Характеристика mTiPSCs – потенційної лінії іПСК миші, отриманої за допомогою системи транспозонів Sleeping beauty
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии |
|---|---|
| Дата: | 2012 |
| Автори: | , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Українська |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2012
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68581 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Характеристика mTiPSCs – потенційної лінії іПСК миші, отриманої за допомогою системи транспозонів Sleeping beauty / С. Малишева, Г. Будаш, Д. Білько, Н. Білько, Т. Саріч // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 291. — укр., англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859467886044643328 |
|---|---|
| author | Малишева, С. Будаш, Г. Білько, Д. Білько, Н. Саріч, Т. |
| author_facet | Малишева, С. Будаш, Г. Білько, Д. Білько, Н. Саріч, Т. |
| citation_txt | Характеристика mTiPSCs – потенційної лінії іПСК миші, отриманої за допомогою системи транспозонів Sleeping beauty / С. Малишева, Г. Будаш, Д. Білько, Н. Білько, Т. Саріч // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 291. — укр., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии |
| first_indexed | 2025-11-24T08:09:03Z |
| format | Article |
| fulltext |
291
Характеристика mTiPSCs – потенційної лінії іПСК миші, отриманої
за допомогою системи транспозонів Sleeping beauty
С. МАЛИШЕВА1,2, Г. БУДАШ1,2, Д. БІЛЬКО1, Н. БІЛЬКО1, Т. САРІЧ2
1Національний університет «Києво-Могилянська академія», м. Київ
2Інститут нейрофізіології Кельнського університету, м. Кельн
Characterization of mTiPSCs – Potential Mouse iPSC Obtained
by Means of Sleeping Beauty Transposon System
S. MALYSHEVA1,2, G. BUDASH1,2, D. BILKO1, N. BILKO1, T. SARICH2
1National University of Kyiv-Mohyla Academy, Kyiv, Ukraine
2 Institute of Neurophysiology, University of Cologne, Cologne
Відкриття індукованих плюрипотентних стовбурових
клітин (іПСК) [Yamanaka, 2007] – перспективної альтерна-
тиви ембріональним стовбуровим клітинам (ЕСК), стало
надзвичайною подією у клітинній біології. Проте тради-
ційні вірусні методи отримання іПСК пов’язані з певним
ризиком для потенційного подальшого застосування цих
клітин у медичній практиці. Використання заснованої на
мобільних генетичних елементах системи Sleeping beau-
ty – принципово новий механізм репрограмування сома-
тичних клітин у індуковані плюрипотентні [Izsvak, 2010].
У даній роботі досліджено ключові характеристики отри-
маної за допомогою цієї системи потенційно нової лінії
іПСК миші – mTiPSCs (murine Transposon-Induced Pluripo-
tent Stem Cells).
Трансфекцію ембріональних фібробластів репрогра-
муючою системою плазмід здійснювали на «Neon Trans-
fection System» («Invitrogen»). Отримані колонії відбира-
ли індивідуально та культивували як лінії ЕСК/іПСК на
мітотично інактивованих фідерних клітинах у присутнос-
ті LIF. Рівень експресії SSEA-1 визначали за допомогою
проточної цитофлуориметрії, локалізацію експресії
транскрипційного фактора Oct4 – імуногістохімічно. Екс-
пресію генів вивчали на рівні мРНК за допомогою полі-
меразної ланцюгової реакції зі зворотньою транскрип-
цією. Диференційний потенціал отриманих клонів оці-
нювали при їх спонтанному диференціюванні in vitro
[Okada, 2010] та формуванні тератом in vivo у імуноде-
фіцитних тварин і лабораторних мишей лінії c57Bl6/N.
Було досліджено експресію факторів плюрипотент-
ності на рівні білку – лужної фосфатази, SSEA-1, Oct4.
