Вплив гормональних ін'єкцій на параметри якості та кріорезистентність сперматозоїдів білого товстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844)
Досліджено вплив різних видів гормональної стимуляції завершальних етапів гаметогенезу білого товстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) на якість його сперми. Препарати використовувались у наступному дозуванні: гіпофіз – 2,5 мг/кг; «Сурфагон» – 1 мкг/кг з «Метоклопрамідом» – 5мг/кг; «Ово...
Saved in:
| Published in: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Date: | 2014 |
| Main Authors: | , , |
| Format: | Article |
| Language: | Ukrainian |
| Published: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2014
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68801 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Вплив гормональних ін'єкцій на параметри якості та кріорезистентність сперматозоїдів білого товстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) / К.І. Буцький, А.Ю. Пуговкін, Є.Ф. Копєйка // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2014. — Т. 24, № 2. — С. 140-148. — Бібліогр.: 22 назв. — укр., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860096527243935744 |
|---|---|
| author | Буцький, К.І. Пуговкін, А.Ю. Копєйка, Є.Ф. |
| author_facet | Буцький, К.І. Пуговкін, А.Ю. Копєйка, Є.Ф. |
| citation_txt | Вплив гормональних ін'єкцій на параметри якості та кріорезистентність сперматозоїдів білого товстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) / К.І. Буцький, А.Ю. Пуговкін, Є.Ф. Копєйка // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2014. — Т. 24, № 2. — С. 140-148. — Бібліогр.: 22 назв. — укр., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| description | Досліджено вплив різних видів гормональної стимуляції завершальних етапів гаметогенезу білого товстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) на якість його сперми. Препарати використовувались у наступному дозуванні: гіпофіз – 2,5 мг/кг; «Сурфагон» – 1 мкг/кг з «Метоклопрамідом» – 5мг/кг; «Овопель» – 0,5 гранули/кг. Встановлено, що після стимуляції плідників сумішшю «Сурфагону» та «Метоклопраміду» концентрація клітин у спермі була вище, ніж після стимуляції препаратом «Овопель» або гіпофізом сазана, та складала (9,7 ± 0,9); (10,7 ± 0,8); (13,3 ± 0,9) млрд/мл відповідно. Концентрація АТФ у сперматозоїдах після стимуляції цим препаратом також збільшилася майже удвічі та складала (51,9 ± 2,1) нмоль/мг білка, а препарата «Овопель» та гіпофіза сазана – (18,5 ± 0,7) та (30,3 ± 4) нмоль/мг білка. Більш висока концентрація активно рухливих сперматозоїдів після кріоконсервування може свідчити про відносно високу якість цієї сперми.
Исследовано влияние разных видов гормональной стимуляции завершающих этапов гаметогенеза белого толстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) на качество его спермы. Препараты использовались в следующей дозировке: гипофиз – 2,5 мг/кг; «Сурфагон» – 1 мкг/кг з «Метоклопрамидом» – 5 мг/кг; «Овопель» – 0,5 гранули/кг. Установлено, что после стимуляции самцов смесью «Сурфагона» и «Метоклопрамида» концентрация клеток в сперме была выше, чем после стимуляции препаратом «Овопель» или гипофизом сазана, и составляла (9,7 ± 0,9); (10,7 ± 0,8); (13,3 ± 0,9) млрд/мл соответственно. Концентрация АТФ в сперматозоидах после стимуляции этим препаратом также увеличилась почти вдвое и составляла (51,9 ± 2,1) нмоль/мг белка, а препарата «Овопель» и гипофиза сазана – (18,5 ± 0,7) и (30,3 ± 4) нмоль/мг белка. Более высокая концентрация активно подвижных сперматозоидов после криоконсервирования может свидетельствовать об относительно высоком качестве этой спермы.
The influence of different hormonal stimulation of final stages of gametogenesis in silver carp (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) on the quality of its sperm was studied. Preparations were used in following dosage: pituitary – 2.5 mg/kg; Surfagon – 1 μg/kg combined with Metoclopramide – 5 mg/kg; Ovopel – 0.5 pellet/kg. It was found that after stimulation of sires with a mixture of Surfagon and Metoclopramide the cell concentration in semen was higher than after stimulation by drug Ovopel or carp pituitary, and it was (9.7 ± 0.9); (10.7 ± 0.8); (13.3 ± 0.9) bln/ml, correspondingly. The ATP concentration in sperm after stimulation by this drug also was almost twice bigger and it was (51.9 ± 2.1) nmol/mg protein, and in case of Ovopel and carp pituitary it was (18.5 ± 0.7) and (30.3 ± 4) nmol/mg protein. A higher concentration of active motile spermatozoa after cryopreservation may indicate a relatively high quality of the sperm.
|
| first_indexed | 2025-12-07T17:26:14Z |
| format | Article |
| fulltext |
УДК 57.043.08:597:612.018
К.І. Буцький*, А.Ю. Пуговкін, Є.Ф. Копєйка
Вплив гормональних ін'єкцій на параметри якості та
кріорезистентність сперматозоїдів білого товстолобика
(Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844)
UDC 57.043.08:597:612.018
K.I. Butskyi*, A.Yu. Puhovkin, E.F. Kopeika
Effect of Hormone Injections on Quality Parameters
and Cryoresistance of Sperm from Silver Carp
(Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844)
Реферат: Досліджено вплив різних видів гормональної стимуляції завершальних етапів гаметогенезу білого товстолобика
(Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) на якість його сперми. Препарати використовувались у наступному дозуванні: гіпо-
фіз – 2,5 мг/кг; «Сурфагон» – 1 мкг/кг з «Метоклопрамідом» – 5мг/кг; «Овопель» – 0,5 гранули/кг. Встановлено, що після сти-
муляції плідників сумішшю «Сурфагону» та «Метоклопраміду» концентрація клітин у спермі була вище, ніж після стимуляції
препаратом «Овопель» або гіпофізом сазана, та складала (9,7 ± 0,9); (10,7 ± 0,8); (13,3 ± 0,9) млрд/мл відповідно. Концентрація
АТФ у сперматозоїдах після стимуляції цим препаратом також збільшилася майже удвічі та складала (51,9 ± 2,1) нмоль/мг
білка, а препарата «Овопель» та гіпофіза сазана – (18,5 ± 0,7) та (30,3 ± 4) нмоль/мг білка. Більш висока концентрація актив-
но рухливих сперматозоїдів після кріоконсервування може свідчити про відносно високу якість цієї сперми.
Ключові слова: сперма, товстолобик, гормональна стимуляція, кріоконсервування, АТФ, концентрація сперми.
Реферат: Исследовано влияние разных видов гормональной стимуляции завершающих этапов гаметогенеза белого
толстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) на качество его спермы. Препараты использовались в следующей до-
зировке: гипофиз – 2,5 мг/кг; «Сурфагон» – 1 мкг/кг з «Метоклопрамидом» – 5 мг/кг; «Овопель» – 0,5 гранули/кг. Установлено,
что после стимуляции самцов смесью «Сурфагона» и «Метоклопрамида» концентрация клеток в сперме была выше, чем
после стимуляции препаратом «Овопель» или гипофизом сазана, и составляла (9,7 ± 0,9); (10,7 ± 0,8); (13,3 ± 0,9) млрд/мл
соответственно. Концентрация АТФ в сперматозоидах после стимуляции этим препаратом также увеличилась почти
вдвое и составляла (51,9 ± 2,1) нмоль/мг белка, а препарата «Овопель» и гипофиза сазана – (18,5 ± 0,7) и (30,3 ± 4) нмоль/мг
белка. Более высокая концентрация активно подвижных сперматозоидов после криоконсервирования может свидетельст-
вовать об относительно высоком качестве этой спермы.
