Лінійна селекція кардіоміоцитів, отриманих із ембріональних та індукованих плюрипотентних стовбурових клітин
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Проблемы криобиологии |
|---|---|
| Datum: | 2012 |
| Hauptverfasser: | , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Ukrainisch |
| Veröffentlicht: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2012
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68574 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Лінійна селекція кардіоміоцитів, отриманих із ембріональних та індукованих плюрипотентних стовбурових клітин / М. Дяченко, Д. Білько, І. Борбуляк, Н. Білько // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 284. — укр., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860259039818022912 |
|---|---|
| author | Дяченко, М. Білько, Д. Борбуляк, І. Білько, Н. |
| author_facet | Дяченко, М. Білько, Д. Борбуляк, І. Білько, Н. |
| citation_txt | Лінійна селекція кардіоміоцитів, отриманих із ембріональних та індукованих плюрипотентних стовбурових клітин / М. Дяченко, Д. Білько, І. Борбуляк, Н. Білько // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 284. — укр., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии |
| first_indexed | 2025-12-07T18:53:32Z |
| format | Article |
| fulltext |
284
Лінійна селекція кардіоміоцитів, отриманих із ембріональних
та індукованих плюрипотентних стовбурових клітин
М. ДЯЧЕНКО, Д. БІЛЬКО, І. БОРБУЛЯК, Н. БІЛЬКО
Центр молекулярних та клітинних досліджень
Національний університет «Києво-Могилянська академія», м. Київ
Linear Selection of Cardiomyocytes Derived
from Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells
M. DYACHENKO, D. BIL’KO, I. BORBULYAK, N. BIL’KO
Center for Molecular and Cell Research, National University of Kyiv-Mohyla Academy, Kyiv, Ukraine
Derivation of induced pluripotent stem cells (iPS) has
opened new perspectives for cell therapy. However there
are several problems have to be solved before the clinical
application of pluripotent cells will be possible. The main
difficulty is the ability of embryonic stem (ES) and iPS cells
to form teratoma when injecting them into recipient’s or-
ganism. The research aim was to develop an effective se-
lection method of residual non-differentiated stem cells with
teratomogenic properties of pool of mature linear-specific
cells during differentiation.
In the research there were used ES and iPS cells of aPig44
and AT25 lines, respectively. They are mice pluripotent cells
expressing gene of green fluorescent protein (GFP) and
puromycin resistance gene under the control of alpha-myo-
sin heavy chain promoter. The cells were routinely main-
tained on feeder layer of mice embryonic fibroblasts. For
differentiation the cells were cultured in a horizontal shaker
in IMDM with addition of 20% FCS. Culturing of the formed
embryoid bodies (EBs) was continued until appearance of
GFP-positive EBs to the 8th differentiation day, after that
puromycin (8 mg/ml) and cytostatic agents in appropriate
concentrations (etoposide phosphate, 5-fluouracyl, bleo-
mycin and cisplatin) were added to the nutritional medium.
Concentration of semi-maximum inhibition of cell growth
for bleomycin was 10 mg/ml, 1 mg/ml for etoposide phos-
phate, 5 mg/ml for cisplatin, 2 µmol for 5-fluouracyl. The
substances in such concentrations had no toxic effect on
mature cardiomyocytes. It was revealed sensitivity differ-
ence of two studied cell lines. Herewith, level of GFP-posi-
tive cells after addition of cytostatic agents to cardiomyo-
cytes derived from AT25 line was in 2.51–3.09 times higher
than the control values (p < 0.05). A statistically significant
increase of GFP-positive cardiomyocytes number derived
from aPIG44 cell line was revealed only after bleomycin ad-
dition (1.86 vs. 0.57% in the control group, p < 0.05), allow-
ing not only selection of mature cardiomyocytes, but also
increasing contractions level of EBs (100% EBs contracted,
intensity was 1.4 beats if compared with 0.8 ones for the
control group, p < 0.05).
The obtained results suggest that cytostatic agents can
be used as non-toxic and effective means for eliminating
teratomogenic immature cells during differentiation. Linear
selection without manipulations with cell genetic material
will enable to apply the proposed method for cells to be
used for therapy.
Отримання індукованих плюрипотентних стовбуро-
вих клітин (iPS) відкрило нові перспективи для клітинної
терапії. Проте, все ще залишається ряд запитань, які необ-
хідно вирішити перш ніж клінічне застосування плюрипо-
тентних клітин стане можливим. Основною перешкодою
є здатність ембріональних стовбурових (ES) та iPS-клітин
формувати тератоми при введенні в організм реципієнта.
Метою дослідження було розробити ефективну мето-
дику селекції резидуальних недиференційованих стов-
бурових клітин із тератомогенними властивостями від
пулу зрілих лінійноспецифічних клітин у процесі диферен-
ціювання.
Для проведення дослідження використовували клі-
тини ES та iPS ліній aPig44 та AT25 відповідно. Це
плюрипотентні клітини миші, що експресують ген зеле-
ного флуоресцентного білка (GFP) та ген резистентності
до пуроміцину під контролем промотора важкого лан-
цюга альфа-міозину. Клітини рутинно підтримувались
на фідерному шарі ембріональних фібробластів миші.