Кількість SSEA-1 – позитивних клітин варіювала у різних
клонах від 59,60% у клона 20 до 94% у клона 17, а у загаль-
новідомих ліній плюріпотентних клітин АТ25 і αPIG44
становила 91,5% і 93,0% відповідно. Показано реактива-
цію ендогенної експресії генів, асоційованих із плюрипо-
тентністю – nanog, rex1, stella, sall4, utf, tcl. При спон-
танному диференціюванні виявлено активацію експресії
ранніх ентодермальних маркерів (AFP і Sox17) на 12-ту
добу диференціювання, мезодермальних tBra – із 7-ї доби
в усіх досліджуваних лініях, αMHC – лише у клоні 7 і
контрольних лініях на 12-ту добу. Експресію гену nestin,
що вважався ектодермальним маркером, спостерігали
у недиференційованому стані та на усіх етапах диферен-
ціювання. При підшкірному введенні імунодефіцитним
тваринам по 2×106 клітин отриманих клонів спостерігали
формування тератом починаючи із 25-ї доби експери-
менту. Клонами 6 і 9 сформовано по одній пухлині, а
клоном 7 і лінією αPIG44 – по дві. У мишей лінії c57Bl6/N
формування тератом не виявлено.
Експериментальні дані є переконливим доказом плю-
ріпотентності отриманих клонів, що свідчить про репро-
грамування соматичних клітин у потенційну лінію іПСК
за допомогою системи Sleeping beauty.
Discovery of induced pluripotent stem cells (iPSCs)
[Yamanaka, 2007], a prospective alternative to embryonic
stem cells, was an extraordinary event in cell biology. How-
ever, the traditional viral methods of iPSC derivation are
associated with certain risk for potential further use of these
cells in medical practice. Usage of Sleeping Beauty system
based on mobile genetic elements is a fundamentally new
mechanism for reprogramming somatic cells into induced
pluripotent ones [Izsvak, 2010]. Basic characteristics of
potentially new mouse iPSC line, mTiPSCs (murine Trans-
poson-induced Pluripotent Stem Cells), obtained by means
of Sleeping Beauty were investigated in this research.
Transfection of embryonic fibroblasts by reprogrammed
plasmid system was performed with NeonTransfection
system (Invitrogen). The obtained colonies were individual-
ly selected and cultured as ESC/iPSC lines on mitotically
inactivated feeder cells in the presence of LIF. Expression
level of SSEA-1 was determined by flow cytofluorimetry,
expression localization of transcription factor Oct4 was done
by immunohistochemistry. Gene expression at the level of
mRNA was studied with polymerase chain reaction with re-
verse transcription. Differentional potential of obtained
clones was evaluated during their spontaneous differentia-
tion in vitro [Okada, 2010] and formation of teratomas in
vivo in immunodeficient animals and c57Bl6/N mice.
The expression of pluripotency factors was studied at
protein level: alkaline phosphatase, SSEA-1, Oct4. The num-
ber of SSEA-1 positive cells varied in different clones from
59.60% in clone 20 upto 94% in clone 17, while standard
AT25 and αPIG44 lines their number was 91.5 and 93.0%,
respectively. We have found the reactivation of endogenous
expression of genes associated with pluripotency: nanog,
rex1, stella, sall4, utf, tcl. During spontaneous differen-
tiation we revealed activation of early entodermic markers
expression (AFP and Sox17) to the 12th day of differentiation;
mesodermal tBra starting from the 7th day in all the studied
lines, and αMHC was found only in clone 7 and the control
lines to the 12th day. Expression of nestin gene, supposed
as ectodermic marker, was observed in undifferentiated state
and at all the stages of differentiation. Subcutaneous intro-
duction to immunodeficient animals of 2×106 cells from the
experimental clones resulted in formation of teratomas start-
ing from the 25th day of the experiment. Clones 6 and 9 formed
one tumor each, and clones 7 and line αPIG44 formed by 2
tumors each. In c57Bl6/N mice no teratomas were found.
