Влияние ритмического холодового воздействия на активность эластаз у самок крыс с алкогользависимой гипертензией

Под влиянием ритмических холодовых воздействий (РХВ) у самок крыс с алкогользависимой гипертензией отмечено угнетение активности эластаз различного происхождения в тканях коры мозга, легких, сердца, печени и почек ниже контрольного уровня. РХВ приводят к противоположно направленным изменениям эласта...

Повний опис

Збережено в:
Бібліографічні деталі
Опубліковано в: :Проблемы криобиологии
Дата:2012
Автори: Самохина, Л.М., Стародуб, Н.Ф., Бабийчук, Г.А., Ломако, В.В.
Формат: Стаття
Мова:Російська
Опубліковано: Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України 2012
Теми:
Онлайн доступ:https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68478
Теги: Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
Назва журналу:Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
Цитувати:Влияние ритмического холодового воздействия на активность эластаз у самок крыс с алкогользависимой гипертензией / Л.М. Самохина, Н.Ф. Стародуб, Г.А. Бабийчук, В.В. Ломако // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 1. — С. 49-60. — Бібліогр.: 37 назв. — рос., англ.

Репозитарії

Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
_version_ 1860094418985418752
author Самохина, Л.М.
Стародуб, Н.Ф.
Бабийчук, Г.А.
Ломако, В.В.
author_facet Самохина, Л.М.
Стародуб, Н.Ф.
Бабийчук, Г.А.
Ломако, В.В.
citation_txt Влияние ритмического холодового воздействия на активность эластаз у самок крыс с алкогользависимой гипертензией / Л.М. Самохина, Н.Ф. Стародуб, Г.А. Бабийчук, В.В. Ломако // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 1. — С. 49-60. — Бібліогр.: 37 назв. — рос., англ.
collection DSpace DC
container_title Проблемы криобиологии
description Под влиянием ритмических холодовых воздействий (РХВ) у самок крыс с алкогользависимой гипертензией отмечено угнетение активности эластаз различного происхождения в тканях коры мозга, легких, сердца, печени и почек ниже контрольного уровня. РХВ приводят к противоположно направленным изменениям эластазоингибиторной активности (ЭИА) α-1-ингибитора протеиназ ( α-1-ИП), вызванным действием алкоголя, а именно – к повышению во всех исследуемых тканях, кроме почек, в которых наблюдали снижение. При этом по сравнению с контролем ЭИА α-1-ИП повышалась только в легких и печени, т. е. в местах возможного синтеза данного ингибитора. Отсутствие стимулирования ингибиторного потенциала в коре мозга и сердце согласуется с локальным снижением ЭИА α-1-ИП в контроле и может быть обусловлено тем, что ингибитор не поступает из мест синтеза. Під дією ритмічних холодових впливів (РХВ) у самок щурів з алкогользалежною гіпертензією відзначено пригнічення активності еластаз різного походження в тканинах кори мозку, легень, серця, печінки і нирок нижче контрольного рівня. РХВ призводять до протилежно направлених змін еластазоінгібіторної активності (ЕІА) α-1-інгібітора протеїназ ( α-1-ІП), викликаних дією алкоголю, а саме до її підвищення у всіх досліджених тканинах, окрім нирок, в яких спостерігали зниження. При цьому порівняно з контролем ЕІА α-1-ІП зростала лише в легенях і печінці, тобто в місцях можливого синтезу даного інгібітору. Відсутність стимулювання інгібіторного потенціалу в корі мозку і серці узгоджується з локальним зниженням ЕІА α-1-ІП в контролі і може бути обумовлено тим, що інгібітор не надходить з місць синтезу. Under the influence of rhythmic cold exposures (RCEs) in female rats with alcohol-dependent hypertension there was found a suppressed activity of elastases of different origin in tissues of brain cortex, lungs, heart, liver and kidneys lower than the control level. RCEs lead to oppositely directed changes in elastase-inhibitory activity (EIA) of α-1- proteinase inhibitor ( α-1-PI) caused by alcohol effect and namely to the rise in all the studied tissues except kidneys wherein there was found a decrease. Herewith if compared to the control EIA α-1-PI increased only in lungs and liver, i. e. in the sites of possible synthesis of this inhibitor. The absence of stimulating an inhibitory potential in brain cortex and heart is in accordance with local decrease of EIA α-1-PI in the control and may be stipulated with the fact that inhibitor does not enter from the synthesis sites.
first_indexed 2025-12-07T17:25:32Z
format Article
fulltext 49 В последние десятилетия значительно увеличи- лись первичная заболеваемость алкоголизмом, а также смертность от отравления алкоголем [9]. Употребление алкоголя вызывает 5–25% всех гипертензивных состояний, причем умеренное его потребление 20–34 г в сутки повышает риск разви- тия артериальной гипертензии на 40%, а потребле- ние 35 г и более – на 90% [6, 24]. Механизмы формирования артериальной гипер- тензии при потреблении алкоголя включают разви- During recent decades primary alcoholism morbidity as well as mortality from poisoning with alcohol has significantly increased [9]. The alcohol consumption causes 5–25% of all hyper- tensive states, herewith its moderate consumption (20– 34 g) per day increases the risk of development of arterial hypertension by 40% and the ingestion of 25 g and more by 90% [6, 24]. The mechanisms of forming the arterial hyperten- sion when consuming alcohol comprise the develop- problems of cryobiology Vol. 22, 2012, №1 проблемы криобиологии Т. 22, 2012, №1 УДК 616.12-008.331.1:612.393.1:615.832.9 Л.М. САМОХИНА1*, Н.Ф. СТАРОДУБ2, Г.А. БАБИЙЧУК3, В.В. ЛОМАКО3 Влияние ритмического холодового воздействия на активность эластаз у самок крыс с алкогользависимой гипертензией UDC 616.12-008.331.1:612.393.1:615.832.9 L.M. SAMOKHINA1*, N.F. STARODUB2, G.A. BABIYCHUK3, V.V. LOMAKO3 Rhythmic Cold Effect on Activity of Elastases in Female Rats with Alcohol-Dependent Hypertension Под влиянием ритмических холодовых воздействий (РХВ) у самок крыс с алкогользависимой гипертензией отмечено угнетение активности эластаз различного происхождения в тканях коры мозга, легких, сердца, печени и почек ниже контрольного уровня. РХВ приводят к противоположно направленным изменениям эластазоингибиторной активности (ЭИА) α-1-ингибитора протеиназ ( α-1-ИП), вызванным действием алкоголя, а именно – к повышению во всех исследуемых тканях, кроме почек, в которых наблюдали снижение. При этом по сравнению с контролем ЭИА α-1-ИП повышалась только в легких и печени, т. е. в местах возможного синтеза данного ингибитора. Отсутствие стимулирования ингибиторного потенциала в коре мозга и сердце согласуется с локальным снижением ЭИА α-1-ИП в контроле и может быть обусловлено тем, что ингибитор не поступает из мест синтеза. Ключевые слова: ритмическое холодовое воздействие, алкогользависимая гипертензия, эластаза, металлоэластаза, эластазо- подобная активность цистеиновых протеиназ, α-1-ингибитор протеиназ, самки. Під дією ритмічних холодових впливів (РХВ) у самок щурів з алкогользалежною гіпертензією відзначено пригнічення активності еластаз різного походження в тканинах кори мозку, легень, серця, печінки і нирок нижче контрольного рівня. РХВ призводять до протилежно направлених змін еластазоінгібіторної активності (ЕІА) α-1-інгібітора протеїназ ( α-1-ІП), викликаних дією алкоголю, а саме до її підвищення у всіх досліджених тканинах, окрім нирок, в яких спостерігали зниження. При цьому порівняно з контролем ЕІА α-1-ІП зростала лише в легенях і печінці, тобто в місцях можливого синтезу даного інгібітору. Від- сутність стимулювання інгібіторного потенціалу в корі мозку і серці узгоджується з локальним зниженням ЕІА α-1-ІП в контролі і може бути обумовлено тим, що інгібітор не надходить з місць синтезу. Ключові слова: ритмічний холодовий вплив, алкогользалежна гіпертензія, еластаза, металоеластаза, еластазоподібна активність цистеїнових протеїназ, α-1-інгібітор протеїназ, самки. Under the influence of rhythmic cold exposures (RCEs) in female rats with alcohol-dependent hypertension there was found a suppressed activity of elastases of different origin in tissues of brain cortex, lungs, heart, liver and kidneys lower than the control level. RCEs lead to oppositely directed changes in elastase-inhibitory activity (EIA) of α-1- proteinase inhibitor ( α-1-PI) caused by alcohol effect and namely to the rise in all the studied tissues except kidneys wherein there was found a decrease. Herewith if compared to the control EIA α-1-PI increased only in lungs and liver, i. e. in the sites of possible synthesis of this inhibitor. The absence of stimulating an inhibitory potential in brain cortex and heart is in accordance with local decrease of EIA α-1-PI in the control and may be stipulated with the fact that inhibitor does not enter from the synthesis sites. Key words: rhythmic cold exposure, alcohol-dependent hypertension, elastase, metalloelastase, elastase-like activity of cysteine proteinases, α-1- proteinase inhibitor, females. * Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию: просп. Постышева, 2-а, г. Харьков, Украина 61039; тел.: (+38 057) 373-90-97, факс: (+38 057) 370-28-18, электронная почта: lub.samokhina@yandex.ua * To whom correspondence should be addressed: 2-a, Postysheva ave., Kharkov, Ukraine 61039; tel.:+380 57 373 90 97 , fax: +380 57 370 28 18, e-mail: lub.samokhina@yandex.ua 1L.T. Malaya Institute of Therapy of Academy of Medical Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine 2National University of Bioresourses and Environmental Manage- ment of Ukraine, Kiev, Ukraine 3Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na- tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine 1ГУ «Институт терапии им. Л.