Тромбоцитарный лизат повышает эффективность криоконсервирования мезенхимальных стромальных клеток
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Datum: | 2014 |
| Hauptverfasser: | , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russisch |
| Veröffentlicht: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2014
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68805 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Тромбоцитарный лизат повышает эффективность криоконсервирования мезенхимальных стромальных клеток / Е.Ю. Рогульская, Ю.А. Петренко // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2014. — Т. 24, № 2. — С. 161. — рос., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859816848533487616 |
|---|---|
| author | Рогульская, Е.Ю. Петренко, Ю.А. |
| author_facet | Рогульская, Е.Ю. Петренко, Ю.А. |
| citation_txt | Тромбоцитарный лизат повышает эффективность криоконсервирования мезенхимальных стромальных клеток / Е.Ю. Рогульская, Ю.А. Петренко // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2014. — Т. 24, № 2. — С. 161. — рос., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| first_indexed | 2025-12-07T15:22:42Z |
| format | Article |
| fulltext |
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 24, №/issue 2, 2014
161
Тромбоцитарный лизат повышает эффективность
криоконсервирования мезенхимальных стромальных клеток
Е.Ю. Рогульская, Ю.А. Петренко
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
Platelet Lysate Enhances Efficiency
of Cryopreservation of Mesenchymal Stromal Cells
E.Yu. Rogulska, Yu. A. Petrenko
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
of the National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Применение мезенхимальных стромальных клеток
(МСК) в клинической практике связано с необходимос-
тью стандартизации и оптимизации протоколов культи-
вирования и долгосрочного хранения. Для повышения
биологической безопасности клеточных препаратов
согласно нормам и правилам GMP требуется минимизи-
ровать их контакт с ксеногенными и токсичными компо-
нентами. Криозащитные среды для эффективного
замораживания МСК обычно содержат 10% ДМСО и
эмбриональную сыворотку (ЭС), которые следует уда-
лять перед инфузией, что, в свою очередь, не только связа-
но со значительными затратами времени, но и приводит
к потере части клеток. В связи с этим целью работы было
исследование целесообразности применения тромбоци-
тарного лизата (ТЛ) в качестве альтернативы ксеногенной
ЭС в среде культивирования и криоконсервирования.
В работе использовали МСК жировой ткани человека
4–6 пассажей. Экспансию клеток проводили в среде α-
MEM, дополненной 10% ЭС или 10% ТЛ. Для подготовки
клеток к криоконсервированию за 24 ч до замораживания
в среду культивирования вносили 100 мМ сахарозы. В
качестве среды для криконсервирования использовали
α-MEM, содержащую 200 мМ сахарозы и/или 10% ЭС и
10% ТЛ. Криоконсервирование МСК осуществляли со
скоростью 1 град/мин до –80°С, после чего образцы по-
гружали в жидкий азот. Сохранность клеток определяли
окрашиванием трипановым синим. Метаболическую ак-
тивность оценивали по редокс-индикаторам МТТ и Ala-
mar Blue. Для оценки эффективности колониеобразо-
вания подсчитывали число колоний, определяли их раз-
мер и клеточность. Направленную адипо- и остеогенную
дифференцировку выявляли по накоплению липидов или
экспрессии клетками щелочной фосфатазы.
Ранее нами было установлено, что предварительное
культивирование МСК в присутствии сахарозы способ-
ствовало значительному повышению их устойчивости к
криоповреждению. Около 45% предобработанных саха-
розой и культивированных в среде с ЭС клеток после
замораживания-отогрева в отсутствие ДМСО сохраняло
жизнеспособность и метаболическую активность. Вве-
дение ТЛ в состав среды криоконсервирования улучшало
показатели жизнеспособности на 10–15%. Использование
ТЛ в качестве альтернативы ЭС в среде культивирования
приводило к усилению пролиферации, эффективности
колониеобразования и остеогенной дифференцировки
МСК. Кроме того, экспансия МСК в среде, дополненной
ТЛ, позволяла увеличить сохранность до 63%. Клетки
после культивирования и криоконсервирования с ТЛ
сохраняли способность к адгезии, пролиферации и диф-
ференцировке в остео- и адипогенном направлениях.
Результаты настоящей работы свидетельствуют о том,
что тромбоцитарный лизат повышает эффективность
криоконсервирования МСК.
