Криоконсервирование суспензии клеток надпочечников новорожденных мышей. II. Влияние концентраций сыворотки в составе криозащитной среды
Изучали влияние концентраций фетальной телячьей сыворотки (ФТС) и диметилсульфоксида (ДМСО) в составе криозащитной среды на показатели жизнеспособности по исключению трипанового синего, сохранности количества и гормональной активности клеток надпочечников новорожденных мышей после замораживания-отта...
Saved in:
| Published in: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Date: | 2013 |
| Main Authors: | , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2013
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68705 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Криоконсервирование суспензии клеток надпочечников новорожденных мышей. II. Влияние концентраций сыворотки в составе криозащитной среды / И.В. Тамарина, Г.А. Божок, Т.М. Гурина, Н.Ф. Губина, Т.П. Бондаренко // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 1. — С. 66-74. — Бібліогр.: 22 назв. — рос., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68705 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Тамарина, И.В. Божок, Г.А. Гурина, Т.М. Губина, Н.Ф. Бондаренко, Т.П. 2014-09-27T10:41:43Z 2014-09-27T10:41:43Z 2013 Криоконсервирование суспензии клеток надпочечников новорожденных мышей. II. Влияние концентраций сыворотки в составе криозащитной среды / И.В. Тамарина, Г.А. Божок, Т.М. Гурина, Н.Ф. Губина, Т.П. Бондаренко // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 1. — С. 66-74. — Бібліогр.: 22 назв. — рос., англ. 2307-6143 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68705 57.043:612.45.018.1.085.23:547.569.2 Изучали влияние концентраций фетальной телячьей сыворотки (ФТС) и диметилсульфоксида (ДМСО) в составе криозащитной среды на показатели жизнеспособности по исключению трипанового синего, сохранности количества и гормональной активности клеток надпочечников новорожденных мышей после замораживания-оттаивания. Использование сыворотки в концентрации 10 и 25% позволило увеличить количество жизнеспособных клеток надпочечников новорожденных мышей по сравнению с бессывороточными средами. Наибольшие показатели жизнеспособности (от 71,4 до 76,0%) и сохранности (99,0%) наблюдались после замораживания-оттаивания клеток надпочечников в средах, содержащих 10, 15, 20% ДМСО и 25% ФТС. Однако гормональная и пролиферативная активности оказались снижены по сравнению с контрольной культурой. Вивчали вплив концентрацій фетальної телячої сироватки (ФТС) та диметилсульфоксиду (ДМСО) у складі кріозахисного середовища на показники життєздатності за виключенням трипанового синього, збереження та гормональної активності клітин наднирників новонароджених мишей після заморожування-відтавання. Використання сироватки у концентрації 10 або 25% дозволяє підвищити кількість життєздатних клітин наднирників новонароджених мишей у порівнянні з кріозахисними середовищами, які не містили сироватки. Найбільші показники життєздатності (від 71,4 до 76,0%) та збереження (99,0%) кількості клітин спостерігались після заморожування-відтавання суспензії клітин наднирників новонароджених мишей у середовищах із вмістом 10, 15, 20 ДМСО та 25% ФТС. Проте гормональна та проліферативна активності були нижчими у порівнянні з контрольною культурою. The effect of fetal bovine serum (FBS) and dimethylsulfoxide (DMSO) concentrations within cryoprotective medium on the viability indices by exclusion of trypan blue, survival and hormonal activity of adrenal cells of newborn mice after freeze-thawing has been studied. Application of 10 and 25% serum enabled to increase a number of viable adrenal cells of newborn rats if compared with serum-free media. The highest indices of viability (from 71.4 upto 76.0%) and survival (99.0%) were observed after freezethawing of adrenal cells in the media, containing 10, 15, 20% DMSO and 25% FBS. However, hormonal and proliferative activities were reduced if compared with the control culture. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Криоконсервирование биологических систем Криоконсервирование суспензии клеток надпочечников новорожденных мышей. II. Влияние концентраций сыворотки в составе криозащитной среды Cryopreservation of Newborn Mice Adrenal Cell Suspension. II. Effect Caused by Concentration of Serum as Component of Cryoprotective Medium Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Криоконсервирование суспензии клеток надпочечников новорожденных мышей. II. Влияние концентраций сыворотки в составе криозащитной среды |
| spellingShingle |
Криоконсервирование суспензии клеток надпочечников новорожденных мышей. II. Влияние концентраций сыворотки в составе криозащитной среды Тамарина, И.В. Божок, Г.А. Гурина, Т.М. Губина, Н.Ф. Бондаренко, Т.П. Криоконсервирование биологических систем |
| title_short |
Криоконсервирование суспензии клеток надпочечников новорожденных мышей. II. Влияние концентраций сыворотки в составе криозащитной среды |
| title_full |
Криоконсервирование суспензии клеток надпочечников новорожденных мышей. II. Влияние концентраций сыворотки в составе криозащитной среды |
| title_fullStr |
Криоконсервирование суспензии клеток надпочечников новорожденных мышей. II. Влияние концентраций сыворотки в составе криозащитной среды |
| title_full_unstemmed |
Криоконсервирование суспензии клеток надпочечников новорожденных мышей. II. Влияние концентраций сыворотки в составе криозащитной среды |
| title_sort |
криоконсервирование суспензии клеток надпочечников новорожденных мышей. ii. влияние концентраций сыворотки в составе криозащитной среды |
| author |
Тамарина, И.В. Божок, Г.А. Гурина, Т.М. Губина, Н.Ф. Бондаренко, Т.П. |
| author_facet |
Тамарина, И.В. Божок, Г.А. Гурина, Т.М. Губина, Н.Ф. Бондаренко, Т.П. |
| topic |
Криоконсервирование биологических систем |
| topic_facet |
Криоконсервирование биологических систем |
| publishDate |
2013 |
| language |
Russian |
| container_title |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Cryopreservation of Newborn Mice Adrenal Cell Suspension. II. Effect Caused by Concentration of Serum as Component of Cryoprotective Medium |
| description |
Изучали влияние концентраций фетальной телячьей сыворотки (ФТС) и диметилсульфоксида (ДМСО) в составе криозащитной среды на показатели жизнеспособности по исключению трипанового синего, сохранности количества и гормональной активности клеток надпочечников новорожденных мышей после замораживания-оттаивания. Использование сыворотки в концентрации 10 и 25% позволило увеличить количество жизнеспособных клеток надпочечников новорожденных мышей по сравнению с бессывороточными средами. Наибольшие показатели жизнеспособности (от 71,4 до 76,0%) и сохранности (99,0%) наблюдались после замораживания-оттаивания клеток надпочечников в средах, содержащих 10, 15, 20% ДМСО и 25% ФТС. Однако гормональная и пролиферативная активности оказались снижены по сравнению с контрольной культурой.
Вивчали вплив концентрацій фетальної телячої сироватки (ФТС) та диметилсульфоксиду (ДМСО) у складі кріозахисного середовища на показники життєздатності за виключенням трипанового синього, збереження та гормональної активності клітин наднирників новонароджених мишей після заморожування-відтавання. Використання сироватки у концентрації 10 або 25% дозволяє підвищити кількість життєздатних клітин наднирників новонароджених мишей у порівнянні з кріозахисними середовищами, які не містили сироватки. Найбільші показники життєздатності (від 71,4 до 76,0%) та збереження (99,0%) кількості клітин спостерігались після заморожування-відтавання суспензії клітин наднирників новонароджених мишей у середовищах із вмістом 10, 15, 20 ДМСО та 25% ФТС. Проте гормональна та проліферативна активності були нижчими у порівнянні з контрольною культурою.
