Жизнеспособность и дифференцировка костного мозга гемопоэтических и мезенхимальных стволовых клеток, криоконсервированных при –196° C с 1972 года
Збережено в:
| Дата: | 2012 |
|---|---|
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2012
|
| Назва видання: | Проблемы криобиологии |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68525 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Жизнеспособность и дифференцировка костного мозга гемопоэтических и мезенхимальных стволовых клеток, криоконсервированных при –196° C с 1972 года / С. Сумида, Т. Китамура, Н. Мотомура, А. Сайто // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 235. — рос., англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68525 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-685252025-02-09T09:54:38Z Жизнеспособность и дифференцировка костного мозга гемопоэтических и мезенхимальных стволовых клеток, криоконсервированных при –196° C с 1972 года Viability and Differentiation of Bone Marrow Hematopoietic and Mesenchymal Stem Cells Cryopreserved at –196° С since 1972 Сумида, С. Китамура, Т. Мотомура, Н. Сайто, А. Пленарные доклады 2012 Article Жизнеспособность и дифференцировка костного мозга гемопоэтических и мезенхимальных стволовых клеток, криоконсервированных при –196° C с 1972 года / С. Сумида, Т. Китамура, Н. Мотомура, А. Сайто // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 235. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68525 ru Проблемы криобиологии application/pdf Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Пленарные доклады Пленарные доклады |
| spellingShingle |
Пленарные доклады Пленарные доклады Сумида, С. Китамура, Т. Мотомура, Н. Сайто, А. Жизнеспособность и дифференцировка костного мозга гемопоэтических и мезенхимальных стволовых клеток, криоконсервированных при –196° C с 1972 года Проблемы криобиологии |
| format |
Article |
| author |
Сумида, С. Китамура, Т. Мотомура, Н. Сайто, А. |
| author_facet |
Сумида, С. Китамура, Т. Мотомура, Н. Сайто, А. |
| author_sort |
Сумида, С. |
| title |
Жизнеспособность и дифференцировка костного мозга гемопоэтических и мезенхимальных стволовых клеток, криоконсервированных при –196° C с 1972 года |
| title_short |
Жизнеспособность и дифференцировка костного мозга гемопоэтических и мезенхимальных стволовых клеток, криоконсервированных при –196° C с 1972 года |
| title_full |
Жизнеспособность и дифференцировка костного мозга гемопоэтических и мезенхимальных стволовых клеток, криоконсервированных при –196° C с 1972 года |
| title_fullStr |
Жизнеспособность и дифференцировка костного мозга гемопоэтических и мезенхимальных стволовых клеток, криоконсервированных при –196° C с 1972 года |
| title_full_unstemmed |
Жизнеспособность и дифференцировка костного мозга гемопоэтических и мезенхимальных стволовых клеток, криоконсервированных при –196° C с 1972 года |
| title_sort |
жизнеспособность и дифференцировка костного мозга гемопоэтических и мезенхимальных стволовых клеток, криоконсервированных при –196° c с 1972 года |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2012 |
| topic_facet |
Пленарные доклады |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68525 |
| citation_txt |
Жизнеспособность и дифференцировка костного мозга гемопоэтических и мезенхимальных стволовых клеток, криоконсервированных при –196° C с 1972 года / С. Сумида, Т. Китамура, Н. Мотомура, А. Сайто // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 235. — рос., англ. |
