Культивирование и дифференцировка мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека в составе носителей на основе хитиновых скелетов морских губок
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Datum: | 2013 |
| Hauptverfasser: | , , , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russisch |
| Veröffentlicht: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2013
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68732 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Культивирование и дифференцировка мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека в составе носителей на основе хитиновых скелетов морских губок / Е.Ю. Рогульская, В.В. Муценко, Е.Б Ревенко., Ю.А. Петренко, Г. Эрлих, А.Ю. Петренко // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 3. — С. 267-270. — Бібліогр.: 4 назв. — рос., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859487457277378560 |
|---|---|
| author | Рогульская, Е.Ю. Муценко, В.В. Ревенко, Е.Б. Петренко, Ю.А. Эрлих, Г. Петренко, А.Ю. |
| author_facet | Рогульская, Е.Ю. Муценко, В.В. Ревенко, Е.Б. Петренко, Ю.А. Эрлих, Г. Петренко, А.Ю. |
| citation_txt | Культивирование и дифференцировка мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека в составе носителей на основе хитиновых скелетов морских губок / Е.Ю. Рогульская, В.В. Муценко, Е.Б Ревенко., Ю.А. Петренко, Г. Эрлих, А.Ю. Петренко // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 3. — С. 267-270. — Бібліогр.: 4 назв. — рос., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| first_indexed | 2025-11-24T15:58:06Z |
| format | Article |
| fulltext |
УДК 611.018.26.085.23:593.4.147.12
Е.Ю. Рогульская1*, В.В. Муценко1, Е.Б. Ревенко1, Ю.А. Петренко1, Г. Эрлих2, А.Ю. Петренко1
Культивирование и дифференцировка мезенхимальных стромальных
клеток жировой ткани человека в составе носителей на основе хитиновых
скелетов морских губок#
UDC 611.018.26.085.23:593.4.147.12
O.Y. Rogulska1*, V.V. Mutsenko1, E.B. Revenko1, Y.A. Petrenko1, H. Ehrlich2, A.Y. Petrenko1
Culture and Differentiation of Human Adipose Tissue Mesenchymal Stromal
Cells within Carriers Based on Sea Sponge Chitin Skeletons#
Ключевые слова: мезенхимальные стромальные клетки, хитин, морские губки, носитель, тканевая инженерия.
Ключові слова: мезенхімальні стромальні клітини, хітин, морські губки, носій, тканева інженерія.
Key words: mesenchymal stromal cells, chitin, sea sponges, carrier, tissue engineering.
*Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015;
тел.: (+38 057) 373-30-34, факс: (+38 057) 373-30-84,
электронная почта: rog-helen@yandex.ru
*To whom correspondence should be addressed:
23, Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015;
tel.:+380 57 373 3034, fax: +380 57 373 3084,
e-mail: rog-helen@yandex.ru
1Department of Cryobiochemistry, Institute for Problems of Cryobi-
ology and Cryomedicine of the National Academy of Sciences of
Ukraine, Kharkov, Ukraine
2Institute of Experimental Physics, TU Bergakademie Freiberg,
Freiberg, Germany
1Отдел криобиохимии, Институт проблем криобиологии и
криомедицины НАН Украины, Харьков, Украина
2Институт экспериментальной физики, Фрайбергский
технический университет, Фрайберг, Германия
Поступила 15.06.2013
Принята в печать 30.08.2013
Проблемы криобиологии и криомедицины. – 2013. – Т. 23, №3. – С. 267–270.
© 2013 Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины
Received June, 15, 2013
Accepted August, 30, 2013
Problems of Cryobiology and Cryomedicine. – 2013. – Vol. 23, Nr. 3. – P. 267–270.
© 2013 Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
Тканевая инженерия – интенсивно развивающееся
направление биотехнологии, объединяющее принципы
клеточной биологии, медицины и материаловедения
с целью создания функциональных структур, спо-
собных заменить поврежденный орган или ткань при
трансплантации [2].
