Ультраструктура ядросодержащих клеток донорской и кордовой крови на различных этапах криоконсервирования. Сообщение 1. Изменения на этапе выделения клеток
Исследованы ультраструктурные характеристики ядросодержащих клеток (ЯСК) донорской и кордовой крови, выделенных различными методами. С помощью электронной микроскопии показано, что ЯСК донорской и кордовой крови, выделенные с помощью методов двухэтапного центрифугирования и седиментации в полиглюкин...
Saved in:
| Published in: | Проблемы криобиологии |
|---|---|
| Date: | 2012 |
| Main Authors: | , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2012
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68683 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Ультраструктура ядросодержащих клеток донорской и кордовой крови на различных этапах криоконсервирования. Сообщение 1. Изменения на этапе выделения клеток / Л.А. Бабийчук, Р.К. Мигунова, О.Ф. Невзорова, В.П. Невзоров // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 4. — С. 453-461. — Бібліогр.: 10 назв. — рос., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859944612558274560 |
|---|---|
| author | Бабийчук, Л.А. Мигунова, Р.К. Невзорова, О.Ф. Невзоров, В.П. |
| author_facet | Бабийчук, Л.А. Мигунова, Р.К. Невзорова, О.Ф. Невзоров, В.П. |
| citation_txt | Ультраструктура ядросодержащих клеток донорской и кордовой крови на различных этапах криоконсервирования. Сообщение 1. Изменения на этапе выделения клеток / Л.А. Бабийчук, Р.К. Мигунова, О.Ф. Невзорова, В.П. Невзоров // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 4. — С. 453-461. — Бібліогр.: 10 назв. — рос., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии |
| description | Исследованы ультраструктурные характеристики ядросодержащих клеток (ЯСК) донорской и кордовой крови, выделенных различными методами. С помощью электронной микроскопии показано, что ЯСК донорской и кордовой крови, выделенные с помощью методов двухэтапного центрифугирования и седиментации в полиглюкине, достаточно хорошо сохраняют свойственную им ультраструктурную архитектонику. Наличие в цитоплазме большого количества рибосом и полисом свидетельствует о высокой активности синтезирующей и репаративной функций этих клеток. Выделение ЯСК донорской и кордовой крови с помощью фиколла приводит к деструктивным нарушениям мембранных структур и органелл, что не позволяет восстановить нормальную метаболическую активность путем внутриклеточной репарации.
Досліджено ультраструктурні характеристики ядровмісних клітин донорської та кордової крові, які виділені різними методами. За допомогою електронної мікроскопії показано, що ядровмісні клітини донорської та кордової крові, виділені методами двохетапного центрифугування і седиментації у поліглюкині, досить добре зберігають властиву їм ультраструктурну архітектоніку. Наявність у цитоплазмі великої кількості рибосом й полісом свідчить про високу активність синтезуючої та репаративної функцій цих клітин. Виділення ядровмісних клітин донорської та кордової крові за допомогою фіколу призводить до деструктивних порушень мембранних структур та органел, що перешкоджає відновленню нормальної метаболічної активності шляхом внутрішньоклітинної репарації.
Ultrastructure characteristics were studied in the nucleated cells from adult donor blood and cord blood isolated by different methods. Electron microscopical investigation revealed quite good preservation of characteristic ultrastructure in nucleated cells of adult donor blood and cord blood isolated by two-step centrifugation and sedimentation in Poliglyukin. Presence of large amount of ribosomes and polysomes in cytoplasm testifies to a high activity of synthesizing and reparative function of the cells. Isolation of nucleated cells from adult donor blood and cord blood using Ficoll leads to destructions of membrane structures and organelles, which impedes the restoration of normal metabolic activity by intracellular reparation.
|
| first_indexed | 2025-12-07T16:12:55Z |
| format | Article |
| fulltext |
453
В последние десятилетия интенсивно разви-
вается новое направление в медицине – клеточная
терапия [4] с использованием гемопоэтических
стволовых клеток (ГСК) из кордовой крови (КК) и
донорской крови (ДК) [10]. Ввиду востребован-
ности препаратов ГСК в составе ядросодержащих
клеток крови (ЯСК) необходимо создать низко-
температурные банки, в которых образцы хра-
нятся в замороженном состоянии при температуре
–196°С в течение длительного времени.
Учитывая небольшие полученные объемы КК
и трудности, связанные с выделением ГСК из ДК,
важно сохранить максимальное количество ЯСК
Recent decades have been characterized with rapid-
ly developing new area of medicine, cell therapy [4]
with application of hematopoietic stem cells (HSCs)
from cord blood (CB) and blood of adult donors (DB)
[10]. In view of the demand of HSC preparation as a
part of nucleated blood cells (NCs) it is necessary to
estab-lish the low-temperature banks where the samp-
les could be stored at –196°C for a long time.
Taking into account the small volumes of procured
CB as well as the difficulties associated with the
isolation of HSCs from DC, it is important to preserve
as much NCs and their structural and functional value
at every stage of the cryopreservation process.
problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
УДК 612.112.086.3:57.043
Л.А.БАБИЙЧУК1, Р.К. МИГУНОВА1, О.Ф. НЕВЗОРОВА2, В.П. НЕВЗОРОВ2
Ультраструктура ядросодержащих клеток донорской и кордовой
крови на различных этапах криоконсервирования.
Сообщение 1. Изменения на этапе выделения клеток
UDC 612.112.086.3:57.043
L.A.BABIYCHUK1*, R.K. MIGUNOVA1, O.F. NEVZOROVA2, V.P. NEVZOROV2
Ultrastructure of Nucleated Cells of Cord Blood and Blood of Adult
Donors at Different Stages of Cryopreservation.
Report 1. The Changes on the Stage of Cells Isolation
Исследовали ультраструктурные характеристики ядросодержащих клеток (ЯСК) донорской и кордовой крови, выделенных
различными методами. С помощью электронной микроскопии показано, что ЯСК донорской и кордовой крови, выделенные
методами двухэтапного центрифугирования и седиментации в полиглюкине, достаточно хорошо сохраняют свойственную им
ультраструктурную архитектонику. Наличие в цитоплазме большого количества рибосом и полисом свидетельствует о высокой
активности синтезирующей и репаративной функций этих клеток. Выделение ЯСК донорской и кордовой крови с помощью
фиколла приводит к деструктивным нарушениям мембранных структур и органелл, что не позволяет восстановить нормальную
метаболическую активность путем внутриклеточной репарации.