Ключевые слова: сперма, толстолобик, гормональная стимуляция, криоконсервирование, АТФ, концентрация спермы.
Abstract: The influence of different hormonal stimulation of final stages of gametogenesis in silver carp (Hypophthalmichthys
molitrix, Val. 1844) on the quality of its sperm was studied. Preparations were used in following dosage: pituitary – 2.5 mg/kg;
Surfagon – 1 µg/kg combined with Metoclopramide – 5 mg/kg; Ovopel – 0.5 pellet/kg. It was found that after stimulation of sires with
a mixture of Surfagon and Metoclopramide the cell concentration in semen was higher than after stimulation by drug Ovopel or carp
pituitary, and it was (9.7 ± 0.9); (10.7 ± 0.8); (13.3 ± 0.9) bln/ml, correspondingly. The ATP concentration in sperm after stimulation by
this drug also was almost twice bigger and it was (51.9 ± 2.1) nmol/mg protein, and in case of Ovopel and carp pituitary it was (18.5 ±
0.7) and (30.3 ± 4) nmol/mg protein. A higher concentration of active motile spermatozoa after cryopreservation may indicate a
relatively high quality of the sperm.
Key words: sperm, silver carp, hormone stimulation, cryopreservation, ATP, sperm concentration.
*Автор, якому необхідно надсилати кореспонденцію:
вул. Переяславская, 23, м. Харків, Україна 61015;
тел.: (+38 057) 373-74-35, факс: (+38 057) 373-30-84,
електронна пошта: kirill_buz@list.ru
*To whom correspondence should be addressed:
23, Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015;
tel.:+380 57 3737435, fax: +380 57 373 3084,
e-mail: kirill_buz@list.ru
Department of Cryobiology of Reproduction System, Institute for
Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Acad-
emy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Відділ кріобіології системи репродукції, Інститут проблем
кріобіології і кріомедицини НАН України, м. Харків
Надійшла 24.12.2013
Прийнята до друку 27.02.2014
Проблеми кріобіології і кріомедицини. – 2014. – Т. 24, №2. – С. 140–148.
© 2014 Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
Received December 24, 2013
Accepted February 27, 2014
Probl. Cryobiol. Cryomed. 2014. 24(2): 140–148.
© 2014 Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
оригінальне дослідження research article
Забруднення водоймищ, будівництво гідроспо-
руд і хижацький рибний промисел є причинами
різкого зменшення чисельності багатьох популяцій
цінних риб і навіть зникнення деяких їх видів. Для
збереження генофонду риб використовують як ме-
тоди кріоконсервування сперматозоїдів, так і штуч-
ного їх вирощування у риборозплідних господар-
ствах. Покращення якості кріоконсервованої спер-
Water pollution, building of hydraulic constructs and
robbery fishing are the reasons of dramatic deminishing
of numerous populations of commercially valuable spe-
cies and even loss of some species. To preserve fish
gene pool one use either methods of sperm cryopre-
servation or artificial fish culture in fish hatcheries.
Improving of a cryopreserved semen quality would
enable to reduce probability of selection effects during
ми дозволить знизити ймовірність селекційних
ефектів під час кріоконсервування, зменшити вит-
рати на зберігання клітин, удосконалити біотехніку
відтворення риб і підвищити продуктивність рибо-
розплідних підприємств.
Якість кріоконсервованої сперми залежить від
багатьох факторів як на стадії формування спер-
матозоїдів, так і на останньому етапі сперміації
[13]. Однією з головних умов, за яких відбувається
дозрівання риб, є певне співвідношення між тем-
пературою води та кількістю світлових днів. При
отриманні гамет для штучного запліднення обо-
в’язковою є гормональна стимуляція риб. На рибо-
розплідних заводах для дозрівання риб використо-
вують ін’єкцію розтертого гіпофіза, люліберіну, хо-
ріонічного гонадотропіну або гормональні препара-
ти «Сурфагон», «Овопель» та ін. Отже, особливого
значення набувають як умови утримання риб, так
і стимуляція дозрівання плідників на завершаль-
ному етапі.
Для кріоконсервування сперми білого товсто-
лобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val, 1844)
використовували розроблені ще у 1986 р. методи
кріоконсервування сперми коропових [3], за допо-
могою яких після відігріву отримували 30–40% рух-
ливих клітин. Однак з’явились відомості про отри-
мання до 70% рухливих сперматозоїдів після кріо-
консервування сперми коропових [9], але механізми
підвищення якості цієї сперми недостатньо вивчені,
а дані методи потребують подальшої перевірки.
Крім того, цю роботу неможливо повторити через
високу варіабельність якості нативної сперми.
На сьогодні ще недостатньо досліджена дія
гормональних препаратів на метаболізм і функ-
ціональні характеристики сперматозоїдів риб до та
після кріоконсервування. Основними параметрами,
за якими оцінюють метаболізм та функціональний
стан сперми після гормональної стимуляції, є
запліднююча здатність, рівень рухливості та кон-
центрація АТФ у спермі. Існує багато досліджень
[8, 14, 21, 22] щодо впливу деяких гормонів на харак-
теристики сперми риб у нормі, але лише у пооди-
ноких роботах повідомляється про механізм їх дії
на кріорезистентність сперматозоїдів [11,15]. Вста-
новлено, що після стимуляції веслоноса «Овопелем»
сперматозоїди рухались на 2 хв довше, ніж після
стимуляції синтетичним аналогом гонадотропін-
рилізінг-гормону, а після кріоконсервування життє-
здатними залишалося вдвічі більше клітин [15].
Мета дослідження – вивчити вплив різних видів
гормональної стимуляції білого товстолобика на
концентрацію клітин, АТФ сперми, рівень та час
рухливості сперматозоїдів після активації, а також
на їх кріорезистентність.
cryopreservation, save the costs for cell storage, ad-
vance the biotechniques of fish reproduction and enhan-
ce productivity of fish hatcheries.
Cryopreserved sperm quality depends on the va-
rious factors both at the stage of sperm formation and
at the very last step, spermiation [8]. One of the main
conditions for fish maturation is apparently the ratio
between water temperature and number of day-light
hours. Hormone stimulation of fish is mandatory to
derive the gametes for artificial insemination. Fish
maturation at fish hatcheries is achieved by injection
of pounded pituitary gland, luliberin, chorionic gonado-
tropin or such hormonal preparations as Surfagon,
Ovopel etc. Thus, of special value are the fish keeping
conditions as well as stimulation of male maturation at
the final stage.
Cryopreservation of silver carp (Hypophthalmi-
chthys molitrix, Val. 1844) semen is possible by deve-
loped in 1986 methods for cryopreservation of carp
sperm [12], which allow to get post thaw 30–40% mo-
tile cells. Nevertheless, there are some data on the
possible up to 70% motile spermatozoa after cryopre-
servation of carp semen [4], but the mechanisms of
improving the quality of the sperm are unclear, and the
methods require further testing. Moreover, this expe-
riment is impossible to perform due to a high variability
of fresh sperm quality.