В качестве клеточной основы биоинженерных тка-
ней наиболее перспективными являются мезенхи-
мальные стромальные клетки (МСК), обладающие
высоким пролиферативным потенциалом и способ-
ностью к направленной мультилинейной дифферен-
цировке. Жировая ткань обладает рядом преимуществ
по сравнению с другими источниками МСК благода-
ря минимальной инвазивности процедуры получения,
относительной доступности материала и высокому
содержанию клеток-предшественников [4].
Основной задачей при разработке тканеинженер-
ных структур остается выбор оптимального носителя
для клеточной экспансии. В последние годы сущест-
венно возрос интерес исследователей к биотехноло-
гическому потенциалу различных видов морских
губок. Однако вопрос о возможности применения хи-
тиновых скелетов этих губок в регенеративной меди-
цине и тканевой инженерии остается открытым.
Целью настоящей работы было исследование рас-
пределения, метаболической активности и способ-
Tissue engineering is a rapidly developing field of
biotechnology that combines the principles of cell bio-
logy, medicine and material science and is aimed at the
development of functional structures to replace damaged
organ or tissue by transplantation [2].
As the cellular basis of bioengineered tissues the most
promising are mesenchymal stromal cells (MSCs), which
possess high proliferative potential and the ability for
directed multilineage differentiation. Adipose tissue has
some advantages compared with other sources of MSCs
due to minimal invasion of harvesting procedure, relative
availability of the material and high content of progenitor
cells [4].
The main objective in the design of tissue-engineered
structures is the selection of optimal scaffolds for cell
expansion. There is significant current interest and re-
search focus to biotechnological potential of the diffe-
rent species of marine sponges. However, the question
about application of chitin skeletons of these sponges in
regenerative medicine and tissue engineering is still open.
The aim of this study was to investigate the distri-
bution, metabolic activity and ability for directed diffe-
rentiation of human adipose tissue-derived MSCs within
chitin-based skeletons derived from marine sponges of
Verongida order (Aplysina fulva, Aplysina aerophoba,
Ianthella basta).
день стволовой клетки. краткое сообщение stem cell day. short communication
#This reseach was presented at minisymposium Stem Cell Day, held
in Kiev, Ukraine, on the 24th of May, 2013.
#Данное исследование было представлено на минисимпозиуме
«День стволовой клетки», проходившем 24 мая 2013 года в
г. Киеве.
ности к направленной дифференцировке МСК жи-
ровой ткани человека при культивировании в составе
скаффолдов на основе скелета морских губок пред-
ставителей отряда Verongida (Aplysina fulva, Aplysina
aerophoba, Ianthella basta).
Для выделения хитинового скелета образцы мор-
ских губок A. fulva, A. aerophoba и I. basta подвер-
гали ступенчатой обработке, как описано ранее [1].
Перед заселением клетками деминерализованные
скелеты морских губок разрезали на фрагменты
4×4×2 мм и на сутки помещали в 70%-й этиловый
спирт, после чего тщательно промывали раствором
Хенкса. Для заселения скаффолдов клетками ис-
пользовали перфузионный метод, ранее разработан-
ный в нашей лаборатории [3].
В работе использовали МСК жировой ткани че-
ловека 5–7-го пассажей, полученные после письмен-
ного согласия взрослых доноров с соблюдением
норм комиссии по биоэтике ИПКиК НАН Украины.
Клетки культивировали в среде α-MEM («Sigma»,
США), дополненной 10% эмбриональной сыворотки
(ЭС) крови крупного рогатого скота («РАА», Авст-
рия), 2 мМ L-глютамина, 50 ед/мл пенициллина и 50
мкг/мл стрептомицина при 37°С, 5% СО2 и 95%-й
влажности.
Прижизненные микроскопические наблюдения,
микрофотосъемку, а также анализ окрашенных азур-
эозином препаратов культур клеток выполняли с ис-
пользованием инвертированного микроскопа «Inver-
so Epi Fluor» («Ceti», Бельгия), снабженного цифро-
вой камерой «Nikon CoolPix 4500» («Nikon», Япо-
ния).
Метаболическую и пролиферативную активность
клеток в составе носителей на основе скелета мор-
ских губок оценивали с использованием редокс-
индикатора Alamar Blue (АВ) и выражали в условных
единицах флуоресценции (УЕФ), а также МТТ-теста.
