Влияние автоклавированных экстрактов плаценты человека на фазовое поведение суспензий клеток при температуре ниже 0°С
Исследовали фазовые переходы в экстрактах плаценты человека при замораживании до –196°С и влияние свежеприготовленного и автоклавированного экстрактов на фазовые переходы в клеточных суспензиях. Обнаружено, что после замораживания со скоростью 3,3(3)град/с в клеточных суспензиях и средах их суспенди...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Дата: | 2013 |
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2013
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68702 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Влияние автоклавированных экстрактов плаценты человека на фазовое поведение суспензий клеток при температуре ниже 0°С / А.В. Зинченко, Е.Н. Боброва, М.И. Щетинский, Ю.С. Говорова // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 1. — С. 40-48. — Бібліогр.: 13 назв. — рос., англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859813412717985792 |
|---|---|
| author | Зинченко, А.В. Боброва, Е.Н. Щетинский, М.И. Говорова, Ю.С. |
| author_facet | Зинченко, А.В. Боброва, Е.Н. Щетинский, М.И. Говорова, Ю.С. |
| citation_txt | Влияние автоклавированных экстрактов плаценты человека на фазовое поведение суспензий клеток при температуре ниже 0°С / А.В. Зинченко, Е.Н. Боброва, М.И. Щетинский, Ю.С. Говорова // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 1. — С. 40-48. — Бібліогр.: 13 назв. — рос., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| description | Исследовали фазовые переходы в экстрактах плаценты человека при замораживании до –196°С и влияние свежеприготовленного и автоклавированного экстрактов на фазовые переходы в клеточных суспензиях. Обнаружено, что после замораживания со скоростью 3,3(3)град/с в клеточных суспензиях и средах их суспендирования развивается процесс завершения кристаллизации на этапе нагрева со скоростью 8,3(3)×10–3 град/с. После разведения суспензий клеток Candida albicans и СПЭВ автоклавированным экстрактом этот процесс не регистрируется. Показано, что при замораживании экстрактов плаценты развивается кристаллизация эвтектических составов в отличие от смеси экстрактов с эритроцитами и клетками C. albicans.
Досліджували фазові переходи в екстрактах плаценти людини при заморожуванні до –196°С та вплив свіжовиготовленого і автоклавованого екстрактів на фазові переходи в клітинних суспензіях. Виявлено, що після заморожування зі швидкістю 3,3(3)град/с в клітинних суспензіях і середовищах їх суспендування розвивається процес завершення кристалізації на етапі нагріву зі швидкістю 8,3(3)×10–3 град/с. Після розведення суспензій клітин Candida albicans і СПЕВ автоклавованим екстрактом цей процес не реєструється. Показано, що при заморожуванні екстрактів плаценти розвивається кристалізація евтектичних сумішей на відміну від суміші екстрактів з еритроцитами та клітинами C. albicans.
Phase transitions in human placental extracts during cooling at –196°C and the effect of fresh and autoclaved extracts on phase transitions in cell suspensions were studied. It has been found that after cooling with the rate of 3.3(3)deg/s in cell suspensions or suspending media the process of crystallization termination developed at the stage of heating with the rate of 8.3(3)×10–3 deg/s. After dilution of the suspension of Candida albicans and SPEV cells with autoclaved extract this process was not observed. It was found that the crystallization of eutectic mixtures was developed in frozen placental extracts unlike the mixture of extracts with erythrocytes and C. albicans cells.
|
| first_indexed | 2025-12-07T15:20:16Z |
| format | Article |
| fulltext |
УДК 536.6:615.361.013.85:615.451.16
А.В. Зинченко*, Е.Н. Боброва, М.И. Щетинский, Ю.С. Говорова
Влияние автоклавированных экстрактов плаценты человека на
фазовое поведение суспензий клеток при температуре ниже 0°С
UDC 547.42/43:547.569.2:577.336:576.311.332/336
A.V. Zinchenko*, E.N. Bobrova, M.I. Schetinsky, Yu.S. Govorova
Influence of Autoclaved Placenta Extracts
on Phase Behavior of Cell Suspensions Below 0°C
Реферат. Исследовали фазовые переходы в экстрактах плаценты человека при замораживании до –196°С и влияние
свежеприготовленного и автоклавированного экстрактов на фазовые переходы в клеточных суспензиях. Обнаружено,
что после замораживания со скоростью 3,3(3)град/с в клеточных суспензиях и средах их суспендирования развивается
процесс завершения кристаллизации на этапе нагрева со скоростью 8,3(3)×10–3 град/с. После разведения суспензий клеток
Candida albicans и СПЭВ автоклавированным экстрактом этот процесс не регистрируется. Показано, что при замораживании
экстрактов плаценты развивается кристаллизация эвтектических составов в отличие от смеси экстрактов с эритроцитами
и клетками C. albicans.
Ключевые слова: фазовые переходы, дифференциальный сканирующий калориметр, экстракт плаценты, автокла-
вирование, суспензии клеток, СПЭВ, эритроциты, Candida albicans.
Реферат. Досліджували фазові переходи в екстрактах плаценти людини при заморожуванні до –196°С та вплив
свіжовиготовленого і автоклавованого екстрактів на фазові переходи в клітинних суспензіях. Виявлено, що після замо-
рожування зі швидкістю 3,3(3)град/с в клітинних суспензіях і середовищах їх суспендування розвивається процес завершення
кристалізації на етапі нагріву зі швидкістю 8,3(3)×10–3 град/с. Після розведення суспензій клітин Candida albicans і СПЕВ
автоклавованим екстрактом цей процес не реєструється. Показано, що при заморожуванні екстрактів плаценти розви-
вається кристалізація евтектичних сумішей на відміну від суміші екстрактів з еритроцитами та клітинами C. albicans.
Ключові слова: фазові переходи, диференційний скануючий калориметр, екстракт плаценти, автоклавування, суспензії
клітин, СПЕВ, еритроцити,Candida albicans.
Abstract. Phase transitions in human placental extracts during cooling at –196°C and the effect of fresh and autoclaved extracts
on phase transitions in cell suspensions were studied. It has been found that after cooling with the rate of 3.3(3)deg/s in cell
suspensions or suspending media the process of crystallization termination developed at the stage of heating with the rate of
8.3(3)×10–3 deg/s. After dilution of the suspension of Candida albicans and SPEV cells with autoclaved extract this process was not
observed. It was found that the crystallization of eutectic mixtures was developed in frozen placental extracts unlike the mixture of
extracts with erythrocytes and C. albicans cells.