Clinical application of mesenchymal stromal cells
(MSCs) requires the development of standardized and
optimal protocols for cell culture and long term storage. To
improve the biological safety of cell products in accordance
to GMP standards their contact with xenogeneic and toxic
components needs to be minimized. Cryoprotective solu-
tions for effective freezing of MSCs usually contain 10%
Me2SO and fetal serum (FS). These components should be
removed before infusion that is not only time consuming
process but also leads to a significant cell loss. Therefore
the aim of this study was to evaluate the feasibility of platelet
lysate (PL) application as an alternative to xenogeneic FS in
culture and cryopreservation media.
Human adipose tissue-derived MSCs of the 4–6th
passages were used in this study. Cell expansion was carried
out in α-MEM, supplemented with 10% FS or 10% PL. Suc-
rose in concentration of 100 mM was added to the culture
medium 24 hrs prior to cryopreservation for cell pretreat-
ment. The basic composition of the cryopreservation me-
dium was α-MEM supplemented with 200 mM sucrose and/
or 10% FS and 10% PL. MSCs were cooled with the rate of
1 deg/min down to –80°C, following by plunging into liquid
nitrogen. Cell survival was determined by trypan blue
staining. Metabolic activity of cells was assessed by redox
indicators MTT and Alamar Blue. To evaluate colony
forming efficiency the number of colonies and their size
were determined. Induced adipogenic and osteogenic diffe-
rentiation was determined by the accumulation of lipids or
by the alkaline phosphatase expression.
We have shown previously that the pretreatment of
MSCs with sucrose resulted in a significant increase of
their resistance to the cryodamage. About 45% of pretreated
with sucrose and cultured in medium with FS cells after
freezing in the absence of Me2SO preserved their survival
and metabolic activity. Inclusion of PL into the cryopreser-
vation medium improved cell survival by 10–15%. The appli-
cation of PL as an alternative to FS in the culture medium
increased proliferation, colony forming efficiency and
osteogenic differentiation of MSCs. Moreover, the expan-
sion of MSCs in a medium supplemented with PL allowed
improving cell viability after cryopreservation up to 63%.
MSCs after culture and cryopreservation with PL were able
for attachment, proliferation and multilineage differentiation
towards osteogenic and adipogenic lineages. The obtained
results suggest that platelet lysate enhances the efficiency
of MSCs cryopreservation.
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68805 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 2307-6143 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T15:22:42Z |
| publishDate | 2014 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Рогульская, Е.Ю. Петренко, Ю.А. 2014-09-29T17:50:17Z 2014-09-29T17:50:17Z 2014 Тромбоцитарный лизат повышает эффективность криоконсервирования мезенхимальных стромальных клеток / Е.Ю. Рогульская, Ю.А. Петренко // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2014. — Т. 24, № 2. — С. 161. — рос., англ. 2307-6143 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68805 ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Тезисы Тромбоцитарный лизат повышает эффективность криоконсервирования мезенхимальных стромальных клеток Platelet Lysate Enhances Efficiency of Cryopreservation of Mesenchymal Stromal Cells Article published earlier |
| spellingShingle | Тромбоцитарный лизат повышает эффективность криоконсервирования мезенхимальных стромальных клеток Рогульская, Е.Ю. Петренко, Ю.А. Тезисы |
| title | Тромбоцитарный лизат повышает эффективность криоконсервирования мезенхимальных стромальных клеток |
| title_alt | Platelet Lysate Enhances Efficiency of Cryopreservation of Mesenchymal Stromal Cells |
| title_full | Тромбоцитарный лизат повышает эффективность криоконсервирования мезенхимальных стромальных клеток |
| title_fullStr | Тромбоцитарный лизат повышает эффективность криоконсервирования мезенхимальных стромальных клеток |
| title_full_unstemmed | Тромбоцитарный лизат повышает эффективность криоконсервирования мезенхимальных стромальных клеток |
| title_short | Тромбоцитарный лизат повышает эффективность криоконсервирования мезенхимальных стромальных клеток |
| title_sort | тромбоцитарный лизат повышает эффективность криоконсервирования мезенхимальных стромальных клеток |
| topic | Тезисы |
| topic_facet | Тезисы |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68805 |
| work_keys_str_mv | AT rogulʹskaâeû trombocitarnyilizatpovyšaetéffektivnostʹkriokonservirovaniâmezenhimalʹnyhstromalʹnyhkletok AT petrenkoûa trombocitarnyilizatpovyšaetéffektivnostʹkriokonservirovaniâmezenhimalʹnyhstromalʹnyhkletok AT rogulʹskaâeû plateletlysateenhancesefficiencyofcryopreservationofmesenchymalstromalcells AT petrenkoûa plateletlysateenhancesefficiencyofcryopreservationofmesenchymalstromalcells |