The effect of hormonal preparations on metabolism
and functional characteristics of fish sperm prior to
and after cryopreservation is not properly analyzed to
date. Basic parameters for assessing the metabolism
and functional state of sperm after hormone stimulation
are male fertility, motility rate and ATP concentration
in sperm. There are lot of reports [1, 9, 21, 22] on the
impact of some hormones on the characteristics of
fish sperm in a norm, but only several studies point to
the mechanism of their effect on spermatozoa cryo-
resistance [6, 10]. We have found that after stimulation
of paddlefish with Ovopel the spermatozoa were motile
2 min longer than after stimulation with synthetic
analogue of gonadotropin-releasing hormone, and
following cryopreservation twice as more cells re-
mained viable [10].
The objective of this research was to study the
effect of different types of hormone stimulation of silver
carp on cell concentration, sperm ATP, rate and time
of sperm motility after activation as well as on their
cryoresistance.
Materials and methods
The research was performed at fish hatchery
(Myronivskyy village, Donetsk region, Ukraine) in
silver carp (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844).
Mature males of an average weight of 4.5 kg were
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 24, №/issue 2, 2014
141
Матеріали та методи
Дослідження проводили в рибному господарстві
(сел. Миронівський, Донецька обл.) на білому
товстолобику (Hypophthalmichthys molitrix). Плід-
ників із середньою масою 4,5 кг утримували в ба-
сейнах із проточною водою (25°C), до яких їх пере-
носили зі ставків. Ін’єкції проводили вранці після
зважування. Для стимуляції сперміації використо-
вували гомогенат гіпофіза сазана, суміш препаратів
«Сурфагону» (синтетичний аналог гонадотропін-
рилізінг-гормону ссавців) з «Метоклопрамідом»
(блокатор дофамінових рецепторів), а також комер-
ційний препарат «Овопель» для коропів (аналог
гонадотропін-рилізінг-гормону ссавців із «Метокло-
прамідом»). У роботі використовували наступні до-
зи: гіпофіз – 2,5 мг/кг; «Сурфагон» («МосАгроГен»,
Росія) – 1мкг/кг з «Метоклопрамідом» (ПАТ
«Дарниця», Україна) – 5мг/кг; «Овопель» («Inter
Sh», Угорщина) – 0,5 гранули/кг.
Сперму збирали в сухий чистий посуд через 20–
24 годин після ін’єкцій. Для визначення концентрації
клітин сперму розводили ізотонічним розчином
NaCl та використовували камеру Горяєва і фото-
електроколориметр KF-77 (Польща).
Об’єктивність візуальної оцінки рухливості акти-
вованих сперматозоїдів забезпечувалася методом
«осліплення»: проби брали у випадковому порядку
(експериментатору не було відомо, після якої сти-
муляції отримана кожна проба). Для активації на-
тивної сперми використовували воду зі ставка
(осмотичність 5–10 мОсм/кг), а для відігрітої спер-
ми з метою зменшення впливу перепаду осмотич-
ного тиску на клітини – гліциновий активатор з
осмотичністю 177 мОсм/кг, до складу якого входи-
ли наступні компоненти: 49,5 мМ трис-HCl-буфера
(pH 8,1), 44,5 мМ NaCl, 4 мМ KCl та 18,7 мМ
гліцину.
Сперму розводили у співвідношенні 1:1 кріо-
захисним розчином: 71,8 мМ NaCl; 0,8 мМ KCl;
2,4 мМ CaCl2; 5,2 мМ MgSO4; 33,3 мМ NaHCO3;
5,7 мМ сахарози; 82,3 мМ трис-HCl-буфера, рH 8,1;
24 мг/л яєчного жовтка; 0,01 мМ полівінілового
спирту [3]. Отриману суспензію клітин розливали
в ампули об’ємом 0,5 мл і охолоджували в парах
рідкого азоту за трьохетапним режимом, розробле-
ним для кріоконсервування сперми коропових. На
першому етапі температуру знижували від 25 до
–15°C зі швидкістю 3–5 град/хв, на другому до
–70°С зі швидкістю 15–20 град/хв, далі 100 град/хв
[3]. Ампули розморожували до появи рідкої фази
на водяній бані (40°С), воду постійно перемішували.
Для визначення вмісту АТФ до 0,5 мл сперми
додавали 0,5 мл 10%-го HClO4, потім інтенсивно
перемішували і швидко охолоджували в рідкому
азоті. Після відігріву до 2–5°С ампули центрифу-
kept in the pools with running water (25°C) wherein
they were transfered from ponds. Injections were done
in the morning after weighing. To stimulate the
spermiation we used the homogenate of European carp
pituitary, mixtures of preparations Surfagon (synthetic
analogue of mammal gonadotropin-releasing hormone)
with Metoclopramide (dopamine receptor antagonist)
and commercial preparation Ovopel for carps (analogue
of mammal gonadotropin-releasing hormone with
Metoclopramide). In our study we used the following
dosage: pituitary – 2.5 mg/kg, Surfagon (MosAgroGen,
Russia) – 1 µg/kg with Metoclopramide (Darnitsa,
Ukraine) – 5 mg/kg; Ovopel (Inter Sh, Hungary) –
0.5 granules/kg.
Collection of sperm was done into a dry clean vial
in 20–24 hours following injections. To determine cell
con-centration the sperm was diluted with isotonic NaCl
solution and calculated with Goryaev’s chamber and
photoelectrocolorimeter KF-77 (Poland).
Objective visual assessment of motility of activated
spermatozoa was provided by 'blind' method: the samp-
les were taken at random (researcher did not know
after which stimulation each sample was obtained).
To activate a native sperm we used pond water
(osmolality of 5–10 mOsm/kg), and for thawed sperm
to decrease the impact of osmotic pressure changes
on the cells we applied glycine activating agent of 177
mOsm/kg osmolality which involved the following
components: 49.5 mM Tris-HCl-buffer (pH 8.1), 44.5
mM NaCl, 4 mM KCl and 18.7 mM glycine.
Dilution of sperm was performed 1:1 with cryopro-
tective solution: 71.8 mM NaCl; 0.8 mM KCl; 2.4 mM
CaCl2; 5.2 mM MgSO4; 33.3 mM NaHCO3; 5.7 mM
sucrose; 82.3 mM Tris-HCl-buffer, pH 8.1; 24 mg/l
egg yolk; 0.01 mM polyvinyl alcohol [3]. The obtained
cell suspension was poured into ampoules of 0.5 ml
volume and cooled in the vapours of liquid nitrogen by
three-step regimen developed for cryopreservation of
carp semen. At the first stage temperature was
lowered from 25 down to –15°C with the rate of 3–5
deg/min, at the second stage down to –70°C with the
rate of 15–20 deg/min, and thereafter with 100 deg/
min [12]. The ampoules were thawed in water bath
(40°C) until the appearance of liquid phase, water was
constantly mixed.
To determine the ATP content, 0.5 ml sperm was
supplemented with 0.5 ml 10% HClO4, then it was
intensively mixed and rapidly cooled in liquid nitrogen.
After warming up to 2...5°C the ampoules were centri-
fuged at 5°C for 5 min at 1,000 g. Supernatant was
transferred into another vial, neutralized with 2 M
aqueous KOH solution to pH 7.0 and incubated during
15 min at 5°C. Protein in the sediment was determined
by Lowry method in Miller’s modification. Thereafter
supernatant was centrifuged for 5 min at 1,000 g. ATP
142 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 24, №/issue 2, 2014
гували за температури 5°С протягом 5 хв при 1000g.