Key words: phase transitions, differential scanning calorimeter, placenta extract, autoclaving, cell suspensions, SPEV, erythrocytes,
Candida albicans.
Поступила 30.11.2012
Принята в печать 31.01.2013
Проблемы криобиологии и криомедицины. – 2013. – Т. 23, №1. – С. 40–48.
© 2013, Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины
Received November, 30, 2012
Accepted January, 31, 2013
Problems of Cryobiology and Cryomedicine. – 2013. – Vol. 23, Nr. 1. – P. 40–48.
© 2013 Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
В настоящее время экстракты плаценты чело-
века (ЭПЧ) благодаря наличию большого количес-
тва биологически активных веществ (белки, пепти-
ды, РНК, ДНК, аминокислоты, микроэлементы,
гормоны) широко используют для получения пре-
паратов с высокой биологической активностью,
которые применяют в клинической практике для
лечения ряда заболеваний [12, 13]. Криогенные
технологии позволяют не только получить уникаль-
ные фракции из экстрактов плаценты, но и сохра-
нить их биологическую активность в течение дли-
тельного времени [8]. Однако на каждом этапе
Nowadays, human placental extracts (HPEs) due
to the presence of various biologically active sub-
stances (proteins, peptides, RNA, DNA, aminoacides,
microelements, hormones) have been widely used to
create medicinal preparations with a high biological
activity, applied in clinical practice to treat some di-
seases [12, 13]. Cryogenic technologies allow not only
to obtain unique fractions from placental extracts, but
also to preserve their biological activity for a long time
[8]. However, each stage of technological process,
particularly, cryosublimation fractioning, low-tempe-
rature extraction with freon solvents or derivation of
оригинальное исследование research article
*Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015;
тел.: (+38 057) 373-31-41, факс: (+38 057) 373-30-84,
электронная почта: alexazin@mail.ru
* To whom correspondence should be addressed:
23, Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015;
tel.:+380 57 373 3141, fax: +380 57 373 3084,
e-mail: alexazin@mail.ru
Department of Cryobiophysics, Institute for Problems of Cryobio-
logy and Cryomedicine of the National Academy of Sciences of
Ukraine, Kharkov, Ukraine
Отдел криобиофизики, Институт проблем криобиологии и
криомедицины НАН Украины, г. Харьков
технологического процесса, в частности криосуб-
лимационное фракционирование, низкотемператур-
ная экстракция хладоновыми растворителями или
получение белково-пептидной фракции, возрастает
риск бактериальной и вирусной контаминации.
Для снижения риска контаминации, предотвра-
щения осложнений при использовании препаратов,
в том числе анафилактических, и увеличения срока
их хранения применяют разные виды стерилизации.
Автоклавирование, или высокотемпературная сте-
рилизация [10], – один из перспективных методов,
позволяющих при определенных условиях частич-
но сохранить биологическую активность экстрак-
тов плаценты [7], очистить их от высокомолеку-
лярных белков и нуклеиновых кислот, что является
необходимым условием для приготовления некото-
рых фармакопейных препаратов. Обычно автокла-
вирование биологических препаратов осуществ-
ляется в течение 3–4 ч при 125...130°С и давлении
1,8–2 атм, при этом полностью денатурируют бел-
ки и аминокислоты, разрушаются вещества, обес-
печивающие антиоксидантную активность. В нас-
тоящее время широкое распространение получили
щадящие режимы автоклавирования препаратов
(15–20 мин при 120...122°С и давлении 1,8–2 атм),
которые обеспечивают удовлетворительную их
стерилизацию и частичное сохранение биологичес-
кой активности. При этом режиме, в отличие от
режимов с пролонгированным временем автокла-
вирования, денатурирует часть белков и нуклеино-
вых кислот, происходит распад сахарозы на глюкозу
и фруктозу без последующей деградации [10, 11].
Ранее было показано, что имеет место изменение
биологической активности экстрактов после авто-
клавирования по отношению к клеткам [5]. По
нашему мнению, это может быть обусловлено осо-
бенностями межмолекулярных взаимодействий
смеси экстрактов и суспензий клеток с молекулами
воды. Таким образом, инкубирование клеточных
суспензий с автоклавированными экстрактами
плаценты может быть источником, с одной сторо-
ны, биологически активных веществ для поддер-
жания энергетического статуса клеток, а с дру-
гой – дополнительного количества связанной воды,
необходимой при криоконсервировании.
В то же время для успешного криоконсервиро-
вания суспензий клеток необходима информация о
фазовых переходах в системе, особенностях проте-
кания процессов кристаллизации, рекристаллизации
и т. д. до и после их инкубирования в экстрактах.
Исследование фазовых переходов при температу-
ре ниже 0°C является методическим подходом для
изучения взаимодействий компонентов сложных
биологических систем и образования комплексов
между ними. Результаты, полученные методами
дифференциальной сканирующей калориметрии
(ДСК) и ядерного магнитного резонанса высокого
protein-peptide fraction, is accompanied with increasing
risk of bacterial and virus contamination.
There are different types of sterilization to decrease
contamination risk, to avoid complications when using
the preparations, including anaphylactic shock and in-
crease the term of their storage. Autoclaving or a high
temperature sterilization [10] is the one of perspective
methods, under certain conditions enabling to preserve
partial biological activity of placental extracts [7], purge
away high molecular proteins and nucleic acids, that is
a necessary condition to prepare some pharmacopeial
preparations. Usually autoclaving of biological prepara-
tions is performed for 3–4 hrs at 125...130°C and 1.8–
2 atm pressure, herewith proteins and aminoacids are
completely denaturated, and the substances with
antioxidant activity are damaged. Nowadays, mild regi-
mens of autoclaving of preparations (15–20 min at
120...122°C and 1.8–2 atm pressure), providing their
proper sterilization and partial preservation of biological
activity, have been widely used. At this regimen unlike
the ones with prolonged time of autoclaving, a part of
proteins and nucleic acids is denaturated, dissociation
of sucrose into glucose and fructose without further
degradation occurs [10, 11]. Previously it has been
shown that autoclaving resulted in the changed biolo-
gical activity of extracts in respect to the cells [5]. We
believe it may be stipulated by the peculiarities of water
molecules interactions in the mixture of extracts and
cell suspensions. Thus, incubation of cell suspensions
with autoclaved placental extracts could lead, on the
one hand, to the supply of biologically active substances
for support cell energetic status, and on another hand,
to the appearance of additional amount of bound water
important for cryopreservation.