The effect of fetal bovine serum (FBS) and dimethylsulfoxide (DMSO) concentrations within cryoprotective medium on the viability indices by exclusion of trypan blue, survival and hormonal activity of adrenal cells of newborn mice after freeze-thawing has been studied. Application of 10 and 25% serum enabled to increase a number of viable adrenal cells of newborn rats if compared with serum-free media. The highest indices of viability (from 71.4 upto 76.0%) and survival (99.0%) were observed after freezethawing of adrenal cells in the media, containing 10, 15, 20% DMSO and 25% FBS. However, hormonal and proliferative activities were reduced if compared with the control culture.
|
| issn |
2307-6143 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68705 |
| citation_txt |
Криоконсервирование суспензии клеток надпочечников новорожденных мышей. II. Влияние концентраций сыворотки в составе криозащитной среды / И.В. Тамарина, Г.А. Божок, Т.М. Гурина, Н.Ф. Губина, Т.П. Бондаренко // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 1. — С. 66-74. — Бібліогр.: 22 назв. — рос., англ. |
| work_keys_str_mv |
AT tamarinaiv kriokonservirovaniesuspenziikletoknadpočečnikovnovoroždennyhmyšeiiivliâniekoncentraciisyvorotkivsostavekriozaŝitnoisredy AT božokga kriokonservirovaniesuspenziikletoknadpočečnikovnovoroždennyhmyšeiiivliâniekoncentraciisyvorotkivsostavekriozaŝitnoisredy AT gurinatm kriokonservirovaniesuspenziikletoknadpočečnikovnovoroždennyhmyšeiiivliâniekoncentraciisyvorotkivsostavekriozaŝitnoisredy AT gubinanf kriokonservirovaniesuspenziikletoknadpočečnikovnovoroždennyhmyšeiiivliâniekoncentraciisyvorotkivsostavekriozaŝitnoisredy AT bondarenkotp kriokonservirovaniesuspenziikletoknadpočečnikovnovoroždennyhmyšeiiivliâniekoncentraciisyvorotkivsostavekriozaŝitnoisredy AT tamarinaiv cryopreservationofnewbornmiceadrenalcellsuspensioniieffectcausedbyconcentrationofserumascomponentofcryoprotectivemedium AT božokga cryopreservationofnewbornmiceadrenalcellsuspensioniieffectcausedbyconcentrationofserumascomponentofcryoprotectivemedium AT gurinatm cryopreservationofnewbornmiceadrenalcellsuspensioniieffectcausedbyconcentrationofserumascomponentofcryoprotectivemedium AT gubinanf cryopreservationofnewbornmiceadrenalcellsuspensioniieffectcausedbyconcentrationofserumascomponentofcryoprotectivemedium AT bondarenkotp cryopreservationofnewbornmiceadrenalcellsuspensioniieffectcausedbyconcentrationofserumascomponentofcryoprotectivemedium |
| first_indexed |
2025-11-25T21:07:08Z |
| last_indexed |
2025-11-25T21:07:08Z |
| _version_ |
1850549112631459840 |
| fulltext |
УДК 57.043:612.45.018.1.085.23:547.569.2
И.В. Тамарина*, Г.А. Божок, Т.М. Гурина, Н.Ф. Губина, Т.П. Бондаренко
Криоконсервирование суспензии клеток надпочечников
новорожденных мышей.
II. Влияние концентраций сыворотки в составе криозащитной среды
UDC 611.651.1.018:57.043:616.089
I.V. Tamarina*, G.A. Bozhok, T.M. Gurina, N.F. Gubina, T.P. Bondarenko
Cryopreservation of Newborn Mice Adrenal Cell Suspension.
II. Effect Caused by Concentration of Serum
as Component of Cryoprotective Medium
Реферат. Изучали влияние концентраций фетальной телячьей сыворотки (ФТС) и диметилсульфоксида (ДМСО) в
составе криозащитной среды на показатели жизнеспособности по исключению трипанового синего, сохранности количества
и гормональной активности клеток надпочечников новорожденных мышей после замораживания-оттаивания. Ис-
пользование сыворотки в концентрации 10 и 25% позволило увеличить количество жизнеспособных клеток надпочечников
новорожденных мышей по сравнению с бессывороточными средами. Наибольшие показатели жизнеспособности (от 71,4
до 76,0%) и сохранности (99,0%) наблюдались после замораживания-оттаивания клеток надпочечников в средах, содер-
жащих 10, 15, 20% ДМСО и 25% ФТС. Однако гормональная и пролиферативная активности оказались снижены по сравнению
с контрольной культурой.
Ключевые слова: криоконсервирование, надпочечники, новорожденные мыши, ДМСО.
Реферат. Вивчали вплив концентрацій фетальної телячої сироватки (ФТС) та диметилсульфоксиду (ДМСО) у складі
кріозахисного середовища на показники життєздатності за виключенням трипанового синього, збереження та гормональної
активності клітин наднирників новонароджених мишей після заморожування-відтавання. Використання сироватки у
концентрації 10 або 25% дозволяє підвищити кількість життєздатних клітин наднирників новонароджених мишей у порівнянні
з кріозахисними середовищами, які не містили сироватки. Найбільші показники життєздатності (від 71,4 до 76,0%) та збере-
ження (99,0%) кількості клітин спостерігались після заморожування-відтавання суспензії клітин наднирників новонароджених
мишей у середовищах із вмістом 10, 15, 20 ДМСО та 25% ФТС. Проте гормональна та проліферативна активності були
нижчими у порівнянні з контрольною культурою.
Ключові слова: кріоконсервування, наднирники, новонароджені миші, ДМСО.
Abstract. The effect of fetal bovine serum (FBS) and dimethylsulfoxide (DMSO) concentrations within cryoprotective medium on
the viability indices by exclusion of trypan blue, survival and hormonal activity of adrenal cells of newborn mice after freeze-thawing
has been studied. Application of 10 and 25% serum enabled to increase a number of viable adrenal cells of newborn rats if compared
with serum-free media. The highest indices of viability (from 71.4 upto 76.0%) and survival (99.0%) were observed after freeze-
thawing of adrenal cells in the media, containing 10, 15, 20% DMSO and 25% FBS. However, hormonal and proliferative activities
were reduced if compared with the control culture.
Key words: cryopreservation, adrenal glands, newborn mice, DMSO.