Супернатант переносили в іншу пробірку, нейтралі-
зували водним розчином 2М KOH до pH 7,0 та
інкубували 15 хв при 5°С. Білок в осаді визначали
методом Лоурі в модифікації Міллера. Після цього
супернатант центрифугували протягом 5 хв при
1000g. Визначення концетрації АТФ проводили
ферментативним методом за перетворенням
НАДН у НАДФН у системі сполучених фермента-
тивних реакцій, послідовно додавали глюкозо-6-
фосфатдегідрогеназу (Г6ФДГ) та гексокіназу (ГК)
з глюкозою. Середовище для визначення концент-
рації АТФ містило 100 мМ трис-HCl, pH 7,0; 4,1 мМ
етилендіамінтетраоцтової кислоти (ЕДТА); 2мМ
MgCl2; 4 мМ НАДН; 25 од/мл Г6ФДГ; 5 од/мл ГК
[5]. Рівень НАДФН реєстрували спектрофото-
метричним методом при довжині хвилі 340 нм.
Вміст АТФ виражали в нмоль/мг білка.
Осмотичну резистентність сперматозоїдів оці-
нювали за розробленим нами раніше методом [7].
Для цього в кювету фотоелектроколориметра дода-
вали 3,6 мл дистильованої води та 54 мкл сперми
та, постійно перемішуючи, встановлювали зміну
світлопропускання з часом. За експериментально
отриманою залежністю кількості пошкоджених
клітин від світлопропускання розраховували час, за
який гине 50% клітин (Т50).
Отримані результати статистично обробляли за
допомогою t-критерію Стьюдента для незалежних
вибірок із використанням програм «Statistica 7.0»
(«Statsoft», США) та «Exсel» («Microsoft», США).
Відмінності між виборками вважали статистично
значущими за р < 0,05 (n = 7).
Результати та обговорення
У результаті експериментів було визначено
вплив різної гормональної стимуляції плідників на
концентрації одержаної сперми та АТФ (рис. 1).
Після стимуляції товстолобика сумішшю «Сур-
фагону» і «Метоклопраміду» була отримана сперма
зі значно більшою концентрацією клітин (р < 0,05)
порівняно зі стимуляцією «Овопелем» або гіпофізом
на 20,5 та 28% відповідно (рис. 1). Ця різниця в
перерахунку на 1 мл сперми становила 2,75 млрд
клітин при використанні «Овопеля» та 3,75 млрд –
гіпофіза. Рівень АТФ у спермі плідників після різної
гормональної стимуляції також значно відрізнявся
(рис. 2).
Концентрована сперма, яку отримали після сти-
муляції плідників сумішшю «Сурфагону» та «Мето-
клопраміду», в середньому містила майже на
третину більше клітин та мала вдвічі більший рі-
вень АТФ, ніж після стимуляції гіпофізом або «Ово-
пелем».
concentration was determined by enzymatic method
by the transformation of NADH into NADPH through
the system of combined enzyme reactions, to start these
glucose-6-phosphatedehydrogenase (G6PDH) and he-
xokinase (HK) with glucose were stepwise added. The
medium for determination of ATP concentration con-
tained 100 mM Tris-HCl, pH 7.0; 4.1 mM ethylene di-
amine tetraacetate (EDTA); 2 mM MgCl2; 4 mM
NADP; 25 IU/ml G6PDH; 5 IU/ml HK [19]. NADPH
level was assessed spectrophotometrically at 340 nm.
ATP content was expressed through nmol/mg of protein.
Osmotic resistance of spermatozoa was assessed
by previously developed by us method [17]. For this
purpose, the cuvette of photoelectrocolorimeter was
filled with 3.6 ml distilled water, 54 µl sperm was added
and after constant mixing the change of light trans-
mission was recorded with the time course. Using the
experimentally obtained dependence of damaged cell
number vs. the light transmission we calculated the
time of death of 50% cells (T50).
The results were statistically processed with Stu-
dent’s t-test for independent samples using Statistica
7.0 (Statsoft, USA) and Excel (Microsoft, USA). The
differences between samples were considered signi-
ficant at p < 0.05 (n = 7).
Results and discussion
The experiments allowed to determine the effect
of different hormone stimulation of mature males on
concentration of the obtained sperm and ATP (Fig. 1).
After stimulation of carp with the mixture of Surfa-
gon and Metoclopramide we obtained the sperm with
significantly higher cell concentration (p < 0.05) if com-
pared to the stimulation with Ovopel or pituitary by
20.5 and 28%, respectively (Fig. 1). This difference
normalized to 1 ml sperm was 2.75 bln cells when using
Ovopel and 3.75 bln in case of pituitary. ATP level in
mature male spermatozoa after different hormone
stimulation differed significantly as well (Fig. 2).
Concentrated sperm obtained after stimulation of
mature males with the mixture of Surfagon and Meto-
clopramide in average contained nearly a third more
cells and had two times higher ATP level than after
stimulation with pituitary or Ovopel.
In addition to assessment of cell concentration and
ATP content it was important to reveal the effect of
cryoprotective solution and cryopreservation on the
characteristics of spermatozoa obtained after different
types of hormone stimulation of mature males. For this
purpose the activated sperm was assessed by the moti-
lity of cells with a forward rectilinear movement motion
and duration of their movement. No differences bet-
ween the samples were found according to these
criteria (Fig. 3).
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 24, №/issue 2, 2014
143
Крім визначення концентрації клітин та вмісту
АТФ, важливим було виявити вплив кріозахисного
розчину та кріоконсервування на функціональні
характеристики сперматозоїдів, отриманих після
різних видів гормональної стимуляції плідників. Для
цього в активованій спермі визначали рухливість
клітин із поступовим прямолінійним рухом та час
їх руху. За цими критеріями відмінностей між
групами встановлено не було (рис. 3).
У відігрітій активованій спермі рухливість спер-
матозоїдів була майже однаковою. Виходячи з цих
результатів, можна припустити, що сперма, отри-
мана після стимуляції сумішшю «Сурфагону» і
«Метоклопраміду», була чутливішою до впливу
середовища кріоконсервування, але рухливість клі-
тин у полі зору не є показником абсолютної їх кіль-
кості. При визначенні відносної рухливості сперма-
тозоїдів, тобто відношення відсотка рухливих
клітин після кріоконсервування до відсотка у кріо-
захисному розчині до кріоконсервування, вияви-
лося, що у відігрітій спермі, отриманій після стиму-
ляції сумішшю «Сурфагону» і «Метоклопраміду»,
кількість клітин, які рухались, була найбільшою.
Враховуючи ці дані, можна визначити концентра-
цію рухливих клітин у спермі («Сурфагон» і «Мето-
клопрамід» – 3,2; «Овопель» – 2,2; гіпофіз –
The motility was almost the same in all the groups
of thawed activated sperm. In terms of these results
we can suggest that sperm obtained after stimulation
with the mixture of Surfagon and Metoclopramide was
more sensitive to the effect of cryopreservation me-
dium, but cell motility within the field of vision could
not point their absolute quantity. Assessment of relative
spermatozoa motility, i. e. relation of percentage of
motile cells after cryopreservation to the one found in
cryoprotective solution prior to cryopreservation allo-
wed to note thawed semen obtained after stimulation
with the mixture of Surfagon and Metoclopramide had
the highest number of motile cells. Considering these
data it is possible to calculate the concentration of mo-
tile cells in sperm (3.2 bln/ml for Surfagon and Meto-
clopramide; 2.2 for Ovopel; and 2.4 for case of pituita-
ry). We have found that in thawed semen derived after
hormone stimulation with the mixture of Surfagon and
Metoclopramide, ATP and cell concentrations were
the highest. A significant loss of motile cells in cryopro-
tective solution in our opinion may be explained by the
fact that this sperm had higher heterogeneity by the
maturity degree if compared to other stimulating agents.