At the same time, the successful cryopreservation
of cell suspensions requires the information about pha-
se transitions in the system, peculiarities of crystalli-
zation and recrystallization processes etc. prior to and
after the incubation of the cells with the extracts.
Investigation of phase transitions at the temperature
below 0°C is a methodical approach for studying the
interactions of components of complex biological
systems and formation of the complexes between them.
The results obtained by the methods of differential
scanning calorimetry (DSC) and nuclear magnetic
resonance of a high resolution on protons (1H-NMR),
may testify to the change of molecule-to-molecule inter-
actions and structural peculiarities of membranes of
the studied objects when supplementing the cell sus-
pensions with autoclaved placental extract.
The research aim was to study the effect of auto-
claved extracts on phase transitions in cell suspensions
within the temperature range of –196...0°C.
Materials and methods
There were investigated 5 placentas of 38 weeks
gestation term derived from the maternity patients. The
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
41
разрешения на протонах (1Н-ЯМР), могут свиде-
тельствовать об изменении межмолекулярных взаи-
модействий и о структурных особенностях мем-
бран исследуемых объектов при добавлении авто-
клавированного экстракта в клеточные суспензии.
Целью исследования было изучение влияния
автоклавированных экстрактов на фазовые пере-
ходы в клеточных суспензиях в диапазоне тем-
ператур –196...0°C.
Материалы и методы
Исследовали 5 образцов плацент рожениц на
сроке беременности 38 недель. Образцы плаценты
получали при информированном согласии рожениц
и после прохождения теста на наличие вирусных
инфекций. Свежую плаценту отмывали от крови
физиологическим раствором, который несколько
раз меняли. Удаляли амниотические оболочки и
соединительнотканные участки котиледонов, за-
тем срезали тонкий слой ткани (3×2 см) в области
котиледонов. Полученные фрагменты плаценты
опускали в сосуд с физиологическим раствором в
соотношении 1:5 и перемешивали 2–3 мин, удаляли
надосадок и меняли физиологический раствор.
Процедуру повторяли 3–4 раза. Для получения вод-
но-солевых экстрактов отмытые кусочки плацен-
ты измельчали в течение 5 мин на высокоскорост-
ном гомогенизаторе MPW-302 (Польша) и разбав-
ляли физиологическим раствором в соотношении
1:1. Полученный гомогенат выдерживали 12 ч при
4°С, затем центрифугировали 15 мин при 1500g и
снимали надосадочную жидкость (водно-солевой
экстракт плаценты человека).
Экстракт плаценты автоклавировали в течение
10–15 мин в закрытых полимерных контейнерах
объемом 20 мл в смеси водяного пара с воздухом
в герметично закрытой емкости при температуре
120...122°С и давлении 1,8–2,0 атм. Затем нераст-
воримые агрегаты отфильтровывали через мемб-
ранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.
Эритроциты донорской крови II группы трижды
отмывали физиологическим раствором (pH 7,4) и
центрифугировали в течение 5 мин при 1500 g.
Клетки Candida аlbicans выращивали 48 ч на ага-
ризованной среде Сабуро [1] при 37°С и исследо-
вали в ростовой среде и в физиологическом раст-
воре. Клетки перевиваемой культуры эпителия поч-
ки свиньи (СПЭВ) выращивали при 37°С в рос-
товой среде 199 с добавлением 10% эмбриональ-
ной телячьей сыворотки [4]. Все клетки осаждали
центрифугированием в течение 5 мин при 1500g и
смешивали с экстрактом плаценты в соотношении
1:1, инкубировали в течение 2 ч, после чего замо-
раживали.
placentas were derived with an informed consent of
maternity patients and after tested absence of viral in-
fections. Fresh placenta was washed free of blood
with physiological solution, which was changed several
times. Amnion and connective tissue fragments of coty-
ledons were removed, then cut a slices (3×2 cm) of
cotyledon tissue. The obtained placental fragments we-
re placed into vessel with physiological solution in 1:5
ratio and mixed for 2–3 min, supernatant was re-moved
and physiological solution was changed. This procedure
was repeated 3–4 times. To derive aqueous-saline ex-
tracts the washed placenta was fragmented for 5 min
with a high-rate homogenizer MPW-302 (Poland) and
diluted with physiological solution in 1:1 ratio. The ob-
tained homogenate was exposed for 12 hrs at 4°C,
then centrifuged for 15 min at 1500 g and supernatant
was collected (aqueous-saline extract of human pla-
centa).
Placental extracts were autoclaved for 10–15 min
in closed polymer containers of 20 ml in the mixture of
aqueous vapor with air in pressurized tank at
120...122°C and 1.8–2.0 atm pressure. Then non-
soluble aggregates were filtrered out by membrane
filter with 0.45 µm pore diameter.
Erythrocytes of donor blood of II group were thrice
washed with physiological solution (pH 7.4) and centri-
fuged for 5 min at 1500 g. Candida albicans cells
were cultured for 48 hrs in Sabouraud agar [1] at 37°C
and used thereafter either in growth medium or phy-
siological saline. The cells of inoculated culture of pig
kidney epithelium (SPEV) were cultured at 37°C in
growth medium 199 supplemented with 10% embryonic
bovine serum [4]. All the cells were sedimented for 5
min at 1500g and mixed with placental extracts in 1:1
ratio, incubated for 2 hrs, and thereafter the specimens
were frozen.
Low temperature phase transitions within the tem-
perature ranges of 0...–196°C were studied with diffe-
rential scanning calorimeter (DSC) designed at the
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedi-
cine of the National Academy of Sciences of Ukraine
[2]. The samples were cooled with average rate of
3.3(3) deg/sec with the plunging into liquid nitrogen.
Thermograms were recorded during heating with the
rate of 8.3(3)×10–3 deg/sec. Error of temperature mea-
suring made ±0.2°C.
NMR-studies were performed with high resolution
spectrometer TESLA BS 567 A (Czech Republic). To
determine amount of bound water we used the method
of Kuntz [9], according to which motility of molecules
of bound water below 0°C remains high, and their
NMR-signal in protons appears as a narrow line while
a signal of frozen water broadens by several orders
and is not observed in high resolution spectra.
42 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
Исследования низкотемпературных фазовых
переходов в области температур 0...–196°С прово-
дили на дифференциальном сканирующем калори-
метре (ДСК), разработанном в ИПКиК НАН Ук-
раины [2]. Образцы охлаждали со средней ско-
ростью 3,3(3) град/с погружением в жидкий азот.