Т. Малой АМН Украины», г. Харьков 2Национальный университет биоресурсов и природопользования Украины, г. Киев 3Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков 50 problems of cryobiology Vol. 22, 2012, №1 проблемы криобиологии Т. 22, 2012, №1 тие дисфункции эндотелия, что обусловлено увели- чением продукции свободных радикалов, оксида- тивным стрессом [24]. Эти процессы непосредст- венно связаны с активацией нейтрофилов, которые высвобождают свободные радикалы и протеи- назы, особую роль среди которых играет сериновая эластаза (ЕС 3.4.21.37) [5, 27]. С аккумуляцией сериновой эластазы в гладкомышечных клетках связывают одно из патогенетических звеньев раз- вития и прогрессирования гипертензивных измене- ний в сосудах [34, 35]. Ранее нами было показано [17], что у самок крыс при алкогользависимой гипертензии (АЗГ) повышается общая активность эластаз, представ- ленная в основном нейтрофильной cериновой эластазой. Кроме того, в большинстве органов по- вышается эластастазоподобная активность цис- теиновых (или тиоловых) протеиназ (ЕС 3.4.22) эндотелиального происхождения, активность макрофагальной металлоэластазы (ЕС 3.4.24.65) уменьшается. Эти изменения на фоне снижения эластазоингибиторной активности α-1-ингибитора протеиназ (ЭИА α-1-ИП) могут обусловливать повреждение органов, в частности развитие деструктивных процессов. Эффективным средством коррекции патологи- ческих изменений в организме являются ритмичес- кие холодовые воздействия (РХВ) [2, 3], которые существенно улучшают функцию иммунной сис- темы, способствуют усилению адаптации организ- ма к действию неблагоприятных факторов. Приме- нение РХВ (–4...–6°С) с частотой 0,1–0,2 Гц в те- чение 90 мин восстанавливает нарушения, вызван- ные эмоционально-болевым стрессом, позволяет направленно корректировать патологические про- цессы, нормализует уровень гормонов у самок крыс [8]. Проведение РХВ у крыс со стимулирован- ной эмоционально-болевым стрессом гипертензией способствует нормализации активности отдельных ферментов, повышению активности ингибиторов протеиназ, что предотвращает возможность учас- тия эластаз в процессах повреждения органов [16]. Цель исследования – изучить влияние РХВ на активность эластаз и α-1-ИП в тканях различных органов самок крыс с АЗГ. Материалы и методы В исследовании задействованы 4 группы самок крыс, из них 2 опытные: АЗГ, АЗГ + РХВ; группа сравнения – РХВ; интактные – контроль, n = 5 в каж- дой группе. Начальный возраст животных, которым моделировали АЗГ, составил 7–8 месяцев, групп сравнения и контроля – 17–18 месяцев. Исследования проведены в соответствии с «Об- щими принципами экспериментов на животных», одобренными III Национальным конгрессом по биоэтике (Киев, 2007) и согласованными с положе- ment of dysfunction of endothelium, which is stipulated with the rise in the production of free radicals, oxidative stress [24]. These processes are directly related to the activation of neutrophils, releasing free radicals and proteinases, among those the special role belongs to serine elastase (EC 3.4.21.37) [5, 27]. One of patho- genetic links in development and progressing of hyper- tensive changes in vessels is associated with accumu- lation of serine elastase in smooth muscle cells [34, 35]. Previously we have shown [17] that in female rats at alcohol-dependent hypertension (ADH) total activity of elastase represented mainly with neutrophil elastase increases. In addition in the majority of organs the elastase-like activity of cysteine (or thiol) proteinases (EC.3.4.22) of endothelial origin enhances and the activity of macrophage metalloelastase (EC 3.4.24.65) decreases. These changes on the background of re- ducing elastase-inhibitory activity of α-1- proteinase inhibitor (EIA α-1-PI) may stipulate the lesion of or- gans in particular development of destructive proces- ses. An effective way to correct the pathological chan- ges in an organism are rhythmic cold exposures (RCEs) [2, 3] which significantly improve the function of immune system, contribute to the strengthening of orga- nism adaptation to the effect of unfavorable factors. Application of RCEs (–4...–6°C) with 0.1–0.2 Hz fre- quency for 90 min eliminates the disorders caused by emotional-pain stress, normalizes the hormonal level in female rats [8]. The RCEs in the rats with stimulated by emotional-pain stress hypertension contribute to nor- malized activity of certain enzymes, rise in the acti- vity of proteinase inhibitors, preventing the possible in- volvement of elastases into organs’ lesions [16]. The research aim was to investigate the RCEs on activity of elastases and α-1-PI in tissues of different organs of female rats with ADH. Materials and methods In this research there were used 4 groups of female rats, 2 of them were experimental: ADH; ADH + RCE; the group of comparison was RCE; intact represented the control, n = 5 in each group. Initial age of animals in which ADH was modeled made 7–8 months, for the groups of comparison and control it was 17–18 months. The studies were performed in accordance with ‘General principles of experiments in animals’ appro- ved by the 3rd National Congress in Bioethics (Kiev, 2007) and coordinated with the statements of ‘Euro- pean convention about the protection of vertebrate ani- mals used for experimental and other scientific pur- poses’ (Strasbourg, 1986). The animals were kept in vivarium with the standard diet. The ADH was modeled with ‘two bottle choice method’ (free choice between water and ethanol solu- 51 problems of cryobiology Vol. 22, 2012, №1 проблемы криобиологии Т. 22, 2012, №1 ниями «Европейской конвенции о защите позвоноч- ных животных, используемых для эксперименталь- ных и других научных целей» (Страсбург, 1986). Животных содержали в виварии на стандартном рационе. Моделирование АЗГ проводили «двухбу- тылочным» методом (при свободном выборе между водой и раствором этанола) [1]. Крысы по- лучали раствор этанола 1-ю неделю 5%-й, 2-ю – 10%, 3-ю и до конца эксперимента – 15%. Общий срок алкоголизации – 10 месяцев. Для проведения РХВ с частотой 0,1 Гц в течение 65 мин использовали охлаждающее устройство с программным управлением, созданное в ИПКиК НАНУ, приспособленное для прерывистой подачи хладоагента (холодный воздух с температурой 5 ± 1°С). Контроль систолического давления осущест- вляли медицинским тонометром, манжету накла- дывали на хвост. Из эксперимента животных выво- дили декапитацией. Печень перфузировали охлажденным 0,15 M раствором NaCl. Навески тканей коры мозга, легкого, сердца, печени и почек (300 мг) отмывали охлажденным физиологическим раствором и гомогенизировали в 3 мл Na-фосфатного буфера рН 7,4 на холоде, затем центрифугировали 10 мин при 5000 g на центрифуге РС-6 при температуре 4°С. Хранили при –20°С до анализа. Активность эластаз и ЭИА α-1-ИП в безъядер- ных фракциях указанных тканей исследовали высокочувствительным ферментативным мето- дом, разработанным в Институте терапии им. Л.Т. Малой АМН Украины [18, 20]. Принцип мето- да основан на использовании в качестве субстрата протеолитической реакции иммобилизованного на поверхности полистирола комплекса маркерного фермента (пероксидазы хрена) и аланил-аланина (Ala-Ala). В результате реакции происходят рас- щепление субстрата Ala-Ala и его десорбция с по- верхности полистирола вместе с молекулами свя- занного с ним маркерного фермента. Контролем были растворы эластазы активностью от 0,0005 до 0,5 Ед/мг белка. Оценка активности различных по происхож- дению эластаз основана на их отличии по чувст- вительности к ингибиторам [7]. Для определения эластазоподобной активности цистеиновых про- теиназ (ЭПАЦП) перед протеолитической реак- цией подавляли активность сериновых и металло- протеиназ добавлением к исследуемым образцам 1:1 ингибиторного раствора, содержащего 0,02%-й фенилсульфонилфлюорид и 6%-й этилендиамин- тетраацетат [18, 20]. Для определения активности металлоэластазы перед протеолитической реак- цией подавляли активность сериновой эластазы и ЭПАЦП добавлением к исследуемым образцам tion) [1]. The rats received the ethanol solution as fol- lows: first week 5%, 10% for 2nd one, 15% during the 3rd one and to the end of experiment. Total term of alcoholization was 10 months. To perform RCEs with 0.1 Hz frequency for 65 min we have used a cooling device with programmable control, designed at IPC&C of the National Academy of Sciences of Ukraine, adjusted for discontinuous sup- ply of coolant (cold air