Для диференціювання клітини культивували на горизон-
тальному шейкері у середовищі IMDM із додаванням
20% FCS. Культивування утворених ембріоїдних тілець
(EBs) продовжували до появи GFP-позитивних EBs на
8-й день диференціювання, після чого у живильне сере-
довище додавали пуроміцин (8 мкг/мл) та цитостатики у
відповідних концентраціях (етопозид фосфат, 5-флюоура-
цил, блеоміцин та цисплатин).
Концентрація напівмаксимального інгібування росту
клітин складала для блеоміцину 10 кмг/мл, для етопозиду
фосфату – 1 мкг/мл, для цисплатини – 5 мкг/мл, для 5-
флюоурацилу – 2 мкмоль . Такі концентрації препаратів
не мали токсичного впливу на зрілі кардіоміоцити. Вияв-
лено різницю у чутливості двох досліджуваних ліній клітин.
Так, рівень GFP-позитивних клітин після додавання цито-
статиків для кардіоміоцитів, отриманих із лінії AT25, був
у 2,51–3,09 рази вищим від контрольних значень (p < 0,05).
Статистично достовірне зростання кількості GFP-пози-
тивних кардіоміоцитів, отриманих із клітин лінії aPIG44,
виявлено лише при додаванні блеоміцину (1,86 проти
0,57% у контрольній групі, p < 0,05), який не лише дозво-
ляв провести селекцію зрілих кардіоміоцитів, але й підви-
щував рівень скорочень EBs (100% EBs скорочувались,
інтенсивність 1,4 уд. порівняно з 0,8 уд. для контрольної
групи, p < 0,05).
Отримані результати дозволяють зробити висновок,
що цитостатики можуть використовуватись як нетоксич-
ний та ефективний засіб для елімінації незрілих тератомо-
генних клітин у процесі диференціації. Відсутність мані-
пуляцій із генетичним матеріалом клітин для проведення
лінійної селекції дозволить застосовувати пропонований
метод для клітин, що будуть використовуватись у тера-
певтичних цілях.
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №3
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №3
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68574 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T18:53:32Z |
| publishDate | 2012 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Дяченко, М. Білько, Д. Борбуляк, І. Білько, Н. 2014-09-26T16:17:12Z 2014-09-26T16:17:12Z 2012 Лінійна селекція кардіоміоцитів, отриманих із ембріональних та індукованих плюрипотентних стовбурових клітин / М. Дяченко, Д. Білько, І. Борбуляк, Н. Білько // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 284. — укр., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68574 uk Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии Стволовые клетки. Тканевая инженерия. Клеточная и тканевая терапия Лінійна селекція кардіоміоцитів, отриманих із ембріональних та індукованих плюрипотентних стовбурових клітин Linear Selection of Cardiomyocytes Derived from Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells Article published earlier |
| spellingShingle | Лінійна селекція кардіоміоцитів, отриманих із ембріональних та індукованих плюрипотентних стовбурових клітин Дяченко, М. Білько, Д. Борбуляк, І. Білько, Н. Стволовые клетки. Тканевая инженерия. Клеточная и тканевая терапия |
| title | Лінійна селекція кардіоміоцитів, отриманих із ембріональних та індукованих плюрипотентних стовбурових клітин |
| title_alt | Linear Selection of Cardiomyocytes Derived from Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells |
| title_full | Лінійна селекція кардіоміоцитів, отриманих із ембріональних та індукованих плюрипотентних стовбурових клітин |
| title_fullStr | Лінійна селекція кардіоміоцитів, отриманих із ембріональних та індукованих плюрипотентних стовбурових клітин |
| title_full_unstemmed | Лінійна селекція кардіоміоцитів, отриманих із ембріональних та індукованих плюрипотентних стовбурових клітин |
| title_short | Лінійна селекція кардіоміоцитів, отриманих із ембріональних та індукованих плюрипотентних стовбурових клітин |
| title_sort | лінійна селекція кардіоміоцитів, отриманих із ембріональних та індукованих плюрипотентних стовбурових клітин |
| topic | Стволовые клетки. Тканевая инженерия. Клеточная и тканевая терапия |
| topic_facet | Стволовые клетки. Тканевая инженерия. Клеточная и тканевая терапия |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68574 |
| work_keys_str_mv | AT dâčenkom líníinaselekcíâkardíomíocitívotrimanihízembríonalʹnihtaíndukovanihplûripotentnihstovburovihklítin AT bílʹkod líníinaselekcíâkardíomíocitívotrimanihízembríonalʹnihtaíndukovanihplûripotentnihstovburovihklítin AT borbulâkí líníinaselekcíâkardíomíocitívotrimanihízembríonalʹnihtaíndukovanihplûripotentnihstovburovihklítin AT bílʹkon líníinaselekcíâkardíomíocitívotrimanihízembríonalʹnihtaíndukovanihplûripotentnihstovburovihklítin AT dâčenkom linearselectionofcardiomyocytesderivedfromembryonicandinducedpluripotentstemcells AT bílʹkod linearselectionofcardiomyocytesderivedfromembryonicandinducedpluripotentstemcells AT borbulâkí linearselectionofcardiomyocytesderivedfromembryonicandinducedpluripotentstemcells AT bílʹkon linearselectionofcardiomyocytesderivedfromembryonicandinducedpluripotentstemcells |