Флуктуация содержания кальция во внутриклеточных депо нативных и девитрифицированных ооцитов свиней
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии |
|---|---|
| Дата: | 2012 |
| Автори: | , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2012
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68613 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Флуктуация содержания кальция во внутриклеточных депо нативных и девитрифицированных ооцитов свиней / В.Ю. Денисенко, Т.И. Кузьмина // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 323. — рос., англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859773346735980544 |
|---|---|
| author | Денисенко, В.Ю. Кузьмина, Т.И. |
| author_facet | Денисенко, В.Ю. Кузьмина, Т.И. |
| citation_txt | Флуктуация содержания кальция во внутриклеточных депо нативных и девитрифицированных ооцитов свиней / В.Ю. Денисенко, Т.И. Кузьмина // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 323. — рос., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии |
| first_indexed | 2025-12-02T07:24:27Z |
| format | Article |
| fulltext |
323
Флуктуация содержания кальция во внутриклеточных
депо нативных и девитрифицированных ооцитов свиней
В.Ю. ДЕНИСЕНКО, Т.И. КУЗЬМИНА
Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения
сельскохозяйственных животных РАСХН, Санкт-Петербург, Пушкин
Calcium Fluctuation in Intracellular Depots of Intact and Devitrified Pig Oocytes
V.YU. DENISENKO, T.I. KUZMINA
All-Russian Scientific Research Institute of Genetics and Farm Animal Breeding of the Russian
Academy of Agricultural Sciences, St.-Petersburg, Pushkin, Russia
Создание криобанка донорских ооцитов млекопитаю-
щих позволит интенсифицировать внедрение клеточных
репродуктивных технологий в биомедицину и животно-
водство. Флуктуация содержания кальция – индикатор
функционального состояния ооцитов животных при
созревании in vitro [Kuzmina et al., 2007]. Цель настоящей
работы – на основе ингибиторного анализа исследовать
освобождение Са2+ из внутриклеточных депо (ВД) на-
тивных и девитрифицированных ооцитов при воздейст-
вии соматотропина (СТГ) и ГТФ. Ооциты, выделенные
из яичников на стадии фолликулярного роста, витрифи-
цировали в соответствии с методикой, описанной ранее
[Денисенко, Кузьмина, 2012]. Концентрацию кальция во
ВД измеряли с помощью хлортетрациклина (ХТЦ).
Ооциты инкубировали 5 мин при 37°С в среде Дюльбек-
ко, содержащей 40 мкМ ХТЦ. Флуоресценцию комплекса
Са2+-ХТЦ-мембрана возбуждали ртутной лампой ДРШ-
250 М. Для выделения возбуждающей флуоресценцию
длины волны с максимумом на 390 нм применяли свето-
фильтры СС и СЗС, флуоресценцию регистрировали на
длине волны 520 нм. Исходную популяцию ооцитов
оценивали с помощью витального красителя бриллиан-
тового кристаллического голубого (ВСВ, «Sigma») и в
соответствии с окраской делили на две группы: завер-
шившие фазу роста (окрашенная ооплазма) и растущие
ооциты (отсутствие окраски). В работе использовали
завершившие фазу роста ооциты, их витрифицировали
и после окрашивания вновь инкубировали с ВСВ.
Ооплазма девитрифицированных завершивших стадию
роста ооцитов после экспозиции с ВСВ оставалась ок-
рашенной. В нативных ооцитах при совместном дейст-
вии СТГ в концентрации 10 нг/мл и ГТФ в концентрации
10 мкМ фиксировали переход Са2+ между различными
ВД, о чем свидетельствовало дополнительное освобож-
дение Са2+ из ВД при совместном действии СТГ и ГТФ.
Освобождение Са2+ из ВД вызывает рост концентрации
Са2+ в цитоплазме и обеспечивает прохождение мейоза
[Santella et al., 1999]. Добавление ингибитора полимери-
зации микротрубочек нокодазола (10 мкМ) отменяло до-
полнительное освобождение Са2+ из ВД и соответст-
венно перемещение Са2+ между ВД, стимулированное
совместным действием СТГ и ГТФ. В ооцитах после де-
витрификации при совместном действии СТГ и ГТФ
также наблюдали дополнительное освобождение Са2+ из
ВД ооцитов, эффект ингибировался нокодазолом. Таким
образом, в ооцитах витрификация не оказывает влияния
на перемещение Са2+ между различными ВД, стиму-
лированное совместным действием СТГ и ГТФ.
Работа выполнена при финансовой поддержке
Российского фонда фундаментальных исследований
(проект офи-а 10-04-00389).
Establishing a cryobank for mammalian donor’s oocytes
will allow to intensify the introduction of cell reproductive
technologies in biomedicine and animal breeding. Calcium
fluctuation is an indicator of functional state of animal
oocytes during maturation in vitro [Kuzmina et al., 2007].
The research aim was to study Ca2+ release out of intra-
cellular depots (IDs) of native and devitrified oocytes under
effect of somatotropin (STH) and GTF based on inhibitory
analysis. Oocytes isolated from ovaries at follicular growth
stage were vitrified according to the previously described
method [Denisenko and Kuzmina, 2012]. Calcium concen-
tration in IDs was measured with chlortetracycline (ChTC).
Oocytes were incubated for 5 min at 37°C in Dulbecco’s me-
dium containing 40 µM of ChTC. Fluorescence of Ca2+-
ChTC-membrane complex was excited with DRSh-250 M
mercury lamp. There were used light filters SS and ESS to
detect exciting fluorescence wavelength maximum at 390
nm. Fluorescence was recorded at wavelength of 520 nm.
Initial population of oocytes was assessed with vital dye
brilliant crystal blue (BCB, Sigma), and according with the
staining it was divided into two groups: completed growth
phase (stained ooplasm) and growing oocytes (without stai-
ning). Completed growth phase oocytes were used in the
research, vitrified and incubated again with BCB after their
staining. Ooplasm of devitrified completed growth stage
oocytes after exposure with BCB remained stained. In native
oocytes at a combined action of 10 ng/ml STH and 10 mM
GTF Ca2+ transition among different IDs was revealed, as
evidenced by additional Ca2+ release out of IDs at combined
action of STH and GTF. Release of Ca2+ out of IDs causes a
rise of Ca2+ concentrations in cytoplasm and provides meio-
sis [Santella et al., 1999]. Addition of polymerization inhibitor
of nocodazole microtubules (10 mM) avoided additional
release of Ca2+ out of IDs and, accordingly, Ca2+ transition
in IDs, stimulated by combined action of STH and GTF.
There was also observed an additional Ca2+ release out of
IDs in oocytes after devitrification at combined effect of
STH and GTF. Effect was inhibited by nocodazole. Thus,
vitrification in oocytes does not affect the Ca2+ transfer
between different IDs, stimulated by combined action of
STH and GTF.
This research was supported by the Russian Foundation
for Basic Research (project ofi-a 10-04-00389).
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №3
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №3
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68613 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-02T07:24:27Z |
| publishDate | 2012 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Денисенко, В.Ю. Кузьмина, Т.И. 2014-09-26T17:38:57Z 2014-09-26T17:38:57Z 2012 Флуктуация содержания кальция во внутриклеточных депо нативных и девитрифицированных ооцитов свиней / В.Ю. Денисенко, Т.И. Кузьмина // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 323. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68613 ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии Стендовые доклады Флуктуация содержания кальция во внутриклеточных депо нативных и девитрифицированных ооцитов свиней Calcium Fluctuation in Intracellular Depots of Intact and Devitrified Pig Oocytes Article published earlier |
| spellingShingle | Флуктуация содержания кальция во внутриклеточных депо нативных и девитрифицированных ооцитов свиней Денисенко, В.Ю. Кузьмина, Т.И. Стендовые доклады |
| title | Флуктуация содержания кальция во внутриклеточных депо нативных и девитрифицированных ооцитов свиней |
| title_alt | Calcium Fluctuation in Intracellular Depots of Intact and Devitrified Pig Oocytes |
| title_full | Флуктуация содержания кальция во внутриклеточных депо нативных и девитрифицированных ооцитов свиней |
| title_fullStr | Флуктуация содержания кальция во внутриклеточных депо нативных и девитрифицированных ооцитов свиней |
| title_full_unstemmed | Флуктуация содержания кальция во внутриклеточных депо нативных и девитрифицированных ооцитов свиней |
| title_short | Флуктуация содержания кальция во внутриклеточных депо нативных и девитрифицированных ооцитов свиней |
| title_sort | флуктуация содержания кальция во внутриклеточных депо нативных и девитрифицированных ооцитов свиней |
| topic | Стендовые доклады |
| topic_facet | Стендовые доклады |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68613 |
| work_keys_str_mv | AT denisenkovû fluktuaciâsoderžaniâkalʹciâvovnutrikletočnyhdeponativnyhidevitrificirovannyhoocitovsvinei AT kuzʹminati fluktuaciâsoderžaniâkalʹciâvovnutrikletočnyhdeponativnyhidevitrificirovannyhoocitovsvinei AT denisenkovû calciumfluctuationinintracellulardepotsofintactanddevitrifiedpigoocytes AT kuzʹminati calciumfluctuationinintracellulardepotsofintactanddevitrifiedpigoocytes |