А) и 9.68 мМ (B).
Fig. 2. Dependence of relative reversible intracellular osmolarity on relative volume of MO at different hemoglobin volume
(parameter A: 1 – 0; 2 – 0.1; 3 – 0.2; 4 – 0.3; 5 – 0.4; 6 – 0.5; 7 – 0.6) and hemoglobin concentration of 5 (A) and 9.68 mM (B).
О
тн
ос
ит
ел
ьн
ая
о
бр
ат
на
я
вн
ут
ри
кл
ет
оч
на
я
ос
м
ол
яр
но
ст
ь
С
0/С
R
el
at
iv
e
re
ci
pr
oc
al
in
tra
ce
llu
la
r o
sm
ol
ar
ity
С
0/С
Относительный объем Vrel
Relative volume Vrel
О
тн
ос
ит
ел
ьн
ая
о
бр
ат
на
я
вн
ут
ри
кл
ет
оч
на
я
ос
м
ол
яр
но
ст
ь
С
0/С
R
el
at
iv
e
re
ci
pr
oc
al
in
tra
ce
llu
la
r o
sm
ol
ar
ity
С
0/С
Относительный объем Vrel
Relative volume Vrel
A B
0
100
200
300
400
500
600
0,3 0,5 0,7 0,9 1,1 1,3 1,5
0
100
200
300
400
500
600
0,3 0,5 0,7 0,9 1,1 1,3 1,5
382 problems
of cryobiology
Vol. 21, 2011, №4
проблемы
криобиологии
Т. 21, 2011, №4
гемоглобина, что может быть обусловлено пере-
ходом тетрамеров гемоглобина (HbT) в димеры
(HbD), в результате чего количество осмотически
активных частиц в цитоплазме увеличивается в
два раза и приводит к росту осмотического дав-
ления.
Следует отметить, что второй механизм для
своей реализации в гипотонических условиях также
требует частичного сброса внутриклеточных элек-
тролитов, чтобы скомпенсировать возросшее ос-
мотическое давление цитоплазмы, поэтому он
может рассматриваться как комплексный меха-
низм, включающий оба элемента.
Ранее мы установили [3], что в гипотонической
среде с осмолярностью 150 мОсм β-блокаторы
проявляют значительный протектирующий эф-
фект. Хотя объем эритроцитов в тех условиях не
измерялся, можно предположить, что он не превы-
шал критического гемолитического объема 1,6, ко-
торый достигался при отсутствии блокаторов. Со-
гласно вариантам предлагаемой модели это свя-
зано либо с уменьшением внутриклеточной кон-
центрации электролитов, либо с сопутствующим
переходом HbT→HbD. Кривые 1 на рис. 3 опи-
сывают эту зависимость для С5А03 и С9,68А0.
Чтобы объем МОс не превышал 1,6 при осмоляр-
ности 150 мОсм, С5А03 должен уменьшить кон-
центрацию электролитов от 281 до 260 мМ, а
С9,68А0 – от 211 до 195 мМ. Согласно нашей мо-
дели, чтобы установить, какой именно механизм
действительно реализовался, проведение допол-
нительных осмотических воздействий не эффек-
hemoglobin concentration that may be stipulated by
transformation of hemoglobin tetramers (HbT) into
dimers (HbD) thereby the number of osmotically active
particles in cytoplasm doubles and induces rise of
osmotic pressure.
It should be noted that the second mechanism for
its implementation in hypotonic conditions also requires
a partial release of intracellular electrolytes to compen-
sate an increased osmotic pressure of cytoplasm so it
can be considered as the complex mechanism including
both elements.
We established previously [3] that in hypotonic
medium with 150 mOsm osmolarity the β-blockers
provide a significant protecting effect. Although the
volume of erythrocytes in those conditions was not
measured, we may suppose it did not exceed critical
hemolytic volume of 1.6 which they reached when
blockers were absent. According to the suggested
model it is associated either with decrease of electrolyte
intracellular concentration or with accompanying
transformation HbT→ HbD. The curves 1 in Fig. 3
describe this dependence for C5A03 and C9.68A0. In
order that the MO volume will not exceed 1.6 at 150
mOsm osmolarity, C5A03 has to decrease electrolyte
concentration from 281 down to 260 mM and
C9.68A0 – from 211 down to 195 mM. According to
our model it is not useful to perform additional osmotic
exposures to establish which mechanism was actually
implemented, since curves 1 (Fig. 3) for both MOs
are too close and MOs had the same volumes at any
other osmolarities, i. e. they reveal identity feature as
it was previously mentioned. However, whereas beha-
Рис. 3. Зависимость внутриклеточной осмолярности от относительного объема МОс С5А03 (А) и С9.68А0 (B) при
разных значениях внутриклеточной концентрации ионов калия и хлора, мМ: 1 – 260 (А); 195 (B); 2 – 150; 3 – 75; 4 –
37,5; 5 – 18,75; 6 – 9,375.