Термограммы регистрировали при нагреве со
скоростью 8,3(3)×10–3 град/с. Погрешность изме-
рения температуры составляла ±0,2 °С.
ЯМР-исследования проводили на спектрометре
высокого разрешения «TESLA BS 567 A» (Чехия).
Для определения количества связанной воды ис-
пользовали метод И.Кюнца [9], согласно которому
подвижность молекул связанной воды ниже 0°С
сохраняется высокой, а их ЯМР-сигнал на протонах
имеет вид узкой линии, в то время как сигнал
вымерзшей воды уширяется на несколько поряд-
ков и не регистрируется в спектрах высокого разре-
шения.
Результаты и обсуждение
На первом этапе исследовали низкотемпера-
турные фазовые переходы в эритроцитарном
осадке, осадке C. аlbicans в физиологическом
растворе и сусле, суспензии клеток СПЭВ, а также
в соответствующих средах.
Стрелками на рис.1 обозначены характерные
эндо- и экзотермические эффекты, которые класси-
фицированы нами по форме кривой и диапазону
температур согласно ранее полученных данных [2],
из которых видно, что во всех исследованных об-
разцах, кроме физиологического раствора, регист-
рируется размытый экзотермический пик 2, соот-
ветствующий завершению кристаллизации на эта-
пе нагрева. Этот пик на термограммах наблюдает-
ся в диапазоне температур от –25 до –46°С. На
термограмме физиологического раствора зарегис-
трирован острый пик эвтектического плавления
(пик 3) при температуре –21,3°С (рис. 1, A), харак-
терный для водных растворов NaCl. На ДСК-
термограммах среды суспендирования для клеток
СПЭВ (рис. 1, F) и клеток СПЭВ в суспедирующей
среде (рис. 1, G) также регистрируется пик плавле-
ния эвтектики значительно меньшей интенсивности.
Несмотря на присутствие различных солей в сус-
пендирующей среде для клеток СПЭВ, основной
вклад в развитие кристаллизации и плавления эв-
тектических составов вносит NaCl, о чём свиде-
тельствует характерная для его водного раствора
температура плавления эвтектики. При темпера-
туре –73°С на термограмме среды суспендиро-
вания для клеток СПЭВ зарегистрирован экзотер-
мический пик 1, который отображает, вероятнее
всего, инверсию молекул, имеющих углерод-угле-
родные связи. Для названия данного эффекта в ли-
Results and discussion
At the first stage we studied low temperature phase
transitions in erythrocyte supernatant, C. albicans
suspension in physiological solution and wort, suspen-
sion of SPEV cells, as well as in appropriate media.
The arrows in Fig.1 points the characteristic endo-
and exothermic phenomena, which were classified as
for the shape of the curve and temperature range
according to the previous data [2], and it is seen that
in all the studied samples, except physiological saline,
a broadened exothermic peak 2 exists, which corres-
ponds to completed crystallization during heating. This
peak in thermograms is observed within the tempera-
ture range from –25 to –46°C. In thermogram of phy-
siological saline, a sharp peak of eutectic melting (peak
3) at –21.3°C (Fig. 1A) is found, which is characteristic
for aqueous solutions of NaCl. In DSC thermograms
of suspending medium for SPEV cells (Fig. 1F) and
Температура, °С
Temperature, °C
Те
пл
оп
ог
ло
щ
ен
ие
,
эн
до
H
ea
t
ab
so
rp
tio
n,
e
nd
o
Рис. 1. ДСК-термограммы: A – физиологический раст-
вор; B – эритроцитарная масса; C – C. albicans в физио-
логическом растворе; D – сусло; E – C. albicans в сусле;
F – среда суспендирования для клеток СПЭВ; G –
клетки СПЭВ в суспендирующей среде; 1 – инверсия
молекул; 2 – завершение кристаллизации льда при на-
греве; 3 – плавление эвтектики; 4 – плавление льда.
Fig. 1. DSC thermograms: A – physiological solution; B –
erythrocyte mass; C – C. albicans in physiological solu-
tion; D – wort; E – C. albicans in wort; F – suspending
medium for SPEV cells; G – SPEV cells in suspending
medium; 1 – molecule inversion; 2 – completion of ice
crystallization during heating; 3 – eutectic melting; 4 – ice
melting.
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
43
тературе используют термин «обращение конфигу-
рации», связанный с процессом изомеризации [3].
На ДСК-термограммах клеток СПЭВ в суспенди-
рующей среде при температуре –70°С также реги-
стрируется пик инверсии меньшей интенсивности.
На термограмме суспензии эритроцитов пик
плавления эвтектических составов не регистри-
руется, несмотря на то, что эритроциты отмывали
физиологическим раствором (рис. 1, B). Кристал-
лизация и плавление эвтектик в растворах крио-
протекторов и водно-солевых растворах исчезают
при добавлении в них гидрофильных органических
соединений, что, возможно, объясняется образова-
нием соединений криопротекторов и солей с орга-
ническими веществами [2].
При определенных температурах, характерных
для исследуемых систем, регистрируются пики
теплопоглощения 4, соответствующие процессу
плавления.
ДСК-термограммы ЭПЧ и его смесей с эритро-
цитами, клетками C. аlbicans и СПЭВ в соотно-
шении 1:1 приведены на рис. 2. Видно, что завер-
шение процесса кристаллизации при нагреве в ЭПЧ
(рис. 2, A) происходит при более низких температу-
рах по сравнению с температурами тех же процес-
сов в суспензиях клеток. Можно предположить, что
в исследуемых системах межмолекулярные взаи-
модействия между растворенными компонентами
запускают кинетические факторы, замедляющие
рост кристаллов льда [6]. Пик 3 на термограмме
ЭПЧ свидетельствует о том, что при охлаждении
экстракта произошла кристаллизация эвтектики.
ДСК-термограммы автоклавированного ЭПЧ
и его смеси с эритроцитами, клетками C. albicans
и СПЭВ приведены на рис. 3. Можно отметить,
что на термограмме автоклавированного экстрак-
та, в отличие от термограммы свежеприготовлен-
ного экстракта, пик 2, соответствующий процессу
завершения кристаллизации льда при нагреве, не
SPEV cells in suspending medium (Fig. 1G) the eutectic
melting peak characterized by a significantly lower
intensity is also found. In spite of present various salts
in suspending medium for SPEV cells, the main
contribution into crystallization and eutectic melting is
made by NaCl, as it is evidenced by temperature of
eutectic melting characteristic for its aqueous solution.