Ключевые слова: ядросодержащие клетки, донорская кровь, кордовая кровь, ультраструктура.
Досліджено ультраструктурні характеристики ядровмісних клітин донорської та кордової крові, які виділені різними
методами. За допомогою електронної мікроскопії показано, що ядровмісні клітини донорської та кордової крові, виділені
методами двохетапного центрифугування і седиментації у поліглюкині, досить добре зберігають властиву їм ультраструктурну
архітектоніку. Наявність у цитоплазмі великої кількості рибосом й полісом свідчить про високу активність синтезуючої та
репаративної функцій цих клітин. Виділення ядровмісних клітин донорської та кордової крові за допомогою фіколу призводить
до деструктивних порушень мембранних структур та органел, що перешкоджає відновленню нормальної метаболічної активності
шляхом внутрішньоклітинної репарації.
Ключові слова: ядровмісні клітини, донорська кров, кордова кров, ультраструктура.
Ultrastructure characteristics were studied in the nucleated cells from adult donor blood and cord blood isolated by different
methods. Electron microscopical investigation revealed quite good preservation of characteristic ultrastructure in nucleated cells of
adult donor blood and cord blood isolated by two-step centrifugation and sedimentation in Poliglyukin. Presence of large amount of
ribosomes and polysomes in cytoplasm testifies to a high activity of synthesizing and reparative function of the cells. Isolation of
nucleated cells from adult donor blood and cord blood using Ficoll leads to destructions of membrane structures and organelles, which
impedes the restoration of normal metabolic activity by intracellular reparation.
Key words: nucleated cells, adult donor blood, cord blood, ultrastructure.
* Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015; тел.: (+38
057) 373-30-04, факс: (+38 057) 373-30-84, электронная почта:
aniger_ova@mail.ru
* To whom correspondence should be addressed: 23,
Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 373
3004, fax: +380 57 373 3084, e-mail: aniger_ova@mail.ru
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na-
tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Institute of General and Emergency Surgery" Medical Sciences of
Ukraine, Kharkiv
1Институт проблем криобиологии и криомедицины
НАН Украины, г. Харьков
2ГУ «Институт общей и неотложной хирургии» АМН Украины,
г. Харьков
454 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
и их структурно-функциональную полноценность на
каждом этапе технологического процесса криокон-
сервирования.
Наиболее повреждающими этапами криокон-
сервирования являются замораживание и отогрев
клеточной суспензии. Однако выделение ЯСК из
цельной крови может также приводить к поврежде-
нию клеток и, как следствие, к снижению их ус-
тойчивости и утрате жизнеспособности на этапах
добавления криопротектора и замораживания-
отогрева [2].
В наших предыдущих работах было показано
[1], что сохранность и жизнеспособность ЯСК пос-
ле криоконсервирования во многом зависит от того
состояния, в котором эти клетки входят в процесс
замораживания-отогрева, т. е. от их структурно-
функционального состояния после выделения. По-
этому исследование структурно-функционального
состояния ЯСК после их выделения из цельной кро-
ви имеет очень важное значение. Информативным
методом, позволяющим оценить структурно-функ-
циональное состояние ЯСК, является трансмис-
сионная электронная микроскопия [6].
Целью данной работы было изучение ультра-
структуры ядросодержащих клеток донорской и
кордовой крови после выделения различными
методами.
Материалы и методы
Объектом исследования являлись ЯСК донор-
ской и кордовой крови человека, заготовленной на
глюкозо-цитратном растворе. Кордовую кровь по-
лучали из вены пульсирующей пуповины после
информированного согласия роженицы.
Концентраты ЯСК выделяли несколькими ме-
тодами: седиментации в 3%-м полиглюкине
(«Юрия-Фарм», Украина) [5], центрифугирования
в градиенте плотности фиколл-верографина («Мед-
биоспектр», Россия) [9] и двухэтапного центри-
фугирования цельной крови с последующим полу-
чением концентрата ЯСК в аутоплазме [8].
Для электронно-микроскопического исследова-
ния выделенные ЯСК фиксировали в 2,5%-м раст-
воре глутарового альдегида на фосфатном буфере
(рН 7,3–7,4) в течение 5–6 ч при температуре 4°С.
После отмывки в буферном растворе клетки пере-
носили для дофиксации в 1%-й раствор четырех-
окиси осмия на 3–4 ч. Дегидратацию проводили в
растворах спиртов возрастающей концентрации и
ацетоне. После обезвоживания клетки заключали
в смесь эпоксидных смол эпон-аралдит («Fluka»,
Германия). Полимеризацию блоков осуществляли
в термостате при температуре 60°С в течение двух
суток.
Ультратонкие срезы получали на ультрамик-
ротоме УМТП-3М («Электрон», Украина), кото-
The most damaging stages of cryopreservation are
freezing and thawing of the cell suspension. However
NC selection from whole blood can also cause injuries
to the cells and, as a consequence, to decrease their
resistance and result in loss of viability at the step of
adding a cryoprotectant and freeze-thawing [2].
Our previous studies had shown [1] that the survival
and viability of nucleated cells after cryopreservation
depended mainly on the state in which the cells enter
the process of freeze-thawing, i. e. their structural and
functional status after isolation. Therefore, the
investigation of the structural and functional state of
nucleated cells after isolation from whole blood is very
important. Transmission electron microscopy is an in-
formative method to assess the structural and functional
state of NCs [6].
The aim of this work was to study the ultrastructure
of nucleated cells of adult donor and cord blood after
separation by different methods.
Materials and methods
The object of the study were NCs of adult donor
and cord blood procured in a glucose-citrate buffer.
Cord blood was obtained from the throbbing umbilical
vein after informed consent of puerpera.
Concentrates of NCs were isolated by several me-
thods: sedimentation in 3% Poliglyukin (Yuria-Farm,
Ukraine) [5], centrifugation in Ficoll-Verografin density
gradient (Medbiospektr, Russia) [9] and two-step cent-
rifugation of whole blood with the following sampling
of NC concentrate in autoplasma [8].
For electron-microscopic examination the NCs we-
re fixed in 2.5% glutaraldehyde solution in the phos-
phate buffer (pH 7.3–7.4) during 5–6 hours at 4°C.
After washing in buffer the cells were transferred for
additional stabilization in 1% osmium tetroxide solution
for 3–4 hours. Dehydration was carried out in alcohol
solutions of increasing concentrations and acetone.