Fig. 3. Dependence of intracellular osmolarity vs. relative volume of MO C5A03 (A) and C9.68A0 (B) at different indices of
intracellular concentration of potassium and chlorine ions, mM: 1 – 260 (A); (B) 1 – 195; 2 – 150; 3 – 75; 4 – 37.5; 5 – 18.75;
6 – 9.375.
Вн
ут
ри
кл
ет
оч
на
я
ос
м
ол
яр
но
ст
ь
С
,
м
О
см
In
tra
ce
llu
la
r o
sm
ol
ar
ity
С
, m
O
sm
Относительный объем Vrel
Relative volume Vrel
Вн
ут
ри
кл
ет
оч
на
я
ос
м
ол
яр
но
ст
ь
С
,
м
О
см
In
tra
ce
llu
la
r o
sm
ol
ar
ity
С
, m
O
sm
Относительный объем Vrel
Relative volume Vrel
BA
383 problems
of cryobiology
Vol. 21, 2011, №4
проблемы
криобиологии
Т. 21, 2011, №4
тивно, поскольку кривые 1 (рис. 3) для двух МОс
очень близки и они имеют одинаковые объемы при
любых иных осмолярностях, т. е. проявляют свойст-
во идентичности, как уже отмечалось выше. Одна-
ко поскольку поведение этих МОс существенно
отличается при их истощении по электролитам,
одним из возможных путей проверки модели может
быть индуцирование повышенной калиевой прово-
димости за счет активации канала Гардоша [15]
или обработки клеток валиномицином [10]. В этом
случае можно ожидать, что если основой протек-
ции является сброс электролитов, то такой МОс
(С5А03) будет сжиматься значительно сильнее,
чем при протекции с участием перехода HbT→HbD.
Протектирующий эффект различных соединений
не всегда коррелирует с увеличением калиевой про-
ницаемости [6, 8, 12]. Например, протектирующий
эффект лизолицетина, наоборот, сопровождался
уменьшением проницаемости мембран для калия
в гипотонических условиях [7]. Установлено, что
для повышения устойчивости эритроцитов в гипо-
тонических условиях клетки должны предвари-
тельно потерять значительное количество калия
[1, 4]. Это, вероятно, свидетельствует о том, что
протектирующий эффект в большей степени связан
с перераспределением анионов хлора, а не катио-
нов. Наши оценки изменения количества анионов,
которые необходимы для протекции, вполне соот-
ветствуют внутриклеточному содержанию этих
анионов (~80–100 мМ), которые могут быстро
обмениваться на ионы ОН с участием анионного
обменника АЕ1 [16, 17] и тем самым понижать
внутриклеточную осмолярность. Предложенный в
данной работе механизм осмотической протекции
отличается от модели, согласно которой различные
амфипаты влияют на процесс развития гемолити-
ческой поры [3]. Последняя модель не предпола-
гает изменений осмотического баланса и, следова-
тельно, осмотическое поведение протектирован-
ных эритроцитов не должно отличаться от конт-
рольных. Экспериментальная проверка предложен-
ной модели будет представлена в следующих
работах.
Выводы
На основе анализа модели осмометра предло-
жено два механизма осмотической протекции
эритроцитов в гипотонических средах. Один из них
связан с протектирующим сбросом внутриклеточ-
ных электролитов, другой – с изменением внут-
риклеточной осмолярности, предположительно, за
счет деградации тетрамеров гемоглобина в ди-
меры с одновременным перераспределением
внутриклеточных электролитов. Показаны пути
экспериментальной проверки предложенной мо-
дели.
vior of these MOs significantly differs during their
depletion by electrolytes, induction of a elevated potas-
sium conductivity due to activation of Gardos channel
[15] or cell treatment with valinomycin [10], may be
one of the possible ways for model evaluation. In this
case we can expect that if electrolytes release is the
basis of protection, such MO (C5A03) will shrunk much
more than in the case of transformation HbT→HbD.