| series |
Проблемы криобиологии |
| work_keys_str_mv |
AT sumidas žiznesposobnostʹidifferencirovkakostnogomozgagemopoétičeskihimezenhimalʹnyhstvolovyhkletokkriokonservirovannyhpri196cs1972goda AT kitamurat žiznesposobnostʹidifferencirovkakostnogomozgagemopoétičeskihimezenhimalʹnyhstvolovyhkletokkriokonservirovannyhpri196cs1972goda AT motomuran žiznesposobnostʹidifferencirovkakostnogomozgagemopoétičeskihimezenhimalʹnyhstvolovyhkletokkriokonservirovannyhpri196cs1972goda AT sajtoa žiznesposobnostʹidifferencirovkakostnogomozgagemopoétičeskihimezenhimalʹnyhstvolovyhkletokkriokonservirovannyhpri196cs1972goda AT sumidas viabilityanddifferentiationofbonemarrowhematopoieticandmesenchymalstemcellscryopreservedat196ssince1972 AT kitamurat viabilityanddifferentiationofbonemarrowhematopoieticandmesenchymalstemcellscryopreservedat196ssince1972 AT motomuran viabilityanddifferentiationofbonemarrowhematopoieticandmesenchymalstemcellscryopreservedat196ssince1972 AT sajtoa viabilityanddifferentiationofbonemarrowhematopoieticandmesenchymalstemcellscryopreservedat196ssince1972 |
| first_indexed |
2025-11-25T14:02:11Z |
| last_indexed |
2025-11-25T14:02:11Z |
| _version_ |
1849771251025838080 |
| fulltext |
235
Жизнеспособность и дифференцировка костного мозга гемопоэтических
и мезенхимальных стволовых клеток, криоконсервированных при –196°C с 1972 года
С. СУМИДА, Т. КИТАМУРА, Н. МОТОМУРА, А. САЙТО
Клиника и лаборатория криомедицины и переливания крови д-ра Саджио Сумиды
Тканевой банк, Отделение сердечно-сосудистой хирургии, Факультет медицины Токийского
Университета
Viability and Differentiation of Bone Marrow Hematopoietic
and Mesenchymal Stem Cells Cryopreserved at –196ºС since 1972
S. SUMIDA, T. KITAMURA, N. MOTOMURA, A. SAITO
Dr. Sajio Sumida Clinic and Lab Cryomedicine and Blood Transfusion
Tissue Bank, Department of Cardiovascular Surgery, Tokyo University School of Medicine, Japan
Это исследование было проведено для подтверждения
жизнеспособности и дифференцировки в культуре деконсер-
вированных клеток костного мозга, клеток пуповины и лимфо-
цитов периферической крови, криоконсервированных
с 1972 года в течение 30–40 лет.
Аутологичные клетки костного мозга в количестве 5,1 ±
2,9×106-9 были собраны для лечения 293 больных с рас-
пространенным солидным раком перед химиотерапией. Эти
клетки суспендировали в 15%-м (конечная концентрация)
растворе глицерина в тканевой культуральной среде 199
(в 1972-1980 гг.) или в 10%-м (конечная концентрация)
растворе ДМСО на основе аутологичной плазмы в тефлоно-
вом/каптоновом контейнере, охлаждали до –75±5°С со
скоростью 2-5 град/мин с использованием программного
замораживателя и хранили в жидком азоте 30–40 лет при
температуре –196°С, начиная с 1972 года. Контейнеры
с клетками костного мозга, которые не использовали для ле-
чения пациентов, постоянно хранятся в хранилище с жидким
азотом до сегодняшнего дня. В 2010 году часть образцов
была разморожена для изучения жизнеспособности и диффе-
ренцировки гемопоэтических (ГСК) и мезенхимальных ство-
ловых клеток (МСК). Размороженные клетки культивировали
в чашках Петри с культуральной средой и соответствующими
факторами роста: сыворотками взрослого человека и/или
лизатом клеток крови мечехвоста в инкубаторе при 37°С и
5% CO2. Культуральная среда заменялась регулярно, два-
три раза в неделю.