After dehydration the cells were embedded in Epon-
Araldite epoxy resins (Fluka, Germany). The polyme-
rization was carried out in thermostatic chamber at
60°C for two days.
Ultrathin sections were cut with UMTP-3M ultra-
microtome (Elektron, Ukraine), and mounted on elect-
rolytic meshes. After counterstaining with lead citrate
they were examined with an electron microscope
EMW-100BR (Electron, Ukraine) at an accelerating
voltage of 75 kV. The magnification was chosen in
accordance with the purposes of the study.
Results and discussion
Investigation of ultrastructure of NCs isolated using
the method of two-phase centrifugation revealed the
satisfactory preserved membrane structures. Most
NCs had nuclei filled with predominantly condensed
chromatin (Fig. 1) concentrated on the nuclear memb-
455 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
рые монтировали на электролитические сеточки.
После контрастирования цитратом свинца их
исследовали с помощью электронного микроскопа
ЭМВ-100БР («Электрон», Украина) при ускоряю-
щем напряжении 75 кВ. Увеличение подбирали в
соответствии с целями исследования.
Результаты и обсуждение
При изучении ультраструктуры ЯСК, выделен-
ных с применением метода двухэтапного центри-
фугирования, выявлена удовлетворительная со-
хранность мембранных структур. Большая часть
ЯСК имела ядра, заполненные преимущественно
конденсированным хроматином (рис. 1), концентри-
рующимся на ядерной мембране. Центральная
часть ядра заполнена диффузно рассеянными гра-
нулами деконденсированного хроматина. Ядерная
мембрана образовывала многочисленные мелкие
и глубокие инвагинации и была умеренно разрых-
лена. В цитоплазме сохранено большое количество
рибосом и полисом.
Митохондрии имели различную форму и разме-
ры. Кристы в них сохраняли параллельную ориен-
тацию. На мембранах гранулярного эндоплазма-
тического ретикулума располагалось множество
рибосом. Цитоплазма была заполнена многочис-
ленными рибосомами и полисомами.
Пластинчатый цитоплазматический комплекс
Гольджи развит слабо, его параллельно ориентиро-
ванные гладкие мембраны окружены небольшим
количеством мелких электронно-прозрачных вези-
кул. Цитоплазматическая мембрана была четко
контурирована и образовывала микроворсинки раз-
личной длины.
При электронно-микроскопическом исследова-
нии ультраструктуры ЯСК донорской крови, выде-
ленных с помощью фиколла, выявлены ультра-
структурные изменения в виде очагов деструкции
мембранных структур. Цитоплазматическая мем-
брана была сильно разрыхлена и утратила четко
контурированную структуру. В цитоплазме клеток
сохранялось большое количество рибосом и поли-
сом.
Цистерны гранулярного эндоплазматического
ретикулума сильно расширены и имели вид элект-
ронно-прозрачных вакуолей, а в мембранах опреде-
лялись многочисленные очаги деструкции (рис. 2).
В некоторых ЯСК внутриклеточные мембраны
были фрагментированы. Ядра лейкоцитов содер-
жали конденсированный хроматин, локализую-
щийся вдоль ядерной мембраны, а внутренняя об-
ласть ядра имела низкую электронную плотность.
Наружные мембраны митохондрий сильно разрых-
лены и очагово разрушены. Матрикс митохондрий
сохранял мелко гранулярную структуру и имел
среднюю электронную плотность. Выявлялись ми-
rane. The central part of the nuclei was filled with dif-
fusely located granules of decondensed chromatin. Nuc-
lear membranes formed numerous shallow or deep in-
vaginations and was moderately loosened. The cyto-
plasm contained preserved ribosomes and polysomes.
Mitochondria were of a different shape and size.
The cristae kept their parallel orientation. Many
ribosomes were located on the membranes of rough
endoplasmic reticulum. Cytoplasm was filled with
numerous ribosomes and polysomes.
Laminar cytoplasmic Golgi complex was poorly
developed, its parallel smooth membranes were sur-
rounded by a small number of small electron-transpa-
rent vesicles. Cytoplasmic membrane was clearly
contou-red and formed microvilli of different lengths.
Electron-microscopic study of the ultrastructure of
adult donor blood NCs, isolated by Ficoll, revealed ultra-
structural changes in the form of membrane structures
destruction foci. The cytoplasmic membrane was great-
ly loosened and its structure lost clear contoures. Cell cy-
toplasm preserved most ribosomes and polysomes.
The cisterns of rough endoplasmic reticulum were
significantly expanded and were visualized as electron-
transparent vacuoles, and its membranes had multiple
foci of destruction (Fig. 2). Some NCs had fragmen-
ted intracellular membrane. Leukocyte nuclei contai-
ned condensed chromatin, localized along the nuclear
membrane, and the inner region of the nuclei was of
low electron density. The outer membranes of mito-
chondria were significantly loosened and somewhere
destroyed. Matrix of mitochondria preserved fine gra-
nular structure and was of high electron density. Part
of mitochondrial cristae were destroyed (Fig. 3).
Рис. 1. Ультраструктура ЯСК донорской крови, выделен-
ных методом двухэтапного центрифугирования. Конден-
сация хроматина, электронно-плотные митохондрии с
параллельно ориентированными кристами, ×16000.
Fig. 1. Ultrastructure of adult donor blood NCs, isolated by
two-step centrifugation. Condensation of chromatin,
electron-dense mitochondria with parallell cristae, ×16000.
456 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
тохондрии, кристы которых подвержены разру-
шению (рис. 3).
Пластинчатый цитоплазматический комплекс
Гольджи содержал беспорядочно ориентирован-
ные гладкие мембраны с очагами деструкции и
крупные электронно-прозрачные вакуоли.
После выделения ЯСК донорской крови мето-
дом седиментации в полиглюкине ультраструк-
турная организация клеток сохранялась лучше, чем
после выделения фиколлом (рис. 4). Ядра ЯСК
имели неправильную форму с глубокими инваги-
нациями ядерной мембраны, содержали конденси-
рованный хроматин. Центральная часть ядра за-
полнена равномерно распределенными гранулами
деконденсированного хроматина и свободными
рибосомами. Перинуклеарные пространства уме-
ренно и равномерно расширены. В цитоплазме вы-
являются многочисленные рибосомы и полисомы.
Цитоплазматическая мембрана не имела очагов
деструкции.
В цитоплазме определялись мелкие митохонд-
рии с большим количеством крист и мелкозернис-
тым матриксом. Разрушений наружных мембран
и крист митохондрий не выявлено. Наблюдается
умеренное расширение цистерн гранулярного эндо-
плазматического ретикулума.
