Сравнительный анализ устойчивости клеточных культур к различным условиям заморозки
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии |
|---|---|
| Дата: | 2012 |
| Автори: | , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2012
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68672 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Сравнительный анализ устойчивости клеточных культур к различным условиям заморозки / М.Н. Щетвин, Е.Л. Фирсова, Т.Н. Притчина, И.А. Суетина, Р.Я. Подчерняева // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 382. — рос., англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860254538990092288 |
|---|---|
| author | Щетвин, М.Н. Фирсова, Е.Л. Притчина, Т.Н. Суетина, И.А. Подчерняева, Р.Я. |
| author_facet | Щетвин, М.Н. Фирсова, Е.Л. Притчина, Т.Н. Суетина, И.А. Подчерняева, Р.Я. |
| citation_txt | Сравнительный анализ устойчивости клеточных культур к различным условиям заморозки / М.Н. Щетвин, Е.Л. Фирсова, Т.Н. Притчина, И.А. Суетина, Р.Я. Подчерняева // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 382. — рос., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии |
| first_indexed | 2025-12-07T18:47:39Z |
| format | Article |
| fulltext |
Сравнительный анализ устойчивости клеточных
культур к различным условиям заморозки
М.Н. ЩЕТВИН, Е.Л. ФИРСОВА, Т.Н. ПРИТЧИНА, И.А. СУЕТИНА, Р.Я. ПОДЧЕРНЯЕВА
ФГБУ «НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздравсоцразвития России, г. Москва
Comparative Analysis of Cell Culture Resistance to Different Freezing Conditions
M.N. SCHETVIN, E.L. FIRSOVA, T.N. PRITCHINA, I.A. SUYETINA, R.YA. PODCHERNYAEVA
D.I. Ivanovsky R&D Institute of Virology of the Ministry of Health
and Social Development of the Russian Federation, Moscow, Russia
Существенным аспектом криоконсервирования кле-
точных культур является сохранение жизнеспособности
клеток после размораживания. Это достигается за счет
минимизации образования внутриклеточных кристаллов
льда и предотвращения образования очагов концент-
рированных солей. Однако применение криопротекторов
типа глицерина в высоких концентрациях, токсичных для
клеток, во многом мешает сохранению их жизнеспособ-
ности. Кроме того, хранение замороженных клеток в
жидком азоте при –196°С требует специальных методов
транспортировки и деконсервации.
Целью данной работы являлось изучение жизнеспо-
собности двух перевиваемых клеточных линий: клеток
почки африканской зеленой мартышки (Vero) и клеток
легкого эмбриона человека (ЛЭЧ) при различных усло-
виях заморозки.
Клетки Vero и ЛЭЧ после стандартного выращивания
в культуральных флаконах и снятия раствором версен-
трипсина помещали в стандартную среду для крио-
консервирования с использованием 10% глицерина и без
него. Для замораживания клеток был использован холо-
дильник (–20°С) и программный замораживатель «Mini-
cool 40 PC». О жизнеспособности клеток (%) судили с по-
мощью их подсчета в камере Горяева и по окраске трипа-
новым синим. Подсчет клеток проводили ежечасно в те-
чение первых 6 часов.
Нами было показано, что после применения 10% гли-
церина в качестве криопротектора жизнеспособность
клеток при –20°С сохранялась на уровне 90–98% на про-
тяжении всего времени наблюдения. Без глицерина через
3 ч жизнеспособность клеток Vero снижалась от 76 до
30%, а клеток ЛЭЧ – от 90 до 20%. Спустя 3 ч нахож-
дения клеток при –20°С наблюдалась гибель обеих кле-
точных линий.
При хранении в жидком азоте (–196°С) через 6 ч жиз-
неспособность клеток сохраняется при криоконсервации
с 10% глицерином как у Vero (93%), так и у клеток ЛЭЧ
(95%). Без добавления глицерина уже после 3 ч жизне-
способность клеток Vero снижается до 70%, а через 6ч
она составляет 60%. Тогда как у клеток ЛЭЧ без глицери-
на уже через 3 ч жизнеспособность резко снижается и
составляет только 10%.
Следовательно, изученные перевиваемые клеточные
линии различного происхождения (Vero и ЛЭЧ) отли-
чаются по своей чувствительности к условиям замора-
живания, и для консервации в жидком азоте клеток ЛЭЧ
необходимо применять 10% глицерин. Для деконсер-
вации обеих клеточных линий возможно хранение их при
температуре –20°С не более 2 ч до последующего пасси-
рования.
382
Important aspect in cell culture cryopreservation is to
preserve post-thaw cell viability. This is achieved by mini-
mizing the formation of intracellular ice crystals and preven-
ting that of foci of the concentrated salts. However, the ap-
plication of cryoprotectants such as glycerol in high con-
centrations, being toxic for cells, does not provide the comp-
lete preservation of viability. In addition, the storage of fro-
zen cells in liquid nitrogen at –196°C requires a special
technique for transportation and thawing.