An exothermic peak 1 is present in thermogram at
–73°C for SPEV cells, which represents most probably
the inversion of molecules with carbon-carbon bonds.
This effect is called as ‘configuration transformation’,
and is associated with isomerization [3]. An inversion
peak of low intensity is also found at –70°C in DSC
thermograms of SPEV cells in suspending medium.
No peak of eutectic mixture melting was found in
thermogram of erythrocyte suspension, though the
erythrocytes were washed with physiological solution
(Fig. 1B). The signals of crystallization and melting of
eutectics in cryoprotective solutions and aqueous-sa-
line solutions disappear after addition of hydrophilic
organic compounds, and this could be probably explai-
ned by the formation of complexes of cryoprotectants
and salts with organic substances [2].
The peaks of thermal adsorption 4 relevant to
melting are recorded at certain temperatures charac-
teristic for the studied systems.
DSC thermograms of HPEs and their mixtures with
erythrocytes, C. albicans and SPEV cells in 1:1 ratio
are shown in Fig. 2. It can be seen that crystallization
completion under heating in HPEs (Fig. 2A) occurs
under lower temperatures if compared with the values
Температура, °С
Temperature, °C
Те
пл
оп
ог
ло
щ
ен
ие
,
эн
до
H
ea
t
ab
so
rp
tio
n,
e
nd
o
Рис. 2. ДСК-термограммы: A – водно-солевой экстракт
плаценты; B – эритроцитарная масса и экстракт пла-
центы (1:1); C – C. albicans в сусле и экстракт плаценты
(1:1); D – C. albicans в физиологическом растворе и
экстракт плаценты (1:1); E – клетки СПЭВ и экстракт
плаценты (1:1); 2 – завершение кристаллизации льда
при нагреве; 3 – плавление эвтектики; 4 – плавление
льда.
Fig. 2. DSC thermograms: A – aqueous-saline placental
extract; B – erythrocyte mass and placental extract (1:1);
C – C. albicans in wort and placental extract (1:1); D –
C. albicans in physiological saline and placental extract
(1:1); E – SPEV cells and placental extract (1:1); 2 – com-
pletion of ice crystallization during heating; 3 – eutectic
melting; 4 – ice melting.
44 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
регистрируется. Очевидно, при охлаждении авто-
клавированного экстракта произошла кристаллиза-
ция всей жидкой фазы. При этом по данным метода
ЯМР-спектроскопии количество связанной воды
составляло всего 0,1–0,3% относительно всей воды
в системе. Интенсивность пика 3 плавления эвтек-
тических составов на термограмме автоклави-
рованного экстракта (рис. 3, A) значительно вы-
ше, чем свежеприготовленного (см. рис. 2, A), что
свидетельствует о кристаллизации большего коли-
чества эвтектического состава при охлаждении ав-
токлавированного экстракта. Этот факт может
быть связан с уменьшенным содержанием белка
в автоклавированных экстрактах и соответственно
меньшим количеством связанной воды. На термо-
грамме автоклавированного экстракта регистри-
руется экзотермический эффект инверсии молекул
(пик 1) при температуре –73°С.
На термограммах смеси автоклавированного
экстракта с эритроцитарным осадком (рис. 3, B),
клетками C. albicans в сусле (рис. 3,C) и в физио-
логическом растворе (рис. 3, D) пик плавления
эвтектических составов отсутствует. При этом ко-
личество связанной воды по данным ЯМР-спект-
роскопии составляло 8–11% для эритроцитов и 9–
12% для C. albicans относительно всей воды в
системе. Причем для последнего объекта значения
были такими же, как и без добавления экстракта,
что объясняется строением стенок этих клеток,
обусловливающим постоянную их форму в экстре-
мальных условиях, в том числе и при снижении
температуры. На термограмме смеси экстракта
с эритроцитами регистрируется размытый экзотер-
мический пик 2 в диапазоне –34...–46°C (рис. 3,
B), соответствующий, как указано выше, процессу
завершения кристаллизации льда при нагреве. Ин-
тенсивность этого процесса в смеси эритроцитов
characteristic for the same processes in cell suspen-
sions. It may be suggested that molecular interactions
in the studied systems among dissolved components
could activate kinetic factors, which inhibit growth of
ice crystals [6]. Peak 3 in thermogram of HPEs testi-
fies the presence of eutectic crystallization during
cooling of extract.
DSC thermograms of autoclaved HPE and its
mixture with erythrocytes, C. albicans and SPEV
cells are shown in Fig. 3. It should be noted that in
thermogram of autoclaved extract unlike the thermo-
gram of fresh extract there is no peak 2 corresponding
to completion of ice crystallization during heating. It is
obvious that during cooling of autoclaved extract the
whole liquid phase was crystallized. Moreover,
according to the NMR data an amount of bound water
made only 0.1–0.3% of all the water in system. Intensity
of peak 3 corresponding to the melting of eutectic
mixture in thermogram of autoclaved extract (Fig. 3A)
is significantly higher, than the peak of fresh extract
one (Fig. 2A), that testifies to crystallization of higher
amount of eutectic mixture during cooling of autoclaved
extract. This fact may be associated with a decreased
protein content in autoclaved extracts and, accordingly,
lower amount of bound water. In thermogram of auto-
claved extract an exothermic phenomenon of molecule
inversion (peak 1) is observed at –73°C.
In thermograms of mixture of autoclaved extract
with erythrocyte sediment (Fig. 3B), C. albicans cells
in wort (Fig. 3C) and physiological saline (Fig. 3D) no
peak of eutectic mixture melting is observed. Herewith,
Температура, °С
Temperature, °C
Те
пл
оп
ог
ло
щ
ен
ие
,
эн
до
H
ea
t
ab
so
rp
tio
n,
e
nd
o
Рис. 3. ДСК-термограммы: A – автоклавированный экс-
тракт плаценты; B – эритроцитарная масса и автоклави-
рованный экстракт плаценты (1:1); C – C. albicans в
сусле и автоклавированный экстракт плаценты (1:1);
D – C. albicans в физиологическом растворе и автокла-
вированный экстракт плаценты (1:1); E – клетки СПЭВ
в суспендирующей среде и автоклавированный экс-
тракт плаценты (1:1); 1 – инверсия молекул; 2 – завер-
шение кристаллизации льда при нагреве; 3 – плавле-
ние эвтектики; 4 – плавление льда.
