Криоконсервированные клетки фетальной печени, заключенные в макропористые носители, способствуют восстановлению функций печени после поражения 2-ацетиламинуфлуореном
Исследовано влияние криоконсервированных клеток фетальной печени, иммобилизованных в макропористых альгинатных носителях, на степень поражения печени крыс с моделью печеночной недостаточности, индуцируемой введением 2-ацетиламинофлуорена с последующим проведением частичной гепатэктомии. Показана спо...
Saved in:
| Published in: | Проблемы криобиологии |
|---|---|
| Date: | 2012 |
| Main Authors: | , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2012
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68482 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Криоконсервированные клетки фетальной печени, заключенные в макропористые носители, способствуют восстановлению функций печени после поражения 2-ацетиламинуфлуореном / Д.В. Грицай, А.С. Лебединский, О.В. Оченашко, Ю.А. Петренко // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 1. — С. 88-96. — Бібліогр.: 21 назв. — рос., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859945987153330176 |
|---|---|
| author | Грицай, Д.В. Лебединский, А.С. Оченашко, О.В. Петренко, Ю.А. |
| author_facet | Грицай, Д.В. Лебединский, А.С. Оченашко, О.В. Петренко, Ю.А. |
| citation_txt | Криоконсервированные клетки фетальной печени, заключенные в макропористые носители, способствуют восстановлению функций печени после поражения 2-ацетиламинуфлуореном / Д.В. Грицай, А.С. Лебединский, О.В. Оченашко, Ю.А. Петренко // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 1. — С. 88-96. — Бібліогр.: 21 назв. — рос., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии |
| description | Исследовано влияние криоконсервированных клеток фетальной печени, иммобилизованных в макропористых альгинатных носителях, на степень поражения печени крыс с моделью печеночной недостаточности, индуцируемой введением 2-ацетиламинофлуорена с последующим проведением частичной гепатэктомии. Показана способность иммобилизованных клеток печени ускорять восстановление гепатоспецифических параметров крови: содержания сывороточного альбумина, общего билирубина, активности аминотрансфераз. Полученные результаты свидетельствуют о положительном действии клеток фетальной печени, иммобилизованных в макропористых носителях, на течение печеночной недостаточности и перспективности данного подхода для лечения заболеваний печени.
Досліджували вплив кріоконсервованих клітин фетальної печінки, іммобілізованих у макропористих альгінатних носіях, на ступінь ураження печінки щурів з моделлю печінкової недостатності, яка індукується введенням 2-ацетиламінофлуорену з наступним проведенням часткової гепатектомії. Показана здатність іммобілізованих клітин печінки прискорювати відновлення гепатоспецифічних параметрів крові: вмісту сироваткового альбуміну, загального білірубіну, активності амінотрансфераз. Отримані результати свідчать про позитивну дію клітин фетальної печінки, іммобілізованих у макропористих носіях, на перебіг печінкової недостатності і перспективність обраного підходу для лікування захворювань печінки.
The effect of cryopreserved fetal liver cells immobilized in macroporous alginate scaffolds on liver injury degree in rats with model of liver failure developed by administration of 2-acetylaminofluorene with subsequent partial hepatectomy. It was shown that immobilized fetal liver cells accelerated recovery of spesific hepatic indices: serum albumin, total bilirubin content, aminotransferase activity. The results of this work indicate the positive effect of fetal liver cells seeded in macroporous scaffolds on course of liver failure and argue the availability of this approach for liver failure treatment.
|
| first_indexed | 2025-12-07T16:13:35Z |
| format | Article |
| fulltext |
88
Поиск альтернативных методов коррекции тя-
желых форм печеночной недостаточности остает-
ся актуальной проблемой современной медицины.
Решение этой проблемы многие исследователи ви-
дят в использовании стволовых клеток. Одним из
перспективных источников стволовых клеток гепа-
тического ряда является плодовая печень. Транс-
плантация клеток фетальной печени – многообе-
щающий метод поддержания её функции при
многих заболеваниях [6, 8, 13]. Однако введение
клеточных суспензий в кровоток имеет ряд недо-
статков. Во-первых, при внутривенном введении
лишь небольшая часть клеток попадает в орган-
мишень. Так, для гепатоцитов при введении в пор-
тальную вену она колеблется в пределах 5–20%
The search for alternatives to correct severe forms
of hepatic insufficiency has remained an actual prob-
lem of contemporary medicine. Many researchers sug-
gest to solve this problem by using the stem cells. One
of the perspective sources of hepatic stem cells is fetal
liver. Transplantation of fetal liver cells is promising
method to maintain liver function in many diseases [6,
8, 13]. However, the administration of cell suspensions
into blood flow has some short-comings. The first one
is that during intravenous injection just small amount
of cells enters into target organ. So, for hepatocytes
after portal vein injection it varies within 5–20% of
total number of the injected donor cells [5, 9, 18] and
for stem and progenitor cells which diameter is com-
parable with the one of capillaries it will be even less
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
УДК 618.393.018.2:615.014.41:616.36-08-092.9
Д.В. ГРИЦАЙ, А.С. ЛЕБЕДИНСКИЙ*, О.В. ОЧЕНАШКО, Ю.А. ПЕТРЕНКО
Криоконсервированные клетки фетальной печени, заключенные
в макропористые носители, способствуют восстановлению функций
печени после поражения 2-ацетиламинуфлуореном
UDC 618.393.018.2:615.014.41:616.36-08-092.9
D.V. GRITSAY, A.S. LEBEDINSKIY*, O.V. OCHENASHKO, YU.A. PETRENKO
Cryopreserved Fetal Liver Cells Immobilized in Macroporous Carriers
Promote Liver Function Recovery After Injury With 2-Acetylaminefluorene
Исследовали влияние криоконсервированных клеток фетальной печени, иммобилизованных в макропористых альгинатных
носителях, на степень поражения печени крыс с моделью печеночной недостаточности, индуцируемой введением 2-ацетиламино-
флуорена с последующим проведением частичной гепатэктомии. Показана способность иммобилизованных клеток печени
ускорять восстановление гепатоспецифических параметров крови: содержания сывороточного альбумина, общего билирубина,
активности аминотрансфераз. Полученные результаты свидетельствуют о положительном действии клеток фетальной печени,
иммобилизованных в макропористых носителях, на течение печеночной недостаточности и перспективности данного подхода
для лечения заболеваний печени.
Ключевые слова: 2-ацетиламинофлуорен, частичная гепатэктомия, печеночная недостаточность, клеточная терапия,
криоконсервированные клетки фетальной печени, макропористые носители, альгинаты.
Досліджували вплив кріоконсервованих клітин фетальної печінки, іммобілізованих у макропористих альгінатних носіях, на
ступінь ураження печінки щурів з моделлю печінкової недостатності, яка індукується введенням 2-ацетиламінофлуорену
з наступним проведенням часткової гепатектомії. Показана здатність іммобілізованих клітин печінки прискорювати відновлення
гепатоспецифічних параметрів крові: вмісту сироваткового альбуміну, загального білірубіну, активності амінотрансфераз.
