Влияние гипотермического хранения изолированных нервных клеток новорожденных крыс в средах различного состава на их поведение в культуре
Изучено влияние гипотермического хранения в сахарозосодержащей и солевой средах в присутствии и без 10 % сыворотки на поведение в культуре изолированных нервных клеток новорожденных крыс. Показано, что гипотермическое хранение нервных клеток в солевой среде DMEM/F12 и сахарозо-солевом растворе позво...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Проблемы криобиологии |
|---|---|
| Datum: | 2012 |
| Hauptverfasser: | , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russisch |
| Veröffentlicht: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2012
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68681 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Влияние гипотермического хранения изолированных нервных клеток новорожденных крыс в средах различного состава на их поведение в культуре / М.В. Шевченко, А.Н. Сукач // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 4. — С. 423-432. — Бібліогр.: 11 назв. — рос., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860106083959308288 |
|---|---|
| author | Шевченко, М.В. Сукач, А.Н. |
| author_facet | Шевченко, М.В. Сукач, А.Н. |
| citation_txt | Влияние гипотермического хранения изолированных нервных клеток новорожденных крыс в средах различного состава на их поведение в культуре / М.В. Шевченко, А.Н. Сукач // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 4. — С. 423-432. — Бібліогр.: 11 назв. — рос., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии |
| description | Изучено влияние гипотермического хранения в сахарозосодержащей и солевой средах в присутствии и без 10 % сыворотки на поведение в культуре изолированных нервных клеток новорожденных крыс. Показано, что гипотермическое хранение нервных клеток в солевой среде DMEM/F12 и сахарозо-солевом растворе позволяет сохранять популяции дифференцированных и стволовых/прогениторных клеток на протяжении 2-х суток. При этом гипотермическое хранение нервных клеток в течение одних суток в среде DMEM/F12 с сывороткой и без нее, а также в сахарозо-солевом растворе без сыворотки не влияет на структурно-функциональное состояние дифференцированных и стволовых/прогениторных нервных клеток новорожденных крыс.
Вивчали вплив гіпотермічного зберігання в сахарозо-місткому та сольовому середовищах у присутності і без10% сироватки на поведінку в культурі ізольованих нервових клітин новонароджених щурів. Показано, що гіпотермічне зберігання нервових клітин у сольовому середовищі DMEM/F12 та сахарозо-сольовому розчині дозволяє зберігати популяції диференційованих і стовбурових/прогеніторних клітин протягом 2-х діб. При цьому гіпотермічне зберігання нервових клітин упродовж однієї доби в середовищі DMEM/F12 з сироваткою та без неї, а також в сахарозо-сольовому розчині без сироватки не впливає на структурно-функціональний стан диференційованих і стовбурових/прогеніторних нервових клітин новонароджених щурів.
The behavior of isolated neural cells of newborn rats in culture after hypothermic storage either in sucrose-based solution or saline medium supplemented with 10% serum or serum-free was studied. Hypothermic storage in both saline medium DMEM/F12 and sucrose-based solution was shown to be effective in preserving the populations of differentiated and stem/progenitor cells for 2 days. t was demonstrated that one day of hypothermic storage in medium DMEM/F12 either supplemented with serum or serum-free, as well as in serum-free sucrose-based solution did not effect the structural-functional state of differentiated and stem/progenitor neural cells of newborn rats
|
| first_indexed | 2025-12-07T17:31:28Z |
| format | Article |
| fulltext |
423
Исследование влияния гипотермии на нервные
клетки (НК) новорожденных представляет интерес
для криобиологии и медицины. Изолированные НК
новорожденных могут потенциально использовать-
ся для клеточной терапии нейродегенеративных
заболеваний и повреждений ЦНС [8], что требует
разработки эффективных способов хранения этих
клеток. Чаще всего изолированные клетки хранят
при низких температурах. Однако хранение в гипо-
термических условиях может дополнять или быть
альтернативой замораживанию.
Кроме того, изолированные НК новорожденных
используют в качестве модели для изучения влия-
ния гипотермии на клетки нервной ткани. Гипотер-
мия является перспективным методом уменьше-
Investigation of the effect of hypothermia on the
neural cells (NCs) of newborns is of interest for cryo-
biology and medicine. Isolated NCs of newborns may
be potentially used in cell therapy of neurodegenerative
diseases and injuries of the central nervous system
[8], which requires the development of effective ways
of storage for these cells. Usually the isolated cells
are being stored at low temperatures. However, keep-
ing in hypothermic conditions can complement or even
be an alternative to freezing.
In addition, the isolated NCs of newborns are used
in model studies of the effects of hypothermia on the
neural tissue cells. Hypothermia is a promising method
in reducing the inflammation and activating the re-
covery of neural tissues resulted from hypoxia or inju-
УДК 611.018.82.085.2: 615.014.41: 547.42
М.В. ШЕВЧЕНКО1, А.Н. СУКАЧ2*
Влияние гипотермического хранения изолированных нервных
клеток новорожденных крыс в средах различного состава
на их поведение в культуре
UDC 611.018.82.085.2: 615.014.41: 547.42
M.V. SHEVCHENKO1, A.N. SUKACH2*
Effect of Hypothermic Storage of Isolated Neural Cells of Newborn
Rats in Media of Different Composition on Its Behavior in Culture
Изучали влияние гипотермического хранения в сахарозо-содержащей и солевой средах в присутствии и без 10% сыворотки
на поведение в культуре изолированных нервных клеток новорожденных крыс. Показано, что гипотермическое хранение
нервных клеток в солевой среде DMEM/F12 и сахарозо-солевом растворе позволяет сохранять популяции дифференцированных
и стволовых/прогениторных клеток на протяжении 2-х суток. При этом гипотермическое хранение нервных клеток в течение
одних суток в среде DMEM/F12 с сывороткой и без нее, а также в сахарозо-солевом растворе без сыворотки не влияет на струк-
турно-функциональное состояние дифференцированных и стволовых/прогениторных нервных клеток новорожденных крыс.
Ключевые слова: гипотермическое хранение, нервные клетки, новорожденные крысы, культивирование, многоклеточные
агрегаты.
Вивчали вплив гіпотермічного зберігання в сахарозо-місткому та сольовому середовищах у присутності і без10% сироватки
на поведінку в культурі ізольованих нервових клітин новонароджених щурів. Показано, що гіпотермічне зберігання нервових
клітин у сольовому середовищі DMEM/F12 та сахарозо-сольовому розчині дозволяє зберігати популяції диференційованих
і стовбурових/прогеніторних клітин протягом 2-х діб. При цьому гіпотермічне зберігання нервових клітин упродовж однієї
доби в середовищі DMEM/F12 з сироваткою та без неї, а також в сахарозо-сольовому розчині без сироватки не впливає на
структурно-функціональний стан диференційованих і стовбурових/прогеніторних нервових клітин новонароджених щурів.
Ключові слова: гіпотермічне зберігання, нервові клітини, новонароджені щури, культивування, багатоклітинні агрегати.