Primary and chronic adrenal failure, pheochromo-
cytosis, Cushing syndrome, hemochromatosis, hyper-
aldosteronism are characteristic for pathological states
of adrenal glands. Due to prevalence of genetic disor-
ders and diseases of adrenal system it is necessary to
study adrenal glands both in physiological [20, 21] and
pathological conditions [17, 22]. Tissue or cell culturing
is one of the widespread methods to research organ
оригинальное исследование research article
*Адрес для корреспонденции:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015;
тел.: (+38 057) 373-30-07, факс: (+38 057) 373-30-84,
электронная почта: tamarinai@mail.ru
* Address for correspondence:
23, Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015;
tel.:+380 57 373 3007, fax: +380 57 373 3084,
e-mail: tamarinai@mail.ru
Department of Cryobiochemistry and Pharmacology of Neurohu-
moral Systems, Institute for Problems of Cryobiology and
Cryomedicine of the National Academy of Sciences of Ukraine,
Kharkov, Ukraine
Отдел криобиохимии и фармакологии нейрогуморальных систем,
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины,
г. Харьков
Поступила 27.11.2012
Принята в печать 30.01.2013
Проблемы криобиологии и криомедицины. – 2013. – Т. 23, №1. – С. 66–74.
© 2013, Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины
Received November, 27, 2012
Accepted January, 30, 2013
Problems of Cryobiology and Cryomedicine. – 2013. – Vol. 23, Nr. 1. – P. 66–74.
© 2013 Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
Для патологического состояния надпочечников
характерны первичная, хроническая надпочечни-
ковая недостаточность, феохромоцитоз, синдром
Кушинга, гемохроматоз, гиперальдостеронизм.
Вследствие распространенности генетических
нарушений и заболеваний адреналовой системы
необходимо изучение надпочечников как в фи-
зиологических условиях [20, 21], так и при пато-
логии [17, 22]. Одним из широко распространенных
методов исследования особенностей развития и
функционирования органа, а также влияния на него
внешних факторов является культивирование ткани
или клеток. При необходимости сохранения сус-
пензии клеток надпочечников в течение времени,
превышающего максимальный срок гипотер-
мического хранения, важна разработка способа ее
долгосрочного низкотемпературного хранения. В
настоящее время описаны режимы замораживания
органотипической культуры надпочечников ново-
рожденных поросят [3], клеток взрослых крыс [1,
19] и новорожденных мышей [2]. Однако показа-
тели жизнеспособности клеток надпочечников,
отмеченные в этих работах, составили 50–65% от
их жизнеспособности в незамороженных образ-
цах, что обусловило актуальность поиска новых
режимов замораживания, включая разработку но-
вых составов криопротекторных сред.
В наших предыдущих исследованиях установ-
лено, что в условиях криоконсервирования клеток
надпочечников с ДМСО в широком диапазоне
концентраций (от 5 до 30%) наивысшие показатели
жизнеспособности были при использовании 10, 15
и 20%-х растворов криопротектора [2].
Общепринято, что ДМСО в высоких концентра-
циях оказывает негативные эффекты на многие
клеточные функции. Ранее установлено [11], что
культивирование клеток почки макаки Резус в
присутствии 7,5–15% ДМСО в течение 10–60 мин
приводит к аккумуляции липидов, увеличению
числа лизосом, дегрануляции шероховатого ЭПР,
набуханию и повреждению митохондриальных
мембран. Qi W. и соавт. [15] показали, что при
инкубации кохлеарной органотипической культуры
в течение суток в присутствии 0,5–6% ДМСО
наблюдаются набухание и уменьшение количества
клеток волосяных фолликулов.
По данным предыдущих исследований одним
из дополнительных компонентов сред, используе-
мых для криоконсервирования клеток, могут выс-
тупать белковые добавки, обладающие криозащит-
ными свойствами [6, 9 11]. Например, в работе Ус-
тиченко В.Д. [3] показано, что использование
фетальной телячьей сыворотки (ФТС) в составе
криозащитной среды повышает жизнеспособность
и гормональную активность клеток надпочечников
новорожденных поросят после замораживания-
оттаивания. Концентрации ФТС 10% [1] и 25% [4]
используются в составе криозащитных сред для
криоконсервирования надпочечников новорожден-
ных поросят и взрослых крыс.
Dimasi L. и соавт. [6] установили, что показатель
жизнеспособности клеток линий CHO и Sp2/0, за-
мороженных-оттаянных в присутствии альбумина,
developmental and functional peculiarities, as well as
effect of external factors on it. If preserving adrenal
cell suspension is required for the time exceeding maxi-
mum term provided by hypothermic storage it is impor-
tant to develop the method of its long-term low-tempe-
rature storage. Nowadays, the freezing regimens of
organotypic culture of adrenal glands of newborn pig-
lets [3], cells of adult rats [1, 19] and newborn mice
[2] have been described. However, the indices of adre-
nal cell viability presented in these papers made 50–
65% of their viability in non-frozen samples, that made
searching the new freezing regimens relevant, including
the development of new compositions of cryoprotective
media.
In our previous research we established that under
freeze-thawing of adrenal cells in solutions of DMSO
of wide concentration range (from 5 to 30%) the hi-
ghest indices of viability were observed when using
10, 15 and 20% solutions of cryoprotectant [2].
It is commonly accepted that DMSO of high con-
centrations negatively affects many cell functions. It
was found previously [11] that culturing of cells of
Rhesus monkey kidney in the presence of 7.5–15%
DMSO for 10–60 min resulted in accumulation of lipids,
the increasing of lysosomes number, degranulation of
rough endoplasmic reticulum, swelling and damage of
mitochondrial membranes. Qi W. et al. [15] showed
that incubation of cochlear organotypic culture for
24 hrs in the presence of 0.5–6% DMSO resulted in
swelling and reducing of hair follicle cell number.
According to the previously reported data [6, 9, 11]
as additional components of cell cryopreservation
media could serve the protein additives, possessing
cryoprotective properties. For example, Ustichenko
V.D. [3] reported that using fetal calf serum (FCS) as
a component of cryoprotective medium resulted in an
increase of post-thaw viability and hormonal activity
of adrenal cells of newborn piglets. FCS concentrations
of 10 [1] and 25% [4] were used as a component of
cryoprotective media for cryopreservation of adrenal
glands of newborn piglets and adult rats.
Dimasi L. et al. [6] established that viability of CHO
and Sp2/0 cells frozen-thawed in the presence of albu-
min was not significantly differed from the index found
in the case of using FCS. Freeze-thawing of bone
marrow hemopoietic cells performed in DMSO rich
medium (20%) supplemented with homologous serum
resulted in preservation of colony-forming units [9].
Sericine, a protein of silk, has been successfully used
for cryopreservation of cells of different lines [18].
The research aim was to study the effect of different
concentrations of fetal calf serum, as a component of
cryoprotective medium based on DMSO, on post-thaw
viability and morphofunctional properties of adrenal
cells of newborn mice.
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
67
достоверно не отличается от таковых в ФТС. При
криоконсервировании гемопоэтических клеток
костного мозга добавление гомологической сыво-
ротки в среду с высоким содержанием ДМСО
(20%) способствовало сохранению колониеобра-
зующих единиц [9]. Серицин – белок, входящий в
состав шелка, с успехом был использован при крио-
консервировании клеток различных линий [18].
Целью нашей работы было изучить влияние раз-
личных концентраций фетальной телячьей сыво-
ротки в составе криозащитной среды, включающей
ДМСО, на жизнеспособность и морфофункцио-
нальные свойства клеток надпочечников новорож-
денных мышей после замораживания-оттаивания.