with temperature of 5 ± 1°C). Systolic pressure was controlled with medical blood pressure gauge, the cuff was put on a tail. The animals were slaughtered by decapitation. The liver perfusion was performed with cooled 0.15 M NaCl solution. The tissue samples of brain cortex, lung, heart, liver and kidneys (300 mg) were washed with cooled physiological solution and ho- mogenized in 3 ml Na-phosphate buffer pH 7.4 with cold, then centrifuged for 10 min at 5000g with PC-6 centrifuge at 4°C. They were stored at –20°C prior to analysis. The activity of elastases and EIA α-1-PI in nuclear- free fractions of the mentioned tissues was studied with highly sensitive enzyme method, designed at L.T. Malaya Institute of Therapy of Academy of Medical Sciences of Ukraine [18, 20]. The principle of this method is based on using complex of marker enzyme (horseradish peroxidase) and alanyl-alanyn (Ala-Ala) immobilized on the surface polystyrol as a substrate of proteolytic reaction. As a result of the reaction the Ala-Ala substrate cleavage and its desorp- tion from the surface of polystyrol along with the mo- lecules of bound with it enzyme take place. The control was the solutions of elastase with the activity from 0.005 to 0.5 units/mg protein. The assessment of activity of different by origin elastases is based on their different sensitivity to inhibitors [7]. To examine cysteine proteinases elas- tase-like activity (CPELA) prior to proteolytic reaction the activity of serine and metalloproteinases was sup- pressed by adding to the studied samples of 1:1 in- hibitory solution containing 0.02% phenyl sulfonyl fluoride and 6% ethylene diamine tetraacetate [18, 20]. To study the activity of metalloelastase prior to pro- teolytic reaction the activity of serine elastase and CPELA was suppressed by adding to the studied samp- les and incubation of 0.04% phenylsulfonyl fluoride and 0.1% monoiodoacetate for 5 min at 37°C. Total activity of elastases was studied without reaction with inhi- bitors. To examine EIA α-1-PI prior to proteolytic reaction to the investigated samples there was added the surplus of elastase (solution with the activity of 0.5 units/mg protein) 1:1 for binding with inhibitor, incubated for 15 min at 20°C. After proteolytic reaction the products of reaction were removed by washing-out and there was found 52 problems of cryobiology Vol. 22, 2012, №1 проблемы криобиологии Т. 22, 2012, №1 0,04%-го фенилсульфонилфлюорида и 0,1%-го монойодацетата. Инкубировали 5 мин при 37°С. Общую активность эластаз исследовали без реак- ции с ингибиторами. Для определения ЭИА α-1-ИП перед протеоли- тической реакцией к исследуемым образцам добавляли избыток эластазы (раствор активнос- тью 0,5 Ед/мг белка) 1:1 для связывания с ингиби- тором, инкубировали 15 мин при 20°С. После протеолитической реакции отмыванием удаляли продукты реакции и определяли остаточ- ную активность пероксидазы в реакции с пере- кисью водорода и ортофенилендиамином. По из- мерениям оптической плотности контрольных образцов рассчитывали активность эластаз и ЭИА α-1-ИП в исследуемых пробах в Ед/мл, с учетом концентрации белка в пробах – в Ед/мг белка. Концентрацию белка определяли методом Бред- форда [21]. В работе использовали пероксидазу хрена, элас- тазу, фенилсульфонилфлюорид, монойодацетат («ICN», США), Ala-Ala («Fluka», Германия), этилендиаминтетраацетат, бычий сывороточный альбумин, полистироловые планшеты (Россия) и фотометр-анализатор иммуноферментный «Hu- manreader 2106-1709» («Human», Германия). Статистическую обработку данных проводили по методу Стьюдента-Фишера с использованием программного обеспечения «Exсel». Результаты и обсуждение Уровень систолического артериального давле- ния у алкоголизированных крыс составил 176,70 ± 20,68 мм рт. ст. (контроль 130,00 ± 12,25 мм рт. ст.), что указывает на формирование гипертензии, в ре- зультате РХВ при АЗГ – 125,0±10,5 мм рт. ст., в группе сравнения – 127,00 ± 13,35 мм рт. ст. Исследование группы животных с АЗГ позволи- ло выявить, что общая активность эластаз повы- шается существенно во всех исследуемых тканях в 8–12 раз, а в почках – в 100 раз (табл. 1). Досто- верное увеличение ЭПАЦП наблюдали в коре моз- га, легких, сердце, хотя и менее выраженное, по сравнению с активностью эластаз. Активность металлопротеиназы, в отличие от эластаз и ЭПАЦП, при АЗГ снижалась во всех исследуемых тканях, кроме почек, наиболее выраженное снижение (в сотни раз) отмечено в сердце. Выявленные нами более низкие значения общей активности эластаз в контроле по сравнению с ме- таллэластазой и ЭПАЦП, обусловлены тем, что при определении «общей» активности протеиназ имеет место конкуренция за субстрат, а при подав- лении конкурентных эластаз уровень активности отдельных «частных» протеиназ возрастает. a residual activity of peroxidase in the reaction with hydrogen peroxide and orthophenylenediamine. On the measurements for optical density of the control samp- les there was calculated the activity of elastases and EIA α-1-PI in the investigated assays in units/ml with taking into account the protein concentrations in the samples, in units/mg protein. Protein concentration was found by Bradford method [21]. In the work there were used horseradish peroxi- dase, elastase, phenylsulfonyl fluoride, monoiodacetate (ICN, USA), Ala-Ala (Fluka, Germany), ethylenedia- minetetraacetate, bovine serum albumin, polystyrol strip plates (Russia) and immune-enzyme photometer- analyser Humanreader 2106-1709 (Human, Germany). The data were statistically processed with Student- Fisher method using Excel software. Results and discussion The level of systolic arterial pressure in alcoholized rats made 176.70 ± 20.68 mm Hg (control 130.00 ± 12.25 mm Hg) pointing to the formation of hypertension, as the result of RCEs at ADH was 125 ± 10.5 mm Hg in the comparison group this was 127.00 ± 13.35 mm Hg. The study of the group of animals with ADH enab- led the revealing that total activity of elastases increa- sed in all the investigated tissues in 8–12 times and in kidneys in 100 times (Table 1). Statistically significant rise in CPELA was observed in brain cortex, lungs, heart, though it was less manifested if compared with the activity of elastases. The activity of metallopro- teinase in contrast to elastases and CPELA at ADH reduced in all the studied tissues except the kidneys, the most manifested reduction (in hundreds times) was found in heart. The revealed by us much lower values of total ac- tivity of elastases in the control if compared with metalloelastase and CPELA are stipulated with the fact that when examining total activity of proteinases the competition for the substrate takes place, and when suppressing the competitive elastases the level of acti- vity of certain particular proteinases increases. Herewith EIA α-1-PI in the majority of the studied tissues reduced if compared with the control except kidneys in them the increase was observed (Table 2). The findings were in accordance with the changes of activity of elastases and EIA α-1-PI at ADH, des- cribed previously [17]. The activation of elastases was mainly associated with the development of oxidative injury. Systematic formation of excessive amount of acetalaldehyde during alcohol addiction leads to oxi- dative stress, and development of hypertension [24]. The presence of the most significant activation of elas- tases in kidneys is rather related to local accumulation of toxic susbstances. A special role at alcohol into- xication belongs to CPELA, since its activation may 53 problems of cryobiology Vol. 22, 2012, №1 проблемы криобиологии Т. 22, 2012, №1 При этом ЭИА α-1-ИП в большин- стве исследованных тканей снижается по сравнению с контролем, кроме почек, в них наблюдается ее повыше- ние (табл. 2). Полученные данные согласуются с изменениями активности эластаз и ЭИА α-1-ИП при АЗГ, описанными ранее [17]. Активацию эластаз связывают, в основном, с развитием оксидативного повреждения. Систематическое обра- зование избыточного количества аце- тальдегида при злоупотреблении алко- голем приводит к оксидативному стрессу, развитию гипертензии [24]. Наличие наиболее значимой актива- ции эластаз в почках связано, скорее всего, с локальным накоплением ток- сических веществ. Особая роль при алкогольной интоксикации принадле- жит ЭПАЦП, так как ее активация может быть связана с развитием мор- фофункциональных нарушений струк- туры сосудов и характера протекаю- щих метаболических процессов. Из- вестно, что эндотелиоциты способны синтезировать и высвобождать элас- тазу [25, 26, 33]. Изменения ее актив- ности, очевидно, являются следствием сосудистой дисциркуляции, застойных явлений, возникающих за счет нарас- тания венозного полнокровия на фоне обеднения капиллярной сети [10]. До- стоверный характер изменений ЭПАЦП в тканях коры мозга, легких и сердца указывает на возможность ее локаль- ного участия в развитии деструктив- ных процессов и нарушении функциони- рования этих органов при АЗГ. Сниже- ние активности металлоэластазы, в