Protecting effect of different compounds not always
correlates with an increase of potassium permeability
[6, 8, 12]. For example, protecting effect of lysolecithin,
vice versa was accompanied with a decrease of mem-
brane permeability for potassium in hypotonic condi-
tions [7]. It was established that to elevate the erythro-
cyte resistance in hypotonic conditions the cells have
to loose preliminary a significant amount of potassium
[1, 4]. This probably attests the fact that a protecting
effect is a greater extent associated with redistribution
of chlorine anions rather than cations. Estimated by us
changes of anion amount, essential for protection,
entirely correspond to intracellular content of these
anions (~80–100 mM) that may rapidly exchange for
OH ions with anion exchanger AE1 [16, 17] and in
such a way decrease intracellular osmolarity. Proposed
here mechanism of osmotic protection differs from the
model according to which different amphipaths affect
the process of hemolytic pore development [3]. The
latter does not suggest the changes of an osmotic ba-
lance and therefore osmotic behavior of protected
erythrocytes has not to differ from the control ones.
Experimental testing of the suggested model will be
demonstrated in the further papers.
Conclusions
On the basis of osmometer model analysis we sug-
gested two mechanisms of erythrocyte osmotic protec-
tion in hypotonic media. The first one is associated
with ‘protecting’ release of intracellular electrolytes;
another one is related to the change of intracellular
osmolarity presumably due to degradation of hemo-
globin tetramers into dimers with simultaneous re-
distribution of intracellular electrolytes. The ways for
experimental testing of suggested model were shown.
References
Nipot Ye.Ye. Temperature and some lytic peptides influence
on human erythrocytes during dehydration-rehydration:
Author's abstract of the thesis of Candidate of Biological
Sciences.– Kharkov, 1997.– 24 p.
Rudenko S.V., Said M.K., Bondarenko V.A. Determination of
coefficients of distribution of anti-glaucoma drugs between
erythrocytes and medium // Biophysical Bulletin.– 2009.–
Vol. 2, N23.– P. 69–76.
Rudenko S.V., Said M.K., Volovelskaya Ye.L. Influence of
some β-blockers on erythrocyte hypotonic hemolysis //
Problems of Cryobiology.– 2010.– Vol. 20, N1.– P. 7–17.
1.
2.
3.
384 problems
of cryobiology
Vol. 21, 2011, №4
проблемы
криобиологии
Т. 21, 2011, №4
Литература
Нипот Е.Е. Влияние температуры и некоторых литичес-
ких пептидов на эритроциты человека при дегидратации-
регидратации: Автореф. дис. ... канд. биол. наук.–
Харьков, 1997.– 24 с.
Руденко С.В., Саид М.К., Бондаренко В.А. Определение
коэффициентов распределения антиглаукомных препа-
ратов между эритроцитами и средой // Біофізичний віс-
ник.–2009.– Т. 2, №23.– С. 69–76.
Руденко С.В., Саид М.К., Воловельская Е.Л. Влияние
некоторых бэта блокаторов на гипотонический гемолиз
эритроцитов // Проблемы криобиологии.– 2010.– Т. 20,
№1.– С. 7–17.
Bennekou P., Barksmann T.L., Christophersen P., Kristen-
sen B.I. The human red cell voltage-dependent cation chan-
nel. Part III: Distribution homogeneity and pH dependence //
Blood Cells Mol. Dis.– 2006.–Vol.36, N1.– P. 10–14.
Bisognano J.D., Dix J.A., Pratap P.R. et al. Proton (or
hydroxide) fluxes and the biphasic osmotic response of human
red blood cells // J. Gen. Physiol.– 1993.– Vol. 102, N1.–
P. 99–123.
Eskelinen S., Mela M. Cation permeability and mechanical
properties of the erythrocyte membrane under the influence
of lysophosphatidylcholine (LPC) in isotonic and hypotonic
media // Acta Physiol Scand.– 1984.– Vol. 122, N4.– P. 527–
534.
Eskelinen S. Effect of lysophosphatidylcholine on salt per-
meability through the erythrocyte membrane under haemolytic
conditions // Gen. Physiol Biophys.– 1986.– Vol. 5, N6.–
P. 637–647.
Fogt A., Hagerstrand H., Isomaa B. Effects of N,N'–bisdime-
thyl-1,2-ethanediamine dichloride, a double-chain surfactant,
on membrane-related functions in human erythrocytes //
Chem. Biol. Interact.–1995.–Vol.94, №2.–P. 147–155.
Freedman J.C., Hoffman J.F. Ionic and osmotic equilibria of
human red blood cells treated with nystatin // J. Gen. Physiol.–
1979.–Vol. 74, N2.– P. 157–185.
Freedman J.C., Novak T.S. Electrodiffusion, barrier, and gating
analysis of DIDS-insensitive chloride conductance in human
red blood cells treated with valinomycin or gramicidin // J.
Gen. Physiol.– 1997.– Vol. 109, N2.– P. 201–216.