The behavior of isolated neural cells of newborn rats in culture after hypothermic storage either in sucrose-based solution or saline
medium supplemented with 10% serum or serum-free was studied. Hypothermic storage in both saline medium DMEM/F12 and
sucrose-based solution was shown to be effective in preserving the populations of differentiated and stem/progenitor cells for 2 days.
It was demonstrated that one day of hypothermic storage in medium DMEM/F12 either supplemented with serum or serum-free, as
well as in serum-free sucrose-based solution did not effect the structural-functional state of differentiated and stem/progenitor neural
cells of newborn rats.
Key words: hypothermic storage, neural cells, newborn rats, culturing, multicellular aggregates.
* Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015; тел.: (+38
057) 373-41-35, факс: (+38 057) 373-30-84, электронная почта:
an_sukach@yahoo.com
* To whom correspondence should be addressed: 23,
Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 373
4135, fax: +380 57 373 3084, e-mail: an_sukach@yahoo.com
1G.S. Skovoroda Kharkov National Pedagogical University, Kharkov,
Ukraine
2Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the
National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
1Харьковский национальный педагогический университет им. Г.С.
Сковороды
2Институт проблем криобиологии и криомедицины
НАН Украины, г. Харьков
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
424 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
ния воспаления и активации восстановления нерв-
ных тканей, возникающих вследствие гипоксии и
травм [4, 11], в частности у новорожденных [6, 10],
головной мозг которых может подвергаться дейст-
вию гипоксии при рождении. Однако механизм
нейропротекторного действия гипотермии, а также
отдаленные последствия ее влияния на клетки
нервной ткани новорожденных остаются не изу-
ченными. Исследование влияния условий гипотер-
мии на поведение изолированных НК новорожден-
ных в культуре in vitro позволит выяснить механиз-
мы положительного влияния околонулевых темпе-
ратур на стволовые/прогениторные, нейрональные
и глиальные клетки, а также установить возмож-
ные побочные ее эффекты, которые могут при этом
возникать.
Цель работы – изучение влияния гипотерми-
ческого хранения в средах различного состава на
поведение в культуре in vitro изолированных нерв-
ных клеток мозга новорожденных крыс.
Материалы и методы
Нервные клетки выделяли из ткани головного
мозга новорожденных крыс. Для этого ткань из-
влекали, промывали и механически дезагреги-
ровали на единичные клетки в среде DMEM/F12
(«Sigma», США). Полученную суспензию фильтро-
вали через нейлоновый фильтр, после чего клетки
осаждали центрифугированием при 120 g в течение
3 мин. После удаления надосадочной жидкости к
клеткам добавляли среду для гипотермического
хранения (ГХ). Для ГХ использовали солевую сре-
ду DMEM/F12, обогащенную 0,6% глюкозы, 2 мM
глутамина, 3 мМ бикарбоната натрия и сахарозо-
солевой раствор (ССР), содержащий 250 мМ саха-
розы; 0,44 мМ КН2РО4; 5 мM КСl; 0,5 мM
Na2HPO4; 1,5 мM CaCl2; 1 мM MgSO4 [2] с и без
10% сыворотки крови крыс.
Для получения сыворотки крови взрослых бес-
породных белых крыс декапитировали под эфир-
ным наркозом. Собранную кровь помещали в холо-
дильник (8°С) на 15 мин для активации процессов
свертывания. Свернувшуюся кровь центрифугиро-
вали при 1500 g в течение 15 мин. Полученную
сыворотку стерилизовали фильтрованием через
фильтр с диаметром пор 0,22 мкм («Millipor»,
США), аликвотировали и хранили при температуре
–18°С.
Жизнеспособность клеток оценивали по окра-
шиванию витальным красителем трипановым си-
ним [9]. Количество клеток подсчитывали в камере
Горяева. Суспензию НК в концентрации 40–
50 млн/мл хранили в условиях бытового холодиль-
ника при температуре 8°С в течение 1, 2, 3 и 4-х
суток. Многоклеточные агрегаты перед определе-
нием жизнеспособности дезагрегировали на еди-
ничные клетки пипетированием.
ries [4, 11], particularly in newborns [6, 10], which brain
that may be exposed to hypoxia at birth. However, the
mechanism of neuroprotective effect of hypothermia,
as well as long-term consequences of its action on the
cells of the newborns nervous tissue are not clearly
understood. Investigation of the effects of hypothermic
conditions on behavior of isolated NCs of newborns
during in vitro culturing would clarify the mechanisms
of positive impact caused by near-zero temperatures
on stem/progenitor, neuronal and glial cells, as well as
to establish its possible side effects that may arise.
Our aim was to study the effect of hypothermic
storage in media of different composition on the
behavior of isolated neural cells of newborn rat brain
during in vitro culture.
Materials and methods
Neural cells were isolated from brain tissue of new-
born rats. The tissue was retrieved, washed and me-
chanically disaggregated into single cells in medium
DMEM/F12 (Sigma, USA). The resulting suspension
was passed through a nylon filter, thereafter the cells
were sedi-mented by centrifugation at 120g for 3 min.
After removal of the supernatant the cell sediment was
resuspen-ded in media for hypothermic storage (HS).
For perfor-ming HS we used a saline medium DMEM/
F12, supplemented with 0.6% glucose, 2 mM glutami-
ne, 3 mM sodium bicarbonate and sucrose-based
solution (SBS) containing 250 mM sucrose; 0.44 mM
KH2PO4; 5 mM KCl; 0.5 mM Na2HPO4; 1.5 mM
CaCl2; 1 mM MgSO4 [2], enriched with 10% serum
of rats or serum-free.
To obtain the serum the adult breedless white rats
were decapitated under ether anesthesia. The collected
blood was placed into a refrigerator (8°C) for 15 minu-
tes to activate the clotting process. Clotted blood was
centrifuged at 1500g for 15 min. The resulting serum
was sterilized by passing through a filter with a pore
diameter of 0.22 µm (Millipor, USA), aliquoted and
stored at –18°C.
Cell viability was assessed by staining with supra-
vital dye Trypan blue. [9] The number of cells was
counted in Goryaev’s chamber. The NC suspension in
a concentration of 40–50 million/ml was stored in a
refrigerator at 8°C for 1, 2, 3, and 4 days. To determine
the viability of cells in multicellular aggregates these
were disaggregated into single cells by pipetting.
Freshly isolated neural cells and those after HS were
cultured in a concentration of 2 million/ml in enriched
medium DMEM/F12 in the presence of 10% rat blood
serum. Culturing was carried-out in 24-well plates
(Corning, USA) in a CO2 incubator at 37°C, 5% CO2
and 95% air. Half of the culture medium volume was
replaced with fresh one every 3–4 days.