Probably it would be resonable to collect the sper-
matozoa several hours later. As it was previously men-
tioned [10], stimulation of paddlefish mature males with
Рис. 2. Концентрація АТФ на 1 мг білка в нативній спермі
білого товстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val,
1844); різниця між даними, позначеними різними ін-
дексами (a, b, c), статистично значуща, p < 0,05.
Fig. 2. Fig. 2. ATP concentration per 1 mg protein in native
sperm of silver carp (Hypophthalmichthys molitrix, Val.
1844); differences between data indicated with different
indices (a, b, c) are statistically significant, p < 0.05.
Рис. 1. Концентрація клітин нативної сперми білого
товстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val, 1844)
після гормональної стимуляції різними препаратами;
різниця між даними, позначеними різними індексами
(a, b, c), статистично значуща, p < 0,05.
Fig. 1. Concentration of native sperm cells of silver carp
(Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) after hormone
stimulation with different preparations; differences bet-
ween data indicated with different indices (a, b, c) are
statistically significant, p < 0.05.
0,0
2,0
4,0
6,0
8,0
10,0
12,0
14,0
16,0
Гіпофіз «Овопель» «Сурфагон»+
c
b
a
Ко
нц
ен
тр
ац
ія
к
лі
ти
н,
м
лр
д/
м
л
C
el
l c
on
ce
nt
ra
tio
n,
b
ln
/m
l
Гіпофіз
Pituitary
«Овопель»
Ovopel
«Сурфагон»+
«Метоклопрамід»
Surfagon +
Metoclopramide
0
10
20
30
40
50
60
Гі фі О С ф +
b
c
a
Ко
нц
ен
тр
ац
ія
к
лі
ти
н,
м
лр
д/
м
л
C
el
l c
on
ce
nt
ra
tio
n,
b
ln
/m
l
Гіпофіз
Pituitary
«Овопель»
Ovopel
«Сурфагон»+
«Метоклопрамід»
Surfagon +
Metoclopramide
144 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 24, №/issue 2, 2014
2,4 млрд/мл). Встановлено, що у відігрітій спермі,
отриманій після гормональної стимуляції сумішшю
«Сурфагону» і «Метоклопраміду», концентрація
АТФ та клітин найбільша. Значну втрату рухливих
клітин у кріозахисному розчині, на наш погляд, мож-
на пояснити тим, що ця сперма мала більшу гете-
рогенність за ступенем зрілості в порівнянні з
іншими стимуляторами. Можливо, слід було збіль-
шити термін між стимуляцією та отриманням спер-
ми. Як зазначалося раніше [15], після стимуляції
плідників веслоноса «Овопелем» їх сперма дозрі-
вала вдвічі довше порівняно зі стимуляцією лютеї-
нізуючим гормоном.
На думку деяких авторів [1, 10], при збільшенні
концентрації клітин у суспензії підвищується їх стій-
кість до несприятливих факторів кріоконсерву-
вання. Отже, різна початкова концентрація сперми
може впливати на ії кріорезистентність. Після сти-
муляції сумішшю «Сурфагону» і «Метоклопра-
міду» на фоні більшої концентрації сперматозоїдів
спостерігається більший рівень збереженості клітин
[2], що може пояснюватися внутрішньою регуля-
цією на рівні організму плідників як саморегулюю-
чих систем. При збільшенні концентрації клітин під-
вищується осмотичний тиск плазми, а тому і стій-
кість мембран [19].
Результати наших досліджень свідчать про
майже однакову осмотичну резистентність спер-
матозоїдів, отриманих після різних видів гормо-
нальної стимуляції (зокрема «Овопелем» та суміш-
шю «Сурфагону» і «Метоклопраміду», рис. 4),
однак вони потребують доопрацювання.
Після різних видів стимуляції пошкодження
мембран 50% сперматозоїдів відбувається вдвічі
Ovopel led to twice longer maturation of their sperm if
compared with the stimulation of luteinizing hormone.
Some authors suggested [2, 5] that increasing of
the cell concentration in suspension resulted in an
increased resistance to the unfavorable conditions of
cryopreservation. In other words, different initial sperm
concentration can affect its cryoresistance. Following
stimulation with Surfagon and Metoclopramide resulted
in higher spermatozoa concentration we observed an
increased level of cell survival [3]. This can be explai-
ned by internal regulation at the organismal level of
mature male as self-regulating systems. Rised cell con-
centration leads to an increased osmotic pressure of
plasma, and therefore an improved membrane resis-
tance [16].
Our findings confirm quite an equal osmotic
resistance of spermatozoa derived after different types
of hormone stimulation (in particular, Ovopel and the
mixture of Surfagon and Metoclopramide (Fig. 4)), but
these still require further ascertainment.
After various stimulations the damage in 50% of
spermatozoa membranes occured twice faster if incu-
bation medium temperature was 29°C, if compared
with 22°C. Primarily, this is due to the dependence of
cell membranes permeability for water molecules vs.
the temperature [20].
In the end of summer all carp spermatozoa are
entirely formed and non-motile in fish gonads until new
spawning season. Thus, the cause of possible increa-
sing of their cryoresistance can be the rise of ATP
concentration in sperm. As it is known, the stimulation
of males with Metoclopramide inhibits dopamine
excretion, leading to an increased level of prolactin in
blood [15] which affects different processes in fish
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Гіпофіз
P ituitary
«Овопель»
«Ovopel»
«Сурфагон»+
«Surfagon»+
a a
a
b
bb
Рис. 3. Вплив кріозахисного розчину та кріоконсерву-
вання на рухливість сперматозоїдів білого товстоло-
бика (Hypophthalmichthys molitrix, Val, 1844): – рівень
рухливості нативних сперматозоїдів; – рівень
рухливості кріоконсервованих сперматозоїдів; різниця
між даними, позначеними різними індексами (a, b)
статистично значуща, p < 0,05.
Fig. 3. Effect of cryoprotective solution and cryopreservation
on the motility of silver carp (Hypophthalmichthys molitrix,
Val. 1844) spermatozoa: – motility rate of native sperma-
tozoa, %; – motility rate of cryopreserved spermatozoa,
%; differences between data indicated with different indi-
ces (a, b) are statistically significant, p < 0.05.
Кі
ль
кіс
ть
р
ух
ли
ви
х
сп
ер
м
ат
оз
ої
ді
в,
%
C
on
te
nt
o
f m
ot
ile
s
pe
rm
at
oz
oa
, %
Гіпофіз
Pituitary
«Овопель»
Ovopel
«Сурфагон»+
«Метоклопрамід»
Surfagon +
Metoclopramide
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 24, №/issue 2, 2014
145
швидше за температури середовища інкубації
29°С, ніж за температури 22°С, що, в першу чергу,
пояснюється залежністю проникності їх мембран
для молекул води від температури [6].