Для индукции остеогенеза применяли среду α-
МЕМ, содержащую 10 % ЭС, 0,1 мкМ дексамета-
зона, 0,05 мМ аскорбиновой кислоты, 10 мМ глице-
рол-фосфата. Остеогенез выявляли по экспрессии
ще-лочной фосфатазы с использованием набора
«Fast Blue RR Salt», «Naphtol AS-MX Phosphate Alka-
line Solution kit № 85» («Sigma-Aldrich», США) со-
гласно инструкции производителя.
Индукцию адипогенеза проводили в среде
α-МЕМ, содержащей 0,5 мM 3-изобутил-1-метил-
ксантина, 1 мкM дексаметазона («Sigma-Aldrich»),
10 мкг/мл инсулина и 100 мкM индометацина
(«Sigma-Aldrich»). Адипогенную дифференцировку
клеток определяли по накоплению внутриклеточных
нейтральных липидов, которые позитивно окрашива-
лись раствором Oil Red O.
Матрицы, полученные после деминерализации и
очистки скелетов морских губок, представляли со-
Chitin-based skeletons from marine sponges A. fulva,
A. aerophoba and I. basta have been isolated by step-by-
step treatment as described previously [1]. Before cells
seeding the demineralized skeletons of marine sponges
were cut into pieces of 4×4×2 mm, placed in 70% ethanol
for 24 hrs and then thoroughly washed with Hank’s
solution. Scaffolds were seeded with cells using pre-
viously developed in our laboratory perfusion method [3].
The investigation was performed using MSCs of the
5–7th passages isolated from human adipose tissue after
informed donor consent in appliance with standards of
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
Bioethical Committee.
The cells were cultured in α-MEM (Sigma, USA)
supplemented with 10% fetal calf serum (FS) (PAA,
Austria), 2 mM L-glutamine, 50 U/ml penicillin and
50 µg/ml streptomycin at 37°C, 5% CO2 and 95% hu-
midity.
Intravital microscopic observation, microimaging and
analysis of the azure-eosin-stained cell cultures were
performed using an inverted microscope Inverso Epi Fluor
(Ceti, Belgium) equipped with a digital camera Nikon
CoolPix 4500 (Nikon, Japan).
Metabolic and proliferative activity of cells within
chitin-based skeletons derived from marine sponges was
assested by Redox indicator Alamar Blue (AB) and
expressed in relative fluorescence units (RFU) as well as
MTT assay.
Osteogenesis was induced in α-MEM medium sup-
plemented with 10% FS, 0.1 µM of dexamethasone,
0.05 mM of ascorbic acid, 10 mM of glycerol-phospha-
te.Osteogenesis was revealed by expression of alkaline
phosphatase using Fast Blue RR Salt, Naphtol AS-MX
Phosphate Alkaline Solution kit № 85 (Sigma-Aldrich,
USA) according to manufacturer’s instructions.
Adipogenesis was induced in α-MEM medium sup-
plemented with 0.5 mM of 3-isobutile-1-methyl-xanthine,
1 µM of dexamethasone (Sigma-Aldrich), 10 µg/ml of
insulin and 100 µM of indomethacine (Sigma-Aldrich).
Adipogenic differentiation was revealed by accumulation
of intracellular neutral lipids, positively stained with Oil
Red O.
Scaffolds obtained after demineralization and puri-
fication of marine sponge skeletons had translucent mac-
roporous structure formed by intersecting chitin fibrils.
After seeding human adipose tissue-derived MSCs
attached and spread on the surface of the chitin fibrils of
A. fulva and A. aerophoba, and uniformly distributed
over the entire volume of sponges. When culturing in the
scaffolds based on the I. basta skeletons the cells pro-
liferated actively and filled the space between the fibrils.
The assessment of MSCs metabolic activity after
populating the chitin-based skeletons of A. fulva and
A. aerophoba showed that the level of AB reduction was
2,157 RFU per sponge. This parameter was by 25–30%
lower compared to that of scaffolds based on I. basta
268 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 3, 2013
бой прозрачную сетчатую структуру
из хитиновых поперечносшитых фиб-
рилл.
