Перспективный для криобиологии зонд с длинноволновой эмиссией для обнаружения апоптоза
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии |
|---|---|
| Дата: | 2012 |
| Автори: | , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2012
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68622 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Перспективный для криобиологии зонд с длинноволновой эмиссией для обнаружения апоптоза / К.А. Пыршев, М.М. Гузык, К.Ю. Манойлов // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 332. — рос., англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859791152800071680 |
|---|---|
| author | Пыршев, К.А. Гузык, М.М. Манойлов, К.Ю. |
| author_facet | Пыршев, К.А. Гузык, М.М. Манойлов, К.Ю. |
| citation_txt | Перспективный для криобиологии зонд с длинноволновой эмиссией для обнаружения апоптоза / К.А. Пыршев, М.М. Гузык, К.Ю. Манойлов // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 332. — рос., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии |
| first_indexed | 2025-12-02T11:49:32Z |
| format | Article |
| fulltext |
Перспективный для криобиологии зонд
с длинноволновой эмиссией для обнаружения апоптоза
К.А. ПЫРШЕВ, М.М. ГУЗЫК, К.Ю. МАНОЙЛОВ
Институт биохимии имени А.В. Палладина НАН Украины, г. Киев
Red-Shifted Probe for Apoptosis Detection Prospective for Cryobiology
K.A. PYRSHEV, M.M. GUZYK, K.YU. MANOILOV
Palladin Institute of Biochemistry of the National Academy of Sciences of Ukraine, Kiev, Ukraine
Последние данные литературы демонстрируют
противоречивые результаты о влиянии низких темпера-
тур на различные типы клеток, акцентируя при этом
внимание на роли апоптоза. Поэтому изучение апоптоза
очень важно для криобиотехнологии. Наиболее попу-
лярные методы, применяемые для обнаружения
апоптоза клеток, используют те же механизмы, что и
макрофаги, распознающие изменения на поверхности
апоптотической клетки. Нарушение липидной асиммет-
рии с последующей экспозицией фосфатидилсерина
(ФС) на внешний слой плазматической мембраны
является основным критерием раннего выявления апоп-
тоза и обычно изучается с помощью аннексина V. В связи
с автофлуоресценцией, вызванной клеточными пигмен-
тами, представленной в коротковолновой области,
многие исследователи интересуются зондами с излуче-
нием в красной области. Таким свойством обладает зонд
на основе нильского красного (NR12S) [Kucherak et al.,
2010]. NR12S является радиометрическим зондом,
спектры возбуждения которого находятся в сине-зеленой
области с эмиссионными cдвигами длины волны в
желтую и красную области. Еще одним преимуществом
такого подхода является возможность его комбиниро-
ванного использования в спектрофлуориметрии,
проточной цитометрии и конфокальной микроскопии,
что позволяет детально характеризовать исследуемые
системы.
Мы протестировали NR12S в исследованиях клеток.
Использовали культуру моноцитов человека U937 в среде
RPMI 1640/HEPES («Sigma-Aldrich») с эмбриональной
бычьей сывороткой. Уровень некроза изучали по окра-
шиванию пропидием йодидом (PI) («Sigma-Aldrich»).
Были обнаружены некоторые особенности применения
NR12S, что может быть важно для других исследователей,
использующих этот метод.
Данные спектрофлуорометрии показали, что NR12S
и PI, внесенные вместе во внеклеточный раствор, взаи-
модействуют и дают один пик излучения с эмиссией
с увеличенным квантовым выходом и смещенным пи-
ком ближе к 620 нм. Такая проблема может быть решена
с помощью зонда для выявления некроза со спектром
излучения в зеленой области или применением дополни-
тельных контрольных образцов для обнаружения уровня
некроза. Другая характеристика имеет отношение к нали-
чию в растворе RPMI 1640 красителя фенолового крас-
ного с возбуждением при 520 нм и эмиссией при более
580 нм. Из-за наложения с эмиссией NR12S наиболее
часто изучаемые клетки в растворе RPMI 1640 дают эмис-
сию, смещенную в более длинноволновую область, что
искусственно увеличивает процент апоптотических и
некротических клеток в тестах с проточной цитомет-
рией. Применение NR12S зонда в исследованиях на
клетках для обнаружения апоптоза находится только на
начальной стадии, и определение оптимальных условий
его применения имеет важное значение.
Авторы выражают благодарность Н. В. Коротке-
вич и А.Ю. Лабынцеву за предоставленные культуры
клеток и техническую консультацию.