Microscopic analysis of cell cultures was performed
with the light inverted microscope (AmScope MT3000,
USA), morphometric analysis of aggregates and cell
425 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
Свежевыделенные НК, а также клетки после
ГХ культивировали в концентрации 2 млн/мл в
обогащенной среде DMEM/F12 в присутствии 10%
сыворотки крови крыс. Культивирование проводили
в 24-луночных планшетах («Corning», США) в СО2
инкубаторе при 37°С в атмосфере 5% CO2 и 95%
воздуха. Половину объема среды культивирования
заменяли на свежую каждые 3–4 суток.
Микроскопический анализ клеточных культур
проводили на световом инвертированном микро-
скопе («AmScope MT3000», США), морфометри-
ческий анализ агрегатов и колоний клеток – с
помощью программного обеспечения «AmScope»
(США). Динамику образования монослоя оцени-
вали по изменению размеров участков монослоя в
процессе культивирования.
Результаты статистически обрабатывали по
методу Стьюдента с использованием программы
MS Excel.
Эксперименты проводили в соответствии с «Об-
щими принципами экспериментов на животных»,
одобренными III Национальным конгрессом по
биоэтике (Киев, 2007) и согласованными с положе-
ниями «Европейской конвенции о защите позвоноч-
ных животных, используемых для эксперименталь-
ных и других научных целей» (Страсбург, 1986).
Результаты и обсуждение
Свежевыделенные НК представляли собой ге-
терогенную популяцию клеток, жизнеспособность
которых в среднем составляла 31%.
В течение первых суток гипотермического хра-
нения в ССР наблюдалось резкое увеличение пока-
зателей жизнеспособности НК независимо от при-
сутствия в среде сыворотки. При этом в присут-
ствии сыворотки жизнеспособность клеток увели-
чивалась в среднем до 71,2%, а при отсутствии –
до 57,0% (рис. 1). В процессе дальнейшего ГХ жиз-
неспособность клеток достоверно не изменялась.
В течение первых суток хранения НК в среде
DMEM/F12 незначительно увеличивалась их жиз-
неспособность, что не зависело от присутствия в
среде сыворотки (рис. 1). После 4-х суток хранения
наблюдалось увеличение жизнеспособности НК до
61,7% в присутствии сыворотки и 46,7% без нее.
Как видно из рис. 2, в процессе ГХ снижалась
концентрация НК во всех используемых средах,
которая после 4-х суток хранения составляла 30%
от исходной. В ССР наблюдали резкое уменьшение
количества клеток после первых суток ГХ и не-
значительное изменение их концентрации в про-
цессе дальнейшего хранения. На протяжении всего
срока хранения НК в среде DMEM/F12 их коли-
чество интенсивно снижалось.
Анализ изменения количества только жизнеспо-
собных клеток (клеток, которые не прокрашива-
лись витальным красителем трипановым синим)
colonies was carried-out with AmScope software
(USA). The dynamics of the monolayer formation was
evaluated by changes in the dimensions of the mono-
layer sites during culturing.
Results were statistically processed by the Student’s
method using MS Excel software.
Experiments were performed in accordance with
the General Principles of Experiments in Animals,
approved by the III National Congress on Bioethics
(Kiev, 2007) and consistent with the provisions of the
European Convention for the Protection of Vertebrate
Animals Used for Experimental and Other Scientific
Purposes (Strasbourg, 1986).
Results and discussion
Freshly isolated NCs represented a heterogeneous
population of cells, which viability was 31% in average.
During the first day of hypothermic storage in the
SBS there was a sharp increase in the viability index
of the NCs regardless of the presence of serum in the
medium. In the presence of serum, the cell viability in-
creased up to 71.2% in average, and in the serum-
free medium it reached 57.0% (Fig. 1). During fur-
ther HS the cell viability was not significantly changed.
During the first days of NC storage in medium
DMEM/F12 their viability index slightly increased and
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
Натив 1 2 3 4
* *
*
*
* * *
*
Время хранения, сутки
Storage duration, days
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь
кл
ет
ок
,%
C
el
l v
ia
bi
lit
y,
%
Рис. 1. Изменение жизнеспособности НК в процессе ги-
потермического хранения: – среда DMEM/F12 без
сыворотки; – среда DMEM/F12 с сывороткой; – ССР
без сыворотки; – ССР с сывороткой; * – отличия ста-
тистически достоверны по сравнению со свежевыделен-
ными НК, р < 0,05.
Fig. 1. The change in NC viability during hypothermic
storage: – serum-free DMEM/F12 medium; – DMEM/
F12 medium enriched with serum; – serum-free SBS; –
SBS with serum; * – statistically significant differences com-
paring to freshly isolated NCs, p < 0.05.
Before
storage
426 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
показал (рис. 3), что общее количество не прокра-
шенных клеток в процессе ГХ уменьшается. Так,
ГХ на протяжении 1 суток приводит к уменьшению
количества НК, которые не прокрашиваются три-
пановым синим, в 1,2 раза в среде DMEM/F12 и в
1,2–1,3 раза в ССР. Хранение в течение 2-х суток
характеризуется уменьшением количества не про-
крашенных клеток в 1,3–1,4 раза в среде DMEM/
F12 и в 1,3–1,6 раза в ССР. При ГХ на протяжении
3-х суток уменьшается количество не прокрашен-
ных НК в 1,6–1,7 раза в DMEM/F12 и в 1,5 раза –
в ССР.
При этом, как видно из рис. 3, присутствие сы-
воротки оказывает небольшое положительное
влияние на сохранение количества не прокрашен-
ных клеток в процессе их хранения как в DMEM/
F12, так и в ССР. Хранение НК на протяжении
4-х суток в DMEM/F12 и ССР, содержащих сыво-
ротку, приводило к снижению количества не про-
крашенных клеток в 1,7 и 1,6 раза соответственно.
Отсутствие сыворотки в средах характеризова-
лось уменьшением количества не прокрашенных
it was independent on the presence of serum in the
medium (Fig. 1). After 4 days of storage there was an
increase of the NC viability index up to 61.7% in the
presence of serum and 46.7% in serum-free medium.
As can be seen from Fig. 2, the NC concentration
during HS decreased in all used media and after 4
days of storage made 30% of the initial value. After
storage in SBS we observed a sharp decrease in the
number of cells after the first day of HS and insigni-
ficant changes in their concentration during further
storage. Through the whole period of storage of NCs
in medium DMEM/F12 their number rapidly declined.
Analysis of changes only in the number of viable
cells (cells not stained with vital dye Trypan blue)
showed (Fig. 3), that the total number of non-stained
cells during HS decreased. More specifically, the HS
during 1 day led to a decrease in number of NC non-
stained by Trypan blue for 1.2 times in DMEM/F12
medium and 1.2–1.3 times in the SBS. Storage during
2 days was characterized by a decreasing number of
non-stained cells for 1.3–1.4 times in the medium
DMEM/F12, and 1.3–1.6 times in SBS. Storage during
3 days resulted in reduction of NC number by 1.6–1.7
times in DMEM/F12 and by 1.5 times in the SBS.