Материалы и методы
Исследования проводили в соответствии с «Об-
щими принципами экспериментов на животных»,
одобренными III Национальным конгрессом по био-
этике (2007, Киев) и согласованными с положения-
ми «Европейской конвенции о защите позвоночных
животных, используемых для экспериментальных
и других научных целей» (Страсбург, 1986).
Объектом исследования была суспензия клеток
надпочечников (СКН) новорожденных мышей от
1 до 4 суток обоих полов линий c57Black и CBH.
Клетки получали ферментативным способом с
использованием коллагеназы типа V или IA
(«Sigma», США) в концентрации 1 мг/мл [2] и куль-
тивировали в среде 199 с L-глутамином и HEPES
(«PAA», Австрия) в присутствии 10% ФТС («PAA»)
и атмосфере, обогащенной 5% CO2, при постоян-
ной влажности и температуре 37°С. Клетки культи-
вировали в 24-луночных планшетах («Sarstedt»,
Германия) и чашках Петри диаметром 35 мм
(«Sarstedt»). Посадочная плотность составляла
5×105 клеток на лунку планшета и 1×106 на чашку
Петри. Полностью среду культивирования заменя-
ли раз в 3–4 дня.
Суспензию клеток надпочечников заморажи-
вали в криозащитных средах с конечной концентра-
цией ДМСО 5; 7,5; 10; 15; 20 и 30% в присутствии
10 и 25% ФТС («PAA») со скоростью охлаждения
1 град/мин до –40°С при последующем погружении
контейнеров в жидкий азот. Отогревали образцы
на водяной бане при температуре 40°С, а затем
пошагово отмывали от криопротектора: каждые
60 с к 1 мл размороженной пробы добавляли после-
довательно 0,5; 0,5; 1 и 2 мл среды.
Жизнеспособность суспензии оценивали по
количеству клеток, которые исключали трипановый
синий, и выражали в процентном отношении к
общему количеству клеток. Сохранность вычисля-
ли как соотношение общего количества клеток пос-
ле оттаивания к количеству клеток до заморажива-
ния, выраженное в процентах. Количество расплас-
Materials and methods
The experiments were performed according to the
General Principles of Experiments in Animals, approved
by the 3rd National Congress in Bioethics (Kiev, 2007)
and agreed to the statements of the European Con-
vention for the Protection of Vertebrate Animals Used
for Experimental and Other Scientific Purposes (Stras-
bourg, 1986).
The research object was adrenal cell suspension
(ACS) of c57Black and CBH newborn mice of 1–4
days of both genders. The cells were obtained by enzy-
me method using type V or IA collagenase (Sigma,
USA) of 1 mg/ml [2] and cultured in medium 199 with
L-glutamine and HEPES (PAA, Austria) with 10%
FCS (PAA) in atmosphere with 5% CO2, constant
humidity and 37°C. The cells were cultured on 24-
well plate (Sarstedt, Germany) and 35 mm Petri dish
(Sarstedt). Seeding density made 5×105 cells per well
of plate and 1×105 cells per Petri dish. Culturing me-
dium was completely changed each 3–4 days.
Adrenal cell suspension was frozen in cryoprotec-
tive media with final concentration of DMSO of 5;
7.5; 10; 15; 20 and 30% with 10 and 25% FCS (PAA)
with the cooling rate of 1 degree/min down to –40°C,
thereafter the containers were plunged into liquid
nitrogen. The specimens were thawed in water bath
at 40°C and thereafter stepwise washed from cryopro-
tectant: 1 ml of frozen-thawed sample was gradually
supplemented with 0.5; 1 and 2 ml medium with 60 sec
intervals.
Suspension viability was assessed by the number
of cells, excluded Trypan blue, and expressed in per-
cents of total cell number. Survival was evaluated as a
ratio of post-thaw number of cells and cell number
prior to freezing and expressed in percentage. A num-
ber of flattened and attached cells was calculated in 5
vision fields after a complete change of medium and
expressed in percents to the number of flattened and
attached cells in culture which was not exposed to
cryopreservation. Aldosterone secretion was measured
by radioimmune assay with RIA Aldosterone test-kit
(Immunotech, France) in culturing media to the days
2, 4, 6, 8, 12 for the control culture and to the 2nd day
for thawed samples. Cell proliferation was visually
assessed by the area occupied by monolayer in respect
to the total surface of the well.
The data were processed with non-parametric
Mann-Whitney criterion. The data were expressed as
M ± m (n = 3). The results were considered as
significantly differing at p < 0.05.
Results and discussion
The experiments were performed with 10 and 25%
concentrations of FCS, widely used during freezing of
various cells, including adrenal cells [3, 4, 10]. It has
been established that the presence of FCS in cryo-
68 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
танных и прикрепленных клеток подсчитывали в 5
полях зрения после полной замены среды и выра-
жали в процентном отношении к количеству рас-
пластанных и прикрепленных клеток в культуре,
которая не подвергалась криоконсервированию.
Секрецию альдостерона измеряли радиоиммуноло-
гическим методом с помощью тест-набора «RIA
Aldosterone» («Immunotech», Франция) в средах
культивирования на 2, 4, 6, 8, 12-е сутки для контро-
ля и на 2-е сутки для проб после замораживания-
оттаивания. Пролиферацию клеток оценивали ви-
зуально по площади монослоя относительно общей
площади лунки.
При обработке данных использовали непарамет-
рический критерий Манна-Уитни, данные выража-
ли в виде M ± m (n = 3). Достоверно отличающи-
мися считали результаты при р < 0,05.
Результаты и обсуждение
В экспериментах использовали 10 и 25%-е кон-
центрации ФТС, наиболее часто применяемые при
замораживании различных клеток, включая клетки
надпочечников [3, 4, 10]. Установлено, что при-
сутствие ФТС в криозащитной среде недостоверно
увеличивало сохранность деконсервированных
СКН по сравнению с клетками, замороженными в
бессывороточной среде (рис. 1, A), кроме проб,
замороженных в присутствии 30% ДМСО. Сохран-
ность достоверно уменьшалась относительно
0
20
40
60
80
100
120
140
К 5 7,5 10 15 20 30
* *
*
*
*
Концентрация ДМСО, %
DMSO concentration, %
С
ох
ра
нн
ос
ть
, %
Su
rv
iv
al
, %
0
20
40
60
80
100
120
140
К 5 7,5 10 15 20 30
*
*
*
*
* *
*
*
*
*
Концентрация ДМСО, %
DMSO concentration, %
Ж
из
не
сп
ос
об
но
ст
ь,
%
Vi
ab
ilit
y,
%
Рис. 1. Сохранность (A) и жизнеспособность (B) СКН новорожденных мышей после замораживания-отогрева в
средах с различным содержанием ДМСО и ФТС: – без ФТС; – с 10% ФТС; – с 25% ФТС; К – контроль, клетки,
не подвергавшиеся замораживанию-оттаиванию,* – различия достоверны по отношению к контролю, p < 0,05.