После заселения МСК жировой
ткани человека прикреплялись и рас-
пластывались на поверхности хити-
новых тяжей A. fulva и A. aerophoba,
равномерно распределяясь в губках
от периферии к центру. При культиви-
ровании в составе матриц на основе
скелета I. basta клетки активно дели-
лись, постепенно заполняя все сво-
бодное пространство между тяжами.
При определении метаболической
активности МСК после заселения
носителей установлено, что в первые
сутки культивирования уровень вос-
становления редокс-индикатора АB в
губках A. fulva и A. aerophoba сос-
тавлял 2,157 УЕФ/губку и был на 25–
30% ниже показателей матриц на
основе I. basta. При последующем
культивировании МСК в составе гу-
бок A. fulva и I. basta интенсивность
флуоресценции продукта восстанов-
ления АВ возрастала, что свидетельст-
вовало о сохранении клетками метабо-
лической активности и способности
к пролиферации.
Следует отметить, что при длитель-
ном культивировании носители на
основе деминерализованного скелета
skeletons. Further culture of MSCs within A. fulva and
I. basta sponges resulted in rise of reduced AB fluores-
cence intensity, which indicated preservation of cell
metabolic activity and proliferative ability as well.
It should be noted that during prolonged culture the
chitin-based scaffolds derived from demineralized ske-
letons of A. aerophoba sponge disintegrated into indi-
vidual fibrils, the carriers became loose and unstable.
Therefore further investigation were conducted in chitin
scaffolds of A. fulva and I. basta.
Cell localization and distribution in the scaffolds to
the 14th day of culture were evaluated using MTT test.
It was determined that MSCs were uniformly distributed
within the entire volume of scaffolds and intensive accu-
mulation of formazan crystals indicated viability and me-
tabolic activity of cells within investigated matrices
(Fig. 1).
Induction of cells cultured in chitin-based sponge
skeletons into adipogenic direction resulted in accu-
mulation of intracellular neutral lipids (Fig. 2), which
were positively stained by Oil Red O. When cultured in
osteogenic medium most of the cells expressed alkaline
phosphatase (Fig. 3), being an early marker of osteo-
genesis.
Рис. 1. Распределение МСК в носителях на основе скелета морских губок
через 14 суток культивирования: A – A. fulva; B – I. basta. МТТ-тест, ×10.
Fig. 1. Distribution of MSCs within scaffolds based on skeletons derived from marine
sponges after 14 days of culture: A – A. fulva; B – I. basta. MTT test, ×10.
Рис. 2. Адипогенная дифференцировка МСК, культивированных в составе
деминерализованного скелета морских губок: A – срез носителя на основе
A. fulva; B – матрица на основе скелета I. basta. Окрашивание Oil Red O.
Fig. 2. Adipogenic differentiation of MSCs cultured within the demineralized skeletons
of marine sponges: A – section of scaffold based on A. fulva skeleton; B – scaffold
based on I. basta skeleton. Oil Red O staining.
губки A. aerophoba распадались на отдельные тяжи,
были рыхлыми и нестабильными. В связи с этим
дальнейшие исследования проводили на хитиновых
матрицах A. fulva и I. basta.
Для визуализации локализации клеток на 14-е
сутки культивирования использовали МТТ-тест.
Установлено, что структура губок позволяла МСК
равномерно распределяться во всем объеме носите-
лей, а интенсивное накопление кристаллов формазана
свидетельствовало о жизнеспособности и метаболи-
ческой активности клеток в составе исследуемых
матриц (рис. 1).
Индукция клеток, культивированных в объеме гу-
бок, в адипогенном направлении приводила к накоп-
лению нейтральных внутриклеточных липидов
(рис. 2), которые позитивно окрашивались раствором
Oil Red O. При культивировании в остеогенной среде
большинство клеток были позитивными по окрашива-
нию на щелочную фосфатазу (рис.3), которая яв-
ляется ранним маркером остеогенеза.