Исследования показали: что моноцитарные и эритробласт-
ные КОЕ были обнаружены в 96% деконсервированных
клеток костного мозга. Восстановление ГСК деконсервирован-
ного костного мозга (15 марта 2012 года) соответствует урав-
нению регрессии: Y = –0,0003X + 0,0367, т. е. замораживание
в жидком азоте мало влияет на количество восстановленных
КОЕ-C клеток костного мозга. Повышенная экспрессия по-
верхностных маркеров: CD2, 4, 11б, 13, 16, 33, 38, HLA-DR и
GP означает, что именно факторы роста в средах эффективно
стимулируют пролиферацию и дифференцировку этих клеток
для экспрессирования поверхностных маркеров. Некоторые
колонии клеток, образованные на 5–7 день культивирования,
сохранялись до 3 месяцев ( 4-6 пассажей). Колонии МСК,
перициты и фибробласты обнаружены в 8% оттаянного кост-
ного мозга. Перициты и фибробласты, прикрепившиеся ко
дну чашки, росли и покрывали всю ее поверхность, а также
участвовали в построении необычных «конфлюентных»
структур на поверхности культуры. Некоторые из этих струк-
тур обладали свойством автосокращения. ГСК успешно куль-
тивировали поверх конфлюентного слоя фибробластов. Не
наблюдалось бактериального заражения в результирующей
культуре. Хранение стволовых клеток, а также клеток пупо-
винной крови при –60 до –80°С в механическом холодильнике
или в парах жидкого азота не позволило после отогрева полу-
чить колонии, вероятно, из-за нестабильного температурного
режима, вызванного открыванием двери, приводящего
к фатальной рекристаллизации в клеточных суспензиях.
This study was performed to confirm viability and differen-
tiation in culture of the thawed bone marrow cells, umbilical cord
cells, and peripheral lymphocytes which had been cryopreserved
for 30–40 years since 1972.
Autologous bone marrow cells of 5.1 ± 2.9×106-9 were
harvested for salvage of 293 advanced solid cancer patients before
chemo-ablation, suspended in a 15% (final concentration) glycerol
in a tissue culture medium 199 in 1972-1980, or in a 10% (final
concentration) Me2SO in the autologous plasma solution, enclosed
in a Teflon-Capton bag, cooled down to around –75 ± 5°С at
a controlled rate of 2- 5 deg/min using programmed cooling device,
and preserved in a liquid phase of liquid nitrogen for 30 to 40
years at –196°С since 1972. Containers with bone marrow cells
which were not used to treat patients had been continuously
preserved in liquid nitrogen stocker until today. In 2010 we decided
to thaw those cells in order to study the viability and differentiation
of hematopoietic (HSCs) and mesenchymal stem cells (MSCs).
Thawed cells were cultured in Petri dish with culture media and
appropriate growth factors: adult human sera and/or limulus
(horseshoe crab) blood cell lysate in special incubator maintaining
the correct conditions of 37°С and 5% CO2. The culture medium
was replenished at regular time intervals, two to three times per
week.
The studies showed that: monocytes- and erythroblast-CFU
appeared in 96% of thawed bone marrow. Recovery (%) of HSCs
of thawed marrows gave the regression equation: Y= –0.0003X +
0.0367 on March 15, 2012, which suggests that freezing in liquid
nitrogen hardly influences the CFU-C recovery (%) of marrow
stem cells. The increased expression of surface markers: CD2, 4,
11b, 13, 16, 33, 38, HLA-DR, and GP-A clarified that the right
growth factors in the media effectively stimulated the proliferation
and differentiation of those cells to express surface makers. Some
colony cells of Day 5–7 continuously survived to form colonies
for up to minimum 3 months as the 4th–6th passages. Colonies of
MSCs, pericytes and fibroblasts appeared in 8% of thawed bone
marrows. Pericytes and fibroblasts attached to the bottom of
dish to grow up and covered the entire surface of the dish, and
recruited to construct interesting ‘confluent’ frameworks on the
surface in culture. Some of these structures showed automatically
contraction, suggesting MSCs differentiation into cardiomyocytes
or other cell types. HSCs were successfully cultured on top of
a confluent layer of fibroblasts. Аlthough 6 of 90 containers
ruptured during thawing, but there were neither bacterial
contamination nor obstacles in the culture results afterward. The
cryopreservation of stem cells and also cord blood cells at –60 to
–80°С in the mechanical freezer and in the vapour phase of liquid
nitrogen did not constantly succeed in the formation of colonies,
probably due to long-termed duration of unstable temperatures
caused by the repetitive opening and shutting of the door, resulting
in fatal recrystallization of the cells.
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №3
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №3
|