Отримані результати свідчать про позитивну дію клітин фетальної печінки, іммобілізованих у макропористих носіях, на
перебіг печінкової недостатності і перспективність обраного підходу для лікування захворювань печінки.
Ключові слова: 2-ацетиламінофлуорен, часткова гепатектомія, печінкова недостатність, клітинна терапія, кріоконсервовані
клітини фетальної печінки, макропористі носії, альгінати.
The effect of cryopreserved fetal liver cells immobilized in macroporous alginate scaffolds on liver injury degree in rats with model
of liver failure developed by administration of 2-acetylaminofluorene with subsequent partial hepatectomy. It was shown that
immobilized fetal liver cells accelerated recovery of spesific hepatic indices: serum albumin, total bilirubin content, aminotransferase
activity. The results of this work indicate the positive effect of fetal liver cells seeded in macroporous scaffolds on course of liver
failure and argue the availability of this approach for liver failure treatment.
Key words: 2-acetylaminofluorene, partial hepatectomy, liver failure, cell therapy, cryopreserved fetal liver cells, macroporous
scaffold, alginate.
* Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015; тел.: (+38
057) 373-41-35, факс: (+38 057) 373-30-84, электронная почта:
alebedinsky@mail.ru
* To whom correspondence should be addressed: 23,
Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 373 41
35, fax: +380 57 373 3084, e-mail: alebedinsky@mail.ru
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na-
tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Институт проблем криобиологии и криомедицины
НАН Украины, г. Харьков
89 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
от общего числа введенных донорских клеток [5,
9, 18], а для стволовых и прогениторных клеток,
диаметр которых соизмерим с диаметром капил-
ляров, она будет еще меньше [3, 4]. Во-вторых,
поступив в кровоток, трансплантированные клетки
могут вызывать тромбоз и эмболию в сосудах ма-
лого диаметра [10, 12].
Одним из подходов, позволяющих поддержать
функцию печени и избежать перечисленных не-
достатков, может быть использование тканеин-
женерных конструкций, представляющих собой
трехмерные носители (скаффолды), заселенные
определенным типом клеток. При этом носитель
должен быть нетоксичным, биосовместимым,
обеспечивать трехмерную ориентацию клеток
и выполнение ими специфических функций. Такими
свойствами, в значительной степени, обладают
трехмерные макропористые скаффолды из природ-
ных или искусственных материалов, которые по-
зволяют иммобилизовать клетки в желаемой зоне,
а также обеспечивать их иммуноизоляцию.
Среди материалов, используемых для разра-
ботки тканеинженерных конструкций, выделяется
природный полимер альгинат, безопасность и эф-
фективность которого были продемонстрированы
при доставке клеток и белков в организм пациентов
[19]. В экспериментах in vitro нами было показано,
что макропористые скаффолды на основе альги-
ната создают благоприятные условия для адгезии,
роста и направленной мультилинейной диффе-
ренцировки мезенхимальных стромальных клеток
[17]. Однако возможность использования макропо-
ристых носителей для разработки биоискусствен-
ных эквивалентов печени на основе фетальных кле-
ток до настоящего времени не исследована.
Современные технологии криоконсервирования
позволяют в значительной степени сохранить жиз-
неспособность клеточных суспензий, что позволяет
разделить во времени этапы выделения и оценки
клеток и их применения. Поэтому использование
криоконсервирования и низкотемпературного хра-
нения стало неотъемлемым этапом регенератив-
ной медицины и клеточной трансплантации.
Печень крыс обладает высоким регенерацион-
ным потенциалом, который реализуется за счет
деления зрелых гепатоцитов при нарушении це-
лостности органа или удалении его части. Этот
факт следует учитывать при выборе эксперимен-
тальной модели поражения печени. Формирование
модели печеночной недостаточности у крыс обыч-
но осуществляется путем введения гепатотокси-
нов (четыреххлористый углерод, D-галактозамин),
которые вызывают обширное повреждение парен-
химы печени, однако при этом способность гепато-
цитов к делению сохраняется. Принципиально
другой подход – применение веществ (ацетилами-
нофлуорен (ААФ), дипин, ретрорзин), которые мета-
[3, 4]. Secondly, when entered to blood flow the trans-
planted cells may cause thrombosis and embolism in
the vessels of small diameter [10, 12].
One of the approaches allowing to maintain the liver
function and avoid the mentioned short-comings may
be the use of tissue-engineered constructs, representing
the 3D carriers (scaffolds), seeded with certain cell
type. Herewith the carrier should be non-toxic, biocom-
patible, provide 3D orientation of cells and performing
by them of specific functions. These properties are in-
herent to 3D macroporous scaffolds either of natural
or artificial materials, allowing the immobilization of
the cells in a desired zone as well as providing their
immune isolation.
Among the materials used for developing the tissue-
engineered constructs the natural polymer, alginate is
of interest, its efficiency was demonstrated when deli-
vering the cells and proteins to patients’ organism [19].
In the experiments in vitro we have shown that algi-
nate-based macroporous scaffolds create favorable
conditions for adhesion, growth and directed multilinear
differentiation of mesenchymal stromal cells [17]. How-
ever, the possibility to use macroporous carriers for
developing bioartificial equivalents of liver based in fetal
cells has not been investigated till now.
Current cryopreservation technologies allow signifi-
cant preservation of the viability of cell suspensions,
that allow to spread in time the stages of isolation,
assessment of cells and their application. Therefore
the cryopreservation and low temperature storage has
become an integral stage of regenerative medicine and
cell transplantation.
Rat liver has a high regenerative potential, imple-
menting due to division of mature hepatocytes after
organ integrity impairment or removal of its part. This
fact should be taken into account when selecting the
experimental model for liver injury. Hepatic insufficien-
cy model in rats is usually formed by administration of
hepatotoxins (carbon tetrachloride, D-galactosamine),
causing a vast injury of liver parenchyma, but thereat
the ability of hepatocytes for division in kept. Principally
another approach to the formation of the models of
hepatic insufficiency is the application of the substances
(acetylaminefluorene (AAF), dipine, retrorsine), meta-
bolizing in liver with the formation of toxic agents, blo-
cking proliferation of hepatocytes [20]. Combination
of such an effect with partial (2/3) hepatectomy (PH)
leads to the situation when rapid organ recovery due
to the division of own hepatocytes is impossible and as
a consequence a chronic hepatic insufficiency charac-
terized with a disorder in main hepatic functions de-
velops. When realizing these models in a recipient orga-
nism the favorable conditions to reveal the potential of
the cells to be transplanted are created.
The research aim was to study the effect of fetal
liver cells, immobilized in macroporous alginate carriers
on the recovery of liver function of rats with AAF/PH.
90 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
болизируются в печени с образованием токсичес-
ких агентов, блокирующих пролиферацию гепато-
цитов [20]. Сочетание такого воздействия с удале-
нием 2/3 части печени создает ситуацию, когда
быстрое восстановление органа за счет деления
собственных гепатоцитов невозможно, и, как след-
ствие, развивается хроническая печеночная недо-
статочность, характеризующаяся нарушением
основных функций печени. При воспроизведении
таких моделей в организме реципиента создаются
выгодные условия для раскрытия потенциала
трансплантируемых клеток.