свою очередь, связывают с ее расходо- ванием в процессах деградации экстра- целлюлярного матрикса [17]. Наибо- лее выраженное снижение ее активнос- ти в сердце может свидетельствовать о существенном локальном тканевом повреждении, развитии деструктивных процессов. Введение этанола в орга- низм приводит к эскалации сосудистых be related to the development of morphofunctional impairments of the structure of vessels and the charac- ter of proceeding metabolic processes. It is known that endotheliocytes are capable to synthesize and release elastase [25, 26, 33]. The changes in its activity are likely the result of vascular discirculation, stagnant phe- nomena appearing due to increased congestion on the background of capillary network depletion [10]. ыцзарбО йенакт eussiT selpmas ьлортноK lortnoC ГЗА HDA ВХР+ГЗА ECR+HDA ВХР ECR )ьтсонвиткаяащбо(затсалэьтсонвиткА )ytivitcalatot(ytivitcaesatsalE агзомароK xetrocniarB 122,0±588,0 392,2±426,9 3 *20,0±01,0 4,2±7,07 3 еикгеЛ sgnuL 431,0±204,0 048,1±392,6 3 600,0±810,0 2 1,71±2,35 3 ецдреС traeH 122,0±466,0 453,1±783,5 3 500,0±610,0 2 8,33±3,201 3 ьнечеП reviL 831,0±994,0 820,1±095,4 3 600,0±910,0 1 7,47±8,242 3 икчоП syendiK 320,0±080,0 320,3±175,8 2 400,0±310,0 2 3,72±2,38 3 заниеторпхывониетсицьтсонвиткаяанбодопозатсалЭ esatsaleesanietorpenietcyC l- ytivitcaeki агзомароK xetrocniarB 355,0±862,2 561,1±634,4 1 210,0±860,0 2 *04,0±66,5 еикгеЛ sgnuL 432,0±609,0 21,1±84,4 1 320,0±921,0 1 08,1±53,4 2 ецдреС traeH 771,0±916,0 078,0±384,3 1 210,0±660,0 2 09,0±62,7 2 ьнечеП reviL 831,0±585,0 403,0±678,0 410,0±360,0 2 25,1±84,6 2 икчоП syendiK 811,0±544,0 992,0±592,1 *910,0±170,0 40,1±76,3 2 ызатсалэоллатемьтсонвиткА ytivitcaesatsaleollateM агзомароK xetrocniarB 423,2±585,6 781,0±417,0 1 210,0±630,0 2 8,4±5,72 1 еикгеЛ sgnuL 406,0±384,2 042,0±689,0 1 700,0±320,0 2 5,5±9,81 1 ецдреС traeH 929,0±338,2 300,0±900,0 2 300,0±800,0 2 21,4±58,41 1 ьнечеП reviL 677,0±864,2 670,0±403,0 2 400,0±420,0 3 3,8±6,02 1 икчоП syendiK 792,0±881,1 232,0±496,1 600,0±910,0 2 8,4±0,42 3 Таблица 1. Активность эластаз у самок крыс с алкогользависимой гипертензией под влиянием РХВ (n = 5), (M ± m), Ед ×10–3/мг белка Table 1. Activity of elastases in female rats with alcohol-dependent hypertension at RCE (n = 5), (M ± m) Units×10–3/mg protein Примечание: 1, 2, 3 – степень вероятности различий по сравнению с контролем, р < 0,05, < 0,01, < 0,001 соответственно. Notes: 1, 2, 3 – probability of significant differences comparing with the control, p < 0.05, < 0.01, < 0.001, correspondingly. нарушений в сердце, дистрофическим изменениям в субклеточных структурах, формированию очагов распада миоцитов [31]. Защищенность тканей от избыточной активации эластаз при АЗГ может обеспечиваться повыше- нием ЭИА α-1-ИП. Усиление ЭИА α-1-ИП лишь в почках может быть связано с чрезмерной ло- кальной активацией эластаз (табл. 2). 54 problems of cryobiology Vol. 22, 2012, №1 проблемы криобиологии Т. 22, 2012, №1 Применение РХВ при АЗГ способ- ствовало существенному угнетению активности эластаз, металлоэластазы и ЭПАЦП во всех исследуемых об- разцах ниже контрольного уровня (см. табл. 1). Снижение уровня активности эластаз и ЭПАЦП может быть обус- ловлено формированием повышенной устойчивости организма к негатив- ным факторам и феноменом пере- крестной адаптации к стрессорным воздействиям [11, 19]. Данное предпо- ложение согласуется с результатами исследований других авторов, указы- вающих, что экстремальная криоте- рапия у алкоголизированных крыс способствует снижению венозной на- пряженности и увеличению площади капиллярного русла [9, 10]. Последнее, возможно, вызывает и снижение ак- тивности макрофагальной металло- эластазы. В большинстве исследуемых об- разцов тканей в группе АЗГ + РХВ, как Statistically significant character of the changes in CPELA in tissues of brain cortex, lungs and heart points to the possibility of its local involvement into the deve- lopment of destructive processes and disordered func- tioning of these organs at ADH. Reduced activity of metalloelastase in its turn is associated with its expen- diture during degradation of extracellular matrix [17]. The most manifested decrease of its activity in heart may testify to a significant local tissue lesion, develop- ment of destructive processes. Administration of etha- nol into organism leads to escalation of vascular im- pairments in heart, dystrophic changes in subcellular structures, formation of myocytes’ decay foci [31]. Defence of the tissues from excessive activation of elastases at ADH can be provided with the rise in EIA α-1-PI. Strengthening of EIA α-1-PI only in kid- neys may be related to redundant local activation of elastases (Table 2). Application of RCEs at ADH contributed to a strong suppression of activity of elastases, metalloelastases and CPELA in all the studied samples below the con- trol level (see Table 1). The reduced level of activity of elastases and CPELA can be stipulated with the formation of an increased resistance of an organism to negative factors and phenomenon of cross-adapta- tion to stress effects [11, 19]. This supposition is in accordance with the reported data of other authors, demonstrating that extreme cryo- therapy in alcoholized rats contributed to a reduced venous tension and rise in the capillary bed area [9, 10]. The latter likely caused the decrease in activity of macrophagal metalloelastases as well. ыцзарбО йенакт eussiT selpmas ьлортноK lortnoC ГЗА HDA ВХР+ГЗА ECR+HDA ВХР ECR агзомароK xetrocniarB 3,1±5,055 3,0±9,573 1 1,2±6,393 3 2,7±3,373 2 еикгеЛ sgnuL 9,0±4,433 4,0±5,662 1 0,3±1,854 1 3,2±9,654 2 ецдреС traeH 8,0±8,144 6,0±4,223 1 1,2±3,904 1 1,6±1,004 1 ьнечеП reviL 0,1±7,572 5,0±4,091 1 4,1±7,884 2 4,3±2,484 2 икчоП syendiK 5,0±8,692 *2,0±2,233 1,2±7,023 1 8,6±1,603 1 Таблица 2. Эластазоингибиторная активность α-1-ингибитора протеиназ у самок крыс с алкогользависимой гипертензией под влиянием РХВ (n = 5), (M ± m), Ед ×10–3/мг белка Table 2. Elastase-inhibiting activity of α-1-inhibiting proteinases in female rats with alcohol-dependent hypertension at RCE (n = 5), (M ± m) Units×10–3/mg protein Примечание: 1, 2, 3 – степень вероятности различий по сравнению с контролем, р < 0,05, < 0,01, < 0,001 соответственно. Notes: 1, 2, 3 – probability of significant differences comparing with the control, p < 0.05, < 0.01, < 0.001, correspondingly. и в контроле, выявленный нами уровень активности металлоэластазы и ЭПАЦП выше по сравнению с «общей» активностью эластаз, что связано, как указано выше, со снижением конкуренции за суб- страт при подавлении отдельных эластаз. Наблюдаемое нами уменьшение активности эластаз в группе АЗГ + РХВ взаимосвязано с увели- чением эластазоингибиторной активности α-1-ИП, изменения которой имели противоположно направ- ленный характер по сравнению с вызванными действием алкоголя, а именно: повышение в тканях коры мозга, легких, сердца, печени и снижение в почках (табл. 2). Следует отметить, что в группе АЗГ + РХВ активность эластаз в легких, сердце и печени, ЭПАЦП в коре мозга снижались более чем в 20 раз, а активность металлоэластазы – в сотни раз практически во всех исследуемых тканях, кроме почек, в которых выявлено уменьшение ее уровня в 55 раз. Большая степень выраженности подавле- ния активности металлоэластазы в группе АЗГ + РХВ, по сравнению с эластазами и ЭПАЦП, мо- жет свидетельствовать о существенном вкладе макрофагов в развитие ответной реакции на РХВ при АЗГ. При этом меньшее снижение активности металлоэластазы в почках, по сравнению с дру- гими исследованными тканями, по-видимому, связано с наличием защищенности данного органа от негативного проявления активности эластаз за счет исходного локального повышения ЭИА α-1- ИП при АЗГ. Более существенное снижение актив- ности эластаз в легких, сердце и печени, по срав- 55 problems of cryobiology Vol. 22, 2012, №1 проблемы криобиологии Т. 22, 2012, №1 нению с другими тканями, может быть связано с активностью метаболических процессов в этих органах. Известно, что активность нейтрофилов, высвобождающих сериновую эластазу, во многом определяется внутрисосудистой окружающей средой [37]. Полученные результаты согласуются с данны- ми других исследователей, свидетельствующими о том, что мягкая гипотермия ингибирует адгезию, активацию и аккумуляцию нейтрофилов [28, 36]. Охлаждение также нарушает процесс миграции нейтрофилов и степень этого нарушения меняется в зависимости от локализации [22]. Кроме того, гипотермия влияет на функцию эндотелия и ак- тивность макрофагов, значительно снижает эндо- телиальную экспрессию молекул адгезии и ин- фильтрацию лейкоцитами (моноцитами) [36]. Выраженный характер снижения ЭПАЦП в коре мозга может быть связан с эффектом РХВ на ультраструктуру астроглии, особенно это касается отростков астроцитов, окружающих терминальные сосуды [12]. Применение РХВ приводит к сущест- венным изменениям в ультраструктуре эндотелио- цитов, их плотных контактов и окружающей сосуд базальной мембраны. Следует отметить, что в результате РХВ у крыс с АЗГ (группа АЗГ + РХВ) ЭИА α-1-ИП остается на уровне ниже контрольного значения в коре мозга и сердце, что указывает на недостаточный эффект применяемого нами режима РХВ. Повышение ЭИА α-1-ИП в других исследуемых тканях сви- детельствует об их защищенности в результате РХВ от деструктивных процессов, протекающих с участием эластаз. Наличие повышенного уровня α-1-ИП в легких и печени обеспечивается возмож- ностью его синтеза и высвобождения клетками печени и макрофагами легких. Можно предпо- лагать, что РХВ у крыс с АЗГ стимулирует высво- бождение α-1-ИП, повышение активности кото- рого приводит к значительному снижению уровня эластаз. При этом в коре мозга и сердце наблю- дается его расходование без необходимой компен- сации, что, возможно, определяется недостаточ- ным поступлением данного ингибитора из мест синтеза. В группе сравнения по оценке влияния РХВ на организм интактных крыс наблюдали активацию всех исследуемых эластаз по сравнению с контро- лем (см. табл. 1). Наиболее существенные измене- ния выявили при исследовании активности эластаз: в коре мозга увеличение в 87 раз, легких – в 130 раз, сердце – в 170 раз, печени – в 600 раз, почках – в 1000 раз. Эти результаты значительно отличаются от изменений ЭПАЦП, максимальное усиление которой отмечено нами в сердце и печени (в 12 раз), и металлоэластазы, наибольшую активность которой наблюдали в почках – в 21 раз. В то же In the majority of the studied tissue samples in the group ADH + RCE as well as in the control the revealed by us level of activity of metalloelastases and CPELA was higher if compared with ‘total’ activity of elas- tases, related as above mentioned to reduced com- petition for substrate when suppressing certain elas- tases. The observed by us decrease in the activity of elas- tases in the group ADH + RCE was interrelated with a rise in EIA α-1-PI which changes had a directed character if compared with those caused by alcohol, and namely: increase in tissues of brain cortex, lungs, heart, liver and decrease in kidneys (Table 2). It should be noted that in the group ADH + RCE the activity of elastases in lungs, heart and liver, CPELA in brain cortex reduced more than 20 times and the one of metalloelastases did in hundreds times virtually in all the studied tissues, in addition there was found a decrease of its level in 55 times. Higher manifestation rate of metalloelastase activity suppression in the group ADH + RCE if compared with elastases and CPELA may testify to significant contribution of macrophages into the response to RCEs at ADH. Herewith, less re- duction in the activity of metalloelastase in kidneys if compared with other studied tissues can be likely related with the presence of defence of this organ from negative manifestation of elastases due to initial local rise in EIA α-1-PI at ADH. More significant reduction in the activity of elastases in lungs, heart and liver if compared with other tissues can be related to the activity of metabolic processes in these organs. Activity of neutrophils, releasing serine elastase is known to be mainly determined by intra-vascular environment [37]. The findings are in accordance with the data of other researchers, reported that mild hypothermia inhi- bited adhesion, activation and accumulation of neut- rophils [28, 36]. Cooling also impaired the migration of neutrophils and the degree of this disorder altered depending on localization [22]. Moreover, hypothermia affected endothelium function and activity of macro- phages, strongly reduced endothelial expression of ad- hesion molecules and infiltration of leucocytes (mono- cytes) [36]. Manifested character of CPELA decrease in brain cortex may be related to RCEs on ultrastructure of astroglia, especially it concerns astrocytes’ proces- ses surrounding terminal vessels [12]. Application of RCEs leads to significant changes in ultrastructure of endotheliocytes, their dense contacts and surrounding the vessel basal membrane. It should be noted that as a result of RCEs in the rats with ADH (group ADH + RCE) the EIA α-1-PI has remained at the level below the control value in brain cortex and heart, pointing to insufficient effect of the applied by us RCE regimen. Increased EIA α-1-PI in other studied tissues testify to caused by RCEs resistance to destructive processes occurring with the involvement of elastases. The presence of in- 56 problems of cryobiology Vol. 22, 2012, №1 проблемы криобиологии Т. 22, 2012, №1 время ЭИА α -1-ИП снижалась в коре мозга и сердце, повышалась в легких, печени, менее – в почках (табл. 2). Указанные изменения свидетельствуют о зна- чительной активации при РХВ реакций ограничен- ного протеолиза с участием эластаз как за счет повышения их активности, так и снижения ЭИА α-1-ИП. Следует также отметить, что РХВ, как стресс-воздействие, может приводить к значитель- ной активации регуляторных функциональных систем организма [19], в частности гематоэнце- фалического барьера [11]. При этом активация эластаз может способствовать расширению адап- тационных возможностей, повышению устойчи- вости к влиянию внешних и внутренних стрессовых факторов [15, 16]. Наблюдаемую нами активацию всех исследуемых эластаз при РХВ можно рас- сматривать и как элемент гормезиса. Известно, что явление гормезиса наблюдается при кратковре- менных воздействиях низких температур [4]. При- меняемые в наших экспериментах РХВ выступают в роли стимулятора, причем температура их воздействия находится в положительном диапа- зоне (около 5°С) и значительно меньше уровня, вредного для организма. Наблюдаемое нами при РХВ более сущест- венное повышение активности эластаз, по сравне- нию с ЭПАЦП и металлоэластазой, может быть обусловлено активацией циркулирующих нейтрофи- лов и опосредовано стимуляцией высвобождения таких цитокинов, как интерлейкин-1, интерлейкин-8, фактор некроза опухоли α [30]. При этом возникает вопрос о возможном усилении тканеповреждаю- щего эффекта. В этом аспекте интересно отметить результаты другого исследования, свидетельст- вующие о повышении экспрессии нейтрофильных интегринов CD11b и CD11c [29]. Считают, что акти- вация этих молекул адгезии способствует притуп- лению нейтрофилопосредованного повреждения тканей. Повышение ЭПАЦП является естественной реакцией организма в ответ на стресс-воздействие [26]. Можно предполагать, что значительное по- вышение ЭПАЦП при РХВ происходит за счет увеличения общего количества ферментов, локали- зованных в эндотелиоцитах. Увеличение ЭПАЦП, возможно, оказывает влияние на течение эндо- телий-зависимых процессов, включающих тонус, проницаемость сосудов, и приводит к развитию структурных изменений в сосудах [13]. В данном случае эти изменения могут проявляться в увели- чении эластичности волокон, обеспечивающих противодействие растяжимости сосудов, снижении их жесткости. Полученные результаты указывают на важность этих процессов в первую очередь для тканей сердца и печени, активная деятельность ко- creased level of α-1-PI in lungs and liver is provided with its possible synthesis and release by liver cells and macrophages of lungs. It is possible to suppose that RCEs in the rats with ADH stimulate the release of α-1-PI, increased activity of which results in signi- ficant reduction of the level of elastases. Herewith in brain cortex and heart there is observed its expenditure with no necessary compensation which is likely deter- mined with insufficient entering of this inhibitor from the synthesis sites. In the group of comparison on the assessment of RCE influence on intact rats the activation of all the studied elastases compared to the control was observed (see Table 1). The strongest changes were revealed when investigating the activity of elastases in brain cortex in 87 times, in 130 and 170 times for lungs and heart, correspondingly, for liver in 600 times and kidneys in 1,000 times. These results differ significantly from the changes of CPELA, maximum strengthening of which was noted by us in heart and liver (in 12 times) and metalloelastase the highest activity of which was seen in kidneys (in 21 times). At the same time EIA α-1-PI reduced in brain cortex and heart, and increased in lings, liver, in less extent in kidneys (Table 2). The mentioned changes testify to a significant ac- tivation at RCEs of the reactions of restricted proteoly- sis with the participation of elastases both due to in- crease of their activity and reduction of EIA α-1-PI. It should be also noted that RCEs as stress effect can lead to significant activation of regulatory function sys- tems of an organism [19], in particular blood brain bar- rier [11]. Herewith the activation of elastases can con- tribute to the extension of adaptive possibilities, rise in the resistance to the effect of external and internal stress factors [15, 16]. The observed by us activation of all the studied elastases at RCEs can be considered also as element of hormesis. It is known that the pheno- menon of hormesis is observed at short-term effects of low temperatures [4]. Applied