332
Recent literature data search shows controversial results
dealing with influence of low temperatures on different cell
types with important focus on apoptosis. The most popular
methods applying for apoptotic cells detection use the same
mechanism as the macrophages recognizing the change on
apoptotic cell surface. Lipid asymmetry disturbance
followed by phosphotidylserine (PS) exposure on plasma
membrane extracellular layer is the main parameter for early
detection of apoptosis been com-monly studied by annexin
V assays. In view of autofluorescence caused by the cellular
pigments presented in a short-wavelength region a lot of
researchers interest in probes with the emission in red
region. Such characteristic is proper for probe based on
Nile Red (NR12S) [Kucherak, Oncul et al., 2010]. NR12S is a
ratiometric probe that can be excited in the blue-green region
with response by wavelength shifts in yellow and red
emission. Another advantage of this approach is the pos-
sibility of its combine using in specrofluorimetry, flow
cytometry and confocal microscopy permitting to charac-
terize the studied system in detail.
We tested the application of NR12S for cellular studies.
Human monocytes culture U937 was used in RPMI 1640/
HEPES (Sigma-Aldrich) with fetal bovine serum (FBS). The
level of necrosis was detected by propidium iodide (PI)
(Sigma-Aldrich). Some peculiarities in NR12S application
have been found that can be important for other researchers
using this method.
Spectrofluorimetry data has shown that NR12S and PI
added together to extracellular solution are interacting and
giving one peak of emission with enhanced quantum yield
and shifted peak closer to 620 nm. Such problem can be
solved by using the probe for necrosis with emission spect-
ra in green region or applying additional control specimen
for necrosis level detection. Another characteristic deals
with existing in RPMI 1640 solution of the dye phenol red
excitated in 520 nm and giving response over 580 nm. Due
to overlap with NR12S emission the commonly studied cells
in RPMI 1640 solution respond in emission shifted to longer-
wavelength region artificially increasing percent of apoptotic
and necrotic cells detected by flow cytometry. It has to be
noted that FBS contains different types of proteins and
flow cytometer has shown their conjugating with NR12S
probe.
NR12S probe application in a cell research as the assay
for apoptosis is just on its beginning and the determination
of its optimal application conditions is of importance. Some
results of NR12S application will be presented at the
conference.
The authors would like to thank N.V. Korotkevich and
A.J. Labyntsev for providing cell culture and technical
advice.
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №3
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №3
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68622 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-02T11:49:32Z |
| publishDate | 2012 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Пыршев, К.А. Гузык, М.М. Манойлов, К.Ю. 2014-09-26T17:50:47Z 2014-09-26T17:50:47Z 2012 Перспективный для криобиологии зонд с длинноволновой эмиссией для обнаружения апоптоза / К.А. Пыршев, М.М. Гузык, К.Ю. Манойлов // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 332. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68622 ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии Стендовые доклады Перспективный для криобиологии зонд с длинноволновой эмиссией для обнаружения апоптоза Red-Shifted Probe for Apoptosis Detection Prospective for Cryobiology Article published earlier |
| spellingShingle | Перспективный для криобиологии зонд с длинноволновой эмиссией для обнаружения апоптоза Пыршев, К.А. Гузык, М.М. Манойлов, К.Ю. Стендовые доклады |
| title | Перспективный для криобиологии зонд с длинноволновой эмиссией для обнаружения апоптоза |
| title_alt | Red-Shifted Probe for Apoptosis Detection Prospective for Cryobiology |
| title_full | Перспективный для криобиологии зонд с длинноволновой эмиссией для обнаружения апоптоза |
| title_fullStr | Перспективный для криобиологии зонд с длинноволновой эмиссией для обнаружения апоптоза |
| title_full_unstemmed | Перспективный для криобиологии зонд с длинноволновой эмиссией для обнаружения апоптоза |
| title_short | Перспективный для криобиологии зонд с длинноволновой эмиссией для обнаружения апоптоза |
| title_sort | перспективный для криобиологии зонд с длинноволновой эмиссией для обнаружения апоптоза |
| topic | Стендовые доклады |
| topic_facet | Стендовые доклады |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68622 |
| work_keys_str_mv | AT pyrševka perspektivnyidlâkriobiologiizondsdlinnovolnovoiémissieidlâobnaruženiâapoptoza AT guzykmm perspektivnyidlâkriobiologiizondsdlinnovolnovoiémissieidlâobnaruženiâapoptoza AT manoilovkû perspektivnyidlâkriobiologiizondsdlinnovolnovoiémissieidlâobnaruženiâapoptoza AT pyrševka redshiftedprobeforapoptosisdetectionprospectiveforcryobiology AT guzykmm redshiftedprobeforapoptosisdetectionprospectiveforcryobiology AT manoilovkû redshiftedprobeforapoptosisdetectionprospectiveforcryobiology |