Целью настоящей работы явилось изучение
влияния клеток фетальной печени, иммобилизован-
ных в макропористые альгинатные носители, на
восстановление функции печени крыс с моделью
ААФ/ЧГЭ.
Материалы и методы
Исследования проводились на белых беспород-
ных крысах-самцах массой 250–300 г. Экспери-
менты были проведены в соответствии с «Общи-
ми этическими принципами экспериментов на
животных», одобренными IV Национальным кон-
грессом по биоэтике (Киев, 2010 г.) и согласован-
ными с положениями «Европейской конвенции о
защите позвоночных животных, используемых для
экспериментальных и других научных целей»
(Страсбург, 1986 г.).
Было сформировано 3 группы эксперименталь-
ных животных. Группу 1 составили животные, кото-
рые не подвергались никаким воздействиям – од-
новозрастная норма. У животных остальных двух
групп была сформирована модель печеночной не-
достаточности. Для формирования модели ААФ
вводился из расчета 30 мг/кг массы тела в течение
5 суток интрагастрально в виде масляного раст-
вора. На 5-е сутки проводилась ЧГЭ по Хиггинсу,
одновременно в большой сальник имплантировали
альгинатные макропористые носители. Животным
группы 2 (контроль) имплантировали носители без
клеток, а животным группы 3 – носители с иммо-
билизованными в них клетками фетальной печени
человека. Макропористые альгинатные скаффол-
ды, полученные методом криотропного гелирова-
ния [17], перед использованием покрывали оболоч-
кой из альгината и (для группы 3) заселяли клетка-
ми, как было описано ранее [2].
Клетки фетальной печени (КФП) выделяли
неферментативным методом [16] из плодов чело-
века первого триместра гестации, которые получа-
ли после письменного согласия пациента с соблю-
дением этических норм. Клеточную суспензию
криоконсервировали с использованием программ-
ного замораживателя ЗП-10 (СКТБ с ОП ИПКиК
НАН Украины) с использованием трехэтапной про-
Materials and methods
The studies were performed in white outbreed male
rats of 250–300g in accordance with General ethical
principles of the experiments in animals adopted by
the 4th National Congress in Bioethics (Kiev, 2010) and
coordinated with the statements of European Conven-
tion about the Protection of Vertebrate Animals Used
for Experimental and Other Scientific Purposes (Stras-
bourg, 1986).
There were formed 3 groups of experimental ani-
mals. The group 1 comprised the animals not subjected
to any effects, one-age norm. In the animals of other
two groups the model of hepatic insufficiency was
formed. To form the model the AAF was injected in
respect of 30 mg/kg of body mass for 5 days intragastri-
cally as oily solution. To the 5th day there was performed
PH according to Higgins, alginate macroporous carriers
were simultaneously implanted into greater omentum.
The animals of group 2 (control) were implanted with
the carriers without cells and the animals of group 3
obtained the carriers with immobilized cells of human
fetal liver. Macroporous alginate scaffolds obtained by
means of cryotropic gel formation [17] prior to the use
were covered with alginate and seeded with the cells
(for group 3) as reported earlier [2].
Fetal liver cells (FLCs) were isolated with non-
enzyme method [16] from fetal fetuses of the first
gestation trimester, derived after the written consent
of the patient with keeping all ethical norms. Cell sus-
pension was cryopreserved using programmable free-
zer ZP-10 (Special Construction and Technical Bureau
with Experimental Unit of the Institute for Problems
of Cryobiology and Cryomedicine of the National Aca-
demy of Sciences of Ukraine) according to three-step
freezing program [15] with initial rate of 1 deg/min
down to –40°C and seeding at –7°C and with the rate
of 10 deg/min from –40 down to –80°C with following
plunging into liquid nitrogen. Cryopreservation medium
comprised 250 mM sucrose, 5 mM KCL, 1.6 mM
Na2HPO4, 0.4 mM KH2PO4, 0.8 mM MgCl2, 1.2 mM
CaCl2 (pH 7.4) and 10% DMSO. The cells were stored
at –196°C under conditions of Low temperature bank
of the IPC&C of the National Academy of Sciences
of Ukraine for 2–3 months. Prior to the application
they were thawed, the viability was assessed by trypan
blue staining and then they were seeded into macropo-
rous carriers.
Observation period for animals after the model for-
mation and implantation of macroporous sponges made
4 weeks. The blood was procured in animals for bio-
chemical studies to the 7, 14, 21 and 28th days. In the
resulted blood serum the content of albumin, total
bilirubin, as well as activity of marker enzymes of liver
lesion: alanine aminotransferase (AlT) and aspartate
aminotransferase (AsT) were spectrophotometrically
examined. For biochemical studies there were used
91 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
граммы замораживания [15] с начальной скорос-
тью охлаждения 1 град/мин до –40°С и сидингом
при –7°С, со скоростью 10 град/мин от –40°С до
–80°С с последующим погружением в жидкий азот.
Среда криоконсервирования содержала 250 мМ
сахарозы, 5 мМ KCl, 1,6 мМ Na2HPO4, 0,4 мМ
KH2PO4, 0,8 мМ MgCl2, 1,2 мМ CaCl2 (pH 7,4) и
10% ДМСО. Клетки хранили при –196°С в услови-
ях низкотемпературного банка ИПКиК НАН Ук-
раины в течение 2–3 месяцев. Перед использова-
нием клетки отогревали, определяли их жизнеспо-
собность по прокрашиванию трипановым синим и
заселяли в макропористые носители.
Период наблюдения за животными после фор-
мирования модели и имплантации макропористых
губок составил 4 недели. На 7, 14, 21 и 28-е сутки
проводился забор крови у животных для биохими-
ческих исследований. В полученной сыворотке кро-
ви спектрофотометрически определяли содержа-
ние альбумина, общего билирубина, а также ак-
тивность маркерных ферментов повреждения пече-
ни: аланинаминотрансферазы (АлТ) и аспартат-
аминотрансферазы (АсТ). Для биохимических ис-
следований использовали стандартные биохими-
ческие наборы «Lachema BioLaTest» (Чехия).
Полученные результаты обрабатывали статис-
тически при помощи компьютерного пакета про-
грамм «Origin 7.5». Данные оценивали, используя
непараметрический метод Манна-Уитни. Данные
представлены как М ± m.
Результаты и обсуждение
Жизнеспособность свежеизолированных КФП
составляла 90,6 ± 5,9%. Криоконсервирование сус-
пензии клеток под защитой 10% ДМСО по трехэтап-
ной программе замораживания достоверно (р ≤
0,05) снижало жизнеспособность до 73,0 ± 3,6%.
Формирование модели ААФ/ЧГЭ сопровож-
далось значительной смертностью животных, пик
которой приходился на 2–3-ю недели после частич-
ной гепатэктомии. В группе 2, которой на фоне
сформированной модели были введены макропо-
ристые носители без клеток, смертность к концу
периода наблюдения составила 40%. В группе 3,
которой имплантировали скаффолды с иммобили-
зованными клетками фетальной печени, смерт-
ность была значительно ниже и составила 20%.