in our experiments RCEs act as stimulators, moreover the temperature of their effect is within the positive range (about 5°C) and considerably lower the level, which is harmful for an organism. Observed by us at RCEs stronger rise in the activity of elastases if compared to CPELA and metalloelas- tase can be stipulated by activation of circulating neutrophils and indirectly by stimulation of releasing such cytokines as interleukin-1, interleukin-8, tumor necrosis factor α [30]. Herewith, the question about possible strengthening of tissue injuring effect appears. In this aspect it is interesting to note the results of other study testifying to a rise in the expression of neutorphil integrins CD11b and CD11c [29]. It is belie- ved that activation of these adhesion molecules contri- butes to an obtusion of neutrophil-mediated tissue da- mage. 57 problems of cryobiology Vol. 22, 2012, №1 проблемы криобиологии Т. 22, 2012, №1 торых непосредственно отражается на функциони- ровании всех систем организма. Значительное повышение активности металло- эластазы под влиянием РХВ может быть связано с участием макрофагов в развитии противовоспа- лительных, проангиогенных эффектов, адаптивного ответа, а также в восстановлении иммунитета, на- рушенного в результате старения организма [32]. Следует отметить, что повышение активности α-1-ИП в легких и печени в результате РХВ по сравнению с контролем указывает, как уже было отмечено ранее [16], на возможность его синтеза и/или высвобождения. Снижение ЭИА α-1-ИП в коре мозга и сердце под влиянием РХВ, вероятно, обусловлено его расходованием на подавление избыточной активности эластаз, а также отсутст- вием поступления α-1-ИП в данные органы из мест синтеза. Наблюдаемое нами повышение ЭИА α-1-ИП в почках может быть связано с про- явлением естественной реакции организма, воз- никающей в ответ на воздействие стресс-факторов, а также со снижением уровня окислительных метаболитов, в частности супероксида и пе- роксинитрита, способных подавлять ЭИА α-1-ИП [23]. Активность α-1-ИП направлена на связы- вание протеиназ, в том числе и эластаз, и выве- дение их из организма почками. Это особенно важ- но в условиях влияния РХВ, учитывая максималь- ную локальную активацию эластаз и металлоэлас- тазы. Выводы 1. После РХВ у самок крыс с АЗГ существенно угнетается активность эластаз, металлоэластазы и ЭПАЦП в тканях коры мозга, легких, сердца, печени и почек ниже контрольных значений, несмотря на их различный исходный уровень. 2. Применение РХВ приводит к противоположно направленным изменениям ЭИА α-1-ИП, вызван- ным действием алкоголя: повышению во всех исследуемых тканях, кроме почек, в которых на- блюдается снижение. При этом по сравнению с контролем ЭИА α-1-ИП повышается только в легких и печени, т. е. в местах возможного син- теза данного ингибитора. 3. Отсутствие стимулирования ингибиторного потенциала под влиянием РХВ при АЗГ в коре мозга и сердце согласуется с локальным сниже- нием ЭИА α-1-ИП в контроле и может быть обус- ловлено тем, что ингибитор не поступает из мест синтеза. Перспективно исследование активности элас- таз и ЭИА α-1-ИП при других режимах и видах холодовых воздействий у животных с эксперимен- тальными моделями патологических состояний. Increase in CPELA is natural response of an orga- nism to stress-effect [26]. It is possible to suppose that a significant rise in CPELA at RCEs occurs due to increase of total number of enzymes, localized in endotheliocytes. The increase in CPELA likely affects the course of endothelium-dependent processes, inclu- ding tonus, permeability of vessels and leads to the development of structural changes in the vessels [13]. In this case these alterations may be manifested in the rise of elasticity of fibers, providing counteraction to the compliance of vessels, reduction of their rigidity. The findings point to the importance of these processes first of all for the tissues of heart and liver, the activity of those is directly reflected to functioning of all the systems of an organism. Considerable rise of metalloelastases at RCEs can be related to the involvement of macrophages in development of anti-inflammatory, pro-angiogenic effects, adaptive response as well as in recovery of immunity impaired as a result of organism ageing [32]. It should be noted that increase in the activity of α-1-PI in lungs and liver as a result of RCEs if com- pared to the control points as it has been already noted [16] to its possible synthesis and/or release. The re- duction of EIA α-1-PI in brain cortex and heart at RCEs is likely stipulated by its expenditure for sup- pressing surplus activity of elastases as well by the absence of entering of α-1-PI to these organs from the synthesis sites. The observed by us rise in EIA α- 1-PI in kidneys can be related to the manifestation of natural reaction of an organism in response to the effect of stress factors, as well as with the reduction of level of oxidative metabolites, in particular super- oxide and peroxynitirite capable to suppress EIA α-1- PI [23]. Activity of α-1-PI is directed to binding the proteinases including elastases and their release from an organism by kidneys. This is especially important under conditions of RCEs, taking into account the maximal local activation of elastases and metallo- elastase. Conclusions 1. After RCEs in female rats with ADH the activity of elastases, metalloelastase and CPELA are signi- ficantly suppressed in tissues of brain cortex, lungs, heart, liver and kidneys beyond the control values, in spite of their different initial levels. 2. Application of RCEs leads to oppositely directed changes in EIA α-1-PI, caused by alcohol: rise in all the studied tissues, except kidneys, wherein the de- crease is observed. Herewith if compared with the control EIA α-1-PI increases only in lungs and liver, i. e. in the sites of possible synthesis of this inhibitor. 3. The absence of stimulation of inhibitory potential under RCEs at ADH in brain cortex and heart is in 58 problems of cryobiology Vol. 22, 2012, №1 проблемы криобиологии Т. 22, 2012, №1 accordance with local reduction in EIA α-1-PI in the control and can be stipulated with the fact that the inhibitor does not enter from the synthesis sites. The study of activity of elastases and EIA α-1-PI at other regimens and types of cold effects in animals with experimental models of pathological states is pers- pective. Литература 1. Анохина И.П., Камерницкий А.В., Станишевская А.В. и др. Экспериментальное исследование действия нового корти- костероидного соединения на влечение к морфину, кокаину и алкоголю на различных стадиях формирования зависи- мости // Вопросы наркологии. – 2010. – №1. – С. 41–47. 2. Бабийчук Г.А., Бабийчук В.Г., Мамонтов В.В. Влияние ритмических экстремальных холодовых воздействий на показатели вегетативной регуляции сердечного ритма и содержание цитокинов в сыворотке крови у людей пожилого возраста // Буковинський медичний вісник. – 2009. – Т. 13, №4. – С. 17–20. 3. Бабийчук В.Г. Количественная оценка антиген-специфи- ческих клеток в крови человека после ритмических холо- довых воздействий // Проблемы криобиологии. – 2009. – T.19, №2. – С. 143–153. 4. Баранов А.Ю., Кидалов В.Н. Лечение холодом. Криоме- дицина.– СПб: Атон, 1999. – 272 с. 5. Белова Л.А. Биохимия процессов воспаления и поражения сосудов. Роль нейтрофилов // Биохимия. – 1997. – Т. 62, №6. – C. 659–669. 6. Бульда В.І., Корсунська О.Є. Хронічне вживання алкоголю та підвищений артеріальний тиск // Внутрішня медицина. – 2008. – №3. – С. 67–69. 7. Досенко В.Е. Определение различных форм эластазы в аорте при экспериментальном артериосклерозе // Лаб. диагностика. – 1998. – №1. – С. 24. 8. Єршова О.В. Вплив ритмічної краніоцеребральної гіпотермії на нейрогуморальні механізми регуляції циклічних процесів репродуктивної системи: Автореф. дис. … канд. мед. наук. – Харків, 2008.– 20 с. 9. Ломакин И.И. Обоснование методов лечебного охлаж- дения в терапии хронического алкоголизма // Проблемы криобиологии. – 2008. – Т. 18, №3. – С. 383–385. 10.Ломакін І.І., Луценко Д.Г., Марченко В.С., Марченко Л.М. Функціональна ангіоархітектоніка мозку при дії низьких температур в умовах експериментальної моделі хронічного алкоголізму // Світ медицини та біології.– 2009.– №3, Ч. 1. – С. 99–105. 11.Марченко В.С., Бабийчук В.Г. Кардиорегуляторная функ- ция гематоэнцефалического барьера при резонансной гипотермии // Проблемы криобиологии. – 2001. – №4. – С. 17–29. 12.Марченко Л.Н., Бабийчук Г.А., Марченко В.С. и др. К механизмам регуляции проницаемости гематоэнцефа- лического барьера охлажденного мозга // Проблемы крио- биологии. – 1995. – №4. – С. 10–19. 13.Меншутина М.А. Сравнительная оценка реактивности сосудов как формы дисфункции эндотелия у больных ате- росклерозом и хронической болезнью почек // Нефроло- гия. – 2004. – Т. 8, №3. – С. 56–61. 14.Москвичев В.Г., Цыганков Б.Д., Волохова Р.Ю., Верт- кин А.Л. Гендерспецифические аспекты алкоголь-обуслов- ленных соматических заболеваний // Трудный пациент (Архив). – 2006. – №9. – С. 57–62. 