Fig. 3. DSC thermograms: A – autoclaved placental ex-
tract; B – erythrocyte mass and autoclaved placental ex-
tract (1:1); C – C. albicans in wort and autoclaved placen-
tal extract (1:1); D – C. albicans in physiological solution
and autoclaved placental extract (1:1); E – SPEV cells in
suspending medium and autoclaved placental extract (1:1);
1 – molecule inversion; 2 – completion of ice crystalliza-
tion during heating; 3 – eutectic melting; 4 – ice melting.
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
45
the amount of bound water according to the NMR
data made 8–11% for erythrocytes and 9–12% for C.
albicans relatively to whole amount of water in the
system. Moreover, for the last object the values were
the same as in the case without extract, that could be
explained by the structure of walls of these cells,
responsible for their constant shape under extreme
conditions, including low temperatures. In thermogram
of mixture of extract with erythrocytes a broadened
exothermic peak 2 within the range of –34...–46°C is
found (Fig. 3B), which corresponds as mentioned
above to ice crystallization completion during heating.
Intensity of this process in the mixture of erythrocytes
and autoclaved extract is lower, than in erythrocyte
sediment (Fig. 1B). This fact is caused by lower
viscosity of erythrocyte suspension dissolved with
extract, where intercellular liquid does not affect the
ice crystallization completion during heating.
In DSC thermograms of mixtures of autoclaved
extract with SPEV and C. albicans cells in physiolo-
gical saline and wort (Fig. 3) no peak 2 is present, sin-
ce during heating of the sample no ice crystallization
completion occurs unlike mixtures of cell suspensions
and fresh extract (see Fig. 2). In the mixture of auto-
claved extract and SPEV cell suspension the melting
of eutectic mixture is observed unlike the mixture of
placental extract with erythrocytes or C. albicans
cells (Fig. 3). Moreover, the peak of eutectic mixture
melting is several times more intensive than in thermo-
grams of mixture of SPEV cell suspension with fresh
placental extract (Fig. 2G). In the mixtures of cell sus-
pensions and autoclaved extract the values of inversion
temperature (peak 1) increase by 3–7°C, that is
probably explained by binding of molecules, taking part
in inversion, with cell membranes and complicated de-
velopment of inversion. Usually the inversion proceeds
within narrow temperature range, however, we recor-
ded the peak within broadened temperature range.
Above mentioned fact is most likely stipulated by the
fact that the process of inversion involves the molecules
with close values of inversion temperature.
It was shown [5] that utilization of mild regimen of
autoclaving with a short heating period (15–20 min at
120...122°C and 1.8–2.0 atm pressure) resulted in a
complete denaturation of high-molecular proteins and
increase of amount of proteins and nucleotides with
molecular mass of 10–15 kDa enabling to preserve
antioxidant and biological activity of placental extracts
regarding to erythrocytes. Most likely, the regimen of
autoclaving selected by us and the resulted redistributed
by molecular masses proteins and nucleotides content
contributed to the changed phase behavior of mixture
of extracts and cell suspensions at the temperatures
below 0°C after their incubation with placental extracts
autoclaved by this regimen.
и автоклавированного экстракта ниже, чем в эрит-
роцитарном осадке (см. рис. 1, B). Этот факт обус-
ловлен меньшей вязкостью разбавленной экстрак-
том суспензии эритроцитов, в которой межклеточ-
ная жидкость не влияет на процесс завершения
кристаллизации льда на этапе нагрева.
На ДСК-термограммах смеси автоклавирован-
ного экстракта с клетками СПЭВ, C. albicans в
физиологическом растворе и сусле (рис. 3) пик 2
не регистрируется, так как на этапе нагрева образ-
ца процесс завершения кристаллизации льда не
развивается в отличие от смесей клеток со свеже-
приготовленным экстрактом (см. рис. 2). В смеси
автоклавированного экстракта и суспензии клеток
СПЭВ регистрируется процесс плавления эвтекти-
ческих составов в отличие от смеси экстракта пла-
центы с эритроцитами и клетками C. albicans
(рис. 3). Причем пик плавления эвтектических сос-
тавов в несколько раз интенсивнее, чем на термо-
граммах смеси суспензии клеток СПЭВ со свеже-
приготовленным экстрактом плаценты (см. рис. 2,
G). В смесях суспензий клеток и автоклавирован-
ного экстракта значения температуры инверсии
(пик 1) повышаются на 3–7°С, что, вероятно, объяс-
няется связыванием молекул, участвующих в
процессе инверсии, с клеточными мембранами
и затруднением развития процесса инверсии.
Обычно процесс инверсии протекает в узком
диапазоне температур, однако нами был зарегист-
рирован пик в более широком температурном
диапазоне. Вероятнее всего, вышеуказанный факт
обусловлен тем, что в процессе участвуют моле-
кулы со сходными значениями температуры ин-
версии.
Как отмечалось ранее [5], использование щадя-
щего режима автоклавирования с малым временем
нагрева (15–20 мин при температуре 120...122°С и
давлении 1,8–2,0 атм) приводит к полной денатура-
ции высокомолекулярных белков и увеличению ко-
личества белков и нуклеотидов с молекулярной
массой 10–15 кДа, что способствует сохранению
антиоксидантной и биологической активности экс-
трактов плаценты по отношению к эритроцитам.
Вероятно, что в условиях выбранного нами режима
автоклавирования такое перераспределение сос-
тава белков и нуклеотидов по молекулярным мас-
сам изменяет фазовое поведение смеси экстрак-
тов и суспензий клеток при температуре ниже 0°C
после их инкубирования с автоклавированными в
этом режиме экстрактами плаценты.
Выводы
В результате использования щадящего режима
автоклавирования на термограммах ДСК экстрак-
та плаценты человека наблюдается экзотерми-
46 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
ческий эффект при –73°С, вероятно, связанный с
инверсией молекул в ЭПЧ.
При замораживании автоклавированного ЭПЧ
происходит полная кристаллизации льда, о чем сви-
детельствует отсутствие размытого экзотермичес-
кого пика на термограммах ДСК, соответствующе-
го завершению кристаллизации льда при нагреве.
При этом количество связанной воды составляло
0,1–0,3% относительно всей воды в системе.