Fig. 1. Survival (A) and viability (B) of ACS of newborn mice after freeze-thawing in the media with different content of
DMSO and FBS: – FCS-free; – with 10% FCS; – with 25% FCS; K – control, the cells not exposed to freeze-thaw-
ing; * – differences are significant relative to the control, p < 0.05.
protective medium insignificantly increased survival of
frozen-thawed ACS if compared with the cells, frozen-
thawed in serum-free medium (Fig. 1A), except the
case of 30% DMSO. The survival was significantly
reduced comparing to the control for the samples fro-
zen-thawed without FCS in 5 and 7.5% DMSO and
for all the cases with 30% DMSO. The viabilities of
ACS frozen in serum-free media and with FCS were
significantly different (Fig. 1B). For the cells frozen-
thawed in serum-free media the maximum indices of
viability made from 63.7 ± 6.4 upto 66.7 ± 7.3%, while
for the media, containing 10 and 25% FCS and 10, 15
and 20% DMSO they made from 71.4 ± 6.8 upto
76.0 ± 7.2% for the samples. No significant differences
were found in post-thaw viabilities between the media,
containing 10 and 25% FCS.
An important index of functional activity of ACS is
aldosterone secretion level. In the culture obtained from
freshly isolated ACS, aldosterone level to the 2–4th
day of culturing was 2155.27 ± 473.21 pg/ml/mln
(Table), starting from the 6th day of culturing there
was observed a sharp decrease of its secretion down
to 34.94 ± 26.80 pg/ml/mln. It may be likely associated
with the reduced aldosterone secretion, as well as pro-
liferation of adrenocortical cells in culture without the
required components of the medium, for example
endothelial factors [5], or ACTH [13].
Significant reduction of aldosterone secretion of
post-thaw ACS irrespective of composition of cryo-
BA
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
69
контроля для проб, замороженных-оттаянных без
ФТС в 5 и 7,5% ДМСО, и для всех проб, заморо-
женных-оттаянных с 30% ДМСО. Достоверные
различия имели показатели жизнеспособности
СКН, замороженных в бессывороточных средах
и в присутствии ФТС (рис. 1, B). Для клеток, за-
мороженных-оттаянных в бессывороточных сре-
дах, максимальные показатели жизнеспособности
составляли от 63,7 ± 6,4 до 66,7 ± 7,3%, для сред c
10 и 25% ФТС с содержанием ДМСО 10, 15 и
20% – от 71,4 ± 6,8 до 76,0 ± 7,2%. Достоверных
различий в уровне жизнеспособности после замо-
раживания-оттаивания между средами, содержа-
щими 10 и 25% ФТС, отмечено не было.
Важным показателем функциональной актив-
ности СКН является уровень секреции альдосте-
рона. В культуре, полученной из свежевыделенной
СКН, уровень альдостерона на 2–4-e сутки куль-
тивирования составлял 2155,27 ± 473,21 пг/мл/млн
(таблица), начиная с 6-х суток культивирования
наблюдалось резкое снижение его секреции до
34,94 ± 26,80 пг/мл/млн. Возможно, это связано со
снижением секреции альдостерона, а также проли-
ферации адренокортикальных клеток в культуре при
отсутствии необходимых компонентов среды, на-
пример эндотелиальных факторов [5], АКТГ [13].
Независимо от состава криозащитных сред
после криоконсервирования наблюдалось значи-
тельное снижение секреции альдостерона СКН в
процессе их культивирования (таблица). При этом
достоверно увеличивался уровень гормона после
замораживания-отогрева в ФТС-содержащих сре-
дах по сравнению с бессывороточными. Кроме
того, установлено, что с повышением концентрации
криопротектора увеличивалось содержание альдо-
стерона в среде культивирования. В образцах, за-
мороженных в присутствии 5 и 7,5% ДМСО,
содержание альдостерона в среде на 2-е и 3-и сутки
культивирования было ниже 10 пг/мл/млн клеток,
тогда как наивысший его уровень (326,49 ± 47,7 и
245,63 ± 39,1 пг/мл/млн клеток соответственно) был
характерен для СКН, замороженной-оттаянной в
присутствии 20% ДМСО и 25% ФТС.
Способность СКН к прикреплению и пролифе-
рации в процессе культивирования оценивали до и
после криоконсервирования и выражали в процент-
ном отношении к культуре, не подвергавшейся
замораживанию-оттаиванию. Как видно из рис. 2, A,
наибольшее количество прикрепленных клеток
характерно для СКН, замороженной-оттаянной в
ФТС-содержащих средах с 10, 15 и 20% ДМСО.
Наибольший процент распластанных клеток (51 ±
3,1%) установлен в культуре СКН, замороженной-
оттаянной в присутствии 20% ДМСО и 25% ФТС
(рис. 2, B). В остальных случаях количество рас-
пластанных клеток было достоверно ниже и сос-
Содержание альдостерона в среде культивирования
СКН новорожденных мышей после замораживания-
отогрева в средах с различным содержанием ДМСО
и ФТС (M ± m)
Content of aldosterone in medium during culturing of
ACS of newborn mice frozen-thawed in media with
different content of DMSO and FСS (M ± m)
%,ОСМДяицартнецноK
)СТФеивтстусто/еичилан(
%,noitatnecnocOSMD
)SCFfoecnesba/ecneserp(
,аноретсодьлаеинажредоС
котелкнлм/лм/гп
,tnetnocenoretsodlA
sllecfonlm/lm/gp
иктусе-2
2 dn yad
иктуси-3
3 dr yad
)SCFon/СТФзеб(5 68,2±64,3 65,4±79,1
)SCF%52/СТФ%52(5 41,9±76,12 31,31±20,42
)SCFon/СТФзеб(05,7 80,1±61,0 04,2±93,0
)SCF%52/СТФ%52(05,7 38,6±92,11 27,6±16,3
)SCFon/СТФзеб(01 3,2±60,0 88,1±70,0
)SCF%52/СТФ%52(01 73,02±82,341 18,21±98,36
)SCFon/СТФзеб(51 71,1±30,0 70,2±91,0
)SCF%52/СТФ%52(51 46,32±07,45 30,71±01,47
)SCFon/СТФзеб(02 10,2±60,0 96,1±61,0
SCF%52/)СТФ%52(02 ±94,623
17,74
±36,542
01,93
)SCFon/СТФзеб(03 89,0±20,0 40,2±50,0
)SCF%52/СТФ%52(03 31,01±51,1 10,2±60,0
protective media was observed during their culturing
(Table). Herewith a hormone level after freeze-thawing
in FCS-containing media if compared with serum-free
ones is significantly increased. Moreover, it has been
established that with the rise in cryoprotectant concent-
ration the aldosterone content in culturing medium was
also increased. In the samples frozen-thawed in the
presence of 5 and 7.5% DMSO the aldosterone content
in the medium to the 2nd and 3rd day of culturing was
lower than 10 pg/ml/mln of cells, whereas its maximum
level (326.49 ± 47.7 and 245.63 ± 39.1 pg/ml/mln of
cells, correspondingly) was characteristic for ACS
frozen-thawed with 20% DMSO and 25% FCS.
The ablity of cultured ACS to attach and proliferate
was assessed prior to and after freeze-thawing and
expressed in percentage ratio to non-frozen-thawed
culture. Fig. 2A shows that the highest number of
attached cells is characteristic for ACS frozen-thawed
in FCS-containing media with 10, 15 and 20% DMSO.
The highest percentage of the flattened cells (51 ±
3.1%) was revealed in ACS culture frozen-thawed in
the presence of 20% DMSO and 25% FCS (Fig. 2B).