15.Самохина Л.М., Бабийчук Г.А., Познахарева И.А., Само- хин А.А. Система протеиназа – ингибитор протеиназ у крыс разного возраста // Труды науч. конф., посвященной 100- летию со дня рождения акад. Н.И. Буланкина (16–17 января 2001г.) – Харьков, 2001.– С. 154–155. 16.Самохина Л.М. Влияние ритмического холодового воз- действия на активность отдельных ферментов у старых крыс со стимулированной гипертензией // Проблемы крио- биологии. – 2003. – №1. – С. 20–25. 17.Самохіна Л.М., Ломако В.В. Еластази за умов алкоголь- залежної гіпертензії у щурів різної статі // Вісник проблем біології та медицини. – 2011. – Вип. 1. – С. 165–169. 18.Самохіна Л.М., Ломако В.В., Шило О.В. Еластази за умов штучного гіпометаболічного стану у щурів // Проблемы криобиологии. – 2008. – Т. 18, №4. – С. 557–560. References 1. Anokhina I.P., Kamernitsky A.V., Stanishevskaya A.V. et al. Experimental study of effect of new corticosteroid compound on addiction to morphine, cocaine and alcohol at different stages of dependence formation // Voprosy narkologii. – 2010. – N1. – P. 41–47. 2. Babiychuk G.A., Babiychuk V.G., Mamontov V.V. Influence of rhythmic extreme cold effects on indices of vegetative regu- lation of cardiac rhythm and content of cytokines in blood serum of aged people // Bukovinsky Medychnyy Visnyk. – 2009. – Vol. 13, N4. – P. 17–20. 3. Babijchuk V.G. Quantitative estimation of antigen-specific cells in human blood after rhythmic cold effects // Problems of Cryo- biology. – 2009. – Vol. 19, N2. – P. 143–153. 4. Baranov A.Yu., Kidalov V.N. Treatment with cold. Cryome- dicine. – St.–Petersburg, 1999. – 272 p. 5. Belova L.A. Biochemistry of processes of inflammation and joint lesion. Role of neutrophils // Biokhimiya. – 1997. – Vol. 62, N6. – P. 659–669. 6. Bulda V.I., Korsunska O.E. Chronic consumption of alcohol and increased arterial pressure // Vnutrishnya Meditsyna. – 2008. – N3. – P. 67–69. 7. Dosenko V.Ye. Determination of different forms of elastase in aorta at experimental artheriosclerosis// Lab. Diagnostika. – 1998. – N1. – P. 24. 8. Ershova O.V. Effect of rhythmic craniocerebral hypothermia on neurohumoral mechanisms of regulation of reproductive system cyclic processes: Author's Abstract of Cand. Med. Sciences. – Kharkov, 2008. – 20 p. 9. Lomakin I.I. Substantiation of medical cooling methods in therapy of chronic alcoholism // Problems of Cryobiology. – 2008. – Vol. 18, N3. – P. 383–385. 10.Lomakin I.I., Lutsenko D.G., Marchenko V.S., Marchenko L.M. Functional angioarchitecture of brain at low temperature effect under conditions of experimental model of chronic alcoholism // Svit Meditsyny ta Biologii. – 2009. – N3, Part 1. – P. 99–105. 11.Marchenko V.S., Babiychuk V.G. Cardioregulatory function of blood brain barrier under resonance hypothermia // Problems of Cryobiology. – 2001. – N4. – P. 17–29. 12.Marchenko L.N., Babiychuk G.A., Marchenko V.S. et al. On the mechanisms of regulation of blood brain barrier permeability of the cooled brain // Problems of Cryobiology. – 1995. – N4. – P. 10–19. 13.Menshutina M.A. Comparative estimation of reactivity of vessels as form of dysfunction of endothelium in patients with atherosclerosis and chronic kidney disease // Nefrologiya. – 2004. – Vol. 8, N3. – P. 56–61. 14.Moskvichev V.G., Tsygankov B.D., Volokhova R.Yu., Vert- kin A.L. Gender specific aspects of alcohol-stipulated somatic diseases // Trudnyi Patsyent (Archive). – 2006. – N9. – P. 57–62. 15.Samokhina L.M., Babiychuk G.A., Poznakhareva I.A., Samo- khin A.A. Proteinase-proteinase inhibitor system in rats of different age // Proc. of Scientific Conference devoted to the 100th Anniversary of Academician N.I. Bulankin (January 16– 17, 2001). – Kharkov, 2001. – P. 154–155. 16.Samokhina L.M. Effect of rhythmic cold exposures in activity of certain enzymes in aged rats with stimulated hypertension // Problems of Cryobiology. – 2003. – N1. – P. 20–25. 59 problems of cryobiology Vol. 22, 2012, №1 проблемы криобиологии Т. 22, 2012, №1 19.Судаков К.В. Новые акценты классической концепции стресса // Бюл. эксперим. биол. мед. – 1997. – №2. – С. 124– 130. 20.Пат. України №45068 МПК G01N33/48, A61B19/02. Набір для визначення активності ендотеліальної еластази в біо- логічних рідинах / Л.М.Самохіна, Н.А.Максимова. Заявлено 23.04.2001. Опубл. 15.03.2002. Бюл. №3. 21.Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of pro- tein-dye binding // Anal. Biochem. – 1976. – Vol. 72, Issue 1–2. – P. 248–254. 22.Biggar W.D., Bohn D., Kent G. Neutrophil circulation and release from bone marrow during hypothermia // Infection and Immunity. – 1983. – Vol. 40, №2. – P. 708–712. 23.Cho Y., Jang Y.Y, Han E.S., Lee C.S. The inhibitory effect of ambroxol on hypochlorous acid-induced tissue damage and respiratory burst of phagocytic cells // Eur. J. Pharmacol. – 1999. – Vol. 383, №1. – Р. 83–91. 24.Fuchs F.D., Chambless L.E., Whelton P.K. et al. Alcohol consumption and the incidence of hypertension: The athero- sclerosis risk in communities study // Hypertension. – 2001. – Vol. 37, №5. – Р. 1242. 25.Goericke S.L., Parohl N., Albert J. et al. Elastase-induce aneurysm in Swine: proof of feasibility in a first case. A technical note // Interventional neuroradiology. – 2009. – Vol. 15, №4. – P. 413–416. 26.Hennig T., Mogensen C., Kirsch J. et al. Shear stress induces the release of an endothelial elastase: role in integrin α(v)β(3)- mediated FGF-2 release // J. Vasc. Res. – 2011. – Vol. 48, №6. – Р. 453–464. 27.Hwang T.L., Wang C.C., Kuo Y.H. et al. The hederagenin saponin SMG-1 is a natural FMLP receptor inhibitor that sup- presses human neutrophil activation // Biochem. Pharmacol. – 2010. – Vol. 80, №8. – P. 1190–1200. 28.Kira S., Daa T., Kashima K. et al. Mild hypothermia reduces expression of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and the accumulation of neutrophils after acid–induced lung injury in the rat // Acta Anaesthesiol. Scand. – 2005. – Vol. 49, №3. – Р. 351–359. 29.Le Deist .F, Menasche P., Kucharski C. et al. Hypothermia during cardiopulmonary bypass delays but does not prevent neutrophil–endothelial cell adhesion. A clinical study // Circu- lation. – 1995. – Vol. 92, №9. – P. 354–358. 30.Chello M., Mastroroberto P., Romano R. et al. Complement and neutrophil activation during cardiopulmonary bypass. A randomized comparison of hypothermic and normothermic Circulation // Eur. J. Cardiothor. Surg. – 1997. – Vol. 11, №1. – P. 162–168. 31.Nuzhnyi V.P., Ugriumov A..I, Beliaeva N.Y. et al. Morphofunc- tional examination of the heart in rats with the alcohol with- drawal syndrome // Cor. Vasa. – 1989. – Vol. 31, №5. – Р. 402– 410. 32.Stout R.D., Suttles J. Functional plasticity of macrophages: reversible adaptation to changing microenvironments // J. Leukoc. Biol. – 2004. – Vol. 76, №3. – P. 509–513. 33. Theres H., Ulrich P., Torsten G. Shear stress induced integrin V3 activation is dependent on the activity of an endothelian elastase // Acta Physiologica. – 2009. – Vol. 197, Suppl. 675. – P. 208. 34.Tong S., Neboori H.J., Tran E.D., Schmid-Schonbein G.W. Constitutive expression and enzymatic cleavage of ICAM-1 in the spontaneously hypertensive rat // J. Vasc. Res. – 2011. – Vol. 48, №5. – P. 386–396. 35.Yamada E., Hazama F., Kataoka H. Elastase-like enzyme in the aorta of spontaneously hypertensive rats // Virchows Arch. B. Cell. Pathol. Incl. Mol. Pathol. – 1983. – Vol. 44, №2. – Р. 241– 245. 36.Wang G.J., Deng H.Y., Maier C.M. et al. Mild hypothermia reduces ICAM-1 expression, neutrophil infiltration and microglia/ 17.Samokhina L.M., Lomako V.V. Elastases at alcohol-dependent hypertension in rats of different gender // Visnyk Problem Biolo- gii ta Meditsyny. – 2011. – Issue 1. – P. 165–169. 18.Samokhina L.M., Lomako V.V., Shilo A.V. Elastases at artificial hypometabolic state in rats// Problems of Cryobiology. – 2008. – Vol. 18, N4. – P. 557–560. 19.Sudakov K.V. New accents of classic concept of stress // Bul. Experim. Biol. Med. – 1997 – N2. – P. 124–130. 20.Patent of Ukraine N45068 IPC G01N33/48, A61B19/02. Kit for determining activity of endothelial elastase in biological fluids/ L.M. Samokhina, N.A. Maksimova. Appl. 23.04.2001. Publ. 15.03.2002. Bul. N3. 21.Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of pro- tein-dye binding // Anal. Biochem. – 1976. – Vol. 72, Issue 1–2. – P. 248–254. 22.Biggar W.D., Bohn D., Kent G. Neutrophil circulation and release from bone marrow during hypothermia // Infection and Immunity. – 1983. – Vol. 40, N2. – P. 708–712. 23.Cho Y., Jang Y.Y, Han E.S., Lee C.S. The inhibitory effect of ambroxol on hypochlorous acid-induced tissue damage and respiratory burst of phagocytic cells // Eur. J. Pharmacol. – 1999. – Vol. 383, N1. – Р. 83–91. 24.Fuchs F.D., Chambless L.E., Whelton P.K. et al. Alcohol consumption and the incidence of hypertension: The athero- sclerosis risk in communities study // Hypertension. – 2001. – Vol. 37, N5. – Р. 1242. 