Уровень альбумина (рис. 1) резко снижался
после проведения ЧГЭ в обеих группах с миниму-
мом на 7-е сутки. При этом в группе 2 показатель
оставался достоверно ниже значений нормы (груп-
па 1) в течение всего периода наблюдения. Введе-
ние КФП, иммобилизованных в макропористых
носителях (группа 3), позволило избежать такого
значительного снижения концентрации альбумина:
показатель достоверно снижался только на 7-е и
standard biochemical kits Lachema BioLaTest (Czech
Republic).
The obtained results were statistically processed
with Origin 7.5 software. To assess the data there were
used non-parametric Mann-Whitney test. The data are
presented as M ± m.
Results and discussion
Viability of freshly isolated FLCs made 90.6 ±
5.9%. Cryopreservation of cell suspension under pro-
tection of 10% DMSO according to three-stage freez-
ing program statistically and significantly (p ≤ 0.05)
reduced viability down to 73.0 ± 3.6%.
Formation of AAF/PH model was accompanied
by significant mortality of animals, the peak of which
felt within the 2nd–3rd weeks after partial hepatectomy.
In group 2, where the animals on the background of
the formed model underwent the transplantation of cell
free macroporous carriers, the death rate to the end
of observation period made 40%. In the group 3, whe-
re the scaffolds with immobilized fetal liver cells were
implanted, the mortality was significantly lower (20%).
The albumin level (Fig. 1) sharply reduced after
PH in the groups 2 and 3 with the minimum to the 7th
day. Thereat, in group 2 the index remained statistically
lower than the norm (group 1) during the whole obser-
15
20
25
30
35
40
45
50
*
**
*
*
* #
Рис. 1. Содержание альбумина в сыворотке крови крыс
с моделью ААФ/ЧГЭ после имплантации в сальник крио-
консервированных клеток фетальной печени, иммоби-
лизованных в макропористых альгинатных носителях:
– группа 1; – группа 2; – группа 3; * – р ≤ 0,05
относительно группы 1; # – р ≤ 0,05 относительно группы 2.
Fig. 1. Albumin content in rat blood serum with AAF/PH
model after implantation into omentum of cryopreserved
fetal liver cells immobilized in alginate macroporous carri-
ers; – group 1; – group 2; – group 3; * – р ≤ 0.05
as for the group 1; # – р ≤ 0.05 as for the group 2.
Сроки наблюдения, сутки
Observation term, days
С
од
ер
жа
ни
е
ал
ьб
ум
ин
а,
г
/л
Al
bu
m
in
c
on
te
nt
, g
/l
0 ЧГЭ/PH 7 14 21 28
92 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
14-е сутки. Следует отметить, что пик падения по-
казателя на 7-е сутки, который наблюдался в груп-
пе 2 (контрольной) сглаживался в ответ на введение
иммобилизованных КФП в группе 3 (р ≤ 0,05).
Схожая динамика наблюдалась в содержании
общего билирубина (рис. 2). На 7-е сутки в группе
2 (контрольной) показатель резко повышался (в 3,3
раза выше значений группы 1, интактной). В тече-
ние остального периода наблюдения отмечалось
умеренное повышение показателя (в 1,3–1,6 раза
выше нормы). Имплантация макропористых аль-
гинатных носителей с иммобилизованными КФП
(группа 3) предотвращала пикообразное повыше-
ние показателя на 7-е сутки после гепатэктомии
(р ≤ 0,05 по сравнению с группой 2, контрольной).
Более того, введение КФП в группе 3 позволило
нормализовать показатель уже к 21-м суткам, чего
не наблюдалось в контроле (группа 2).
Активность АсТ (рис. 3) в группе 2 была выше
нормальных значений примерно в 1,5 раза на 7–
21-е сутки после ЧГЭ, а к 28-м суткам нормализо-
валась. После имплантации носителей с иммоби-
лизованными КФП повышение данного показателя
было выражено значительно меньше и нормализо-
валось уже к 21-м суткам наблюдения.
vation period. Administration of FLCs immobilized in
macroporous carriers (group 3) allowed the avoiding
of such a considerable decrease of albumin concentra-
tion: the index statistically and significantly reduced
only to the 7th and 14th days. It should be noted that
the maximum fall of the index to the 7th day which
was observed in group 2 (control), was smoothed in
response to the treatment with immobilized FLCs in
the group 3 (p ≤ 0.05).
The similar dynamics was noted in the content of
total bilirubin (Fig. 2). To the 7th day in the group 2
(control) the index sharply increased (in 3.3 times
above the values of group 1). During the remained pe-
riod of observation the index was still moderately in-
creased (in 1.3–1.6 times above the norm). Implanta-
tion of macroporous alginate carriers with immobilized
FLCs (group 3) prevented a peak-like rise in the index
to the 7th day after hepatectomy (p ≤ 0.05 vs. group 2
(control)). Moreover, the FLCs introduction in group 3
enabled the normalization of the index already to the
21st day which was not observed in the control (group 2).
Activity of AsT (Fig. 3) in group 2 was higher than
normal values approximately in 1.5 times to the 7–21st
days after PH and to the 28th day it normalized. After
implantation of the carriers with immobilized FLC the
5
10
15
20
25
30
35
***
**
*
#
120
140
160
180
200
220
#
*
*
*
*
#
Рис. 2. Содержание общего билирубина в сыворотке
крови крыс с моделью ААФ/ЧГЭ после имплантации в
сальник криоконсервированных клеток фетальной пече-
ни, иммобилизованных в макропористых альгинатных
носителях: – группа 1; – группа 2; – группа 3; * –
р ≤ 0,05 относительно группы 1; # – р ≤ 0,05 относительно
группы 2.
Fig. 2. Total bilirubin content in rat blood serum with AAF/
PH model after implantation into omentum of cryopreserved
fetal liver cells immobilized in alginate macroporous carri-
ers; – group 1; – group 2; – group 3; * – р ≤ 0.05
as for the group 1; # – р ≤ 0.05 as for the group 2.
Сроки наблюдения, сутки
Observation term, days
С
од
ер
жа
ни
е
об
щ
ег
о
би
ли
ру
би
на
,
м
км
ол
ь/
л
To
ta
l b
ilir
ub
in
c
on
te
nt
, µ
m
ol
/l
0 ЧГЭ/PH 7 14 21 28
Рис. 3. Активность АcТ в сыворотке крови крыс с мо-
делью ААФ/ЧГЭ после имплантации в сальник криокон-
сервированных клеток фетальной печени, иммоби-
лизованных в макропористых альгинатных носителях:
– группа 1; – группа 2; – группа 3; * – р ≤ 0,05
относительно группы 1; # – р ≤ 0,05 относительно группы 2.
Fig. 3. Activity of AsT in rat blood serum with AAF/PH
model after implantation into omentum of cryopreserved
fetal liver cells immobilized in alginate macroporous carri-
ers; – group 1; – group 2; – group 3; * – р ≤ 0.05
as for the group 1; # – р ≤ 0.05 as for the group 2.
Сроки наблюдения, сутки
Observation term, days
Ак
ти
вн
ос
ть
А
сТ
, Е
д/
л
As
T
ac
tiv
ity
, U
ni
ts
/l
0 ЧГЭ/PH 7 14 21 28
93 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
Изменения активности АлТ носили сходный
характер (рис. 4). В группе 2 данный показатель
повышался вплоть до 21-х суток после гепатэкто-
мии, а затем резко снижался до уровня контроля.