Moreover, as it can be seen from Fig. 3, the pre-
sence of serum has a slight positive effect on the
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Натив 1 2 3 4
*
#
#
*
#
Рис. 2. Изменение концентрации НК в процессе гипо-
термического хранения: – среда DMEM/F12 без
сыворотки; – среда DMEM/F12 с сывороткой; – ССР
без сыворотки; – ССР с сывороткой;* – отличия ста-
тистически достоверны по сравнению со средой DMEM/
F12 без сыворотки, р < 0,05; # – отличия статистически
достоверны по сравнению со средой DMEM/F12 с сыво-
роткой, р < 0,05.
Fig. 2. Change in NC concentration during hypothermic
storage: – serum-free DMEM/F12 medium; – DMEM/
F12 medium enriched with serum; – serum-free SBS; –
SBS with serum; * – statistically significant differences
comparing with data for serum-free DMEM/F12 medium,
p < 0.05; # – statistically significant differences comparing
with the the data for medium DMEM/F12 enriched with
serum, p < 0.05.
Время хранения, сутки
Storage duration, days
Ко
нц
ен
тр
ац
ия
к
ле
то
к,
%
C
el
l c
on
ce
nt
ra
tio
n,
%
Before
storage
10
15
20
25
30
35
Натив 1 2 3 4
Время хранения, сутки
Storage duration, days
Н
е
пр
ок
ра
ш
ен
ны
е/
п
ос
ея
нн
ы
е
кл
ет
ки
,
%
N
on
-s
ta
in
ed
/s
ee
de
d
ce
lls
,
%
Before
storage
Рис. 3. Влияние ГХ в DMEM/F12 и ССР с сывороткой и
без нее на количество нервных клеток, которые не
прокрашивались витальным красителем трипановым
синим: – среда DMEM/F12 без сыворотки; – среда
DMEM/F12 с сывороткой; – ССР без сыворотки; –
ССР с сывороткой.
Fig. 3. Effect of HS in DMEM/F12 and SBS media enriched
with serum or serum-free on number of neural cells non
stained with Trypan blue: – serum-free DMEM/F12
medium; – DMEM/F12 medium enriched with serum;
– serum-free SBS; – SBS with serum.
427 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
клеток в 2,6 раза при хранении в DMEM/F12 и в 2
раза – в ССР.
Таким образом, увеличение жизнеспособности
НК в процессе ГХ происходит за счет интенсивной
гибели клеток, очевидно летально поврежденных
при их выделении. Причем процесс гибели наибо-
лее интенсивен в первые сутки хранения и не
зависит от используемой среды и присутствия в
ней сыворотки. Количество клеток, которые не про-
крашиваются трипановым синим, также умень-
шается в течение ГХ. Это достаточно медленный
и равномерный процесс, который практически не
зависит от среды хранения. На протяжении 3 суток
за сутки хранения количество не прокрашенных
клеток в среднем уменьшается на 17%. При этом
присутствие сыворотки оказывает незначительное
положительное влияние на сохранность клеток.
Присутствие сыворотки в среде при ГХ клеток на
протяжении 4 суток как в DMEM/F12, так и в ССР
оказывает выраженное положительное влияние на
способность клеток исключать трипановый синий.
Поскольку определение жизнеспособности НК
по трипановому тесту в полной мере не отражает
их структурно-функциональное состояние, мы про-
водили культивирование клеток.
Свежевыделенные НК уже через несколько
часов культивирования формировали многоклеточ-
ные агрегаты. В процессе дальнейшего культивиро-
вания происходило постепенное уплотнение упа-
ковки клеток в агрегатах. Некоторые агрегаты уве-
личивались в размере. На 2-е сутки они начали
активно прикрепляться к подложке. На 4-е сутки
культивирования к подложке прикреплялись прак-
тически все агрегаты (таблица). После прикреп-
ления агрегатов клетки, входящие в их состав,
формировали отростки, мигрировали, распласты-
вались и формировали участки монослоя (рис. 4,
А). На 4–6-е сутки культивирования на монослое,
состоящем из клеток глии, появлялись β-тубулин
III – положительные клетки, которые имели мор-
фологию нейробластов (таблица).
Поведение в культуре НК, подвергнутых ГХ на
протяжении одних суток в среде DMEM/F12 с сы-
вороткой и без нее, а также в ССР без сыворотки
незначительно отличалось от свежевыделенных
клеток (таблица, рис. 4, В). Начало прикрепления
агрегатов наблюдалось на 3-и сутки культивиро-
вания, а прикрепление всех агрегатов – на 6-е сут-
ки. При этом в культурах клеток, подвергнутых ГХ
в среде DMEM/F12 с сывороткой и без нее, а также
в ССР без сыворотки, скорость формирования мо-
нослоя была выше по сравнению с контролем (таб-
лица). На 4–5-е сутки культивирования на моно-
слое, сформированном этими клетками, как и в
контроле, появлялись β-тубулин III – положитель-
ные клетки с морфологией нейробластов.
preserving the number of non-stained cells during
storage in both DMEM/F12 and SBS. Storage of NCs
for 4 days in DMEM/F12 and SBS supplemented with
serum led to a drop in the number of non-stained cells
in 1.7 and 1.6 times, respectively. The absence of
serum in media was accompanied by reduction in the
number of non-stained cells by 2.6 times during storage
in DMEM/F12 and by 2 times in case of SBS.
Thus, the increase of NC viability index during HS
is caused by intensive death of cells, apparently lethally
damaged during isolation procedure. Moreover, the
process of death is mostly pronounced during the first
day of storage and does not depend on the type of
medium used as well as the presence of serum in it.
The number of cells non-stained by Trypan blue
decreases during HS too. This is fairly slow and steady
process that is virtually independent on the type of
storage medium. During 3 days of storage the average
daily decrease in number of non-stained cells was 17%.
Moreover, the presence of serum had little positive
impact on the cell preservation. The presence of serum
in medium during 4 days of HS both in DMEM/F12
and SBS had a strong positive effect on the ability of
cells to exclude Trypan blue.
Since the assessment of NCs viability by Trypan
blue test does not fully reflect their structural and
functional state, we performed the cell culturing.
Freshly isolated NC after few hours of culture
formed multicellular aggregates. Cell packing in aggre-
gates gradually became more dense during further
culturing. Some aggregates increased their dimensions.
On the 2nd day they began to adhere actively to the
substrate. On the 4th day of culture almost all aggre-
gates were attached to the substrate (Table). After
the aggregates attached, their cells formed processes,
migrated and formed the monolayer areas (Fig. 4A).
On the 4–6th day of culture on the monolayer formed
by glial cells appeared β-tubulin III positive cells that
had the neuroblast morphology (Table).