Heubusch P., Jung C.Y., Green F.A. The osmotic response
of human erythrocytes and the membrane cytoskeleton // J.
Cell Physiol.– 1985.– Vol. 122, N2.– P. 266–272.
Isomaa B., Hagerstrand H., Paatero G., Engblom A.C.
Permeability alterations and antihaemolysis induced by
amphiphiles in human erythrocytes // Biochim. Biophys. Acta.–
1986.–Vol. 860, N3.– P. 510–524.
Jay A.W., Rowlands S. The stages of osmotic haemolysis //
J. Physiol –1975.– Vol. 252, N3.– P. 817–832.
Lew V.L., Bookchin R.M. Volume, pH, and ion-content
regulation in human red cells: analysis of transient behavior
with an integrated model // J. Membr. Biol.– 1986.– Vol. 92,
N1.– P. 57–74.
Rudenko S.V., Peresetskaia N.M. Anomalous transport of
cations upon stimulation of a Ca-dependent K-channel in
rehydrated erythrocytes // Biokhimiia.– 1995.– Vol. 60, N7.–
P. 1146–1154.
Sato Y., Yamakose H., Suzuki Y. Mechanism of hypotonic
hemolysis of human erythrocytes // Biol. Pharm. Bull.–1993.–
Vol.16, N5.– P. 506–512.
Sato Y., Yamakose H., Suzuki Y. Participation of band 3 protein
in hypotonic hemolysis of human erythrocytes // Biol. Pharm.
Bull.– 1993.– Vol.16, N2.– P. 188–194.
Поступила 19.07.2011
Рецензент О.И. Гордиенко
Bennekou P., Barksmann T.L., Christophersen P., Kristen-
sen B.I. The human red cell voltage-dependent cation chan-
nel. Part III: Distribution homogeneity and pH dependence //
Blood Cells Mol. Dis.– 2006.–Vol.36, N1.– P. 10–14.
Bisognano J.D., Dix J.A., Pratap P.R. et al. Proton (or
hydroxide) fluxes and the biphasic osmotic response of human
red blood cells // J. Gen. Physiol.– 1993.– Vol. 102, N1.–
P. 99–123.
Eskelinen S., Mela M. Cation permeability and mechanical
properties of the erythrocyte membrane under the influence
of lysophosphatidylcholine (LPC) in isotonic and hypotonic
media // Acta Physiol Scand.– 1984.– Vol. 122, N4.– P. 527–
534.
Eskelinen S. Effect of lysophosphatidylcholine on salt per-
meability through the erythrocyte membrane under haemolytic
conditions // Gen. Physiol Biophys.– 1986.– Vol. 5, N6.–
P. 637–647.
Fogt A., Hagerstrand H., Isomaa B. Effects of N,N'–bisdime-
thyl-1,2-ethanediamine dichloride, a double-chain surfactant,
on membrane-related functions in human erythrocytes //
Chem. Biol. Interact.–1995.–Vol.94, №2.–P. 147–155.
Freedman J.C., Hoffman J.F. Ionic and osmotic equilibria of
human red blood cells treated with nystatin // J. Gen. Physiol.–
1979.–Vol. 74, N2.– P. 157–185.
Freedman J.C., Novak T.S. Electrodiffusion, barrier, and gating
analysis of DIDS-insensitive chloride conductance in human
red blood cells treated with valinomycin or gramicidin // J.
Gen. Physiol.– 1997.– Vol. 109, N2.– P. 201–216.
Heubusch P., Jung C.Y., Green F.A. The osmotic response
of human erythrocytes and the membrane cytoskeleton // J.
Cell Physiol.– 1985.– Vol. 122, N2.– P. 266–272.
Isomaa B., Hagerstrand H., Paatero G., Engblom A.C.
Permeability alterations and antihaemolysis induced by
amphiphiles in human erythrocytes // Biochim. Biophys. Acta.–
1986.–Vol. 860, N3.– P. 510–524.
Jay A.W., Rowlands S. The stages of osmotic haemolysis //
J. Physiol –1975.– Vol. 252, N3.– P. 817–832.
Lew V.L., Bookchin R.M. Volume, pH, and ion-content
regulation in human red cells: analysis of transient behavior
with an integrated model // J. Membr. Biol.– 1986.– Vol. 92,
N1.– P. 57–74.
Rudenko S.V., Peresetskaia N.M. Anomalous transport of
cations upon stimulation of a Ca-dependent K-channel in
rehydrated erythrocytes // Biokhimiia.– 1995.– Vol. 60, N7.–
P. 1146–1154.
Sato Y., Yamakose H., Suzuki Y. Mechanism of hypotonic
hemolysis of human erythrocytes // Biol. Pharm. Bull.–1993.–
Vol.16, N5.– P. 506–512.
