Сохранность биологических свойств бактерий рода Enterococcus после криоконсервирования
Збережено в:
| Дата: | 2008 |
|---|---|
| Автори: | , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2008
|
| Назва видання: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68855 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Сохранность биологических свойств бактерий рода Enterococcus после криоконсервирования / М.Н. Калашникова, Е.Г. Перетятко // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 1. — С. 34-36. — Бібліогр.: 5 назв. — рос., англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68855 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-688552025-02-23T18:00:47Z Сохранность биологических свойств бактерий рода Enterococcus после криоконсервирования Integrity of biological properties of Enterococcus bacteria after cryopreservation Калашникова, М.Н. Перетятко, Е.Г. Краткие сообщения 2008 Article Сохранность биологических свойств бактерий рода Enterococcus после криоконсервирования / М.Н. Калашникова, Е.Г. Перетятко // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 1. — С. 34-36. — Бібліогр.: 5 назв. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68855 57.043:579 ru Проблемы криобиологии и криомедицины application/pdf Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Russian |
| topic |
Краткие сообщения Краткие сообщения |
| spellingShingle |
Краткие сообщения Краткие сообщения Калашникова, М.Н. Перетятко, Е.Г. Сохранность биологических свойств бактерий рода Enterococcus после криоконсервирования Проблемы криобиологии и криомедицины |
| format |
Article |
| author |
Калашникова, М.Н. Перетятко, Е.Г. |
| author_facet |
Калашникова, М.Н. Перетятко, Е.Г. |
| author_sort |
Калашникова, М.Н. |
| title |
Сохранность биологических свойств бактерий рода Enterococcus после криоконсервирования |
| title_short |
Сохранность биологических свойств бактерий рода Enterococcus после криоконсервирования |
| title_full |
Сохранность биологических свойств бактерий рода Enterococcus после криоконсервирования |
| title_fullStr |
Сохранность биологических свойств бактерий рода Enterococcus после криоконсервирования |
| title_full_unstemmed |
Сохранность биологических свойств бактерий рода Enterococcus после криоконсервирования |
| title_sort |
сохранность биологических свойств бактерий рода enterococcus после криоконсервирования |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| publishDate |
2008 |
| topic_facet |
Краткие сообщения |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68855 |
| citation_txt |
Сохранность биологических свойств бактерий рода Enterococcus после криоконсервирования / М.Н. Калашникова, Е.Г. Перетятко // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 1. — С. 34-36. — Бібліогр.: 5 назв. — рос., англ. |
| series |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| work_keys_str_mv |
AT kalašnikovamn sohrannostʹbiologičeskihsvojstvbakterijrodaenterococcusposlekriokonservirovaniâ AT peretâtkoeg sohrannostʹbiologičeskihsvojstvbakterijrodaenterococcusposlekriokonservirovaniâ AT kalašnikovamn integrityofbiologicalpropertiesofenterococcusbacteriaaftercryopreservation AT peretâtkoeg integrityofbiologicalpropertiesofenterococcusbacteriaaftercryopreservation |
| first_indexed |
2025-11-24T08:09:19Z |
| last_indexed |
2025-11-24T08:09:19Z |
| _version_ |
1849658451635994624 |
| fulltext |
34
УДК 57.043:579
М.Н. КАЛАШНИКОВА1* , Е.Г. ПЕРЕТЯТКО2
Сохранность биологических свойств бактерий рода Enterococcus
после криоконсервирования
UDC 57.043:579
M.N. KALASHNYKOVA1*, E.G. PERETYATKO2
Integrity of Biological Properties of Enterococcus
Bacteria After Cryopreservation
* Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015; тел.:+38
(057) 373-31-26, факс: +38 (057) 373-30-84, электронная почта:
cryo@online.kharkov.ua
* To whom correspondence should be addressed: 23, Pereyaslavskaya
str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 373 3126, fax: +380 57
373 3084, e-mail: cryo@online.kharkov.ua
1Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na-
tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
2I.I. Mechnikov Institute of Microbiology and Immunology of the
Academy of Medical Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
1Институт проблем криобиологии и криомедицины
НАН Украины, г. Харьков
2ГУ”Институт микробиологии и иммунологии им. И.И. Мечникова
АМН Украины”, г. Харьков
Наиболее распространенными источниками
внутрибольничных и гнойно-септических инфекций
являются бактерии рода Enterococcus [1, 5]. Для
разработки методов диагностики, профилактики и
терапии заболеваний, вызываемых этими бакте-
риями, необходимо создание коллекций эталонных
штаммов и клинических изолятов данных бакте-
рий. Наиболее перспективный метод долгосроч-
ного хранения энтерококков в коллекциях микро-
организмов – криоконсервирование. Работ по
криоконсервированию бактерий рода Enterococcus
в доступной литературе мало и они фрагментарны.