Behavior in culture of NCs subjected to one day of
HS in DMEM/F12 medium both enriched with serum
and serum-free, as well as in serum-free SBS, had no
significant differences comparing to freshly isolated
cells (Table, Fig. 4B). Aggregates started to attach on
the 3rd day of culture, and the attachment of all ag-
gregates was observed on the 6th day. Thereat the
monolayer formation rate was higher in the cell cultures
exposed to the HS in DMEM/F12 medium with or
without serum, and in serum-free SBS if compared
with the control (Table). Appearance of β-tubulin III
positive cells with the neuroblast morphology on the
monolayer formed by these cells was observed on the
4–5th day of culture like in the control culture.
In cultures of NCs subjected to HS in SBS enriched
with serum we observed the formation of small loose
aggregates. Their structure did not change during
,ХГямерВ
иктус
,noitarudSH
syad
яиненархадерС
muidemegarotS
иктус,KНяинаворивитьлукиидатС
syad,segatserutlucCN
олачаН
яинелперкирп
вотагерга
fotratS
setagergga
tnemhcatta
еинелперкирП
вотагергахесв
llafotnemhcattA
setagergga
еинаворимроФ
воктсачу
яолсоном
setisreyalonoM
noitamrof
еинелвяоП
вотсалборйен
foecnaraeppA
atsalboruen
еинаворимроФ
КНйинолок
seinolocCN
noitamrof
0
ьлортноK
)иктелкеындохси(
lleclaitini(lortnoC
)noisnepsus
2-1 4 6-3 6-4 31-9
1
21F/MEMD 3 6 5-4 5-4 51-9
+21F/MEMD
mures/акторовыс 3 6 5-4 5-4 31-9
РСС
SBS 3 6 5-4 5-4 51-9
акторовыc+РСС
mures+SBS - - - - -
2
21F/MEMD - - 7 - -
+21F/MEMD
mures/акторовыс 3 7 5 5 01-9
РСС
SBS 3 01 5 5 21
акторовыc+РСС
mures+SBS - - - - -
3 ыдерсесВ
aidemllA - - - - -
4 ыдерсесВ
aidemllA - - - - -
428 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
В культурах НК, которые подвергались ГХ в
ССР с сывороткой, формировались мелкие и рыхлые
агрегаты. В процессе культивирования их структу-
ра не изменялась и к подложке они не прикрепля-
лись. При этом наблюдали прикрепление и рас-
пластывание единичных клеток, характеризующих-
ся глиальной морфологией, однако в процессе даль-
нейшего культивирования их количество не увели-
чивалось и формирования монослоя не происходило.
Нервные клетки после хранения в гипотерми-
ческих условиях на протяжении 2-х суток в среде
DMEM/F12 с сывороткой и в ССР без нее, как и
свежевыделенные, формировали агрегаты в пер-
вые сутки культивирования. Но к подложке они при-
креплялись значительно позже по сравнению с аг-
регатами свежевыделенных НК (таблица). При
этом около 25% агрегатов НК, которые хранились
в ССР без сыворотки, к подложке не прикрепля-
лись и в дальнейшем клетки этих агрегатов поги-
бали. После прикрепления клетки агрегатов мигри-
ровали и формировали монослой, однако скорость
его образования была ниже по сравнению с
контролем (таблица). Так, в культурах НК, которые
culturing and they had not attached to substrate.
Moreover, several cells attached and spreaded, these
were of glial morphology, but during further culture
their number did not increase and no monolayer for-
mation occurred.
After the storage in hypothermic conditions during
2 days in DMEM/F12 medium with and without serum
and in serum-free SBS the neural cells formed aggre-
gates in the first day of cultivation like freshly isolated
did. But they attached to the substrate much later than
the freshly isolated NCs (Table). Moreover, about 25%
of NC aggregates, stored in the serum-free SBS, were
not attached to the substrate and later the cells of these
aggregates died. After the attachment the cells of
aggregates migrated and formed monolayer, but the
rate of its formation was lower comparing to the control
(Table). Namely in cultures of NCs, which were kept
in DMEM/F12 medium enriched with serum and in
serum-free SBS, on the 6th day of culture the mono-
layer occupied 45 and 30% of the well surface, respec-
tively. After 12 days of culture the monolayer area if
culture of NCs, which were stored in DMEM/F12 me-
dium enriched with serum, increased up to 60%, and
Влияние ГХ в различных средах на стадии культивирования агрегатов НК
Effect of HS in various media on the timings in NC aggregates culture
429 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
хранились в среде DMEM/F12 в присутствии сы-
воротки и в ССР без нее, на 6-е сутки культивиро-
вания монослой занимал 45 и 30% площади лунки
соответственно. Через 12 суток культивирования
площадь монослоя в культуре НК, которые храни-
лись в среде DMEM/F12 в присутствии сыворотки,
увеличивалась до 60%, а в ССР без сыворотки –
до 50%. В процессе дальнейшего культивирования
площадь монослоя не увеличивалась. В культуре
НК, которые хранились в среде DMEM/F12 без
добавления сыворотки, формировались небольшие
участки монослоя, состоящие из клеток глии. На
7-е сутки культивирования этот монослой занимал
около 20% поверхности лунки и при дальнейшем
культивировании его площадь не увеличивалась.
На 4–6-е сутки культивирования клеток, которые
хранились в среде DMEM/F12 с сывороткой и в
ССР без сыворотки, на глиальном монослое появ-
лялись β-тубулин III – положительные клетки с
морфологией нейробластов (таблица).
Нервные клетки, которые хранились на протя-
жении 2-х суток в среде DMEM/F12 без сыворотки
и в ССР с сывороткой, в процессе культивирования
формировали мелкие рыхлые агрегаты, которые к
подложке не прикреплялись и в процессе куль-
тивирования погибали. Прикрепившиеся к подлож-
ке единичные клетки в течение нескольких суток
культивирования погибали.
Как было показано ранее [1] на 9–15-е сутки
культивирования на монослое глии, образованном
свежевыделенными НК, появлялись колонии не-
дифференцированных β-тубулин III – положитель-
ных клеток, большинство которых являлись нестин-
и виментин-положительными.
Время появления колоний в культурах НК, под-
вергавшихся ГХ в течение 1 и 2-х суток, не отли-
in serum-free SBS rised up to 50%. During further
culturing the monolayer area did not increase. In the
culture of NCs, which were kept in serum-free DMEM/
F12 medium, only small monolayer sites consisted of
glial cells were formed. On the 7th day of culture this
monolayer occupied about 20% of the well’s surface
and further culturing did not increase its area. On the
4–6th day of culturing the cells, stored in serum-enriched
DMEM/F12 medium and serum-free SBS, β-tubulin
III positive cells of neuroblast morphology appeared
on the glial monolayer (Table).
Neural cells that have been stored for 2 days in
serum-free DMEM/F12 medium and in serum-enriched
SBS formed small loose aggregates during culturing
that had not attached to the substrate and died during
further culturing. Several single cells attached to the
substrate died after few days of culturing.
As it was previously shown [1] on the 9–15th day
of culturing the colonies of undifferentiated β-tubulin
III positive cells appeared on a glia monolayer formed
by freshly isolated NCs, and most of the appeared cells
were nestin- and vimentin-positive.