Усі сперматозоїди у коропових вже наприкінці
літа повністю сформовані та нерухливі в гонадах
риб до нового нерестового сезону, тому причиною
можливого підвищення їх кріорезистентності може
бути збільшення концентрації АТФ у спермі. Відо-
мо, що стимуляція самців «Метоклопрамідом»
інгібує виділення дофаміну, що призводить до під-
вищення рівня пролактину в крові [18], який впливає
на різноманітні процеси в організмі риб [17], у тому
числі й на концентрацію клітин та іонний склад спер-
ми. Для забезпечення цих процесів потрібна більша
концентрація АТФ. Крім того, АТФ необхідна кож-
ній клітині для регуляції її об’єму [12, 19]. Тому ми
вважаємо, що з регуляторними процесами на рівні
організму пов’язана і більша концентрація АТФ у
сперматозоїдах, отриманих після стимуляції плід-
ників сумішшю «Сурфагону» і «Метоклопраміду»
порівняно з іншими препаратами. Сперматозоїду
АТФ необхідна для підтримання рухливості, гра-
дієнта концентрацій іонів на мембрані [16] та кріо-
резистентності [20]. Показано, що при зниженні кон-
центрації АТФ у спермі після кріоконсервування
зменшується її здатність до запліднення [4]. Отже,
після стимуляції плідників сумішшю «Сурфагону»
і «Метоклопраміду» збільшення концентрації АТФ
у спермі впливає на кріорезистентність, однак це
ствердження потребує подальших досліджень.
Ефективнішу дію суміші «Сурфагону» і «Метокло-
праміду» порівняно з «Овопелем» можна пояснити
більшим дозуванням «Метоклопраміду» у суміші,
ніж у «Овопелі».
organism [14] including the cell concentration and
sperm ion composition. To provide these processes
higher ATP concentration is required. Moreover, ATP
is necessary for each cell to regulate its volume [7,
16]. So, we suggest that higher ATP concentration in
spermatozoa derived after stimulation of mature males
with the mixture of Surfagon and Metoclopramide
comparing with the other preparations is associated
with the regulatory processes at the organismal level.
A spermatozoon needs ATP to maintain the motility,
the gradient of ion concentration on the membrane [11]
and cryoresistance [18]. It was reported, that decreas-
ing of ATP concentration in sperm following cryopre-
servation resulted in reduced fertilization ability [13].
Therefore, stimulation of mature males with the mixture
of Surfagon and Metoclopramide results in the increase
of ATP concentration in sperm and influences their
cryoresistance, nevertheless this suggestion requires
further study. More effective impact of the mixture of
Surfagon and Metoclopramide if compared to Ovopel
could be explained by higher dosage of Metoclopramide
in the mixture if compared with Ovopel.
Conclusions
Stimulation of silver carp (Hypophthalmichthys
molitrix, Val. 1844) with the mixture of Surfagon and
Metoclopramide resulted in obtaining a sperm with the
highest ATP concentration and cell number if compared
with Ovopel and pituitary homogenate. Thus, this type
of stimulation could be recommended for cryopreser-
vation and application in fish breeding.
Choice of optimal drugs, their dosage and proper
period post hormonal stimulation would allow to enhan-
ce th spermatozoa cryoresistance. Of importance is
the investigation of hormonal effect at the final stage
60
80
100
120
140
160
180
200
220
20 22 24 26 28 30
Температура інкубації, °С
Incubation temperature, °C
Ча
с
за
ги
бе
лі
п
ол
ов
ин
и
сп
ер
м
ат
оз
ої
ді
в
Т 5
0,
с
H
al
f-d
ea
th
ti
m
e
of
s
pe
rm
at
oz
oa
T
50
, s
Рис. 4. Залежність загибелі сперматозоїдів (T50), отри-
маних після різних видів гормональної стимуляції, від
температури середовища інкубації: та суцільна лінія –
стимуляція сумішшю «Сурфагону» і «Метоклопраміду»;
та пунктирна лінія – стимуляція «Овопелем»).
Fig. 4. Dependence of spermatozoa death half time (T50)
obtained after various hormone stimulation, on tempe-
rature of incubation medium ( and solid line denote sti-
mulation with Surfagon and Metoclopramide; and dot-
ted line denite stimulation with Ovopel).
146 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 24, №/issue 2, 2014
Висновки
У результаті стимуляції плідників білого товсто-
лобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val, 1844)
«Сурфагоном» із «Метоклопрамідом» порівняно з
«Овопелем» та гомогенатом гіпофіза була одер-
жана сперма з найбільшою концентрацією клітин
та АТФ, тому можна рекомендувати такий вид
стимуляції плідників для кріоконсервування та
використання в рибоводній практиці.
Підбір оптимальних препаратів, їх дозування та
визначення періоду після гормональної стимуляції
дозволять підвищити кріорезистентність спермато-
зоїдів. Важливим є вивчення впливу гормонів на
завершальні етапи гаметогенезу. Наприклад, ще
недостатньо вивчена роль пролактину в цьому
процесі. Розуміння всіх механізмів гормональної
регуляції репродуктивної системи дозволить отри-
мувати статеві продукти найвищої якості та з висо-
кою кріорезистентністю.
Література
1. Белоус А.М., Гордиенко Е.А., Розанов Л.Ф. Биохимия
мембран. Замораживание и криопротекция. – М.: Высш.
шк., 1987. – 80 c.
2. Буцкий К.И., Пуговкин А.Ю. Изменение качества нативной
и криоконсервированной спермы белого толстолоба (Hy-
pophthalmichthys molitrix) при различной гормональной сти-
муляции // Матеріали VI Міжнарод. іхтіолог. наук.-практ.
конф. «Сучасні проблеми теоретичної та практичної
іхтіології». – Тернопіль, 2013. – С. 44–47.
3. Копейка Е.Ф. Инструкция по низкотемпературной консер-
вации спермы карпа. – М.: Изд-во ВНИПРХ, 1986. – 11 с.
4. Копейка Е.Ф., Черепанов В.В., Дзюба Б.Б. Анализ содержа-
ния АТФ и креатинфосфата в сперме карпа (Cyprinus
carpio) до и после криоконсервации // Проблемы криобио-
логии. – 1997. – №4. – С. 41–45.
5. Прохорова М.И. Методы биохимических исследований:
липидный и энергетический обмен. – Л.: Изд-во Ленинград.
ун-та, 1982. – 272 с.
6. Пуговкин А.Ю., Копейка Е.Ф. Осмотическая резистент-
ность сперматозоидов карпа Cyprinus carpio // Проблемы
криобиологии и криомедицины. – 2013. – Т. 23, №2. – C. 190.
7. Пат. №83803, Україна, МПК G01N33/48 G01N15/14. Спосіб
визначення якості сперми коропа / Є.Ф. Копєйка, А.Ю. Пу-
говкін, К.І. Буцький. – № u201305510; заявл. 29.04.2013;
опубл. 25.09.2013, Бюл. №18. – 4 с.
8. Alavi S.M., Hatef A., Mylonas C.C. et al. Sperm characteristics
and androgens in Acipenser ruthenus after induction of sper-
miation by carp pituitary extract or GnRHa implants // Fish
Physiol. Biochem. – 2012. – Vol. 38, №6. – P. 1655–1666.