Цель работы – изучение влияния режимов
охлаждения и состава консервирующих сред на
жизнеспособность бактерий рода Enterococcus, а
также исследование сохранности их биохимичес-
ких и некоторых биологических свойств после крио-
консервирования.
Материалы и методы
Объектами исследования служили штаммы
E.faecalis АТСС № 29213 и клинические штаммы
E.faеcium №113 и №167, выделенные от больных
пиелонефритом. Культуры выращивали на энте-
рококк-агаре в течение 48 ч при 37°С. Бактериаль-
ные клетки смывали дистиллированной водой,
физиологическим раствором натрия хлорида и са-
харным бульоном [4]. Суспензию бактерий вносили
(по 1,0 мл) в криопробирки объемом 1,8 мл и замо-
раживали по трем режимам: 1 – быстрое погруже-
ние образцов в жидкий азот; 2 – охлаждение со
скоростью 1°С/мин от 18 до –40°С с последующим
погружением в жидкий азот; 3 – охлаждение со
скоростью 2–3°С /мин от 18 до –28°С, выдержива-
ние при этой температуре в течение 15 мин, и пос-
ледующее погружение в жидкий азот. Образцы
хранили в жидком азоте, отогревали на водяной
The most spread sources of intra-hospital and pyo-
septic infections are Enterococcus bacteria [1, 5].
To develop the methods for diagnosis, prophylaxis and
therapy of the diseases, caused by these bacteria it is
necessary to establish the collections of reference
strains and clinical isolates of these bacteria. Cryopre-
servation is the most perspective method of long-term
storage of enterococci in the collections of microorga-
nisms. The papers devoted to the questions of cryo-
preservation of Enterococcus bacteria in available
literature are inconsiderable in number and fragmen-
tary.
The research aim was to study the effect of cooling
regimens and composition of preserving media on
viability of Enterococcus bacteria as well as to
investigate the survival of biochemical and biological
properties of bacteria after cryopreservation.
Materials and methods
The research objects were strains of E. faecalis
ATCC N 29213 and two clinical strains of E. faecium
N113 and N167 isolated from the patients with pyelone-
phritis. The cultures were grown on enterococcal agar
for 48 hrs at 37°C.Bacterial cells were washed-out
with distilled water, physiological solution of NaCl and
sugar broth [4]. Bacterial suspension of 1.0 ml volume
were introduced into 1.8 ml cryovials and freezing was
performed according to 3 regimens: regimen 1 was a
rapid plunging of samples into liquid nitrogen; regimen
2 comprised cooling with the rate of 1°C/min from
18°C down to –40°C and following submersion into
liquid nitrogen; regimen 3 consisted of cooling with the
rate of 2–3°C/min from 18°C down to –28°C, maintai-
ning at this temperature for 15 min and following
immersion into liquid nitrogen. The samples were stored
in liquid nitrogen and warmed on water bath at 37°C.