The timepoint for appearance of colonies in cultures
of NCs subjected to HS for 1 and 2 days, did not differ
from the control (Table). Moreover, the colonies were
formed by NCs, stored during one day in serum-enriched
and serum-free DMEM/F12 medium, as well as in se-
rum-free SBS. After 2 days of HS the colonies were
formed only by NCs, kept in serum-enriched DMEM/
F12 medium and in serum-free SBS. During culture the
number and size of the colonies increased. As can be
seen from Fig. 5, the size of colonies formed by cells
stored during one day in serum-enriched DMEM/F12
medium was bigger than in the control. Size of colonies
of cells that were kept in serum-free DMEM/F12
medium and SBS did not differ from the control (Fig. 5).
Рис. 4. Прикрепление агрегатов, сформированных свежевыделенными НК (А) и после ГХ на протяжении 2-х суток
в среде DMEM/F12 в присутствии сыворотки (B). Масштаб: 100 мкм.
Fig. 4. Attaching aggregates formed freshly isolated NC (A) and after HS for 2 days in DMEM/F12 medium in the presence
of serum (B). Scale: 100 µm.
430 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
чалось от контроля (таблица). При этом колонии
были сформированы НК, которые хранились на
протяжении первых суток в среде DMEM/F12 в
присутствии сыворотки и без нее, и в ССР – без
сыворотки. После 2-х суток ГХ колонии формиро-
вались культурами НК, которые хранили в среде
DMEM/F12 в присутствии сыворотки и в ССР без
нее. В процессе культивирования количество и
размер колоний увеличивались. Как видно из рис. 5,
размер колоний, образованных клетками, которые
хранились в течение первых суток в среде DMEM/
F12 с сывороткой, был больше по сравнению с конт-
ролем. Размер колоний клеток, хранившихся в сре-
де DMEM/F12 и в ССР без добавления сыворотки,
не отличался от контроля (рис. 5).
В культурах клеток, которые подвергались ГХ
в течение 2-х суток, количество колоний увеличи-
валось незначительно, при этом их площадь была
меньше по сравнению с контролем (рис. 6).
При культивировании НК, которые находились
в гипотермических условиях в течение 3 и 4-х суток
независимо от среды хранения, образовывались
мелкие рыхлые агрегаты, которые к подложке не
прикреплялись, а их клетки в процессе культивиро-
вания погибали. Единичные клетки прикреплялись,
но не распластывались.
Таким образом, проведенные исследования
показали, что максимальным временем ГХ, в тече-
ние которого НК, изолированные из ткани мозга
новорожденных крыс, сохраняют свои свойства на
уровне свежевыделенных, является 2-е суток:
дифференцированные НК прикрепляются и рас-
пластываются, а стволовые/прогениторные НК
пролиферируют и дифференцируются. При этом
оптимальной средой хранения является DMEM/
F12 с сывороткой, что можно объяснить сходством
ее состава с внутриклеточной средой организма.
Потерю способности НК, подвергнутых ГХ в
ССР с сывороткой, формировать агрегаты, клетки
которых пролиферируют и прикрепляются к под-
ложке в условиях in vitro, можно объяснить соче-
танным действием на плазматическую мембрану
сахарозы и белков сыворотки. Известно, что в са-
харозном микроокружении увеличивается отрица-
тельный поверхностный заряд плазматической
мембраны [3], что повышает степень связывания
белков с мембраной. При этом адсорбция изоли-
рованных белков вызывает локальные перемеще-
ния липидов в мембране, их концентрирование в
местах связывания белков и формирование доме-
нов [5], что, в свою очередь, приводит к нестабиль-
ности плазматической мембраны и может быть
причиной латерального фазового разделения мем-
браны [7], в результате которого нарушаются
барьерные свойства мембран и клетки погибают.
Кроме того, изменение локализации липидов в
In cell cultures, which were subjected to HS for 2
days, the number of colonies increased insignificantly,
and their area was smaller than the control (Fig. 6).
When culturing NCs kept in hypothermic conditions
for 3 or 4 days, regardless of the storage medium, we
observed the formation of small loose aggregates that
were not attached to the substrate, and their cells died
during culture. Several single cells attached, but did
not spread.
Thus, our investigations have shown that the ma-
ximum time for HS, which allow to preserve the
peculiarities of NCs isolated from brain tissue of new-
born rats at the level of freshly isolated ones, is 2 days:
differentiated NCs are attached and spreaded, and
stem/progenitor NCs proliferate and differentiate. The
optimal storage medium for this case is DMEM/F12
enriched with serum, that can be attributed to the
similarity of its content and intracellular environment
of an organism.
The loss of ability of NCs subjected to HS in serum-
enriched SBS to form aggregates, which cells proli-
ferate and attach to the substrate in vitro, can be
Рис. 5. Размер колоний, образованных в процессе культи-
вирования НК после первых суток ГХ: – контроль;
– среда DMEM/F12 без сыворотки; – среда DMEM/
F12 с сывороткой; – ССР без сыворотки; * – отличия
статистически достоверны по сравнению с контролем,
р < 0,05; # – отличия статистически достоверны по срав-
нению с 33-ми сутками культивирования, р < 0,05.
Fig. 5. The size of the colonies formed during culturing of
NC after one day of HS: – control; – serum-free DMEM/
F12 medium; – DMEM/F12 medium enriched with serum;
– serum-free SBS; * – statistically significant differences
comparing with data for control, p < 0.05; # – statistically
significant differences comparing with the the data for the
33rd day of culture, p < 0.05.
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
2 4 6 10 13 17 24 33
*#
*
#
#
Время культивирования НК после начала
образования колоний, сутки
Time period after start of colony formation, days
Н
е
пр
ок
ра
ш
ен
ны
е/
п
ос
ея
нн
ы
е
кл
ет
ки
,
%
N
on
-s
ta
in
ed
/s
ee
de
d
ce
lls
,
%
431 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
мембране может приводить к трансформации ее
архитектуры и затруднять связывание регулятор-
ных белков с рецепторами, а также препятствовать
прикреплению клеток к подложке.
Проведенные исследования также показали,
что ГХ на протяжении одних суток, несмотря на
снижение количества не прокрашенных клеток, не
приводит к существенному ухудшению поведения
НК в процессе их культивирования. При этом лишь
замедляется прикрепление агрегатов, сформи-
рованных этими клетками. Это можно объяснить,
с одной стороны, тем, что жизнеспособность НК,
определенная по трипановому тесту, лишь частич-
но коррелирует с их функциональной активностью,
а с другой – развитием в процессе ГХ нелетальных
повреждений клеток, восстановление которых тре-
бует определенного времени в процессе их культи-
вирования. При хранении НК на протяжении 2-х
суток количество нелетальных повреждений повы-
шается, что проявляется в увеличении времени
прикрепления агрегатов к подложке и снижении
скорости формирования монослоя. Появление ней-
робластов и колоний стволовых/прогениторных
клеток в те же сроки, что и у контрольных клеток,
указывает на их сохранность при хранении в гипо-
термических условиях на протяжении 2-х суток.