Таким образом, матрицы на основе скелета мор-
ских губок отряда Verongida обеспечивают адгезию,
пролиферацию и дифференцировку МСК жировой
ткани человека в остеогенном и адипогенном нап-
A B
A B
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 3, 2013
269
Литература
1. Ehrlich H., Ilan M., Maldonado M. et al. Three-dimensional chi-
tin-based scaffolds from Verongida sponges (Demospongiae:
Porifera). Part I. Isolation and identification of chitin //
International Journal of Biological Macromolecules. – 2010. –
Vol. 47, №2. – P. 132–140.
2. Langer R., Vacanti J.P. Tissue engineering // Science. – 1993. –
Vol. 260, №5110. – P. 920–926.
3. Petrenko Y.A., Ivanov R.V., Lozinsky V.I., Petrenko A.Y.
Comparison of the methods for seeding human bone marrow
mesenchymal stem cells to macroporous alginate cryogel
carriers // Bull. Exp. Biol. Med. – 2011. – Vol. 150, №4. –
P. 543–546.
4. Zuk P.A., Zhu M., Ashjian P. et al. Human adipose tissue is a
source of multipotent stem cells // Mol. Biol. Cell. – 2002. –
Vol. 13, №12. – P. 4279–4295.
References
1. Ehrlich H., Ilan M., Maldonado M. et al. Three-dimensional chitin-
based scaffolds from Verongida sponges (Demospongiae:
Porifera). Part I. Isolation and identification of chitin //
International Journal of Biological Macromolecules. – 2010. –
Vol. 47, N2. – P. 132–140.
2. Langer R., Vacanti J.P. Tissue engineering // Science. – 1993. –
Vol. 260, N5110. – P. 920–926.
3. Petrenko Y.A., Ivanov R.V., Lozinsky V.I., Petrenko A.Y.
Comparison of the methods for seeding human bone marrow
mesenchymal stem cells to macroporous alginate cryogel
carriers // Bull. Exp. Biol. Med. – 2011. – Vol. 150, N4. – P. 543–
546.
4. Zuk P.A., Zhu M., Ashjian P. et al. Human adipose tissue is a
source of multipotent stem cells // Mol. Biol. Cell. – 2002. –
Vol. 13, N12. – P. 4279–4295.
равлениях, что открывает широкие перспективы их
использования для создания новых биосовместимых
и функционально активных биоинженерных конс-
трукций.
Рис. 3. Остеогенная дифференцировка МСК,
культивированных в составе деминерали-
зованного скелета морских губок: А – срез
носителя на основе A. fulva с дифференци-
рованными клетками; B – клетки, экспрес-
сирующие щелочную фосфатазу в матрице
на основе скелета I. basta. Окрашивание
набором Fast Blue RR Salt.
Fig. 3. Osteogenic differentiation of MSCs cul-
tured within the demineralized skeletons of ma-
rine sponges: A – section of scaffold based on
A. fulva skeleton with differentiated cells, B –
cells expressing alkaline phosphatase in
scaffold based on I. basta skeleton. Fast Blue
RR Salt Kit staining.
Thus, the scaffolds based on skeletons derived from
marine sponges of Verongida order promote adhesion,
proliferation and differentiation into osteogenic and
adipogenic directions of human adipose tissue-derived
MSCs, which could provide broad opportunities for
creation of new biocompatible and functionally active
bioengineered structures.