Bacterial viability was evaluated with Koch dish method
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №1
35
бане при 37°С. Жизнеспособность бактерий оцени-
вали чашечным методом Коха [2], а их биохими-
ческие свойства изучали с помощью набора EN-
COCCUStest (PLIVA-Lachema Diagnostika, Чеш-
ская республика). Дополнительно определяли ре-
зистентность бактерий к теллуриту калия, каталаз-
ную, гемолитическую активность и подвижность
[3]. Статистическую обработку полученных дан-
ных проводили с помощью t-критерия Стьюдента,
значения р≤0,05 считали достоверными.
Результаты и обсуждение
Жизнеспособность бактерий Enterococcus
faecalis при замораживании по всем режимам была
достоверно ниже исходной (р≤0,05), кроме
бактерий, суспендированных в сахарном бульоне
после охлаждения по режиму 3 (оставалась на
уровне контроля). При замораживании бактерий
Enterococcus faecium (штамм № 167), суспен-
дированных в дистиллированной воде и сахарном
бульоне, количество живых клеток, замороженных
по режиму 3, достоверно снижалось по сравнению
с контролем, а в образцах, замороженных по режи-
мам 1 и 2, наблюдалась тенденция к их снижению.
При замораживании бактерий в физиологическом
растворе большую выживаемость клеток обеспе-
чивало охлаждение по режиму 2 (выживаемость
клеток на уровне контроля), более низкую – по
режимам 1 и 3.
В экспериментах с бактериями Enterococcus
faecium (штамм № 113) жизнеспособность клеток,
суспендированных в дистиллированной воде по
всем режимам, после замораживания оставалась
на уровне контроля. Количество живых клеток,
суспендированных в физиологическом растворе по
режимам 2 и 3, после замораживания также оста-
валось на уровне контроля, а по режиму 1 досто-
верно отличалось от него. Напротив, при заморажи-
вании исследуемых бактерий в сахарном бульоне
количество живых клеток по сравнению с контроль-
ными образцами достоверно отличалось после
охлаждения по режимам 2 и 3, а при охлаждении
по режиму 1 – оставалось на уровне контроля.
Установлено, что режим охлаждения и состав
среды консервирования не влияют на сохранность
биохимических свойств криоконсервированных
бактерий рода Enterococcus. Кроме того, не выяв-
лены изменения каталазной, гемолитической
активности, подвижности и резистентности к
теллуриту калия.
Выводы
1. Показана возможность эффективного крио-
консервирования бактерий рода Enterococcus.
2. На жизнеспособность энтерококков в процес-
се криоконсервирования оказывают влияние сос-
[2]. Biochemical properties were studied using the EN-
COCCUStest kit (PLIVA-Lachema Diagnostika,
Czech Republic). Resistance of bacteria to potassium
tellurite, catalase and hemolytical activities, motility [3]
were additionally determined. The data were
statistically processed using t- Student’s criterion, the
values p ≤0.05 were considered as statistically
significant.
Results and discussion
When freezing Enterococcus faecalis bacteria
according to the regimens the viability of bacteria was
statistically and significantly lower than initial number
(p≤ 0.05) except the bacteria suspended on sugar broth
after cooling on regimen 3, it remained at the control
level. During freezing of Enterococcus faecium
bacteria N 167, suspended in distilled water and sugar
broth, the number of living cells, frozen on regimen 3,
statistically significantly reduced compared with the
control and in the samples frozen with regimens 1 and
2 had a tendency to the reduction. When freezing the
bacteria in physiological solution the cooling on regimen
2 provided hight survival (cell survival at the control
level) and a lower one according to regimens 1 and 3.
In the experiments with Enterococcus faecium
bacteria, strain N 113 the viability of cells suspended
in distilled water according to all the regimens remained
at the control level after freezing. The number of living
cells suspended in physiological solution according to
regimens 2 and 3 after freezing was also kept at the
control level, and for regimen 1 it differed statistically
from the control level. On the contrary, when freezing
these bacteria in sugar broth the cell number in
comparison with the control samples statistically and
significantly differed after cooling with regimens 2
and 3, and remained at the control level with regimen 1.