Имплантация макропористых альгинатных носите-
лей с иммобилизованными КФП нивелировала это
повышение.
Ранее в нашей лаборатории на модели ЧГЭ
была выявлена способность КФП стимулировать
синтез ДНК и таким образом ускорять процессы
регенерации печени [1]. При проведении ЧГЭ ин-
тактным животным происходит быстрое, в преде-
лах 7–10 суток, восстановление клеточной массы
печени за счет пролиферации паренхиматозных
клеток печени, в связи с чем органоспецифические
функции также быстро восстанавливаются.
Использованная в данном исследовании модель
исключает возможность быстрой регенерации пе-
чени за счет пролиферации гепатоцитов, так как
она ингибируется введением ААФ [7, 14], который
метаболизируется в гепатоцитах с образованием
токсичного продукта, связывающегося с ДНК, что
приводит к подавлению способности гепатоцитов
к пролиферации [11]. ЧГЭ в данном случае, с одной
стороны, является мощным стимулом к пролифе-
рации, а с другой – увеличивает метаболическую
нагрузку на оставшиеся клетки печеночной парен-
химы, что ускоряет их гибель. Клетки, трансплан-
тированные реципиентам с такой моделью, попа-
дают в условия, в которых имеется достаточное
количество биологически активных веществ, сти-
мулирующих их пролиферацию и/или дифференци-
ровку [21]. Таким образом, введение ААФ перед
проведением ЧГЭ, с одной стороны, формирует
модель поражения печени, сопровождающуюся
серьезными структурными и функциональными
нарушениями в органе [14], позволяющими более
четко наблюдать эффекты от клеточной транс-
плантации, с другой – создает стимул для развития
введенных клеток. Результаты проведенных нами
исследований на модели ААФ/ЧГЭ свидетельст-
вуют о глубоких нарушениях биохимических пока-
зателей печени. Резкое пикообразное повышение
содержания общего билирубина и снижение кон-
центрации сывороточного альбумина на 7-е сутки
после ЧГЭ у животных группы 2, которым имплан-
тировали скаффолды без клеток, очевидно, отра-
жает острую фазу патологического процесса, когда
функция печени страдает больше всего. Данные
показатели связаны, поскольку именно альбуми-
ном осуществляется транспорт билирубина. Тем
не менее падение уровня альбумина, вероятно,
свидетельствует о нарушении синтетической
функции печени, а повышение уровня билирубина
указывает на нарушение детоксикационной функ-
ции. В то же время повышение сывороточной
rise of this index was manifested in less extent and
normalized already to the 21st observation day.
The changes in activity of AlT were of the same
character (Fig. 4). In group 2 this index increased up
to the 21st day after hepatectomy and then sharply
reduced to the control level. Implantation of macropo-
rous alginate carriers with immobilized FLCs eliminated
this rise.
Previously at our laboratory it was found in PH
model the ability of FLCs to stimulate DNA synthesis
and thereby to accelerate the liver regeneration proces-
ses [1]. After performing PH in intact animals a rapid
recovery within 7–10 days of liver cell amount due to
proliferation of parenchyma cells took place, as well
as quick restoration of organ specific functions.
The used in this research model excludes the pos-
sibility of rapid liver regeneration due to proliferation
of hepatocytes, which is inhibited by AAF administra-
tion [7, 14]. AAF is metabolized in hepatocytes with
the formation of DNA binding toxic product, that leads
to suppression of the ability of hepatocytes to proli-
ferate [11]. In this case PH on the one hand is a
powerful stimulus to proliferation and on the other hand
it increases metabolic loading to the remaining cells of
hepatic parenchyma, accelerating their death. The cells
transplanted to recipients with such a model enter the
70
80
90
100
110
120
130
140
#
#
*
*
*
#
Рис. 4. Активность АлТ в сыворотке крови крыс с мо-
делью ААФ/ЧГЭ после имплантации в сальник криокон-
сервированных клеток фетальной печени, иммоби-
лизованных в макропористых альгинатных носителях:
– группа 1; – группа 2; – группа 3; * – р ≤ 0,05
относительно группы 1; # – р ≤ 0,05 относительно группы 2.
Fig. 4. Activity of AlT in rat blood serum with AAF/PH
model after implantation into omentum of cryopreserved
fetal liver cells immobilized in alginate macroporous carri-
ers; – group 1; – group 2; – group 3; * – р ≤ 0.05
as for the group 1; # – р ≤ 0.05 as for the group 2.
Сроки наблюдения, сутки
Observation term, days
Ак
ти
вн
ос
ть
А
лТ
, Е
д/
л
Al
T
ac
tiv
ity
, U
ni
ts
/l
0 ЧГЭ/PH 7 14 21 28
94 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
активности маркерных ферментов повреждения
печени – аминотрансфераз – было наиболее выра-
жено в этой группе в более отдаленные сроки – с
7 по 21-е сутки после ЧГЭ. Увеличение активнос-
тей АлТ и АсТ, вероятно, отражает постепенный
процесс гибели паренхиматозных клеток печени,
не справляющихся с метаболической нагрузкой.
Введение иммобилизованных в макропористые
скаффолды КФП (группа 3) предотвращало пико-
образное повышение содержания общего билиру-
бина и снижение концентрации альбумина, более
того, в отличие от группы 2, эти показатели норма-
лизовались к 28-м суткам наблюдения. Аналогич-
но в группе 3 было менее выражено повышение
активности аминотрансфераз, что, очевидно, свиде-
тельствует о меньшей интенсивности некротичес-
ких процессов в печеночной паренхиме животных.
Приведенные результаты могут свидетельство-
вать, что клетки, иммобилизованные в макропо-
ристых носителях, оказывают эффект на течение
патологического процесса. Это влияние может
быть обусловлено активацией пролиферации и диф-
ференцировки овальных клеток реципиента. В та-
ком случае позитивный эффект, вероятно, обус-
ловлен действием синтезированных в клетках
биологически активных веществ. При этом прове-
денные исследования не позволяют выявить,
реализуется ли действие этих биологически актив-
ных веществ на уровне овальных клеток или на-
правлено на поддержание жизнеспособности и
функциональной активности зрелых гепатоцитов.
Для выяснения механизмов позитивного действия
КФП, заключенных в макропористые носители, на
течение патологического процесса требуются до-
полнительные исследования структурных измене-
ний печени.
Другим направлением развития настоящей
работы является гистологическое исследование
клеток в составе макропористых носителей после
введения реципиенту. Ранее в нашей лаборатории
было показано, что клетки выживают и размно-
жаются при объемном культивировании в составе
макропористых губок [17], однако нельзя утверж-
дать, что они поведут себя аналогичным образом
в данных экспериментальных условиях. Во-первых,
в культуре клетки находятся в стационарных усло-
виях снабжения питательными веществами и кис-
лородом, чего нельзя обеспечить в системе in vivo.