A B
270 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 3, 2013
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68732 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 2307-6143 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-11-24T15:58:06Z |
| publishDate | 2013 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Рогульская, Е.Ю. Муценко, В.В. Ревенко, Е.Б. Петренко, Ю.А. Эрлих, Г. Петренко, А.Ю. 2014-09-27T16:28:57Z 2014-09-27T16:28:57Z 2013 Культивирование и дифференцировка мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека в составе носителей на основе хитиновых скелетов морских губок / Е.Ю. Рогульская, В.В. Муценко, Е.Б Ревенко., Ю.А. Петренко, Г. Эрлих, А.Ю. Петренко // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 3. — С. 267-270. — Бібліогр.: 4 назв. — рос., англ. 2307-6143 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68732 611.018.26.085.23:593.4.147.12 Данное исследование было представлено на минисимпозиуме «День стволовой клетки», проходившем 24 мая 2013 года в г. Киеве. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины День стволовой клетки. краткие сообщения Культивирование и дифференцировка мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека в составе носителей на основе хитиновых скелетов морских губок Culture and Differentiation of Human Adipose Tissue Mesenchymal Stromal Cells within Carriers Based on Sea Sponge Chitin Skeletons Article published earlier |
| spellingShingle | Культивирование и дифференцировка мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека в составе носителей на основе хитиновых скелетов морских губок Рогульская, Е.Ю. Муценко, В.В. Ревенко, Е.Б. Петренко, Ю.А. Эрлих, Г. Петренко, А.Ю. День стволовой клетки. краткие сообщения |
| title | Культивирование и дифференцировка мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека в составе носителей на основе хитиновых скелетов морских губок |
| title_alt | Culture and Differentiation of Human Adipose Tissue Mesenchymal Stromal Cells within Carriers Based on Sea Sponge Chitin Skeletons |
| title_full | Культивирование и дифференцировка мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека в составе носителей на основе хитиновых скелетов морских губок |
| title_fullStr | Культивирование и дифференцировка мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека в составе носителей на основе хитиновых скелетов морских губок |
| title_full_unstemmed | Культивирование и дифференцировка мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека в составе носителей на основе хитиновых скелетов морских губок |
| title_short | Культивирование и дифференцировка мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека в составе носителей на основе хитиновых скелетов морских губок |
| title_sort | культивирование и дифференцировка мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани человека в составе носителей на основе хитиновых скелетов морских губок |
| topic | День стволовой клетки. краткие сообщения |
| topic_facet | День стволовой клетки. краткие сообщения |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68732 |
| work_keys_str_mv | AT rogulʹskaâeû kulʹtivirovanieidifferencirovkamezenhimalʹnyhstromalʹnyhkletokžirovoitkaničelovekavsostavenositeleinaosnovehitinovyhskeletovmorskihgubok AT mucenkovv kulʹtivirovanieidifferencirovkamezenhimalʹnyhstromalʹnyhkletokžirovoitkaničelovekavsostavenositeleinaosnovehitinovyhskeletovmorskihgubok AT revenkoeb kulʹtivirovanieidifferencirovkamezenhimalʹnyhstromalʹnyhkletokžirovoitkaničelovekavsostavenositeleinaosnovehitinovyhskeletovmorskihgubok AT petrenkoûa kulʹtivirovanieidifferencirovkamezenhimalʹnyhstromalʹnyhkletokžirovoitkaničelovekavsostavenositeleinaosnovehitinovyhskeletovmorskihgubok AT érlihg kulʹtivirovanieidifferencirovkamezenhimalʹnyhstromalʹnyhkletokžirovoitkaničelovekavsostavenositeleinaosnovehitinovyhskeletovmorskihgubok AT petrenkoaû kulʹtivirovanieidifferencirovkamezenhimalʹnyhstromalʹnyhkletokžirovoitkaničelovekavsostavenositeleinaosnovehitinovyhskeletovmorskihgubok AT rogulʹskaâeû cultureanddifferentiationofhumanadiposetissuemesenchymalstromalcellswithincarriersbasedonseaspongechitinskeletons AT mucenkovv cultureanddifferentiationofhumanadiposetissuemesenchymalstromalcellswithincarriersbasedonseaspongechitinskeletons AT revenkoeb cultureanddifferentiationofhumanadiposetissuemesenchymalstromalcellswithincarriersbasedonseaspongechitinskeletons AT petrenkoûa cultureanddifferentiationofhumanadiposetissuemesenchymalstromalcellswithincarriersbasedonseaspongechitinskeletons AT érlihg cultureanddifferentiationofhumanadiposetissuemesenchymalstromalcellswithincarriersbasedonseaspongechitinskeletons AT petrenkoaû cultureanddifferentiationofhumanadiposetissuemesenchymalstromalcellswithincarriersbasedonseaspongechitinskeletons |