Пластинчатый цитоплазматический комплекс
Гольджи представлен гладкими параллельно
ориентированными и собранными в стопки мемб-
ранами, которые окружены мелкими везикулами.
Цитоплазматические выросты на поверхности
ЯСК не нарушены. Деструкций внутриклеточных
мембранных структур не наблюдается.
Laminar cytoplasmic Golgi complex contained ran-
domly oriented smooth membranes with foci of de-
struction and large electron-transparent vacuoles.
After isolation of NCs of adult donor blood by sedi-
mentation in Poliglyukin the ultrastructure of cells was
better preserved than after Ficoll separation (Fig. 4).
The nuclei of NCs were of irregular shape with deep
invaginations of the nuclear membrane, and contained
condensed chromatin. The central part of the nuclei
was filled with evenly distributed decondensed chro-
matin granules and free ribosomes. Perinuclear spaces
Рис. 2. Ультраструктура ЯСК донорской крови, выделен-
ных с помощью фиколла. Конденсация хроматина ядра,
вакуолизация цитоплазмы и фрагментация мембран
эндоплазматической сети, ×20000.
Fig. 2. Ultrastructure of NCs of adult donor blood isolated
with Ficoll. Nuclear chromatin condenstation, vacuolization
of cytoplasm and fragmentation of endoplasmatic reticulum
membranes, ×20000.
Рис. 3. Ультраструктура ЯСК донорской крови, выделен-
ных с помощью фиколла. Разрыхление и деструкция на-
ружных мембран митохондрий, ×19000.
Fig. 3. Ultrastructure of NCs of adult donor blood, isolated
with Ficoll. Loosening and destruction of outer membranes
of mitochondria, ×19000.
Рис. 4. Ультраструктура ЯСК донорской крови, выделен-
ных полиглюкином. Конденсация хроматина, многочис-
ленные рибосомы и полисомы в цитоплазме, ×18000.
Fig. 4. Ultrastructure of NCs of adult donor blood, isolated
by Poliglyukin. Chromatin condenstation, numerous
ribosomes and polysomes in cytoplasm, ×18000.
457 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
Результаты исследования ультраструктуры
ЯСК кордовой крови показали, что после выделения
методом двухэтапного центрифугирования клетки
имели хорошо сохранившуюся субмикроскопичес-
кую организацию. Ядра ЯСК кордовой крови зани-
мали большую часть цитоплазмы (рис. 5), были
округлой формы и располагались в центральной об-
ласти цитоплазмы.
Ядерная мембрана гладкая с неглубокими инва-
гинациями, четко контурирована. Перинуклеарные
пространства не расширены. Ядерный хроматин
находился как в конденсированном, так и в декон-
денсированном состоянии. Узкая полоска цитоплаз-
мы, окружающая ядро, заполнена многочислен-
ными рибосомами и полисомами. Гранулярный
эндоплазматический ретикулум развит слабо. В ци-
топлазме определялись единичные митохондрии
округлой формы с мелкозернистым матриксом.
Наружные мембраны и кристы были без очагов
деструкции. Цитоплазматическая мембрана глад-
кая, четко контурирована, образует микроворсинки.
После выделения ЯСК кордовой крови в гра-
диенте плотности фиколла ядра клеток содержали
конденсированный хроматин с разрыхленной
структурой. Ядерная мембрана была сильно раз-
рыхлена и имела множественные очаги лизиса.
Большая часть внутриклеточных структур и мемб-
ранных комплексов разрушена (рис. 6). Мембраны
гранулярного эндоплазматического ретикулума
разрыхлены, его цистерны приобретали вид элект-
ронно-прозрачных вакуолей. Достаточно часто наб-
людалась фрагментация внутриклеточных мем-
бран. На мембранах эндоплазматической сети свя-
занные рибосомы практически отсутствовали. Ци-
топлазма обладала высокой электронной плотнос-
тью.
Митохондрии ЯСК кордовой крови имели вид
вакуолей, заполненных грубоволокнистой субстан-
цией. Кристы митохондрий подвергались тоталь-
ной деструкции. Цитоплазматическая мембрана
образовывала многочисленные выросты и места-
ми была разрушена.
Пластинчатый цитоплазматический комплекс
Гольджи представлен фрагментами беспорядочно
ориентированных разрыхленных и зачастую раз-
рушенных гладких мембран. Везикулярная часть
комплекса Гольджи состояла из деструктивно из-
мененных электронно-плотных везикул.
При выделении ЯСК кордовой крови методом
седиментации в полиглюкине установлено, что
ядра клеток занимали большую часть цитоплазмы.
Ядерная мембрана умеренно разрыхлена, образо-
вывала глубокие инвагинации. Перинуклеарные
пространства не расширены. Ядерный хроматин
частично конденсирован, его глыбки располагались
равномерно по площади среза ядра. Между ними
локализовался деконденсированный хроматин.
were moderately and evenly extended. The cytoplasm
had numerous ribosomes and polysomes. Cytoplasmic
membrane had no foci of destruction.
The cytoplasm had small mitochondria with many
cristae and fine-grained matrix. No destructions of ou-
ter membrane and cristae of mitochondria were obser-
ved. A moderate expansion of rough endoplasmic reti-
culum cisterns was found. Laminar cytoplasmic Golgi
complex was represented by smooth parallel-oriented
stacked membranes, surrounded by small vesicles.
Cytoplasmic processes on the surface of NCs were
not damaged. No destructions of intracellular memb-
rane structures were observed.
Investigation of ultrastructure of NCs from cord
blood showed that after isolation by two-step centrifu-
gation the cells had well preserved submicroscopic
organization. The nuclei of cord blood NCs occupied
the most part of the cytoplasm (Fig. 5), were round
and located in the central part of the cytoplasm.
Nuclear membrane was smooth, had shallow inva-
ginations and clear contours. Perinuclear spaces were
not extended. The nuclear chromatin was either con-
densed or decondensed. A narrow strip of cytoplasm
surrounding the nucleus was filled with numerous ribo-
somes and polysomes. The rough endoplasmic reticu-
lum was poorly developed. The cytoplasm had single
mitochondria of round shape and with fine-grained
matrix. Outer membranes and cristae had no destruc-
tion foci. The cytoplasmic membrane was smooth,
well-contoured and formed microvilli.