Во-вторых, в настоящей работе макропористые
альгинатные скаффолды были заселены клетками
другого типа, более чувствительными к парциаль-
ному давлению кислорода. В-третьих, в работе
использовали криоконсервированные клетки. Тот
факт, что после деконсервирования суспензия со-
держала более 70% сохранных клеток, не означает,
что клетки оставались жизнеспособными в тече-
conditions where an essential amount of biologically
active substances is present, stimulating their prolife-
ration and/or differentiation [21]. Thus the introduction
of AAF prior to PH on the one hand forms the model
of liver injury, accompanied by severe structural and
functional disorders in organ [14], allowing more clear
observation of the effects resulted from cell transplan-
tation and on the other hand creates the stimulus for
development of the introduced cells. The results of
performed by us studies in the model of AAF/PH testify
to a deep impairments of liver biochemical indices. An
abrupt peak-like rise in the content of total bilirubin
and reduction of serum albumin concentration to the
7th day after PH in the animals of group 2, implanted
with cell free scaffolds apparently reflects an acute
phase of pathological process when liver function suf-
fers most. The fall of albumin level testifies likely to a
disorder of liver synthetic function and the rise in
bilirubin level points to a damaged detoxication func-
tion. At the same time the rise in serum activity of
marker enzymes of liver injury, the aminotransferases,
was the most manifested in this group in more distant
terms, from 7 to 21st days after PH. The increased
activities of AlT and AsT obviously reflect the gradual
process of death of parenchymatous cells, not endured
the metabolic loading. Implantation of FLCs immobilized
in macroporous scaffolds (group 3) prevented a peak-
like rise in the content of total bilirubin and reduction
of albumin concentration, moreover in contrast to group
2 these indices normalized to the 28th observation day.
Similar to group 3 the rise in activity of aminotrans-
ferases was less manifested, likely testifying to a lower
intensity of necrotic processes in hepatic parenchyma
of animals.
The presented results may testify to the fact that
the cells immobilized in macroporous carriers affect
the course of pathological process. This effect may
be stipulated by activated proliferation and differen-
tiation of recipient oval cells. In that case a positive
effect may be conditioned by the effect of biologically
active substances synthesized in cells. Herewith the
performed studies do not allow the revealing whether
the effect of these biologically active substances is
implemented at the level of oval cells or is directed to
the maintenance of viability and functional activity of
mature hepatocytes. To elucidate the mechanisms of
positive effect of FLCs enclosed into macroporous
carriers on the course of pathological process additional
investigations of liver structural changes are needed.
Other direction of this research development is his-
tological study of cells as components of macroporous
carriers after administration to a recipient. The previous
studies performed at our laboratory showed that cells
survive and propagate during 3D culturing in macro-
porous sponges [17], but it is impossible to state that
their behavior would be the same under these experi-
95 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
ние долгосрочного пребывания в организме, тем
более, что они находились в агрессивной среде,
обусловленной течением патологического процес-
са. Определение морфофункционального состоя-
ния клеток в составе макропористых носителей
после имплантации в организм реципиента и воз-
можностей его коррекции является важным этапом
на пути развития тканевой инженерии и регенера-
тивной медицины.
Выводы
Проведенные исследования показали, что ксе-
ногенная трансплантация криоконсервированных
клеток фетальной печени человека, полученных из
плодов первого триместра гестации и заключенных
в макропористые скаффолды из альгината, в значи-
тельной степени способствует восстановлению
функции печени, нарушенной сочетанным дейст-
вием ААФ и ЧГЭ, что проявляется в улучшении
гепатоспецифических показателей крови.
В целом результаты настоящей работы свиде-
тельствуют о положительном действии клеток
фетальной печени, иммобилизованных в макро-
пористых носителях, на течение печеночной недос-
таточности и перспективности данного подхода для
лечения заболеваний печени.
mental conditions. Firstly, in the culture the cells are in
conditions of constant supplying of nutrients and oxy-
gen, which can not be provided in vivo. Secondly, in
this study the macroporous alginate scaffolds were
seeded with the cells of other type being more sensitive
to partial pressure of oxygen. Thirdly, the research was
conducted with cryopreserved cells. The fact that after
freeze-thawing the suspension contained more than
70% of survived cells does not mean that the cells
would remain viable during long-term staying in an or-
ganism, moreover they would be in aggressive medium,
resulted from pathological process course. The examin-
ing of morphofunctional state of cells inside the macro-
porous carriers and possibilities of its correction is an
important stage in the progress of tissue engineering
and regenerative medicine.
Conclusions
The performed studies have shown that xenogeneic
transplantation of cryopreserved human fetal liver cells
derived from fetuses of the first trimester and immobi-
lized in macroporous alginate scaffolds in a great extent
contribute to a recovery of liver function disordered
by a combined effect of AAF and PH, manifesting in
improvement of hepatospecific blood indices.
Generally the results of present work testify to a
positive effect of fetal liver cells immobilized in macro-
porous carriers on the course of hepatic insufficiency
and prospects of this research for treating hepatic di-
seases.Литература
1. Оченашко О.В., Божков А.И., Петренко А.Ю. Влияние эмб-
риональных клеток печени человека на синтез ДНК и яРНК
в регенерирующей печени крыс // Укр. біохім. журнал. –
2002. – Т. 74, №3. – С. 20–25.
2. Петренко Ю.А., Иванов Р.В., Лозинский В.И., Петренко А.Ю.
Сравнительное исследование методов заселения широко-
пористых носителей на основе альгинатного криогеля
мезенхимальными стромальными клетками костного моз-
га человека // Клеточные технологии в биологии и медици-
не. – 2010. – №4. – C. 225–228.
3. Cheng K., Benten D., Bhargava K. et al. Hepatic targeting and
biodistribution of human fetal liver stem/progenitor cells and
adult hepatocytes in mice // Hepatology. – 2009. – Vol. 50,
№4. – P. 1194–1203.
4. Darinskas A., Gasparaviciute R., Malisauskas M. et al. Engraf-
ting fetal liver cells into multiple tissues of healthy adult mice
without the use of immunosuppressants // Cellular & Molecular
Biology Letters. – 2007. – Vol. 12. – P. 422–434.
5. De Roos W.K., von Geusau B.A., Bouwman E. et al. Monitoring
engraftment of transplanted hepatocytes in recipient liver with
5-bromo-2'-deoxyuridine // Transplantation. – 1997. – Vol. 63,
№4. – P. 513–518.
6. Duncan A. W., Dorrell C., Grompe M. Stem cells and liver
regeneration // Gastroenterology. – 2009. – Vol. 137, №2. –
P. 466–481.
7. Dusabineza A.C., Van Hul N.K., Abarca-Quinones J. et al.
Participation of liver progenitor cells in liver regeneration: lack
of evidence in the AAF/PH rat model // Lab. Invest. – 2011. –
Vol. 92. – P. 72–81.
8. Kakinuma S., Nakauchi H., Watanabe M. Hepatic stem/
progenitor cells and stem-cell transplantation for the treatment
of liver disease // J. Gastroenterol. – 2009. – Vol. 44, №3. –
P. 167–172.
References
1. Ochenashko O.V., Bozhkov A.I., Petrenko A.Yu. Effect of hu-
man embryonic liver cells on DNA and nRNA synthesis in rats'
regenerating liver // Ukr. Biokhim. Zhurnal. – 2002. – Vol. 74,
N3. – P. 20–25.