9. Chen S. L., Liu X. T., Lu D. C. et al. Cryopreservation of sper-
matozoa of silver carp, common car, blunt snout bream and
grass carp // Acta Zoologica Sinica. – 1992. – Vol. 38, №4. –
P. 413–424.
10.Ciereszko A. Chemical composition of seminal plasma and its
physiological relationship with sperm motility, fertilizing capacity
and cryopreservation success in fish // Fish Spermatology /
Ed. by Alavi S.M.H. – Oxford: Alpha Science Ltd., 2007. –
P. 215–240.
11.Ding F., Milley J.E., Rommens M. et al. Effect of hormone imp-
lantation on cryopreservation of Atlantic halibut (Hippoglossus
of hametogenesis, e. g. the role of prolactin is unclear.
Understanding of entire mechanism of hormonal re-
gulation in reproductive system would allow to obtain
sexual products of highest quality and cryoresistance.
References
1. Alavi S.M., Hatef A., Mylonas C.C. et al. Sperm characteristics
and androgens in Acipenser ruthenus after induction of sper-
miation by carp pituitary extract or GnRHa implants. Fish
Physiology and Biochemistry 2012; 38(6): 1655–1666.
2. Belous A.M., Gordienko E.A., Rozanov L.F. Membrane bioche-
mistry. Freezing and cryoprotection. Moscow: Visshaya
Shkola; 1987.
3. Butskyi K.I., Puhovkin A.Y. Changing of fresh and cryopre-
servated sperm quality of white silver carp (Hypophthal-
michthys molitrix) after different hormonal stimulation: Pro-
ceedings of the VI International ichtiol scientific-practical
conference 'Modern Problems of Theoretical and Practical
Ichthyology'. Ternopil; 2013. p. 44–47.
4. Chen S.L., Liu X.T., Lu D.C. et al. Cryopreservation of sper-
matozoa of silver carp, common car, blunt snout bream and
grass carp. Acta Zoologica Sinica 1992; 38(4): 413–424.
5. Ciereszko A. Chemical composition of seminal plasma and its
physiological relationship with sperm motility, fertilizing capacity
and cryopreservation success in fish. In: Alavi S.M.H. et al.,
editors. Fish Spermatology, Oxford: Alpha Science Ltd; 2007.
p. 215–240.
6. Ding F., Milley J.E., Rommens M. et al. Effect of hormone
implantation on cryopreservation of Atlantic halibut (Hippoglos-
sus hippoglossus L.) sperm. Cryobiology 2012; 65(1): 51–55.
7. Florian L., Busch G.L., Ritter M. et al. Functional significance of
cell volume regulatory mechanisms // Physiol Rev 1998; 78
(1): 247–306.
8. Hajirezaee S., Mojazi B., Mirvaghefi A., Mirvaghefi A. Fish milt
quality and major factors influencing the milt quality parameters:
A review. Afr J Biotechnol 2010; 9(54): 9148–9154.
9. Kayim M., Bozkurt Y., Ogretmen F. Comparing the Effectiveness
of Ovopel and Carp Puritary Extract (CPE) on Artificial Spawn-
ing of Scaly Carp (Cyprinus carpio). J Anim Vet Adv 2010;
9(20): 2589–2592.
10.Kopeika E.F., Drokin S.I., Cherepnin V.A., et al. Experience in
obtaining the high-quality of paddlefish sperm and its cryo-
preservation. Proceedings of the 1st International Workshop
on the Biology of Fish Sperm; Vodnany; 2007. p. 48–49.
11.Kopeika E.F., Kopeika J.E. Variability of sperm quality after
cryopreservation in fish. In: Alavi S.M.H. et al., editors. Fish
spermatology. Oxford: Alpha Science Ltd; 2007. p. 347–396.
12.Kopeika E.F. Instruction of carp sperm low temperature
conservation. Moscow: VNIPRH; 1986.
13. Kopeika E.F., Cherepanov V.V., Dzyuba B.B. Analysis of ATP
and creatine phosphate content in carp (Cyprinus carpio)
before and after cryopreservation. Problems of Cryobiology
1997; (4): 41–45.
14. Manzon L.A. The role of prolactin in fish osmoregulation: a
review. Gen Comp Endocrinol 2002; 125(2): 291–310.
15.McCallum R.W., Sowers J.R., Hershman J.M., Sturdevant R.A.L.
Metoclopramide stimulates prolactin secretion in man. J Clin
Endocrin Metab 1976; 42(6): 1148–1152.
16.Meryman H.T. Osmotic stress as a mechanism of freezing
injury. Cryobiology 1971; 8(5): 489–500.
17.Kopeika E.F., Puhovkin A.Y., Butskyi K.I. Method of carp sperm
quality etermining. Patent of Ukraine 83803, G01N33/48
G01N15/14, u201305510. 2013 Sep25.
18.Perchec G., Jeulin C., Cosson J. et al. Relationship between
sperm ATP content and motility of carp spermatozoa. J Cell
Sci 1995; 108: 747–753.
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 24, №/issue 2, 2014
147
hippoglossus L.) sperm // Cryobiology. – 2012. – Vol. 65, №1. –
P. 51–55.
12.Florian L., Busch G.L., Ritter M. аt al. Functional significance
of cell volume regulatory mechanisms // Physiol. Rev. – 1998. –
Vol. 78, №1. – P. 247–306.
13.Hajirezaee S., Mojazi B., Mirvaghefi A., Mirvaghefi A. Fish milt
quality and major factors influencing the milt quality parameters:
a review // Afr. J. Biotechnol. – 2010. – Vol. 9, №54. – P. 9148–
9154.
14.Kayim M., Bozkurt Y., Ogretmen F. Comparing the effectiveness
of Ovopel and carp puritary extract (CPE) on artificial spawning
of scaly carp (Cyprinus carpio) // J. Anim. Vet. Adv. – 2010. –
Vol. 9, №20. – P. 2589–2592.
15.Kopeika E.F., Drokin S.I., Cherepnin V.A. at al. Experience in
obtaining the high-quality of paddlefish sperm and its cryo-
preservation // The 1st International Workshop on the Biology
of Fish Sperm: Abstract book. – Vodnany, 2007. – P. 48–49.
16.Kopeika E.F., Kopeika J.E. Variability of sperm quality after
cryopreservation in fish // Fish Spermatology / Ed. by Ala-
vi S.M.H. – Oxford: Alpha Science Ltd., 2007. – P. 347–396.
17.Manzon L.A. The role of prolactin in fish osmoregulation: a
review // Gen. Comp. Endocrinol. – 2002. – Vol. 125, №2. –
P. 291–310.
18.McCallum R.W., Sowers J.R., Hershman J.M., Sturdevant R.A.L.
Metoclopramide stimulates prolactin secretion in man // J. Clin.
Endocrinol. Metab. – 1976. – Vol. 42, №6. – P. 1148–1152.
19.Meryman H.T. Osmotic stress as a mechanism of freezing in-
jury // Cryobiology. – 1971. – Vol. 8, №5. – P. 489–500.
20.Perchec G., Jeulin C., Cosson J. et al. Relationship between
sperm ATP content and motility of carp spermatozoa // J. Cell
Sci. – 1995. – Vol. 108. – P. 747–753.
21.Seifi T., Imanpoor M.R, Golpour A. The effect of different
hormonal treatments on semen quality parameters in cultured
and wild carp // Turkish Journal of Fisheries and Aquatic
Sciences. – 2011. – Vol. 11, №4. – P. 595–602.
22.Zarski D., Kucharczyk D., Targonska K. et al. Application of
Ovopel and Ovaprim and their combinations in controlled repro-
duction of two reophilic cyprinid fish species // Polish Journal
of Natural Sciences. – 2009. – Vol. 24, №4. – P. 235–244.