На термограммах ДСК автоклавированных
экстрактов увеличивается пик плавления эвтектики
на этапе нагрева, что свидетельствует о ее крис-
таллизации при замораживании. Однако в смеси
автоклавированного ЭПЧ с суспензиями эритроци-
тов и клетками C. albicans кристаллизация эвтек-
тических составов не развивается. При этом коли-
чество связанной воды существенно не увеличи-
вается относительно ее величины в суспензиях
клеток C. albicans без экстрактов.
Изменения состава экстракта плаценты чело-
века при автоклавировании (отсутствие белков и
нуклеотидов с высокими молекулярными массами
и увеличение их количества с низкими (ниже
15 кДа)) влияют на фазовые переходы при низких
температурах.
Conclusions
After using mild regimen of autoclaving of human
placental extract the exothermic phenomenon at –73°C
is observed in DSC thermograms, evidently, reflecting
the inversion of HPE molecules.
During freezing of autoclaved HPEs a complete
ice crystallization occurs, that is evident from the
absence of broad exothermic peak in DSC thermo-
grams, corresponding the completion of ice crystalliza-
tion during heating. Herewith, the amount of bound
water makes 0.1–0.3% of whole water in the system.
The peak of eutectic melting at heating increases
in DSC thermograms of autoclaved extracts, testifying
to eutectic crystallization during freezing. However, in
mixture of autoclaved HPEs with suspensions of
erythrocytes and C. albicans cells the crystallization
of eutectic mixtures was not developed. Herewith,
amount of bound water was not significantly increased
relatively to its amount in C. albicans cell suspension
without added extracts.
The changes of composition of human placental
extract at autoclaving (absence of proteins and
nucleotides of high molecular masses and increasing
number of molecules with low masses (below 15 kDa))
affect the phase transitions at low temperatures.
Литература
1. Вирина А.М., Фейгин А.М., Белоусова И.И. и др. Изменение
состава клеток Candida аlbicans при возникновении
резистентности к полиеновым антибиотикам // Микробио-
логия. – 1976. – Т. XLV, Вып. 4. – С. 679–682.
2. Зинченко А.В. Исследование фазовых переходов и
физических состояний водных растворов многоатомных
спиртов в диапазоне температур –150°С...0°С: Автореф.
дис. … канд. физ.–мат. наук. – Киев, 1983. – 20 с.
3. Потапов В.М. Стереохимия. – М.: Химия, 1988. – 463 с.
4. Розанов Л.Ф., Высеканцев И.П., Петренко Т.Ф. и др. Чувст-
вительность клеток перевиваемой клеточной линии
СПЭВ и грибов Candida albicans к процессам вне- и внутри-
клеточной кристаллизации // Проблемы криобиологии. –
2004. – №3. – С. 18–25.
5. Розанова С.Л., Щетинский М.И., Розанова Е.Д., Нардид О.А.
Некоторые свойства и биологическая активность авто-
клавированных экстрактов плаценты // Высокие техноло-
гии, фундаментальные и прикладные исследования. –
2010. – Т. 2. – С.90–94.
6. Шахпаронов М.И. Механизмы быстрых процессов в жид-
костях. – М.:Высш. шк., 1980. – 325 с.
7. Пат. 5120 Україна, МПК7 А 61 К 35/50. Спосіб переробки
тканини плаценти людини / В.І. Грищенко, О.І. Осецький,
Г.О. Бабійчук., Ю.Г. Федченко, М.І. Щетинський, М.О. Осець-
ка; заявлено 07.07.2004; опубл.15.02.2005, Бюл. №2.
8. Kuntz I. D. Hydration of macromolecules // J. Amer. Chem.
Soc. – 1971. – Vol. 93, №2. – P. 514–516.
9. Msogoya T. J., Maerere A. P., Nzogela Y. et. al. Changes in aci-
dity of plant growth media during heat sterilization // J. Applied
Biosciences. – 2008. – Vol. 10. – P. 488–490.
References
1. Virina A.M., Feygin A.M., Belousova I.I. et al. Change of composi-
tion of Candida albicans cells at occurrence of resistance to
polyene antibiotics // Mikrobiologiya. – 1976. – Vol. XLV,
Issue 4. – P. 679–682.
2. Zinchenko A.V. The studying of phase transitions and physical
states of aqueous solutions of polyatomic alcohols within the
temperature range of –150°C...0°C: Abstract of the thesis of
candidate of physical and mathematical sciences. – Kiev,
1983. – 20 p.
3. Potapov V.M. Stereochemistry. – Moscow: Khimiya, 1988. –
463 p.
4. Rozanov L.F., Vysekantsev I.P., Petrenko T.F. et al. Cell sensi-
tivity of recultured cell SPEV line and Candida albicans fungi
to extra- and intracellular crystallization processes // Problems
of Cryobiology. – 2004. – N3. – P. 18–25.
5. Rozanova S.L., Schetinsky M.I., Rozanova E.D., Nardid O.A.
Some properties and biological activity of autoclaved placental
extracts // Vysokie tekhnologii, fundamentalnye i prikladnye
issledovaniya. – 2010. – Vol. 2. – P. 90–94.
6. Shakhparonov M.I. Mechanisms of rapid processes in fluids. –
Moscow: Vysshaya shkola, 1980. – 325 p.
7. Patent 5120 (Ukraine), IPC7 A61K35/50. Treatment method of
human placental tissue / V.I. Grischenko, O.I. Osetskiy, G.O. Ba-
biychuk, Yu.G. Fedchenko, M.I. Schetinsky, M.O. Osetska;
Applied 07.07.2004; Publ. 15.02.2005. Bull. N2.
8. Kuntz I. D. Hydration of macromolecules // J. Amer. Chem.
Soc. – 1971. – Vol. 93, N2. – P. 514–516.
9. Msogoya T. J., Maerere A. P., Nzogela Y. et. al. Changes in aci-
dity of plant growth media during heat sterilization // J. Applied
Biosciences. – 2008. – Vol. 10. – P. 488–490.
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
47
10.Onuaguluchi G., Ghasi S. The pharmacological basis for the
use of dried placenta in traditional obstetric practice in Nigeria //
J. Ethnofarmacology. – 1996. – Vol. 54, №1. – P.27–36.
11.Shibasaki T., Odagiri E., Shizume K., Ling N. Corticotropinrelea-
sing factor like activity in human placental extracts // J. Clin
Endocrinol. Metab. – 1982. – Vol. 55. – P. 384–386.
12. Shinde V., Dhalwal K., Paradkar A.R. et. al. Evaluation of in–
vitro antioxidant activity of human placental extract // Pharma-
cology online. – 2006. – Vol. 3. – P. 172–179.