Гипотермическое хранение НК новорожденных
крыс в исследованных средах на протяжении 3-х
и более суток приводит к их гибели: клетки утрачи-
вают способность к формированию агрегатов, при-
креплению и распластыванию.
Выводы
Гипотермическое хранение нервных клеток в
среде DMEM/F12 и ССР на протяжении 2-х суток
позволяет сохранять популяции дифференцирован-
explained by the combined effect of sucrose and serum
proteins on the plasma membrane. The negative sur-
face charge of the plasma membrane is known to
increase in sucrose microenvironment [3], that in its
turn increases the binding of proteins to the membrane.
Moreover the adsorption of isolated proteins causes
local transposition of lipids in the membrane, their
concentrating in protein binding sites and formation of
domains [5], that subsequently leads to instability of
plasma membrane and can cause lateral phase sepa-
ration of the membrane [7] with following disturbance
of membrane barrier properties and cell death. In
addition, the changes in location of lipids in the mem-
brane can lead to the structural transformations,
obstacles in the binding of regulatory proteins and
receptors and restricted attachment of cells to the
substrate.
The conducted studies also showed that the HS
during one day did not lead to significant changes in
behavior of NCs during their culturing despite the
decrease in the number of non-stained cells. Herewith
the attachment of aggregates formed by these cells
was slower. This can be explained, on the one hand,
by the fact that the viability of NCs, assessed by Trypan
blue test, correlates only partially with their functional
activity, and on the other, that HS is accompanied with
development of non-lethal cell damages, which re-
paration requires some time during their culturing.
Storage of NCs during 2 days led to the increase in
number of non-lethal damages, and this fact was
manifested in the increasing of time period for aggre-
gates’ attaching to the substrate and reduced rate of
monolayer formation. The appearance of neuroblasts
and colonies of stem/progenitor cells in the same terms
like for the control cells indicates their survival during
storage in hypothermic conditions for 2 days.
Рис. 6. Размер колоний, образованных в процессе куль-
тивирования НК после 2-х суток ГХ: – контроль; –
среда DMEM/F12 с сывороткой; – ССР без сыворотки;
* – отличия статистически достоверны по сравнению с
контролем, р < 0,05.
Fig. 6. The size of the colonies formed during culturing of
NC after one day of HS: – control; – DMEM/F12
medium enriched with serum; – serum-free SBS; * – statis-
tically significant differences comparing with data for the
control, p < 0.05.
0
200
400
600
800
1000
1200
1400
1600
1800
1 5 8 13
*
*
*
*
*
*
*
Время культивирования НК после начала
образования колоний, сутки
Time period after start of colony formation, days
Н
е
пр
ок
ра
ш
ен
ны
е/
п
ос
ея
нн
ы
е
кл
ет
ки
,
%
N
on
-s
ta
in
ed
/s
ee
de
d
ce
lls
,
%
432 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
ных и стволовых/прогениторных нервных клеток
новорожденных крыс.
Присутствие сыворотки в среде DMEM/F12
улучшает, а в ССР ухудшает жизнеспособность НК
в процессе ГХ.
Hypothermic storage of NCs of newborn rats in
the studied media during 3 days and more results in
their death: cells lose their ability to form aggregates,
to attach and spread.
Conclusion
Hypothermic storage of neural cells in the medium
DMEM/F12 and SBS for 2 days allows to preserve
the populations of differentiated and stem/progenitor
neural cells of newborn rats.
The presence of serum in the medium DMEM/F12
improves the viability of NCs during HS and in the
case of SBS vice versa deteriorates it.
Литература
1. Сукач А.Н., Ляшенко Т.Д. Роль формирования агрегатов в
процессе выживания изолированных нервных клеток
новорожденных крыс после криоконсервирования // Проб-
лемы криобиологии. – 2011. – Т. 21, №4. – С. 395–405.
2. Патент № 16946 України, МПК 5 С 12 N 5/00. Розчин для
гіпотермічного зберігання ізольованих гепатоцитів /
Л.П. Кравченко, А.М. Андрієнко, О.А. Семенченко, А.М. Бі-
лоус. – № 4684421/SU; Заявлено 20.02.89; Опубл. 29.08.97,
Бюл. №4.
3. Bernhardt I., Hall A.C., Ellory J.C. Effects of low ionic strength
media on passive human red cell monovalent cation transport //
J. Physiol. – 1991. – Vol. 434. – P. 489–506.
4. Deng H., Han H. S., Cheng D. et al. Mild hypothermia inhibits
inflammation after experimental stroke and brain inflammation //
Stroke. – 2003. – Vol. 34, №10. – P. 2495–2501.
5. Hinderliter A., Biltonen R.L., Almeida P.F. Lipid modulation of
protein-induced membrane domains as a mechanism for cont-
rolling signal transduction // Biochemistry. – 2004. – Vol. 43,
№22. – P. 7102–7110.
6. Kanagawa T., Fukuda H., Tsubouchi H. et al. A decrease of
cell proliferation by hypothermia in the hippocampus of the
neonatal rat // Brain Res. – 2006. – Vol. 1111, №1. – P. 36–40.
7. Mbamala E. C., Ben-Shaul A., May S. Domain formation induced
by the adsorption of charged proteins on mixed lipid membra-
nes // Biophysical Journal. – 2005. – Vol. 88, №3. – P. 1702–
1714.
8. Palmer T.D., Schwartz P.H., Taupin P. et al. Cell culture. Pro-
genitor cells from human brain after death // Nature. – 2001. –
Vol. 411, №3. – P. 42–43.
9. Seglen P.O. Preparation of isolated rat liver cells // Meth. Cell
Biol. – 1976. – Vol. 13, №1. – P. 29–83.
10.Xiong M., Cheng G.Q., Ma S.M. et al. Post-ischemic hypo-
thermia promotes generation of neural cells and reduces apop-
tosis by Bcl-2 in the striatum of neonatal rat brain // Neurochem.
Int. – 2011. – Vol. 58, №6. – P. 625–633.
11.Zhang R.L., Zhang Z.G., Zhang L., Chopp M. Proliferation and
differentiation of progenitor cells in the cortex and the sub-
ventricular zone in the adult rat after focal cerebral ischemia //
Neuroscience. – 2001. – Vol. 105, №1. – P. 33–41.
Поступила 25.06.2012
References
1. Sukach A.N., Lyashenko T.D. The effect of DMSO of different
concentrations and freeze-thawing on newborn rat neural
cell survival // Problems of Cryobiology. – 2011. – Vol. 21,
N4. – P. 395–405.
2. Patent of Ukraine Nr. 16946, IPC 5 С 12 N 5/00. Solution for
hypothermic storage of isolated hepatocytes / L.P. Kravchen-
ko, A.M. Andrienko, O.A. Semenchenko, A.M. Belous. – Nr.