19.Prokhorova M.I. Methods of biochemical research: energy and
lipid metabolism. Leningrad: Leningrad University Press; 1982.
20.Puhovkin A.Y., Kopeika E.F. Osmotic resistance of carp Cyp-
rinus carpio spermatozoa. Problems of Cryobiology and Cryo-
medicine 2013; 23(2): 190.
21.Seifi T., Imanpoor M.R, Golpour A. The effect of different hor-
monal treatments on semen quality parameters in cultured and
wild carp. Turkish Journal of Fisheries and Aquatic Sciences
2011; 11(4): 595–602.
22. Zarski D., Kucharczyk D., Targonska K. et al. Application of
Ovopel and Ovaprim and their combinations in controlled repro-
duction of two reophilic cyprinid fish species. Polish Journal
of Natural Sciences 2009; 24(4): 235–244.
148 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 24, №/issue 2, 2014
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68801 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 2307-6143 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T17:26:14Z |
| publishDate | 2014 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Буцький, К.І. Пуговкін, А.Ю. Копєйка, Є.Ф. 2014-09-29T17:39:43Z 2014-09-29T17:39:43Z 2014 Вплив гормональних ін'єкцій на параметри якості та кріорезистентність сперматозоїдів білого товстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) / К.І. Буцький, А.Ю. Пуговкін, Є.Ф. Копєйка // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2014. — Т. 24, № 2. — С. 140-148. — Бібліогр.: 22 назв. — укр., англ. 2307-6143 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68801 57.043.08:597:612.018 Досліджено вплив різних видів гормональної стимуляції завершальних етапів гаметогенезу білого товстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) на якість його сперми. Препарати використовувались у наступному дозуванні: гіпофіз – 2,5 мг/кг; «Сурфагон» – 1 мкг/кг з «Метоклопрамідом» – 5мг/кг; «Овопель» – 0,5 гранули/кг. Встановлено, що після стимуляції плідників сумішшю «Сурфагону» та «Метоклопраміду» концентрація клітин у спермі була вище, ніж після стимуляції препаратом «Овопель» або гіпофізом сазана, та складала (9,7 ± 0,9); (10,7 ± 0,8); (13,3 ± 0,9) млрд/мл відповідно. Концентрація АТФ у сперматозоїдах після стимуляції цим препаратом також збільшилася майже удвічі та складала (51,9 ± 2,1) нмоль/мг білка, а препарата «Овопель» та гіпофіза сазана – (18,5 ± 0,7) та (30,3 ± 4) нмоль/мг білка. Більш висока концентрація активно рухливих сперматозоїдів після кріоконсервування може свідчити про відносно високу якість цієї сперми. Исследовано влияние разных видов гормональной стимуляции завершающих этапов гаметогенеза белого толстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) на качество его спермы. Препараты использовались в следующей дозировке: гипофиз – 2,5 мг/кг; «Сурфагон» – 1 мкг/кг з «Метоклопрамидом» – 5 мг/кг; «Овопель» – 0,5 гранули/кг. Установлено, что после стимуляции самцов смесью «Сурфагона» и «Метоклопрамида» концентрация клеток в сперме была выше, чем после стимуляции препаратом «Овопель» или гипофизом сазана, и составляла (9,7 ± 0,9); (10,7 ± 0,8); (13,3 ± 0,9) млрд/мл соответственно. Концентрация АТФ в сперматозоидах после стимуляции этим препаратом также увеличилась почти вдвое и составляла (51,9 ± 2,1) нмоль/мг белка, а препарата «Овопель» и гипофиза сазана – (18,5 ± 0,7) и (30,3 ± 4) нмоль/мг белка. Более высокая концентрация активно подвижных сперматозоидов после криоконсервирования может свидетельствовать об относительно высоком качестве этой спермы. The influence of different hormonal stimulation of final stages of gametogenesis in silver carp (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) on the quality of its sperm was studied. Preparations were used in following dosage: pituitary – 2.5 mg/kg; Surfagon – 1 μg/kg combined with Metoclopramide – 5 mg/kg; Ovopel – 0.5 pellet/kg. It was found that after stimulation of sires with a mixture of Surfagon and Metoclopramide the cell concentration in semen was higher than after stimulation by drug Ovopel or carp pituitary, and it was (9.7 ± 0.9); (10.7 ± 0.8); (13.3 ± 0.9) bln/ml, correspondingly. The ATP concentration in sperm after stimulation by this drug also was almost twice bigger and it was (51.9 ± 2.1) nmol/mg protein, and in case of Ovopel and carp pituitary it was (18.5 ± 0.7) and (30.3 ± 4) nmol/mg protein. A higher concentration of active motile spermatozoa after cryopreservation may indicate a relatively high quality of the sperm. uk Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Теоретическая и экспериментальная криобиология Вплив гормональних ін'єкцій на параметри якості та кріорезистентність сперматозоїдів білого товстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) Effect of Hormone Injections on Quality Parameters and Cryoresistance of Sperm from Silver Carp (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) Article published earlier |
| spellingShingle | Вплив гормональних ін'єкцій на параметри якості та кріорезистентність сперматозоїдів білого товстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) Буцький, К.І. Пуговкін, А.Ю. Копєйка, Є.Ф. Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| title | Вплив гормональних ін'єкцій на параметри якості та кріорезистентність сперматозоїдів білого товстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) |
| title_alt | Effect of Hormone Injections on Quality Parameters and Cryoresistance of Sperm from Silver Carp (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) |
| title_full | Вплив гормональних ін'єкцій на параметри якості та кріорезистентність сперматозоїдів білого товстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) |
| title_fullStr | Вплив гормональних ін'єкцій на параметри якості та кріорезистентність сперматозоїдів білого товстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) |
| title_full_unstemmed | Вплив гормональних ін'єкцій на параметри якості та кріорезистентність сперматозоїдів білого товстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) |
| title_short | Вплив гормональних ін'єкцій на параметри якості та кріорезистентність сперматозоїдів білого товстолобика (Hypophthalmichthys molitrix, Val. 1844) |
| title_sort | вплив гормональних ін'єкцій на параметри якості та кріорезистентність сперматозоїдів білого товстолобика (hypophthalmichthys molitrix, val. 1844) |
| topic | Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| topic_facet | Теоретическая и экспериментальная криобиология |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68801 |
| work_keys_str_mv | AT bucʹkiikí vplivgormonalʹnihínêkcíinaparametriâkostítakríorezistentnístʹspermatozoídívbílogotovstolobikahypophthalmichthysmolitrixval1844 AT pugovkínaû vplivgormonalʹnihínêkcíinaparametriâkostítakríorezistentnístʹspermatozoídívbílogotovstolobikahypophthalmichthysmolitrixval1844 AT kopêikaêf vplivgormonalʹnihínêkcíinaparametriâkostítakríorezistentnístʹspermatozoídívbílogotovstolobikahypophthalmichthysmolitrixval1844 AT bucʹkiikí effectofhormoneinjectionsonqualityparametersandcryoresistanceofspermfromsilvercarphypophthalmichthysmolitrixval1844 AT pugovkínaû effectofhormoneinjectionsonqualityparametersandcryoresistanceofspermfromsilvercarphypophthalmichthysmolitrixval1844 AT kopêikaêf effectofhormoneinjectionsonqualityparametersandcryoresistanceofspermfromsilvercarphypophthalmichthysmolitrixval1844 |