70 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
5 7,5 10 15 20 30
*
*
*
*
*
* *
**
Концентрация ДМСО, %
DMSO concentration, %
Ко
ли
че
ст
во
к
ле
то
к,
%
C
el
l c
on
te
nt
, %
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
5 7,5 10 15 20 30
*
*
*
*
*
* * **
Концентрация ДМСО, %
DMSO concentration, %
Ко
ли
че
ст
во
к
ле
то
к,
%
C
el
l c
on
te
nt
, %
Рис. 2. Количество распластанных клеток в СКН новорожденных мышей после замораживания-отогрева в
криозащитных средах с различным содержанием ДМСО, 10% ФТС (A) и 25% ФТС (B) на 2-е сутки культивирования:
– общее количество клеток в поле зрения; – количество распластанных клеток (* – различия достоверны по
отношению к контролю, p < 0,05. Данные представлены в процентном отношении от показателя свежевыделенных
клеток).
Fig. 2. Number of flattened cells in ACS of newborn mice after freeze-thawing in cryoprotective media with different
content of DMSO, 10% FBS (A) and 25% FBS (B) to the 2nd day of culturing: – total number of cells in field of vision; –
content of flattened cells; * – differences are statistically significant comparing to the control, p < 0.05. The data are
presented as percentage of indices observed in freshly isolated cells.
тавляло от 0 до 24 ± 1,9% (для для всех концент-
раций ДМСО, кроме 20%).
В культуре, полученной из свежевыделенной
суспензии клеток надпочечников, выявлено нес-
колько основных морфологических типов клеток:
фибробластоподобные и эпителиоидные, а также ок-
руглые, имеющие при световой микроскопии жел-
то-коричневый цвет за счет многочисленных вклю-
чений (рис. 3, A). На 4-е сутки культивирования
наблюдается формирование монослоя, который в
среднем составлял 40–50% от площади поверх-
ности лунки. После криоконсервирования значи-
тельная пролиферативная активность клеток сох-
ранялась в образцах, замороженных в средах при 25%
ФТС и 10–20% ДМСО (рис. 3, B). В этих образцах
на 4-е сутки культивирования выявлен монослой
клеток, составляющий 10–15% от площади поверх-
ности лунки. Единичные островки деления клеток
наблюдались в образцах, замороженных с 10%
ФТС и 10–20% ДМСО, а также при использовании
5 и 7,5% ДМСО с ФТС и без нее (рис. 3, C). В об-
разцах, замороженных без сыворотки, наблюда-
лись одиночные прикрепленные клетки, признаки
формирования монослоя отсутствовали (рис. 3, D).
В целом было установлено позитивное влияние
добавок сыворотки в концентрациях 10 и 25% в
In other cases a number of flattened cells was signi-
ficantly lower and varied from 0 to 24 ± 1.9% (for all
concentrations of DMSO, except 20%).
In the culture obtained from freshly isolated suspen-
sion of adrenal cells we revealed some main morpho-
logical types of cells such as: fibroblastoid and epithe-
lioid ones as well as round-shaped stained yellow-brown
in transmission light microscopy due to multiple inclu-
sions (Fig. 3A). By the 4th day of culturing there was
observed monolayer formation, which occupied in ave-
rage 40–50% of a well surface. A significant post-
thaw proliferative activity of cells was found in the
samples frozen-thawed in the media frozen-thawed in
the presence of 25% FCS and 10–20% DMSO (Fig. 3B).
To the 4th day of culturing these samples had the cell
monolayer, occupied 10–15% of well surface. Single
areas with dividing cells were observed in the samples
frozen-thawed in the presence of 10% FCS and 10–
20% DMSO, as well in the case of 5 and 7.5% DMSO
with FCS and without it (Fig. 3C). In the samples fro-
zen-thawed without serum we revealed only single
attached cells, and no evidence of monolayer formation
(Fig. 3D).
Generally we found a positive effect of serum
supplements of 10 and 25% into composition of cryo-
protective media on indices of viability, survival, ability
BA
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
71
Рис. 3. Культуры клеток, полученные из свежевыделенной и криоконсервированных СКН на 4-е сутки: A – культура
из свежевыделенных клеток (1– фибробластоподобные клетки, 2 – эпителиодные клетки, 3 – хромаффинные
клетки); B – СКН, замороженная-отогретая в присутствии 20% ДМСО и 25% ФТС; C – СКН, замороженная-
отогретая в присутствии 20% ДМСО и 10% ФТС; D – СКН, замороженная-отогретая в присутствии 20% ДМСО.
Fig. 3. Cultures of cells, obtained from freshly isolated and frozen-thawed ACS to the 4th day: A – culture from freshly
isolated cells: 1 – fibroblastoid cells; 2 – epithelioid cells; 3 – chromaffin cells; B – ACS frozen-thawed in the presence
of 20% DMSO and 25% FСS; C – ACS frozen-thawed in the presence of 20% DMSO and 10% FCS; D – ACS frozen-
thawed in the presence of 20% DMSO.
состав криозащитных сред на показатели жизне-
способности, сохранности, способности к прикреп-
лению и росту, а также секреции альдостерона
клетками надпочечников новорожденных мышей.
Способность эндокринных клеток к синтезу
гормонов непосредственно связана с пространст-
венной организацией и взаимодействием компонен-
тов цитоскелета [8]. Для большинства клеток мле-
копитающих наиболее физиологичным состоянием
являются прикрепление к субстрату и распласты-
вание на нем. Поэтому данные о максимальном
уровне альдостерона в среде культивирования со-
гласуются с данными о максимальном количестве
распластанных клеток и их высокой пролифератив-
ной активностью для образца, замороженного под
защитой 20% ДМСО и 25% ЭТС (рис. 2, B; таблица).
Известно, что криозащитные свойства ДМСО
связаны с его способностью проникать через кле-
точную мембрану и связывать воду. Он также
оказывает негативное влияние, приводящее к не-
обратимым изменениям в клетках и их гибели.
Такие эффекты обусловлены типом исследуемых
клеток, концентрацией ДМСО и временем экспози-
ции с криопротектором. В частности, токсичность
данного криопротектора для клетки заключается
to attach and proliferate as well as to secrete aldo-
sterone in adrenal cells of newborn mice.
An ability of endocrine cells to synthesize hormones
is directly associated with three-dimensional organi-
zation and interaction of cytoskeleton components [8].
For the majority of mammalian cells the most physio-
logical state is to attach to a substrate and to flatten on
in. Therefore the obtained data of maximum aldoste-
rone level in culturing medium were correlated with
maximum number of flattened cells and their high
proliferative activity found in the samples frozen-
thawed under the protection of 20% DMSO and 25%
FCS (Fig. 2B, Table).
Cryoprotective properties of DMSO are known to
be associated with its ability to penetrate through cell
membrane and bind water. Its negative effects result
in irreversible changes in the cell and its death. These
effects are pre-conditioned by the type of the studied
cells, DMSO concentration and time of exposure with
cryoprotectant. In particular, the toxicity of this cryo-
protectant for a cell is expressed in the pore formation
in cytoplasmic membrane when DMSO concentration
exceeds 20% [12], as well as in replacement of water
molecules in hydrate envelope of macromolecules,
resulting in changing their properties [7, 14]. Despite
BA
C D
72 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
в том, что при его концентрации выше 20% в цито-
плазматической мембране образуются поры [12],
также замещаются молекулы воды в гидратной
оболочке макромолекул, что приводит к измене-
нию их свойств [7, 14]. Несмотря на цитотоксич-
ность, ДМСО остается одним из самых распрост-
раненных криопротекторов, а его применение вмес-
те с непроникающим криопротектором, например
ФТС, позволяет улучшить функциональные показа-
тели клеток после замораживания-оттаивания.