2. Petrenko Yu.A., Ivanov R.V., Lozinsky V.I., Petrenko A.Yu.
Comparative study of seeding methods of widely porous car-
riers based on alginate cryogel with mesenchymal stromal cells
of human bone marrow// Kletochnye Tekhnologii v Biologii i
Meditsine. – 2010. – N4. – P. 225–228.
3. Cheng K., Benten D., Bhargava K. et al. Hepatic targeting and
biodistribution of human fetal liver stem/progenitor cells and
adult hepatocytes in mice // Hepatology. – 2009. – Vol. 50,
N4. – P. 1194–1203.
4. Darinskas A., Gasparaviciute R., Malisauskas M. et al. Engraf-
ting fetal liver cells into multiple tissues of healthy adult mice
without the use of immunosuppressants // Cellular & Molecular
Biology Letters. – 2007. – Vol. 12. – P. 422–434.
5. De Roos W.K., von Geusau B.A., Bouwman E. et al. Monitoring
engraftment of transplanted hepatocytes in recipient liver with
5-bromo-2'-deoxyuridine // Transplantation. – 1997. – Vol. 63,
N4. – P. 513–518.
6. Duncan A. W., Dorrell C., Grompe M. Stem cells and liver
regeneration // Gastroenterology. – 2009. – Vol. 137, N2. –
P. 466–481.
7. Dusabineza A.C., Van Hul N.K., Abarca-Quinones J. et al.
Participation of liver progenitor cells in liver regeneration: lack
of evidence in the AAF/PH rat model // Lab. Invest. – 2011. –
Vol. 92. – P. 72–81.
96 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №1
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №1
9. Kocken J.M., Bouwman E., Borel Rinkes I.H. et al. Observations
on initial cell loss after intraportal hepatocyte transplantation of
5'-bromo-deoxy-uridine-labeled hepatocytes // Eur. Surg. Res. –
1997. – Vol. 29, №6. – P. 411–420.
10.Kocken J.M., Bouwman E., Scheringa M. et al. Acute death
after intraportal hepatocyte transplantation in an allogeneic rat
strain combination: a possible role for complement activation //
Transplant. Proc. – 1997. – Vol. 29. – P. 2067–2068.
11.Meerman J.H.N., Van de Poll M.L.M. Metabolic activation
routes of arylamines and their genotoxic effects // Environmental
Health Perspectives. – 1994. – Vol. 102, №6. – P. 153–159.
12.Muraca M., Neri D., Parenti A. et al. Intraportal hepatocyte
transplantation in the pig: hemodynamic and histopathological
study // Transplantation. – 2002. – Vol. 27, №73(6). – P. 890–
896.
13.Oertel M., Shafritz D.A. Stem cells, cell transplantation and
liver repopulation // Biochim. Biophys. Acta. – 2008. – Vol. 1782. –
P. 61–74.
14.Park D.Y., Suh K.S. Transforming growth factor-β1 protein,
proliferation and apoptosis of oval cells in acetylaminofluorene-
induced rat liver regeneration // J. Korean Med. Sci. – 1999. –
Vol. 14. – P. 531–538.
15.Petrenko A.Yu., Sukach A.N. Isolation of intact mitochondria
and hepatocytes using vibration // Analytical Biochem. – 1991. –
Vol. 194, №2. – P. 326–332.
16.Petrenko A.Yu., Sukach A.N., Grischuk V.P. et al. Separation
of intact and damaged hepatocytes in sucrose following non-
enzymatic liver perfusion // Cytotechnology. – 1995. – Vol. 17. –
P.127–131.
17.Petrenko Yu.A., Ivanov R.V., Petrenko A.Yu., Lozinsky V.I.
Coupling of gelatin to inner surfaces of pore walls in spongy
alginate-based scaffolds facilitates the adhesion, growth and
differentiation of human bone marrow mesenchymal stromal
cells // J. Mater. Sci: Mater. Med. – 2011. – Vol. 22, №6. –
Р. 1529–1540.
18.Saeter G., Schwarze P.E., Nesland J.M., Seglen P.O. Trans-
plantation of preneoplastic rat hepatocytes by intraportal
injection // Toxicol. Pathol. – 1987. – Vol. 15, №1. – P. 78–81.
19.Senni K., Pereira J., Gueniche F. et al. Marine polysacchari-
des: a source of bioactive molecules for cell therapy and tissue
engineering // Mar. Drugs. – 2011. – №9. – Р. 1664–1681.
20.Shafritz D.A., Dabeva M.D. Liver stem cells and model sys-
tems for liver repopulation // J. Hepatol. – 2002. – Vol. 36, №4. –
P. 552–564.
21.Zimmerman A. Liver regeneration: the emergence of new
pathways // Med. Sci. Monit. – 2002. – Vol. 8, №3. – P. 53–63.
Поступила 24.01.2012
8. Kakinuma S., Nakauchi H., Watanabe M. Hepatic stem/
progenitor cells and stem-cell transplantation for the treatment
of liver disease // J. Gastroenterol. – 2009. – Vol. 44, N3. –
P. 167–172.
9. Kocken J.M., Bouwman E., Borel Rinkes I.H. et al. Observations
on initial cell loss after intraportal hepatocyte transplantation of
5'-bromo-deoxy-uridine-labeled hepatocytes // Eur. Surg. Res. –
1997. – Vol. 29, N6. – P. 411–420.
10.Kocken J.M., Bouwman E., Scheringa M. et al. Acute death
after intraportal hepatocyte transplantation in an allogeneic rat
strain combination: a possible role for complement activation //
Transplant. Proc. – 1997. – Vol. 29. – P. 2067–2068.
11.Meerman J.H.N., Van de Poll M.L.M. Metabolic activation
routes of arylamines and their genotoxic effects // Environmental
Health Perspectives. – 1994. – Vol. 102, N6. – P. 153–159.
12.Muraca M., Neri D., Parenti A. et al. Intraportal hepatocyte
transplantation in the pig: hemodynamic and histopathological
study // Transplantation. – 2002. – Vol. 27, N73(6). – P. 890–
896.
13.Oertel M., Shafritz D.A. Stem cells, cell transplantation and
liver repopulation // Biochim. Biophys. Acta. – 2008. – Vol. 1782. –
P. 61–74.
14.Park D.Y., Suh K.S. Transforming growth factor-β1 protein,
proliferation and apoptosis of oval cells in acetylaminofluorene-
induced rat liver regeneration // J. Korean Med. Sci. – 1999. –
Vol. 14. – P. 531–538.
15.Petrenko A.Yu., Sukach A.N. Isolation of intact mitochondria
and hepatocytes using vibration // Analytical Biochem. – 1991. –
Vol. 194, N2. – P. 326–332.
16.Petrenko A.Yu., Sukach A.N., Grischuk V.P. et al. Separation
of intact and damaged hepatocytes in sucrose following non-
enzymatic liver perfusion // Cytotechnology. – 1995. – Vol. 17. –
P.127–131.
17.Petrenko Yu.A., Ivanov R.V., Petrenko A.Yu., Lozinsky V.I.