After isolation of NCs from cord blood in Ficoll
density gradient the cell nuclei contained condensed
Рис. 5. Ультраструктура ЯСК кордовой крови, выделен-
ных методом двухэтапного центрифугирования. Конден-
сация хроматина, скопление рибосом и полисом в ци-
топлазме, митохондрии с мелкозернистым матриксом,
×16000.
Fig. 5. Ultrastructure of NCs from cord blood, isolated by
two-step centrifugation.Chromatin condensation, numerous
ribosomes and polysomes in cytoplasm, mitochondria with
fine-grained matrix, ×16000.
458 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
Цитоплазма ЯСК кордовой крови содержала
большое количество рибосом и полисом (рис. 7),
а также мелкие митохондрии, имеющие матрикс
повышенной электронной плотности и единичные
кристы. Цистерны эндоплазматической сети име-
ли вид вакуолей, заполненных электронно-прозрач-
ной субстанцией. Иногда выявлялись мелкие вклю-
чения липидов. Цитоплазматическая мембрана
была разрыхлена и образовывала микроворсинки.
Существенных изменений ультраструктурной ор-
ганизации пластинчатого цитоплазматического
комплекса Гольджи не выявлено.
Проведенные электронно-микроскопические
исследования ЯСК донорской крови после выде-
ления методом двухэтапного центрифугирования
свидетельствуют, что у клеток сохраняется типич-
ная субмикроскопическая организация. Описанные
изменения, вероятно, связаны с различными ста-
диями метаболизма этих клеток, а также с их дли-
тельным нахождением вне кровеносных сосудов.
Выделение ЯСК донорской крови с помощью
фиколла приводит к деструктивным нарушениям
мембранных структур и органелл этих клеток.
Существенной деструкции подвержены грануляр-
ный эндоплазматический ретикулум, наружные
мембраны и кристы митохондрий, ядерная мемб-
рана и гладкие мембраны пластинчатого цитоплаз-
матического комплекса Гольджи. Большинство
ЯСК, имеющие такие нарушения, вероятно, не
способны восстановить свою нормальную мета-
болическую активность путем внутриклеточной
репарации. Это подтверждается данными, полу-
chromatin with loosened structure. Nuclear membrane
was significantly loosened and had multiple foci of lysis.
Most of the intracellular structures and membrane
complexes was destroyed (Fig. 6). Rough endoplasmic
reticulum membranes were loosened and its cisterns
were in the form of electron-transparent vacuoles.
Fragmentation of intracellular membranes was com-
monly observed. Almost no bound ribosomes were ob-
served on the membranes of the endoplasmic reticulum.
The cytoplasm was of high electron density.
Mitochondria of cord blood NCs appeared as va-
cuoles filled with coarse fibrous substance. Cristae of
mitochondria were totally destructed. Cytoplasmic
membrane formed numerous processes and was some-
times destroyed.
Laminar cytoplasmic Golgi complex was represen-
ted by fragmented, randomly oriented, loosened and
mainly destroyed smooth membranes. Vesicular part
of the Golgi complex was consisted of destructed elect-
ron-dense vesicles.
Cord blood NCs isolated by sedimentation in Poli-
glyukin possessed cell nuclei which occupied the most
part of cytoplasm. Nuclear membrane was moderately
loosened and formed deep invaginations. Perinuclear
spaces were not extended. Nuclear chromatin was
partially condensed, its clumps were located evenly
over the nuclei section. Decondensed chromatin loca-
lized the clumps.
Cytoplasm of cord blood NCs contained a large
number of ribosomes and polysomes (Fig. 7), as well
as small mitochondria with matrix of increased electron
density and single cristae. Endoplasmic reticulum cis-
Рис. 6. Ультраструктура ЯСК кордовой крови, выделен-
ных фиколлом. Разрушение ядерной мембраны, вакуоли-
зация цистерн эндоплазматического ретикулума, мие-
линоподобные структуры в цитоплазме, ×25000.
Fig. 6. Ultrastructure of NCs from cord blood, isolated in
Ficoll. Destroyed nuclear membrane, vacuolization of endo-
plasmatic reticulum cisterns, myelin-like structures in cyto-
plasm, ×25000.
Рис. 7. Ультраструктура ЯСК кордовой крови, выделен-
ных полиглюкином. Глубокие инвагинации ядерной
мембраны, рибосомы в цитоплазме, ×20000.
Fig. 7. Ultrastructure of NCs from cord blood, isolated in
Poliglyukin. Deep invaginations of nuclear membranes,
ribosomes in cytoplasm, ×20000.
459 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
terns were in the form of vacuoles filled with electron-
transparent substance. Small inclusions of lipids were
sometimes revealed. The cytoplasmic membrane was
loosened and formed microvilli. No significant changes
in ultrastructure of laminar cytoplasmic Golgi complex
have been found.
The conducted electron microscopy studies of NCs
from adult donor blood after isolation by two-step
centrifugation revealed that the cells retained the typical
submicroscopic organization. The found changes are
likely to be associated with different stages of meta-
bolism of the cells, as well as with their long-term pre-
sence outside of the blood vessels.
Isolation of NCs from adult donor blood using Ficoll
leads to destructions of membrane structures and
organelles of these cells. The subjects of destruc-tion
are rough endoplasmic reticulum, the outer memb-
ranes and cristae of mitochondria, the nuclear membra-
ne and the smooth membranes of laminar cytoplasmic
Golgi complex. Most NCs with such violations are likely
not able to recover its normal metabolic activity by
intracellular reparation. This is confirmed by the repor-
ted data [3] revealed the dependence of NC metabolic
state on the method of their isolation from the whole
blood. It was found that after Ficoll separation the
metabolic activity of cells was significantly reduced,
and the application of two-step centrifugation and
sedimentation in Poliglyukin to isolate the NC fractions
was characterized by the absence of significant dif-
ferences in the metabolic activity of the cells as com-
pared to the control.
The NCs of adult donor blood isolated by sedimen-
tation in Poliglyukin quite good retain their ultrastruc-
ture. Their cytoplasm had intact mitochondria, that was
important for oxidation-reduction reactions and to pro-
vide a high level of intracellular bioenergetics. The pre-
sence in the cytoplasm of large number of ribosomes
and polysomes testifies to preserved synthesizing and
reparative activity of these cells. The detected changes
in intracellular membranes and organelles are likely
the manifestation of adaptive-compensatory reactions
and are reversible.