Использование сыворотки в качестве добавки
к криозащитным средам имеет ряд недостатков,
которые связаны с непостоянством состава, воз-
можностью контаминации вирусами, присутст-
вием в нем нежелательных биологически актив-
ных веществ [9, 16].
Поскольку альбумин составляет более 60%
белков сыворотки крови млекопитающих, то имен-
но с ним принято связывать криопротекторные
свойства сыворотки [18]. Было показано [6, 10],
что при замораживании овариальных клеток ки-
тайского хомяка и фолликулов овариальной ткани
человека, в зависимости от использования в ка-
честве добавки сыворотки или альбумина, жизне-
способность клеток и их пролиферативная актив-
ность достоверно не отличаются.
В следующей статье нами будет рассмотрена
возможность использования бычьего сывороточ-
ного альбумина и ДМСО для криоконсервирования
СКН.
Выводы
1. Использование 10 и 25% ФТС при криоконсер-
вировании СКН новорожденных мышей позволяет
увеличить количество жизнеспособных клеток
надпочечников новорожденных мышей по сравне-
нию с бессывороточными средами.
2. Наивысшие показатели жизнеспособности и
сохранности были характерны для клеток, заморо-
женных-оттаянных в присутствии 10, 15 и 20%
ДМСО и ФТС, однако гормонопродукция, коли-
чество прикрепленных и распластанных клеток, их
пролиферативная активность были достоверно
ниже контрольных значений.
of its cytotoxicity, DMSO has remained one of the
most widespread cryoprotectants and its application
with non-penetrating cryoprotectant, for example FCS
enables to improve functional indices of cells after
freeze-thawing.
Using of serum as a supplement to cryoprotective
media has some disadvantages, associated with
irregularity of it composition, possibility of viral conta-
mination and the presence in it of undesirable biolo-
gically active substances [9,16].
Albumin comprises more than 60% proteins of
mammalian blood serum, so namely it is associated
usually provide cryoprotective properties of serum [18].
It has been shown [6, 10] that the outcome (cell viability
and proliferative activity) of freeze-thawing of ovarian
cells of Chinese hamster and follicles of human ovarian
tissue was the same for the cases of using serum or
albumin as the additives to cryopreservation media.
In the next paper we will consider a possibility of
using bovine serum albumin and DMSO for cryopreser-
vation of ACS.
Conclusions
1. Application of 10 and 25% FCS during freeze-
thawing of ACS of newborn mice enabled to increase
the number of viable adrenal cells of newborn mice if
compared with the case of serum-free media.
2. The highest indices of viability and survival were
characteristic for the cells frozen-thawed in the
presence of 10, 15 and 20% DMSO and FCS, however
hormone secretion, number of attached and flattened
cells, their proliferative activity were significantly lower
than the control indices.
Литература
1. Дудецкая Г.В., Божок Г.А., Бондаренко Т.П. Влияние скорос-
ти охлаждения на сохранность зонально-дифференци-
рованных популяций клеток надпочечников крыс // Проб-
лемы криобиологии. – 2010.– Т. 20, №4.– С. 379–387.
2. Тамарина И. В., Божок Г.А., Гурина Т.М. и др. Криоконсер-
вирование суспензии клеток надпочечников новорож-
денных мышей: I. Влияние концентрации ДМСО в составе
криозащитной среды // Проблемы криобиологии. – 2012. –
Т. 22, №1. – С. 79–87.
3. Устиченко В.Д. Функціональні властивості надниркових
залоз новонароджених поросят при дії різних режимів
References
1. Dudetskaya G.V., Bozhok G.A., Bondarenko T.P. Effect of cool-
ing rate on integrity of zone-differentiated adrenal cell popu-
lations of rats // Problems of Cryobiology. – 2010. – Vol. 20,
N4. – P. 379–387.
2. Tamarina I.V., Bozhok G.A., Gurina T.M. et al. Cryopreservation
of newborn mice adrenal cell suspension: I. Concentration
effect of DMSO as cryoprotective medium component //
Problems of Cryobiology. – Vol. 22, N1. – P. 79–87.
3.Ustichenko V.D. Functional properties of newborn piglets’ adrenal
glands during effect of different freezing regimens: Author’s
Abstract of the Thesis ... Candidate of Biological Sciences. –
Kharkiv, 2008 – 20 p.
4.Sidorenko O.S., Bozhok G.A., Legach E.I. et al. Study of pos-
sibility to derive and cryopreserve adrenal cell primary culture
of newborn piglets // Problems of Cryobiology. – 2011. – Vol. 21,
N1. – P. 58–67.
5. Ansurudeen I., Kopprasch S., Ehrhart-Bornstein M. et al. Endo-
thelial cell-mediated regulation of aldosterone release from
human adrenocortical cells // Mol. Cel. Endocr. – 2007. –
Vol. 265, N3. – P. 150–156.
6. Dimasi L., Chirkova L., Malbasic M. et al. Recombinant albumin –
its role in cryopreservation and cell recovery [Electronic
document] // [web-site] http://www.novofarma.biozymes.com/
en/information-centre/posters-and-presentations/Documents/
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
73
заморожування: Автореф. дис. ... канд. біол. наук. – Харків,
2008. – 20 с.
4. Сидоренко О.С., Божок Г.А., Легач Е.И. и др. Изучение воз-
можности получения и криоконсервирования первичной
культуры клеток надпочечников новорожденных поросят //
Проблемы криобиологии. – 2011. – Т 21, №1. – С. 58–67.
5. Ansurudeen I., Kopprasch S., Ehrhart–Bornstein M. et al.
Endothelial cell–mediated regulation of aldosterone release
from human adrenocortical cells // Mol. Cel. Endocr. – 2007. –
Vol. 265, №3. – P. 150–156.
6. Dimasi L., Chirkova L., Malbasic M. et al. Recombinant albumin –
its role in cryopreservation and cell recovery [Электронный
документ] // [веб-сайт] http://www.novofarma.biozymes.com/
en/information-centre/posters-and-presentations/Documents/
Recombinant_albumin_%E2%80%93_role_in_cryopreservation_
and_cell[1].pdf (18.11.2012).
7. Fahy G., Lilley T., Linsdell H. et al. Cryoprotectant toxicity and
cryoprotectant toxicity reduction: In search of molecular mecha-
nisms // Cryobiology. – 1990. – Vol. 27, №3. – P. 247–268.
8. Flevaris P., Stojanovich A., Gong H. et al. A molecular switch
that controls cell spreading and retraction // JCB. – 2007. –
Vol. 179, №3. – P. 553–565.