Coupling of gelatin to inner surfaces of pore walls in spongy
alginate-based scaffolds facilitates the adhesion, growth and
differentiation of human bone marrow mesenchymal stromal
cells // J. Mater. Sci: Mater. Med. – 2011. – Vol. 22, N6. –
Р. 1529–1540.
18.Saeter G., Schwarze P.E., Nesland J.M., Seglen P.O. Trans-
plantation of preneoplastic rat hepatocytes by intraportal
injection // Toxicol. Pathol. – 1987. – Vol. 15, N1. – P. 78–81.
19.Senni K., Pereira J., Gueniche F. et al. Marine polysacchari-
des: a source of bioactive molecules for cell therapy and tissue
engineering // Mar. Drugs. – 2011. – N9. – Р. 1664–1681.
20.Shafritz D.A., Dabeva M.D. Liver stem cells and model sys-
tems for liver repopulation. // J. Hepatol. – 2002. – Vol. 36, N4. –
P. 552–564.
21.Zimmerman A. Liver regeneration: the emergence of new
pathways // Med. Sci. Monit. – 2002. – Vol. 8, N3. – P. 53–63.
Accepted 24.01.2012
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68482 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T16:13:35Z |
| publishDate | 2012 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Грицай, Д.В. Лебединский, А.С. Оченашко, О.В. Петренко, Ю.А. 2014-09-25T05:03:45Z 2014-09-25T05:03:45Z 2012 Криоконсервированные клетки фетальной печени, заключенные в макропористые носители, способствуют восстановлению функций печени после поражения 2-ацетиламинуфлуореном / Д.В. Грицай, А.С. Лебединский, О.В. Оченашко, Ю.А. Петренко // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 1. — С. 88-96. — Бібліогр.: 21 назв. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68482 618.393.018.2:615.014.41:616.36-08-092.9 Исследовано влияние криоконсервированных клеток фетальной печени, иммобилизованных в макропористых альгинатных носителях, на степень поражения печени крыс с моделью печеночной недостаточности, индуцируемой введением 2-ацетиламинофлуорена с последующим проведением частичной гепатэктомии. Показана способность иммобилизованных клеток печени ускорять восстановление гепатоспецифических параметров крови: содержания сывороточного альбумина, общего билирубина, активности аминотрансфераз. Полученные результаты свидетельствуют о положительном действии клеток фетальной печени, иммобилизованных в макропористых носителях, на течение печеночной недостаточности и перспективности данного подхода для лечения заболеваний печени. Досліджували вплив кріоконсервованих клітин фетальної печінки, іммобілізованих у макропористих альгінатних носіях, на ступінь ураження печінки щурів з моделлю печінкової недостатності, яка індукується введенням 2-ацетиламінофлуорену з наступним проведенням часткової гепатектомії. Показана здатність іммобілізованих клітин печінки прискорювати відновлення гепатоспецифічних параметрів крові: вмісту сироваткового альбуміну, загального білірубіну, активності амінотрансфераз. Отримані результати свідчать про позитивну дію клітин фетальної печінки, іммобілізованих у макропористих носіях, на перебіг печінкової недостатності і перспективність обраного підходу для лікування захворювань печінки. The effect of cryopreserved fetal liver cells immobilized in macroporous alginate scaffolds on liver injury degree in rats with model of liver failure developed by administration of 2-acetylaminofluorene with subsequent partial hepatectomy. It was shown that immobilized fetal liver cells accelerated recovery of spesific hepatic indices: serum albumin, total bilirubin content, aminotransferase activity. The results of this work indicate the positive effect of fetal liver cells seeded in macroporous scaffolds on course of liver failure and argue the availability of this approach for liver failure treatment. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология Криоконсервированные клетки фетальной печени, заключенные в макропористые носители, способствуют восстановлению функций печени после поражения 2-ацетиламинуфлуореном Cryopreserved Fetal Liver Cells Immobilized in Macroporous Carriers Promote Liver Function Recovery After Injury With 2-Acetylaminefluorene Article published earlier |
| spellingShingle | Криоконсервированные клетки фетальной печени, заключенные в макропористые носители, способствуют восстановлению функций печени после поражения 2-ацетиламинуфлуореном Грицай, Д.В. Лебединский, А.С. Оченашко, О.В. Петренко, Ю.А. Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| title | Криоконсервированные клетки фетальной печени, заключенные в макропористые носители, способствуют восстановлению функций печени после поражения 2-ацетиламинуфлуореном |
| title_alt | Cryopreserved Fetal Liver Cells Immobilized in Macroporous Carriers Promote Liver Function Recovery After Injury With 2-Acetylaminefluorene |
| title_full | Криоконсервированные клетки фетальной печени, заключенные в макропористые носители, способствуют восстановлению функций печени после поражения 2-ацетиламинуфлуореном |
| title_fullStr | Криоконсервированные клетки фетальной печени, заключенные в макропористые носители, способствуют восстановлению функций печени после поражения 2-ацетиламинуфлуореном |
| title_full_unstemmed | Криоконсервированные клетки фетальной печени, заключенные в макропористые носители, способствуют восстановлению функций печени после поражения 2-ацетиламинуфлуореном |
| title_short | Криоконсервированные клетки фетальной печени, заключенные в макропористые носители, способствуют восстановлению функций печени после поражения 2-ацетиламинуфлуореном |
| title_sort | криоконсервированные клетки фетальной печени, заключенные в макропористые носители, способствуют восстановлению функций печени после поражения 2-ацетиламинуфлуореном |
| topic | Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| topic_facet | Криомедицина, клиническая и экспериментальная трансплантология |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68482 |
| work_keys_str_mv | AT gricaidv kriokonservirovannyekletkifetalʹnoipečenizaklûčennyevmakroporistyenositelisposobstvuûtvosstanovleniûfunkciipečeniposleporaženiâ2acetilaminufluorenom AT lebedinskiias kriokonservirovannyekletkifetalʹnoipečenizaklûčennyevmakroporistyenositelisposobstvuûtvosstanovleniûfunkciipečeniposleporaženiâ2acetilaminufluorenom AT očenaškoov kriokonservirovannyekletkifetalʹnoipečenizaklûčennyevmakroporistyenositelisposobstvuûtvosstanovleniûfunkciipečeniposleporaženiâ2acetilaminufluorenom AT petrenkoûa kriokonservirovannyekletkifetalʹnoipečenizaklûčennyevmakroporistyenositelisposobstvuûtvosstanovleniûfunkciipečeniposleporaženiâ2acetilaminufluorenom AT gricaidv cryopreservedfetallivercellsimmobilizedinmacroporouscarrierspromoteliverfunctionrecoveryafterinjurywith2acetylaminefluorene AT lebedinskiias cryopreservedfetallivercellsimmobilizedinmacroporouscarrierspromoteliverfunctionrecoveryafterinjurywith2acetylaminefluorene AT očenaškoov cryopreservedfetallivercellsimmobilizedinmacroporouscarrierspromoteliverfunctionrecoveryafterinjurywith2acetylaminefluorene AT petrenkoûa cryopreservedfetallivercellsimmobilizedinmacroporouscarrierspromoteliverfunctionrecoveryafterinjurywith2acetylaminefluorene |