4684421/SU; Filed 20.02.89; Publ. 29.08.97, Bul. Nr. 4.
3. Bernhardt I., Hall A.C., Ellory J.C. Effects of low ionic strength
media on passive human red cell monovalent cation transport //
J. Physiol. – 1991. – Vol. 434. – P. 489–506.
4. Deng H., Han H. S., Cheng D. et al. Mild hypothermia inhibits
inflammation after experimental stroke and brain inflammation //
Stroke. – 2003. – Vol. 34, N10. – P. 2495–2501.
5. Hinderliter A., Biltonen R.L., Almeida P.F. Lipid modulation of
protein-induced membrane domains as a mechanism for cont-
rolling signal transduction // Biochemistry. – 2004. – Vol. 43,
N22. – P. 7102–7110.
6. Kanagawa T., Fukuda H., Tsubouchi H. et al. A decrease of
cell proliferation by hypothermia in the hippocampus of the
neonatal rat // Brain Res. – 2006. – Vol. 1111, N1. – P. 36–40.
7. Mbamala E. C., Ben-Shaul A., May S. Domain formation induced
by the adsorption of charged proteins on mixed lipid membra-
nes // Biophysical Journal. – 2005. – Vol. 88, N3. – P. 1702–
1714.
8. Palmer T.D., Schwartz P.H., Taupin P. et al. Cell culture. Pro-
genitor cells from human brain after death // Nature. – 2001. –
Vol. 411, N3. – P. 42–43.
9. Seglen P.O. Preparation of isolated rat liver cells // Meth. Cell
Biol. – 1976. – Vol. 13, N1. – P. 29–83.
10.Xiong M., Cheng G.Q., Ma S.M. et al. Post-ischemic hypo-
thermia promotes generation of neural cells and reduces apop-
tosis by Bcl-2 in the striatum of neonatal rat brain // Neurochem.
Int. – 2011. – Vol. 58, N6. – P. 625–633.
11.Zhang R.L., Zhang Z.G., Zhang L., Chopp M. Proliferation and
differentiation of progenitor cells in the cortex and the sub-
ventricular zone in the adult rat after focal cerebral ischemia //
Neuroscience. – 2001. – Vol. 105, N1. – P. 33–41.
Accepted 25.06.2012
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68681 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T17:31:28Z |
| publishDate | 2012 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Шевченко, М.В. Сукач, А.Н. 2014-09-27T07:34:51Z 2014-09-27T07:34:51Z 2012 Влияние гипотермического хранения изолированных нервных клеток новорожденных крыс в средах различного состава на их поведение в культуре / М.В. Шевченко, А.Н. Сукач // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 4. — С. 423-432. — Бібліогр.: 11 назв. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68681 611.018.82.085.2: 615.014.41: 547.42 Изучено влияние гипотермического хранения в сахарозосодержащей и солевой средах в присутствии и без 10 % сыворотки на поведение в культуре изолированных нервных клеток новорожденных крыс. Показано, что гипотермическое хранение нервных клеток в солевой среде DMEM/F12 и сахарозо-солевом растворе позволяет сохранять популяции дифференцированных и стволовых/прогениторных клеток на протяжении 2-х суток. При этом гипотермическое хранение нервных клеток в течение одних суток в среде DMEM/F12 с сывороткой и без нее, а также в сахарозо-солевом растворе без сыворотки не влияет на структурно-функциональное состояние дифференцированных и стволовых/прогениторных нервных клеток новорожденных крыс. Вивчали вплив гіпотермічного зберігання в сахарозо-місткому та сольовому середовищах у присутності і без10% сироватки на поведінку в культурі ізольованих нервових клітин новонароджених щурів. Показано, що гіпотермічне зберігання нервових клітин у сольовому середовищі DMEM/F12 та сахарозо-сольовому розчині дозволяє зберігати популяції диференційованих і стовбурових/прогеніторних клітин протягом 2-х діб. При цьому гіпотермічне зберігання нервових клітин упродовж однієї доби в середовищі DMEM/F12 з сироваткою та без неї, а також в сахарозо-сольовому розчині без сироватки не впливає на структурно-функціональний стан диференційованих і стовбурових/прогеніторних нервових клітин новонароджених щурів. The behavior of isolated neural cells of newborn rats in culture after hypothermic storage either in sucrose-based solution or saline medium supplemented with 10% serum or serum-free was studied. Hypothermic storage in both saline medium DMEM/F12 and sucrose-based solution was shown to be effective in preserving the populations of differentiated and stem/progenitor cells for 2 days. t was demonstrated that one day of hypothermic storage in medium DMEM/F12 either supplemented with serum or serum-free, as well as in serum-free sucrose-based solution did not effect the structural-functional state of differentiated and stem/progenitor neural cells of newborn rats ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии Теоретическая и экспериментальная криобиология Влияние гипотермического хранения изолированных нервных клеток новорожденных крыс в средах различного состава на их поведение в культуре Effect of Hypothermic Storage of Isolated Neural Cells of Newborn Rats in Media of Different Composition on Its Behavior in Culture Article published earlier |
| spellingShingle | Влияние гипотермического хранения изолированных нервных клеток новорожденных крыс в средах различного состава на их поведение в культуре Шевченко, М.В. Сукач, А.Н. Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| title | Влияние гипотермического хранения изолированных нервных клеток новорожденных крыс в средах различного состава на их поведение в культуре |
| title_alt | Effect of Hypothermic Storage of Isolated Neural Cells of Newborn Rats in Media of Different Composition on Its Behavior in Culture |
| title_full | Влияние гипотермического хранения изолированных нервных клеток новорожденных крыс в средах различного состава на их поведение в культуре |
| title_fullStr | Влияние гипотермического хранения изолированных нервных клеток новорожденных крыс в средах различного состава на их поведение в культуре |
| title_full_unstemmed | Влияние гипотермического хранения изолированных нервных клеток новорожденных крыс в средах различного состава на их поведение в культуре |
| title_short | Влияние гипотермического хранения изолированных нервных клеток новорожденных крыс в средах различного состава на их поведение в культуре |
| title_sort | влияние гипотермического хранения изолированных нервных клеток новорожденных крыс в средах различного состава на их поведение в культуре |
| topic | Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| topic_facet | Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68681 |
| work_keys_str_mv | AT ševčenkomv vliâniegipotermičeskogohraneniâizolirovannyhnervnyhkletoknovoroždennyhkrysvsredahrazličnogosostavanaihpovedenievkulʹture AT sukačan vliâniegipotermičeskogohraneniâizolirovannyhnervnyhkletoknovoroždennyhkrysvsredahrazličnogosostavanaihpovedenievkulʹture AT ševčenkomv effectofhypothermicstorageofisolatedneuralcellsofnewbornratsinmediaofdifferentcompositiononitsbehaviorinculture AT sukačan effectofhypothermicstorageofisolatedneuralcellsofnewbornratsinmediaofdifferentcompositiononitsbehaviorinculture |