9. Grill G., Porcellini A., Lucarelli G. Role of serum on cryo-
preservation and subsequent viability of mouse bone marrow
hemopoetic stem cells // Cryobiology. – 1980. – Vol. 17, N5. –
P. 516–520.
10. Hreinsson J., Zhang P., Swahn M. et al. Cryopreservation of
follicles in human ovarian cortical tissue. Comparison of serum
and human serum albumin in the cryoprotectant solutions //
Hum. Reprod. – 2003. – Vol. 18, №11. – P. 2420–2428.
11. Malinin G. Cytotoxic effect of dimethylsulfoxide on the ultra-
structure of cultured Rhesus kidney cells // Cryobiology. –
1973. – Vol. 10, №1. – P. 22–32.
12. Menorval M., Mir M., Fernendez L. et al. Effects of dimethyl
sulfoxide in cholesterol-containing lipid membranes: a
comparative study of experiments in silico and with cells //
PLoS. – 2012. – Vol. 7. – e41733.
13. O'Hare M., Neville A. Morphological responses to corticotrophin
and cyclic AMP by adult rat adrenocortical cells in monolayer
culture // J. Endocrinol. – 1973. – Vol. 56, №3. – P. 529–536.
14. Pogorelyi V. K., Turov V. V., Turov A. V. et al. Reaction of
serum albumin with dimethyl sulfoxide according to PMR
spectra of frozen aqueous solutions // Theor. Exp. Chem. –
1989. – Vol. 25, N1. – P. 93–97.
15. Qi W., Ding D., Salvi R., Cytotoxic effects of dimethyl sulphoxide
(DMSO) on cochlear organotypic cultures // Hear Res. –
2008. – Vol. 236. – P. 52–60.
16. Rossi C., Bridgman C., Kiesel G. Viral contamination of bovine
fetal lung cultures and bovine fetal serum // Am J. Vet Res. –
1980. – Vol. 41, N10. – P. 1680 –1681.
17. Santori C., Di Veroli C., Di Lazzaro F. et al. High prevalence of
thyroid disfunction in primary hyperaldosteronism // Recenti
Prog Med. – 2005. – Vol. 96, N 7–8. – P. 352–356.
18. Sasaki M., Kato Y., Yamada H. et al. Development of a novel
serum-free freezing medium for mammalian cells using the
silk protein sericin // Biotechnol. Appl. Biochem. – 2005. –
Vol. 42. – P. 183–188.
19. Till H., Stachel D., Muller-Hocker J. et al. Cryopreservation
and transplantation of fetal adrenal glands in adrenalectomized
rats // Eur. J. Pediatr. Surg. – 1998. – Vol. 8, №4. – P. 240–243.
20. Unsicker K., Allmendinger A., Stoeckel E. et al. Development
of adrenal chromaffin cells is largely normal in mice lacking
the receptor tyrosine kinase c-Ret // Mech. Dev. – 2003. –
Vol. 120, №3. – P. 299–304.
21. Unsicker K., Huber K., Schutz G. et al. The chromaffin cell
and its development // Neurochem Res. – 2005. – Vol. 30,
№6–7. – P. 921–925.
22. Villa S., Schutz I., Mainini E. et al. Probable role of obesity on
the adrenal response to acute stimulation with adrenocor-
ticotrophic hormone in eumenorrheic and hirsute, non-eume-
norrheic women // Minerva Endocrinol.– 1993. – Vol. 18, №1. –
P. 9–13.
Recombinant_albumin_%E2%80%93_role_in_cryopreservation_
and_cell[1].pdf (18.11.2012).
7. Fahy G., Lilley T., Linsdell H. et al. Cryoprotectant toxicity and
cryoprotectant toxicity reduction: In search of molecular mecha-
nisms // Cryobiology. – 1990. – Vol. 27, N3. – P. 247–268.
8. Flevaris P., Stojanovich A., Gong H. et al. A molecular switch
that controls cell spreading and retraction // JCB. – 2007. –
Vol. 179, N3. – P. 553–565.
9. Grill G., Porcellini A., Lucarelli G. Role of serum on cryo-
preservation and subsequent viability of mouse bone marrow
hemopoetic stem cells // Cryobiology. – 1980. – Vol. 17, N5. –
P. 516–520.
10. Hreinsson J., Zhang P., Swahn M. et al. Cryopreservation of
follicles in human ovarian cortical tissue. Comparison of serum
and human serum albumin in the cryoprotectant solutions //
Hum. Reprod. – 2003. – Vol. 18, N11. – P. 2420–2428.
11. Malinin G. Cytotoxic effect of dimethylsulfoxide on the ultra-
structure of cultured Rhesus kidney cells // Cryobiology. –
1973. – Vol. 10, N1. – P. 22–32.
12. Menorval M., Mir M., Fernendez L. et al. Effects of dimethyl
sulfoxide in cholesterol-containing lipid membranes: a
comparative study of experiments in silico and with cells //
PLoS. – 2012. – Vol. 7. – e41733.
13. O'Hare M., Neville A. Morphological responses to corticotrophin
and cyclic AMP by adult rat adrenocortical cells in monolayer
culture // J. Endocrinol. – 1973. – Vol. 56, N3. – P. 529–536.
14. Pogorelyi V. K., Turov V. V., Turov A. V. et al. Reaction of
serum albumin with dimethyl sulfoxide according to PMR
spectra of frozen aqueous solutions // Theor. Exp. Chem. –
1989. – Vol. 25, N1. – P. 93–97.
15. Qi W., Ding D., Salvi R., Cytotoxic effects of dimethyl sulphoxide
(DMSO) on cochlear organotypic cultures // Hear Res. –
2008. – Vol. 236. – P. 52–60.
16. Rossi C., Bridgman C., Kiesel G. Viral contamination of bovine
fetal lung cultures and bovine fetal serum // Am J. Vet Res. –
1980. – Vol. 41, N10. – P. 1680 –1681.
17. Santori C., Di Veroli C., Di Lazzaro F. et al. High prevalence of
thyroid disfunction in primary hyperaldosteronism // Recenti
Prog Med. – 2005. – Vol. 96, N 7–8. – P. 352–356.
18. Sasaki M., Kato Y., Yamada H. et al. Development of a novel
serum–free freezing medium for mammalian cells using the
silk protein sericin // Biotechnol. Appl. Biochem. – 2005. –
Vol. 42. – P. 183–188.
19. Till H., Stachel D., Muller-Hocker J. et al. Cryopreservation
and transplantation of fetal adrenal glands in adrenalectomized
rats // Eur. J. Pediatr. Surg. – 1998. – Vol. 8, N4. – P. 240–243.
20. Unsicker K., Allmendinger A., Stoeckel E. et al. Development
of adrenal chromaffin cells is largely normal in mice lacking
the receptor tyrosine kinase c-Ret // Mech. Dev. – 2003. –
Vol. 120, N3. – P. 299–304.
21. Unsicker K., Huber K., Schutz G. et al. The chromaffin cell
and its development // Neurochem Res. – 2005. – Vol. 30, N6–
7. – P. 921–925.
22. Villa S., Schutz I., Mainini E. et al. Probable role of obesity on
the adrenal response to acute stimulation with adrenocor-
ticotrophic hormone in eumenorrheic and hirsute, non-eume-
norrheic women // Minerva Endocrinol.– 1993. – Vol. 18, N1. –
P. 9–13.
74 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue1, 2013
|