Typical unmodified submicroscopic structure was
found in the NCs from cord blood isolated by two-step
centrifugation. It should be noted that if compared with
adult donor blood the cord blood contains significantly
larger number of cells that correspond by their ultra-
structural organization to stem cells, which contain large
nuclei and a narrow strip of cytoplasm filled with nu-
merous ribosomes, which determines their high poten-
tial ability to differentiate [7] .
Electron microscopic study of cord blood nucleated
cells isolated by Poliglyukin revealed their satisfactory
preserved submicroscopic structure. Observed loosen-
ing of the nuclear membrane, mitochondrial membrane,
ченными нами ранее [3]. Было показано, что мета-
болическое состояние ЯСК зависит от метода их
выделения из цельной крови. Установлено, что
после выделения фиколлом метаболическая актив-
ность клеток значительно снижается, а примене-
ние методов двухэтапного центрифугирования и
седиментации в полиглюкине для выделения фрак-
ций ЯСК характеризуется отсутствием достовер-
ных отличий в метаболической активности клеток
по сравнению с контролем.
Хорошо сохраняют ультраструктуру ЯСК до-
норской крови, выделенные седиментацией в поли-
глюкине. В их цитоплазме обнаружены неповреж-
денные митохондрии, что важно для протекания
окислительно-восстановительных реакций и обес-
печения высокого уровня внутриклеточной био-
энергетики. Наличие в цитоплазме большого
количества рибосом и полисом свидетельствует о
синтезирующей и репаративной активности этих
клеток. Обнаруженные изменения органелл и внут-
риклеточных мембран – проявление адаптацион-
но-компенсаторных реакций и их обратимости.
Типичную неизмененную субмикроскопичес-
кую архитектонику имели ЯСК кордовой крови,
выделенные методом двухэтапного центрифугиро-
вания. Следует отметить, что по сравнению с ЯСК
донорской крови кордовая кровь содержит значи-
тельно большее количество клеток, соответствую-
щих по своей ультраструктурной организации ство-
ловым клеткам, которые содержат крупные ядра
и узкую полоску цитоплазмы, заполненную много-
численными рибосомами, что предопределяет их
высокую потенциальную способность к дифферен-
цировке [7].
Электронно-микроскопическое исследование
ядросодержащих клеток кордовой крови, выделен-
ных с помощью полиглюкина, выявило удовлет-
ворительную сохранность субмикроскопической
архитектоники. Наблюдаемые разрыхления ядер-
ной мембраны, мембран митохондрий, грануляр-
ного эндоплазматического ретикулума и плазмо-
леммы по глубине и степени выраженности были
в пределах физиологической компенсации.
В ЯСК кордовой крови, выделенных с помощью
фиколла, как и в препаратах донорской крови, вы-
деленных тем же методом, в большом количестве
присутствуют клетки с очагами деструкции суб-
микроскопических структур. Под воздействием
фиколла разрушаются митохондрии, мембраны
эндоплазматической сети, ядерная и цитоплазмати-
ческая мембраны. Следует отметить, что ЯСК
кордовой крови, выделенные фиколлом, имели су-
щественные изменения ультраструктуры, степень
выраженности которых находилась за пределами
физиологической компенсации. Клетки, способные
460 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
к активному восстановлению и дальнейшему функ-
ционированию, встречались редко.
Эти результаты согласуются с полученными на-
ми данными [5] по оценке жизнеспособности и сте-
пени нарушения асимметрии мембран ЯСК кор-
довой и донорской крови в зависимости от методов
выделения. Исследования, проведенные с помо-
щью метода проточной цитофлуориметрии, свиде-
тельствуют, что после выделения ядросодержащих
клеток методом двухэтапного центрифугирования
и седиментации в полиглюкине потери жизнеспо-
собности и изменения в асимметричном распреде-
лении фосфолипидов в мембране не наблюдались,
а при выделении фиколлом снижалась жизнеспо-
собность клеток и нарушалась асимметрия мем-
бран.
Представленные в данной работе результаты
имеют важное значение для последующих этапов
криоконсервирования, так как структурно-функцио-
нальные нарушения при выделении ЯСК могут
приводить к тому, что криоконсервированию будут
подвергаться заведомо поврежденные клетки, что
проявится как в снижении их устойчивости, так и
в потере жизнеспособности на этапах добавления
криопротектора и замораживания-отогрева [1].
В следующем сообщении будут представлены
данные об изменениях ультраструктуры ЯСК кор-
довой и донорской крови после криоконсервиро-
вания клеток, выделенных вышеуказанными мето-
дами.
Выводы
1. Выделение ЯСК донорской и кордовой крови
методом двухэтапного центрифугирования позво-
ляет сохранять типичную субмикроскопическую
организацию этих клеток.
2. Выделение ЯСК донорской и кордовой крови
с помощью фиколла приводит к деструктивным
нарушениям мембранных структур и органелл.
3. Выделенные с помощью полиглюкина ЯСК
донорской и кордовой крови сохраняют свойствен-
ную им ультраструктуру. Цитоплазма данных кле-
ток сохраняет большое количество рибосом и поли-
сом.
rough endoplasmic reticulum and plasmolemma were
within physiological compensation limits by their depth
and severity.
In NCs of cord blood isolated by Ficoll like in pre-
parations of adult donor blood isolated by the same
method a large number of cells with foci of destruction
of submicroscopic structures are present. Under the
influence of Ficoll the mitochondria, endoplasmic reti-
culum membrane, nuclear and cytoplasmic membrane
are being destroyed. It should be noted that the cord
blood NCs isolated by Ficoll had significant changes in
the ultrastructure, the severity of which was outside
the physiological compensation limits. There were only
single cells likely capable of active restoration and the
following functioning.
These results are consistent with the reported by
us data [5] on the assessment of the viability and deg-
ree of membrane asymmetry impairments in NCs of
cord and blood, depending on the selection method.
The research carried out by flow cytometry showed
that after the isolation of nucleated cells using a two-
step centrifugation and sedimentation in Poliglyukin
there was no loss of viability and no changes in the
asymmetric distribution of phospholipids in the mem-
brane, and in the case of isolation with Ficoll we have
found a decrease in cell viability and impaired mem-
brane asymmetry.
The results presented in this paper are important
for the following stages of cryopreservation, as struc-
tural and functional impairments arised during NC iso-
lation can lead to the fact that a priori damaged cells
will undergo cryopreservation, which will result in both
decrease in their stability and loss of viability at the
steps of adding cryoprotectant and freeze-thawing [1].
In the next report we will present the data on chan-
ges in the ultrastructure of NCs from cord blood and
adult donor blood after cryopreservation of cells isolated
by stated methods.