The experimental data showed strong evidence that deri-
ved clones are pluripotent, that testified the reprogramming
of somatic cells to potential iPSC line using Sleeping beauty
system.
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №3
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №3
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68581 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-11-24T08:09:03Z |
| publishDate | 2012 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Малишева, С. Будаш, Г. Білько, Д. Білько, Н. Саріч, Т. 2014-09-26T16:27:44Z 2014-09-26T16:27:44Z 2012 Характеристика mTiPSCs – потенційної лінії іПСК миші, отриманої за допомогою системи транспозонів Sleeping beauty / С. Малишева, Г. Будаш, Д. Білько, Н. Білько, Т. Саріч // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 291. — укр., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68581 uk Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии Стволовые клетки. Тканевая инженерия. Клеточная и тканевая терапия Характеристика mTiPSCs – потенційної лінії іПСК миші, отриманої за допомогою системи транспозонів Sleeping beauty Characterization of mTiPSCs – Mouse iPSC Obtained by Means of Sleeping Beauty Transposon System Article published earlier |
| spellingShingle | Характеристика mTiPSCs – потенційної лінії іПСК миші, отриманої за допомогою системи транспозонів Sleeping beauty Малишева, С. Будаш, Г. Білько, Д. Білько, Н. Саріч, Т. Стволовые клетки. Тканевая инженерия. Клеточная и тканевая терапия |
| title | Характеристика mTiPSCs – потенційної лінії іПСК миші, отриманої за допомогою системи транспозонів Sleeping beauty |
| title_alt | Characterization of mTiPSCs – Mouse iPSC Obtained by Means of Sleeping Beauty Transposon System |
| title_full | Характеристика mTiPSCs – потенційної лінії іПСК миші, отриманої за допомогою системи транспозонів Sleeping beauty |
| title_fullStr | Характеристика mTiPSCs – потенційної лінії іПСК миші, отриманої за допомогою системи транспозонів Sleeping beauty |
| title_full_unstemmed | Характеристика mTiPSCs – потенційної лінії іПСК миші, отриманої за допомогою системи транспозонів Sleeping beauty |
| title_short | Характеристика mTiPSCs – потенційної лінії іПСК миші, отриманої за допомогою системи транспозонів Sleeping beauty |
| title_sort | характеристика mtipscs – потенційної лінії іпск миші, отриманої за допомогою системи транспозонів sleeping beauty |
| topic | Стволовые клетки. Тканевая инженерия. Клеточная и тканевая терапия |
| topic_facet | Стволовые клетки. Тканевая инженерия. Клеточная и тканевая терапия |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68581 |
| work_keys_str_mv | AT mališevas harakteristikamtipscspotencíinoílínííípskmišíotrimanoízadopomogoûsistemitranspozonívsleepingbeauty AT budašg harakteristikamtipscspotencíinoílínííípskmišíotrimanoízadopomogoûsistemitranspozonívsleepingbeauty AT bílʹkod harakteristikamtipscspotencíinoílínííípskmišíotrimanoízadopomogoûsistemitranspozonívsleepingbeauty AT bílʹkon harakteristikamtipscspotencíinoílínííípskmišíotrimanoízadopomogoûsistemitranspozonívsleepingbeauty AT saríčt harakteristikamtipscspotencíinoílínííípskmišíotrimanoízadopomogoûsistemitranspozonívsleepingbeauty AT mališevas characterizationofmtipscsmouseipscobtainedbymeansofsleepingbeautytransposonsystem AT budašg characterizationofmtipscsmouseipscobtainedbymeansofsleepingbeautytransposonsystem AT bílʹkod characterizationofmtipscsmouseipscobtainedbymeansofsleepingbeautytransposonsystem AT bílʹkon characterizationofmtipscsmouseipscobtainedbymeansofsleepingbeautytransposonsystem AT saríčt characterizationofmtipscsmouseipscobtainedbymeansofsleepingbeautytransposonsystem |