25.Goericke S.L., Parohl N., Albert J. et al. Elastase-induce aneurysm in Swine: proof of feasibility in a first case. A technical note // Interventional neuroradiology. – 2009. – Vol. 15, N4. – P. 413–416. 26.Hennig T., Mogensen C., Kirsch J. et al. Shear stress induces the release of an endothelial elastase: role in integrin α(v)β(3)- mediated FGF-2 release // J. Vasc. Res. – 2011. – Vol. 48, N6. – Р. 453–464. 27.Hwang T.L., Wang C.C., Kuo Y.H. et al. The hederagenin saponin SMG-1 is a natural FMLP receptor inhibitor that sup- presses human neutrophil activation // Biochem. Pharmacol. – 2010. – Vol. 80, N8. – P. 1190–1200. 28. Kira S., Daa T., Kashima K. et al. Mild hypothermia reduces expression of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) and the accumulation of neutrophils after acid–induced lung injury in the rat // Acta Anaesthesiol. Scand. – 2005. – Vol. 49, N3. – Р. 351–359. 29.Le Deist .F, Menasche P., Kucharski C. et al. Hypothermia during cardiopulmonary bypass delays but does not prevent neutrophil-endothelial cell adhesion. A clinical study // Circu- lation. – 1995. – Vol. 92, N9. – P. 354–358. 30.Chello M., Mastroroberto P., Romano R. et al. Complement and neutrophil activation during cardiopulmonary bypass. A randomized comparison of hypothermic and normothermic Circulation // Eur. J. Cardiothor. Surg. – 1997. – Vol. 11, N1. – P. 162–168. 31.Nuzhnyi V.P., Ugriumov A..I, Beliaeva N.Y. et al. Morphofunc- tional examination of the heart in rats with the alcohol with- drawal syndrome // Cor. Vasa. – 1989. – Vol. 31, N5. – Р. 402–410. 32.Stout R.D., Suttles J. Functional plasticity of macrophages: reversible adaptation to changing microenvironments // J. Leukoc. Biol. – 2004. – Vol. 76, N3. – P. 509–513. 33.Theres H., Ulrich P., Torsten G. Shear stress induced integrin V3 activation is dependent on the activity of an endothelian elastase // Acta Physiologica. – 2009. – Vol. 197, Suppl. 675. – P. 208. 34.Tong S., Neboori H.J., Tran E.D., Schmid-Schonbein G.W. Constitutive expression and enzymatic cleavage of ICAM-1 in the spontaneously hypertensive rat // J. Vasc. Res. – 2011. – Vol. 48, N5. – P. 386–396. 35.Yamada E., Hazama F., Kataoka H. Elastase-like enzyme in the aorta of spontaneously hypertensive rats // Virchows Arch. 60 problems of cryobiology Vol. 22, 2012, №1 проблемы криобиологии Т. 22, 2012, №1 monocyte accumulation following experimental stroke // Neuro- science. – 2002. – Vol. 114, №4. – Р. 1081–1090. 37.Wenisch Ch., Narzt E., Sessler D.I. et al. Mild intraoperative hypothermia reduces production of reactive oxygen inter- mediates by polymorphonuclear leukocytes // Anesth. Analg. – 1996. – Vol. 82, №4. – P. 810–816. Поступила 18.10.2011 B. Cell. Pathol. Incl. Mol. Pathol. – 1983. – Vol. 44, N2. – Р. 241– 245. 36.Wang G.J., Deng H.Y., Maier C.M. et al. Mild hypothermia reduces ICAM–1 expression, neutrophil infiltration and microglia/ monocyte accumulation following experimental stroke // Neuro- science. – 2002. – Vol. 114, N4. – Р. 1081–1090. 37.Wenisch Ch., Narzt E., Sessler D.I. et al. Mild intraoperative hypothermia reduces production of reactive oxygen interme- diates by polymorphonuclear leukocytes // Anesth. Analg. – 1996. – Vol. 82, N4. – P. 810–816. Accepted 18.10.2011
id nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68478
institution Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
issn 0233-7673
language Russian
last_indexed 2025-12-07T17:25:32Z
publishDate 2012
publisher Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
record_format dspace
spelling Самохина, Л.М.
Стародуб, Н.Ф.
Бабийчук, Г.А.
Ломако, В.В.
2014-09-25T04:54:58Z
2014-09-25T04:54:58Z
2012
Влияние ритмического холодового воздействия на активность эластаз у самок крыс с алкогользависимой гипертензией / Л.М. Самохина, Н.Ф. Стародуб, Г.А. Бабийчук, В.В. Ломако // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 1. — С. 49-60. — Бібліогр.: 37 назв. — рос., англ.
0233-7673
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68478
616.12-008.331.1:612.393.1:615.832.9
Под влиянием ритмических холодовых воздействий (РХВ) у самок крыс с алкогользависимой гипертензией отмечено угнетение активности эластаз различного происхождения в тканях коры мозга, легких, сердца, печени и почек ниже контрольного уровня. РХВ приводят к противоположно направленным изменениям эластазоингибиторной активности (ЭИА) α-1-ингибитора протеиназ ( α-1-ИП), вызванным действием алкоголя, а именно – к повышению во всех исследуемых тканях, кроме почек, в которых наблюдали снижение. При этом по сравнению с контролем ЭИА α-1-ИП повышалась только в легких и печени, т. е. в местах возможного синтеза данного ингибитора. Отсутствие стимулирования ингибиторного потенциала в коре мозга и сердце согласуется с локальным снижением ЭИА α-1-ИП в контроле и может быть обусловлено тем, что ингибитор не поступает из мест синтеза.
Під дією ритмічних холодових впливів (РХВ) у самок щурів з алкогользалежною гіпертензією відзначено пригнічення активності еластаз різного походження в тканинах кори мозку, легень, серця, печінки і нирок нижче контрольного рівня. РХВ призводять до протилежно направлених змін еластазоінгібіторної активності (ЕІА) α-1-інгібітора протеїназ ( α-1-ІП), викликаних дією алкоголю, а саме до її підвищення у всіх досліджених тканинах, окрім нирок, в яких спостерігали зниження. При цьому порівняно з контролем ЕІА α-1-ІП зростала лише в легенях і печінці, тобто в місцях можливого синтезу даного інгібітору. Відсутність стимулювання інгібіторного потенціалу в корі мозку і серці узгоджується з локальним зниженням ЕІА α-1-ІП в контролі і може бути обумовлено тим, що інгібітор не надходить з місць синтезу.
Under the influence of rhythmic cold exposures (RCEs) in female rats with alcohol-dependent hypertension there was found a suppressed activity of elastases of different origin in tissues of brain cortex, lungs, heart, liver and kidneys lower than the control level. RCEs lead to oppositely directed changes in elastase-inhibitory activity (EIA) of α-1- proteinase inhibitor ( α-1-PI) caused by alcohol effect and namely to the rise in all the studied tissues except kidneys wherein there was found a decrease. Herewith if compared to the control EIA α-1-PI increased only in lungs and liver, i. e. in the sites of possible synthesis of this inhibitor. The absence of stimulating an inhibitory potential in brain cortex and heart is in accordance with local decrease of EIA α-1-PI in the control and may be stipulated with the fact that inhibitor does not enter from the synthesis sites.
ru
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
Проблемы криобиологии
Теоретическая и экспериментальная криобиология
Влияние ритмического холодового воздействия на активность эластаз у самок крыс с алкогользависимой гипертензией
Rhythmic Cold Effect on Activity of Elastases in Female Rats with Alcohol- Dependent Hypertension
Article
published earlier
spellingShingle Влияние ритмического холодового воздействия на активность эластаз у самок крыс с алкогользависимой гипертензией
Самохина, Л.М.
Стародуб, Н.Ф.
Бабийчук, Г.А.
Ломако, В.В.
Теоретическая и экспериментальная криобиология
title Влияние ритмического холодового воздействия на активность эластаз у самок крыс с алкогользависимой гипертензией
title_alt Rhythmic Cold Effect on Activity of Elastases in Female Rats with Alcohol- Dependent Hypertension
title_full Влияние ритмического холодового воздействия на активность эластаз у самок крыс с алкогользависимой гипертензией
title_fullStr Влияние ритмического холодового воздействия на активность эластаз у самок крыс с алкогользависимой гипертензией
title_full_unstemmed Влияние ритмического холодового воздействия на активность эластаз у самок крыс с алкогользависимой гипертензией
title_short Влияние ритмического холодового воздействия на активность эластаз у самок крыс с алкогользависимой гипертензией
title_sort влияние ритмического холодового воздействия на активность эластаз у самок крыс с алкогользависимой гипертензией
topic Теоретическая и экспериментальная криобиология
topic_facet Теоретическая и экспериментальная криобиология
url https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68478
work_keys_str_mv AT samohinalm vliânieritmičeskogoholodovogovozdeistviânaaktivnostʹélastazusamokkryssalkogolʹzavisimoigipertenziei
AT starodubnf vliânieritmičeskogoholodovogovozdeistviânaaktivnostʹélastazusamokkryssalkogolʹzavisimoigipertenziei
AT babiičukga vliânieritmičeskogoholodovogovozdeistviânaaktivnostʹélastazusamokkryssalkogolʹzavisimoigipertenziei
AT lomakovv vliânieritmičeskogoholodovogovozdeistviânaaktivnostʹélastazusamokkryssalkogolʹzavisimoigipertenziei
AT samohinalm rhythmiccoldeffectonactivityofelastasesinfemaleratswithalcoholdependenthypertension
AT starodubnf rhythmiccoldeffectonactivityofelastasesinfemaleratswithalcoholdependenthypertension
AT babiičukga rhythmiccoldeffectonactivityofelastasesinfemaleratswithalcoholdependenthypertension
AT lomakovv rhythmiccoldeffectonactivityofelastasesinfemaleratswithalcoholdependenthypertension