Conclusion
1. Isolation of NCs from adult donor blood and cord
blood by a two-step centrifugation allows to preserve
a typical submicroscopic organization of these cells.
2. Isolation of NCs from adult donor blood and cord
blood using Ficoll leads to a destruction of membrane
structures and organelles.
3. The NCs from adult donor blood and cord blood,
isolated in Poliglyukin retain their characteristic ultra-
structure. The cytoplasm of these cells preserved a
high number of ribosomes and polysomes.
Литература
1. Бабийчук Л.А., Зубов П.М., Михайлова О.А., Рязанцев В.В.
Оценка стадий апоптоза ядросодержащих клеток кордовой
крови до и после криоконсервирования // Таврический
медико-биологический вестник. – 2012. – Т. 15, №3, Ч. 2. –
С. 22–26.
2. Бабийчук Л.А., Зубов П.М., Рязанцев В.В., Зубова О.Л.
Выделение и криоконсервирование ядросодержащих кле-
ток пуповинной крови: оценка их качественного и коли-
чественного состава // Новое в гематологии и трансфу-
зиологии: Международный научно-практический рецензи-
руемый сборник.– Киев, 2006. – C.16–20.
References
1. Babiychuk L.A., Zubov P.M., Mikhailova O.A., Ryazantsev
V.V. Evaluation of apoptosis stages in nucleated cells of cord
blood prior to and after cryopreservation // Tavricheskiy Mediko-
461 problems
of cryobiology
Vol. 22, 2012, №4
проблемы
криобиологии
Т. 22, 2012, №4
3. Бабийчук Л.А., Рязанцев В.В., Зубов П.М., Михайлова О.А.
Оценка продукции активных форм кислорода ядросодер-
жащими клетками пуповинной крови на этапах криокон-
сервирования // Вісник проблем біології і медицини. –
2010. – Вип.3– С.50–55.
4. Владимирская Е.Б., Майорова О.А., Румянцев С.А.,
Румянцева А.Г. Биологические основы и перспективы те-
рапии стволовыми клетками.– М.: Медпрактика, 2005. –
391 с.
5. Михайлова О.А., Бабийчук Л.А., Рязанцев В.В., Зубов П.М.
Оценка жизнеспособности и степени нарушения асим-
метрии мембран ядросодержащих клеток при различных
методах их выделения из цельной кордовой и донорской
крови // Вісник проблем біології і медицини. – 2011. –
Вип.4(90).– С.118–122.
6. Пушкарь Н.С., Капрельянц А.С., Панков Е.Я. Ультраструк-
тура клетки при низких температурах. – Киев: Наук. думка,
1978. – 144 с.
7. Хэм А., Кормак Д. Гистология.– М.: Мир,1983.– Т. 1. – 272 c.
8. Пат. 23499 Україна, МПК С 12 N 5/00. Спосіб виділення
ядровмісних клітин кордової крові / Л.О. Бабійчук, В. І. Гри-
щенко, В. В. Рязанцев, П.М. Зубов, О.Л. Зубова; Заявлено
22.01.07; Опубл. 25.05.07, Бюл. №7.
9. Gluckman E., Broxmeyer H.E., Auerbach A.D. et al. Hemato-
poietic reconstitution in a patient with Fanconi's anemia by
means of umbilical cord blood from an HLA-identical sibling //
N. Engl. J. Med. – 1989.– Vol. 321, №17.– P.1174–1178.
10.Siena S., Bregni M., Brando B. et al. Circulation of CD34+
hematopoietic stem cells in the peripheral blood of high-dose
cyclophosphamide-treated patients: enhancement by intrave-
nous recombinant human granulocyte-macrophage colony-
stimulating factor // Blood. – 1989. – Vol.74, №6.– P. 1905–
1914.
Поступила 25.06.2012
Biologicheskiy Vestnik. – 2012. – Vol.15, N3, Part 2. – P. 22–
26.
2. Babiychuk L.A., Zubov P.M., Ryazantsev V.V., Zubova O.L.
Isolation and cryopreservation of cord blood nucleated cells:
evaluation of qualitative and quantitative composition // Novoye
v Gematologii i Perelivanii Krovi: International Scientific and
Practical Perr-Reviewed Collected Papers. – Kyiv, 2006. –
P.16–20.
3. Babiychuk L.A., Ryazantsev V.V., Zubov P.M., Mikhailova O.A.
Estimation of production of reactive oxygen species by
nucleated cells of umbilical cord blood at the stages of
cryopreservation // Visnyk Problem Biologii i Meditsiny. –
2010. – Issue 3. – P. 50–55.
4. Vladimirskaya E.B., Mayorov O.A., Rumyantsev S.A., Rumyan-
tseva A.G. Biological basics and perspectives of stem cell
therapies. – Moscow: Medpraktika, 2005. – 391 p.
5. Mikhailova O.A., Babiychuk L.A., Ryazantsev V.V., Zubov P.M.
Assessment of viability and degree of impairments of asym-
metry of membranes of nucleated cells with different methods
of their isolation from whole cord and donor blood // Visnyk
Problem Biologii i Meditsiny. – 2011. – Issue 4(90). – P. 118–
122.
6. Pushkar N.S., Kaprelyants A.S., Pankow E.Ya. Ultrastructure
of cell at low temperatures. – Kiev: Naukova Dumka, 1978. –
144 p.
7. Ham A., Cormac J. Histology. – Moscow: Mir, 1983. – Vol. 1. –
272 p.
8. Patent of Ukraine 23499, IPC С 12 N 5/00. The way of isolation
of nucleated cell from cord blood / L.O. Babiychuk, V.I. Grish-
chenko, V.V. Ryazantsev et al.; Filed 22.01.07; Publ. 25.05.07,
Bull. Nr. 7.
9. Gluckman E., Broxmeyer H.E., Auerbach A.D. et al. Hemato-
poietic reconstitution in a patient with Fanconi's anemia by
means of umbilical cord blood from an HLA-identical sibling //
N. Engl. J. Med. – 1989.– Vol. 321, N17.– P.1174–1178.
10.Siena S., Bregni M., Brando B. et al. Circulation of CD34+
hematopoietic stem cells in the peripheral blood of high-dose
cyclophosphamide-treated patients: enhancement by intrave-
nous recombinant human granulocyte-macrophage colony-
stimulating factor // Blood. – 1989. – Vol.74, N6.– P. 1905–
1914.