When studying the integrity of biochemical proper-
ties of the bacteria under cryopreservation it was
established that cooling regimen and composition of
preservation medium did not affect the integrity of
biochemical properties of the bacteria under study.
Moreover, no catalase and hemolytical activities,
motility, resistence to potassium tellurite change were
revealed.
Conclusions
1. The possibility of effective cryopreservation of
Enterococcus bacteria has been shown.
2. Viability of enterococci during preservation is
affected by the composition of preserving medium,
cooling regimen and initial morphofunctional species
cell peculiarities. Enterococcus faecium bacteria
occured out to be more resistant to freezing. The featu-
res of cell structure of the studied enterococci of this
type are likely to provide their higher resistance to
physical and chemical factors accompanying the pro-
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №1
36
тав консервирующей среды, режим охлаждения и
исходные морфофункциональные видовые особен-
ности клеток.
Более устойчивыми к замораживанию оказа-
лись бактерии Enterococcus faecium. По-види-
мому, особенности их строения обеспечивают
более высокую по сравнению с бактериями вида
faecalis резистентность к физико-химическим
факторам, сопровождающим процессы охлаждения
и отогрева.
3. Замораживание до –196°С при различных
режимах охлаждения и средах криоконсервиро-
вания не влияет на биохимические и биологические
свойства бактерий рода Enterococcus, что свиде-
тельствует об эффективности метода криокон-
сервирования при долгосрочном хранении бактерий
этого рода в коллекциях микроорганизмов.
cess of cooling-warming, if compared with faecalis
bacteria.
Freezing down to –196°C using various cooling
regimens and cryopreservation media does not affect
biochemical and biological properties of bacteria under
study, thereby testifying to the efficiency of application
of cryopreservation method at long-term storage of
Enterococcus bacteria in collections of microorga-
nisms.
References
Bukharin O.V., Bilimova S.I., Chertkov K.L. Mechanisms of
survival of enterococci in host organism // Zhurnal
Mikrobiologii, Epidemologii i Immunologii.– 2002.– N3.– P. 100–
106.
Lusta K.A., Fikhte B.A. Methods for determining viability of
microorganisms/ Ed. by V.K. Eroshin.– Puschino, 1990.– 186 p.
Methodical recommendations on isolation and identification
of enterococci. – Ivanovo, 1982. – 19 p.
General and sanitary microbiology with the technique of
microbiological studies: Tutorial manua l/ Ed. by A.S. Labins-
kaya, L.P. Blinkova, A.S. Eschina. – Moscow: Meditsina, 2004.–
576 p.
Dobson S.R., Baker C.J. Enterococcal sepsis in neonates:
features by age at onset and occurrence of focal infection//
Pediatrics. –1990.– Vol. 85, N2.– P. 165–171.
Accepted in 13.05.2008
1.
2.
3.
4.
5.
Литература
Бухарин О.В., Билимова С.И., Чертков К.Л. Механизмы
выживания энтерококков в организме хозяина // Журн.
микробиологии, эпидемиологии и иммунологии.– 2002.–
№3.– С. 100–106.
Луста К.А., Фихте Б.А. Методы определения жизнеспо-
собности микроорганизмов/ Под ред. В.К. Ерошина.–
Пущино, 1990.– 186 с.
Методические рекомендации по выделению и иденти-
фикации энтерококков.– Иваново, 1982.– 19 с.
Общая и санитарная микробиология с техникой микро-
биологических исследований: Учеб. пособие / Под ред.
А.С. Лабинской, Л.П. Блинковой, А.С. Ещиной.– М.: Меди-
цина, 2004.– 576 с.
Dobson S.R., Baker C.J. Enterococcal sepsis in neonates:
features by age at onset and occurrence of focal infection //
Pediatrics.– 1990.–Vol. 85, N2.– P. 165–171.
Поступила 13.05.2008
1.
2.
3.
4.
5.
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №1
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №1
|