Sato Y., Yamakose H., Suzuki Y. Participation of band 3 protein
in hypotonic hemolysis of human erythrocytes // Biol. Pharm.
Bull.– 1993.– Vol.16, N2.– P. 188–194.
Accepted 19.07.2011
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68460 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T17:50:21Z |
| publishDate | 2011 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Руденко, С.В. Щетинина, Е.М. Воловельская, Е.Л. 2014-09-24T11:35:03Z 2014-09-24T11:35:03Z 2011 К механизму осмотической протекции эритроцитов. I. Модель осмометра / С.В. Руденко, Е.М. Щетинина, Е.Л. Воловельская // Проблемы криобиологии. — 2011. — Т. 21, № 4. — С. 377-384. — Бібліогр.: 17 назв. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68460 576.324:612.111 Исследованы свойства простой модели осмотического баланса в эритроцитах, включающей вклады внутриклеточных электролитов и неидеальные осмотические свойства гемоглобина. На основании анализа этой модели предложены два механизма, которые могут участвовать в повышении устойчивости эритроцитов к гипотоническим средам, индуцированной различными агентами. Один механизм связан с протектирующим сбросом внутриклеточных электролитов, в частности анионов хлора, другой - с изменением внутриклеточной осмолярности, предположительно, за счет деградации тетрамеров гемоглобина в димеры с одновременным перераспределением внутриклеточных электролитов. Показаны пути экспериментальной проверки предложенных механизмов. У роботі досліджено властивості простої моделі осмотичного балансу в еритроцитах, яка включає внески внутрішньоклітинних електролітів і неідеальні осмотичні властивості гемоглобіну. На основі аналізу цієї моделі запропоновано два механізми, які можуть бути задіяні у збільшенні стійкості еритроцитів до гіпотонічних середовищ, індукованої різними агентами. Один механізм пов’язаний з протектуючим скиданням внутрішньоклітинних електролітів, зокрема аніонів хлору, другий –зі зміною внутрішньоклітинної осмолярності, можливо, за рахунок деградації тетрамерів гемоглобіну в дімери з одночасним перерозподілом внутрішньоклітинних електролітів. Показано шляхи експериментальної перевірки запропонованих механізмів. The properties of simple model of osmotic balance in erythrocytes involving the contributions of intracellular electrolytes and non-ideal osmotic properties of hemoglobin were investigated. Analyzing this model we suggested two mechanisms that may take part in the rise of erythrocyte resistance to hypotonic media induced by different agents. One mechanism is associated with protecting release of intracellular electrolytes, in particular, chloride anions, the second one is associated with the change of intracellular osmolarity presumably due to degradation of hemoglobin tetramers into dimers with a simultaneous redistribution of intracellular electrolytes. The ways for experimental testing of the suggested mechanisms have been shown. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии Теоретическая и экспериментальная криобиология К механизму осмотической протекции эритроцитов. I. Модель осмометра On the Mechanism of Osmotic Protection of Erythrocytes. I. Model of Osmometer. Article published earlier |
| spellingShingle | К механизму осмотической протекции эритроцитов. I. Модель осмометра Руденко, С.В. Щетинина, Е.М. Воловельская, Е.Л. Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| title | К механизму осмотической протекции эритроцитов. I. Модель осмометра |
| title_alt | On the Mechanism of Osmotic Protection of Erythrocytes. I. Model of Osmometer. |
| title_full | К механизму осмотической протекции эритроцитов. I. Модель осмометра |
| title_fullStr | К механизму осмотической протекции эритроцитов. I. Модель осмометра |
| title_full_unstemmed | К механизму осмотической протекции эритроцитов. I. Модель осмометра |
| title_short | К механизму осмотической протекции эритроцитов. I. Модель осмометра |
| title_sort | к механизму осмотической протекции эритроцитов. i. модель осмометра |
| topic | Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| topic_facet | Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68460 |
| work_keys_str_mv | AT rudenkosv kmehanizmuosmotičeskoiprotekciiéritrocitovimodelʹosmometra AT ŝetininaem kmehanizmuosmotičeskoiprotekciiéritrocitovimodelʹosmometra AT volovelʹskaâel kmehanizmuosmotičeskoiprotekciiéritrocitovimodelʹosmometra AT rudenkosv onthemechanismofosmoticprotectionoferythrocytesimodelofosmometer AT ŝetininaem onthemechanismofosmoticprotectionoferythrocytesimodelofosmometer AT volovelʹskaâel onthemechanismofosmoticprotectionoferythrocytesimodelofosmometer |