This research was targeted to study the viability of two
inoculated cell lines: the cells of African green monkey kid-
ney (Vero) and human embryonic lung cells (HEL) after
application of various freezing conditions.
The Vero and HEL cells after the standard culturing in
cultural flasks and detaching by versene-trypsin solution
were placed into the standard medium for cryopreservation
with 10% glycerol and the medium without glycerol. For
cell freezing we used refrigerator with –20°C and a prog-
rammable freezer Minicool 40 PC. The cells viability (%)
was assessed by counting in Goryaev’s chamber of cells
non-stained with trypan blue. Cells were counted every
hour within the first 6 hrs of storage.
We demonstrated that when using 10% glycerol as
a cryoprotectant, the cell viability at –20°C remained at 90–
98% level within the whole observation time. Without gly-
cerol in 3 hrs of storage the Vero and HEL cell viability
reduced from 76 to 30 and from 90 to 20%, correspondingly.
After cell storage at –20°C we observed a death of both cell
lines in 3 hours.
After storage in liquid nitrogen (–196°C) during 6 hrs
the cell viability was preserved if the cells were cryopre-
served in media with 10% glycerol both in case of Vero
(93%) and HEL (95%) cells. Without glycerol already in 3 hrs
the Vero cell viability decreased down to 70%, and after 6
hours it made 60%. HEL cell viability sharply decreased
and made only 10% in 3 hrs if cells were stored without gly-
cerol.
Consequently, the studied inoculated cell lines (Vero
and HEL) differ by their sensitivity to freezing conditions.
HEL cell preservation into liquid nitrogen is provided in the
case of application of 10% glycerol. During thawing of both
cell lines it is possible to store them at –20°C for up to
2 hours prior to following passage.
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №3
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №3
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68672 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T18:47:39Z |
| publishDate | 2012 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Щетвин, М.Н. Фирсова, Е.Л. Притчина, Т.Н. Суетина, И.А. Подчерняева, Р.Я. 2014-09-26T19:12:43Z 2014-09-26T19:12:43Z 2012 Сравнительный анализ устойчивости клеточных культур к различным условиям заморозки / М.Н. Щетвин, Е.Л. Фирсова, Т.Н. Притчина, И.А. Суетина, Р.Я. Подчерняева // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 3. — С. 382. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68672 ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии Стендовые доклады Сравнительный анализ устойчивости клеточных культур к различным условиям заморозки Comparative Analysis of Cell Culture Resistance to Different Freezing Conditions Article published earlier |
| spellingShingle | Сравнительный анализ устойчивости клеточных культур к различным условиям заморозки Щетвин, М.Н. Фирсова, Е.Л. Притчина, Т.Н. Суетина, И.А. Подчерняева, Р.Я. Стендовые доклады |
| title | Сравнительный анализ устойчивости клеточных культур к различным условиям заморозки |
| title_alt | Comparative Analysis of Cell Culture Resistance to Different Freezing Conditions |
| title_full | Сравнительный анализ устойчивости клеточных культур к различным условиям заморозки |
| title_fullStr | Сравнительный анализ устойчивости клеточных культур к различным условиям заморозки |
| title_full_unstemmed | Сравнительный анализ устойчивости клеточных культур к различным условиям заморозки |
| title_short | Сравнительный анализ устойчивости клеточных культур к различным условиям заморозки |
| title_sort | сравнительный анализ устойчивости клеточных культур к различным условиям заморозки |
| topic | Стендовые доклады |
| topic_facet | Стендовые доклады |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68672 |
| work_keys_str_mv | AT ŝetvinmn sravnitelʹnyianalizustoičivostikletočnyhkulʹturkrazličnymusloviâmzamorozki AT firsovael sravnitelʹnyianalizustoičivostikletočnyhkulʹturkrazličnymusloviâmzamorozki AT pritčinatn sravnitelʹnyianalizustoičivostikletočnyhkulʹturkrazličnymusloviâmzamorozki AT suetinaia sravnitelʹnyianalizustoičivostikletočnyhkulʹturkrazličnymusloviâmzamorozki AT podčernâevarâ sravnitelʹnyianalizustoičivostikletočnyhkulʹturkrazličnymusloviâmzamorozki AT ŝetvinmn comparativeanalysisofcellcultureresistancetodifferentfreezingconditions AT firsovael comparativeanalysisofcellcultureresistancetodifferentfreezingconditions AT pritčinatn comparativeanalysisofcellcultureresistancetodifferentfreezingconditions AT suetinaia comparativeanalysisofcellcultureresistancetodifferentfreezingconditions AT podčernâevarâ comparativeanalysisofcellcultureresistancetodifferentfreezingconditions |