Accepted 25.06.2012
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68683 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T16:12:55Z |
| publishDate | 2012 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Бабийчук, Л.А. Мигунова, Р.К. Невзорова, О.Ф. Невзоров, В.П. 2014-09-27T07:38:15Z 2014-09-27T07:38:15Z 2012 Ультраструктура ядросодержащих клеток донорской и кордовой крови на различных этапах криоконсервирования. Сообщение 1. Изменения на этапе выделения клеток / Л.А. Бабийчук, Р.К. Мигунова, О.Ф. Невзорова, В.П. Невзоров // Проблемы криобиологии. — 2012. — Т. 22, № 4. — С. 453-461. — Бібліогр.: 10 назв. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68683 612.112.086.3:57.043 Исследованы ультраструктурные характеристики ядросодержащих клеток (ЯСК) донорской и кордовой крови, выделенных различными методами. С помощью электронной микроскопии показано, что ЯСК донорской и кордовой крови, выделенные с помощью методов двухэтапного центрифугирования и седиментации в полиглюкине, достаточно хорошо сохраняют свойственную им ультраструктурную архитектонику. Наличие в цитоплазме большого количества рибосом и полисом свидетельствует о высокой активности синтезирующей и репаративной функций этих клеток. Выделение ЯСК донорской и кордовой крови с помощью фиколла приводит к деструктивным нарушениям мембранных структур и органелл, что не позволяет восстановить нормальную метаболическую активность путем внутриклеточной репарации. Досліджено ультраструктурні характеристики ядровмісних клітин донорської та кордової крові, які виділені різними методами. За допомогою електронної мікроскопії показано, що ядровмісні клітини донорської та кордової крові, виділені методами двохетапного центрифугування і седиментації у поліглюкині, досить добре зберігають властиву їм ультраструктурну архітектоніку. Наявність у цитоплазмі великої кількості рибосом й полісом свідчить про високу активність синтезуючої та репаративної функцій цих клітин. Виділення ядровмісних клітин донорської та кордової крові за допомогою фіколу призводить до деструктивних порушень мембранних структур та органел, що перешкоджає відновленню нормальної метаболічної активності шляхом внутрішньоклітинної репарації. Ultrastructure characteristics were studied in the nucleated cells from adult donor blood and cord blood isolated by different methods. Electron microscopical investigation revealed quite good preservation of characteristic ultrastructure in nucleated cells of adult donor blood and cord blood isolated by two-step centrifugation and sedimentation in Poliglyukin. Presence of large amount of ribosomes and polysomes in cytoplasm testifies to a high activity of synthesizing and reparative function of the cells. Isolation of nucleated cells from adult donor blood and cord blood using Ficoll leads to destructions of membrane structures and organelles, which impedes the restoration of normal metabolic activity by intracellular reparation. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии Криоконсервирование биологических систем Ультраструктура ядросодержащих клеток донорской и кордовой крови на различных этапах криоконсервирования. Сообщение 1. Изменения на этапе выделения клеток Ultrastructure of Nucleated Cells of Cord Blood and Blood of Adult Donors at Different Stages of Cryopreservation. Report 1. The Changes on the Stage of Cells Isolation Article published earlier |
| spellingShingle | Ультраструктура ядросодержащих клеток донорской и кордовой крови на различных этапах криоконсервирования. Сообщение 1. Изменения на этапе выделения клеток Бабийчук, Л.А. Мигунова, Р.К. Невзорова, О.Ф. Невзоров, В.П. Криоконсервирование биологических систем |
| title | Ультраструктура ядросодержащих клеток донорской и кордовой крови на различных этапах криоконсервирования. Сообщение 1. Изменения на этапе выделения клеток |
| title_alt | Ultrastructure of Nucleated Cells of Cord Blood and Blood of Adult Donors at Different Stages of Cryopreservation. Report 1. The Changes on the Stage of Cells Isolation |
| title_full | Ультраструктура ядросодержащих клеток донорской и кордовой крови на различных этапах криоконсервирования. Сообщение 1. Изменения на этапе выделения клеток |
| title_fullStr | Ультраструктура ядросодержащих клеток донорской и кордовой крови на различных этапах криоконсервирования. Сообщение 1. Изменения на этапе выделения клеток |
| title_full_unstemmed | Ультраструктура ядросодержащих клеток донорской и кордовой крови на различных этапах криоконсервирования. Сообщение 1. Изменения на этапе выделения клеток |
| title_short | Ультраструктура ядросодержащих клеток донорской и кордовой крови на различных этапах криоконсервирования. Сообщение 1. Изменения на этапе выделения клеток |
| title_sort | ультраструктура ядросодержащих клеток донорской и кордовой крови на различных этапах криоконсервирования. сообщение 1. изменения на этапе выделения клеток |
| topic | Криоконсервирование биологических систем |
| topic_facet | Криоконсервирование биологических систем |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68683 |
| work_keys_str_mv | AT babiičukla ulʹtrastrukturaâdrosoderžaŝihkletokdonorskoiikordovoikrovinarazličnyhétapahkriokonservirovaniâsoobŝenie1izmeneniânaétapevydeleniâkletok AT migunovark ulʹtrastrukturaâdrosoderžaŝihkletokdonorskoiikordovoikrovinarazličnyhétapahkriokonservirovaniâsoobŝenie1izmeneniânaétapevydeleniâkletok AT nevzorovaof ulʹtrastrukturaâdrosoderžaŝihkletokdonorskoiikordovoikrovinarazličnyhétapahkriokonservirovaniâsoobŝenie1izmeneniânaétapevydeleniâkletok AT nevzorovvp ulʹtrastrukturaâdrosoderžaŝihkletokdonorskoiikordovoikrovinarazličnyhétapahkriokonservirovaniâsoobŝenie1izmeneniânaétapevydeleniâkletok AT babiičukla ultrastructureofnucleatedcellsofcordbloodandbloodofadultdonorsatdifferentstagesofcryopreservationreport1thechangesonthestageofcellsisolation AT migunovark ultrastructureofnucleatedcellsofcordbloodandbloodofadultdonorsatdifferentstagesofcryopreservationreport1thechangesonthestageofcellsisolation AT nevzorovaof ultrastructureofnucleatedcellsofcordbloodandbloodofadultdonorsatdifferentstagesofcryopreservationreport1thechangesonthestageofcellsisolation AT nevzorovvp ultrastructureofnucleatedcellsofcordbloodandbloodofadultdonorsatdifferentstagesofcryopreservationreport1thechangesonthestageofcellsisolation |