13. Togashi S., Takashi N., Kubo Y. et. al. Purification and identifi-
cation of antioxidant substances in human placenta extracts //
J. Health Sci. – 2000. – Vol. 46, №2. – P. 117–125.
10. Onuaguluchi G., Ghasi S. The pharmacological basis for the
use of dried placenta in traditional obstetric practice in Nigeria //
J. Ethnofarmacology. – 1996. – Vol. 54, №1. – P.27–36.
11.Shibasaki T., Odagiri E., Shizume K., Ling N. Corticotropinrelea-
sing factor like activity in human placental extracts // J. Clin
Endocrinol. Metab. – 1982. – Vol. 55. – P. 384–386.
12. Shinde V., Dhalwal K., Paradkar A.R. et. al. Evaluation of in–
vitro antioxidant activity of human placental extract // Pharma-
cology online. – 2006. – Vol. 3. – P. 172–179.
13. Togashi S., Takashi N., Kubo Y. et. al. Purification and identifi-
cation of antioxidant substances in human placenta extracts //
J. Health Sci. – 2000. – Vol. 46, N2. – P. 117–125.
48 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68702 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 2307-6143 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T15:20:16Z |
| publishDate | 2013 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Зинченко, А.В. Боброва, Е.Н. Щетинский, М.И. Говорова, Ю.С. 2014-09-27T10:35:00Z 2014-09-27T10:35:00Z 2013 Влияние автоклавированных экстрактов плаценты человека на фазовое поведение суспензий клеток при температуре ниже 0°С / А.В. Зинченко, Е.Н. Боброва, М.И. Щетинский, Ю.С. Говорова // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 1. — С. 40-48. — Бібліогр.: 13 назв. — рос., англ. 2307-6143 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68702 536.6:615.361.013.85:615.451.16 Исследовали фазовые переходы в экстрактах плаценты человека при замораживании до –196°С и влияние свежеприготовленного и автоклавированного экстрактов на фазовые переходы в клеточных суспензиях. Обнаружено, что после замораживания со скоростью 3,3(3)град/с в клеточных суспензиях и средах их суспендирования развивается процесс завершения кристаллизации на этапе нагрева со скоростью 8,3(3)×10–3 град/с. После разведения суспензий клеток Candida albicans и СПЭВ автоклавированным экстрактом этот процесс не регистрируется. Показано, что при замораживании экстрактов плаценты развивается кристаллизация эвтектических составов в отличие от смеси экстрактов с эритроцитами и клетками C. albicans. Досліджували фазові переходи в екстрактах плаценти людини при заморожуванні до –196°С та вплив свіжовиготовленого і автоклавованого екстрактів на фазові переходи в клітинних суспензіях. Виявлено, що після заморожування зі швидкістю 3,3(3)град/с в клітинних суспензіях і середовищах їх суспендування розвивається процес завершення кристалізації на етапі нагріву зі швидкістю 8,3(3)×10–3 град/с. Після розведення суспензій клітин Candida albicans і СПЕВ автоклавованим екстрактом цей процес не реєструється. Показано, що при заморожуванні екстрактів плаценти розвивається кристалізація евтектичних сумішей на відміну від суміші екстрактів з еритроцитами та клітинами C. albicans. Phase transitions in human placental extracts during cooling at –196°C and the effect of fresh and autoclaved extracts on phase transitions in cell suspensions were studied. It has been found that after cooling with the rate of 3.3(3)deg/s in cell suspensions or suspending media the process of crystallization termination developed at the stage of heating with the rate of 8.3(3)×10–3 deg/s. After dilution of the suspension of Candida albicans and SPEV cells with autoclaved extract this process was not observed. It was found that the crystallization of eutectic mixtures was developed in frozen placental extracts unlike the mixture of extracts with erythrocytes and C. albicans cells. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Теоретическая и экспериментальная криобиология Влияние автоклавированных экстрактов плаценты человека на фазовое поведение суспензий клеток при температуре ниже 0°С Influence of Autoclaved Placenta Extracts on Phase Behavior of Cell Suspensions below 0°C Article published earlier |
| spellingShingle | Влияние автоклавированных экстрактов плаценты человека на фазовое поведение суспензий клеток при температуре ниже 0°С Зинченко, А.В. Боброва, Е.Н. Щетинский, М.И. Говорова, Ю.С. Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| title | Влияние автоклавированных экстрактов плаценты человека на фазовое поведение суспензий клеток при температуре ниже 0°С |
| title_alt | Influence of Autoclaved Placenta Extracts on Phase Behavior of Cell Suspensions below 0°C |
| title_full | Влияние автоклавированных экстрактов плаценты человека на фазовое поведение суспензий клеток при температуре ниже 0°С |
| title_fullStr | Влияние автоклавированных экстрактов плаценты человека на фазовое поведение суспензий клеток при температуре ниже 0°С |
| title_full_unstemmed | Влияние автоклавированных экстрактов плаценты человека на фазовое поведение суспензий клеток при температуре ниже 0°С |
| title_short | Влияние автоклавированных экстрактов плаценты человека на фазовое поведение суспензий клеток при температуре ниже 0°С |
| title_sort | влияние автоклавированных экстрактов плаценты человека на фазовое поведение суспензий клеток при температуре ниже 0°с |
| topic | Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| topic_facet | Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68702 |
| work_keys_str_mv | AT zinčenkoav vliânieavtoklavirovannyhékstraktovplacentyčelovekanafazovoepovedeniesuspenziikletokpritemperatureniže0s AT bobrovaen vliânieavtoklavirovannyhékstraktovplacentyčelovekanafazovoepovedeniesuspenziikletokpritemperatureniže0s AT ŝetinskiimi vliânieavtoklavirovannyhékstraktovplacentyčelovekanafazovoepovedeniesuspenziikletokpritemperatureniže0s AT govorovaûs vliânieavtoklavirovannyhékstraktovplacentyčelovekanafazovoepovedeniesuspenziikletokpritemperatureniže0s AT zinčenkoav influenceofautoclavedplacentaextractsonphasebehaviorofcellsuspensionsbelow0c AT bobrovaen influenceofautoclavedplacentaextractsonphasebehaviorofcellsuspensionsbelow0c AT ŝetinskiimi influenceofautoclavedplacentaextractsonphasebehaviorofcellsuspensionsbelow0c AT govorovaûs influenceofautoclavedplacentaextractsonphasebehaviorofcellsuspensionsbelow0c |