Оценка энергетического состояния клеток после криоконсервации
Saved in:
| Published in: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Date: | 2008 |
| Main Authors: | , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2008
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68979 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Оценка энергетического состояния клеток после криоконсервации / О.А. Лопатина, Г.И. Морозова, Г.А. Данлыбаева, Е.Л. Фирсова, Р.Я. Подчерняева // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 230. — рос., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68979 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Лопатина, О.А. Морозова, Г.И. Данлыбаева, Г.А. Фирсова, Е.Л. Подчерняева, Р.Я. 2014-10-03T07:08:11Z 2014-10-03T07:08:11Z 2008 Оценка энергетического состояния клеток после криоконсервации / О.А. Лопатина, Г.И. Морозова, Г.А. Данлыбаева, Е.Л. Фирсова, Р.Я. Подчерняева // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 230. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68979 ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Cтендовые доклады Оценка энергетического состояния клеток после криоконсервации Estimation of Cell Energetic State After Cryopreservation Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Оценка энергетического состояния клеток после криоконсервации |
| spellingShingle |
Оценка энергетического состояния клеток после криоконсервации Лопатина, О.А. Морозова, Г.И. Данлыбаева, Г.А. Фирсова, Е.Л. Подчерняева, Р.Я. Cтендовые доклады |
| title_short |
Оценка энергетического состояния клеток после криоконсервации |
| title_full |
Оценка энергетического состояния клеток после криоконсервации |
| title_fullStr |
Оценка энергетического состояния клеток после криоконсервации |
| title_full_unstemmed |
Оценка энергетического состояния клеток после криоконсервации |
| title_sort |
оценка энергетического состояния клеток после криоконсервации |
| author |
Лопатина, О.А. Морозова, Г.И. Данлыбаева, Г.А. Фирсова, Е.Л. Подчерняева, Р.Я. |
| author_facet |
Лопатина, О.А. Морозова, Г.И. Данлыбаева, Г.А. Фирсова, Е.Л. Подчерняева, Р.Я. |
| topic |
Cтендовые доклады |
| topic_facet |
Cтендовые доклады |
| publishDate |
2008 |
| language |
Russian |
| container_title |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Estimation of Cell Energetic State After Cryopreservation |
| issn |
0233-7673 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68979 |
| citation_txt |
Оценка энергетического состояния клеток после криоконсервации / О.А. Лопатина, Г.И. Морозова, Г.А. Данлыбаева, Е.Л. Фирсова, Р.Я. Подчерняева // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 230. — рос., англ. |
| work_keys_str_mv |
AT lopatinaoa ocenkaénergetičeskogosostoâniâkletokposlekriokonservacii AT morozovagi ocenkaénergetičeskogosostoâniâkletokposlekriokonservacii AT danlybaevaga ocenkaénergetičeskogosostoâniâkletokposlekriokonservacii AT firsovael ocenkaénergetičeskogosostoâniâkletokposlekriokonservacii AT podčernâevarâ ocenkaénergetičeskogosostoâniâkletokposlekriokonservacii AT lopatinaoa estimationofcellenergeticstateaftercryopreservation AT morozovagi estimationofcellenergeticstateaftercryopreservation AT danlybaevaga estimationofcellenergeticstateaftercryopreservation AT firsovael estimationofcellenergeticstateaftercryopreservation AT podčernâevarâ estimationofcellenergeticstateaftercryopreservation |
| first_indexed |
2025-11-25T14:02:41Z |
| last_indexed |
2025-11-25T14:02:41Z |
| _version_ |
1850516411414216704 |
| fulltext |
Оценка энергетического состояния клеток после криоконсервации
О. А. ЛОПАТИНА1, Г. И. МОРОЗОВА2, Г. А. ДАНЛЫБАЕВА1, Е. Л. ФИРСОВА1, Р. Я. ПОДЧЕРНЯЕВА1
1ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, г. Москва
2Российский университет дружбы народов, г. Москва
Estimation of Cell Energetic State After Cryopreservation
O.A. LOPATINA1, G.I. MOROZOVA2, G.A. DANLYBAYEVA1, E.L. FIRSOVA1, P.YA. PODCHERNYAYEVA1
1D.I. Ivanovsky Research Institute of Virology of Russian Academy of Medical Sciences, Moscow, Russia
2Peoples’ Friendship University of Russia, Moscow, Russia
Методом долгосрочного хранения клеточных линий
является их криоконсервация и хранение суспензий кле-
ток в жидком азоте.
Эффективность применения клеточных линий после
деконсервации во многом зависит от степени восстанов-
ления их исходных свойств. Показано, что клетки с более
высоким уровнем энергетического обмена способны
сохранять достаточно высокий уровень функциональ-
ной активности [Тощаков В.Ю. и соавт., 1989].
Цель работы − изучение состояния трансмембран-
ных потенциалов (ТМП) и митохондриальной активнос-
ти (МА) в нервных клетках мозга хорька (Mpf) в процессе
размораживания. Для изучения процессов, происходя-
щих в клетках, использовали флюоресценцию потенциал-
чувствительного зонда – катиона 4-(n-диметиламино-
стирил)-1-метилпиридиния (ДСМ), синтезированного в
Институте органического синтеза АН Латвии [Морозо-
ва Г.И. и соавт., 1981]. С целью выбора контрольных
клеток в адекватном физиологическом (энергетическом)
состоянии клетки исследовали через различные вре-
менные интервалы после их размораживания (3–24 ч).
Культуры клеток Mpf окрашивали флуоресцентным
зондом ДСМ при добавлении физиологического раст-
вора с ДСМ к суспензии клеток. В первой серии экспери-
ментов определяли оптимальный режим инкубации кле-
ток с различными концентрациями зонда (от 1 до 50 мкМ
в конечной концентрации). Клетки инкубировали c зон-
дом при 20 и 37°С в течение 15–60 мин. Все препараты
исследовали в люминесцентном микроскопе ЛЮМАМ
И-2 (ЛОМО). Интенсивность флюоресценции (F) в каж-
дой клетке (в области митохондрий) регистрировали с
помощью фотометрической насадки ФМЭЛ через
оптический зонд. Для каждого образца измеряли по 50–
100 клеток в опыте и контроле. Установлено, что концен-
трации 2 и 5 мкМ ДСМ в среде и время инкубации 40
или 20 мин с зондом при 20 и 37°С соответственно яв-
ляются оптимальными. В дальнейшем эксперименты
проводили в этих условиях.
Установлено, что F ДСМ в митохондриях клеток
зависит от времени их культивирования в течение суток
после размораживания. Экспериментальные оценки
показали, что в течение 1–3 ч с момента начала культиви-
рования таких клеток сохраняется низкий уровень ТМП,
а наиболее высокий их уровень, сопряженный, прежде
всего, с энергизацией митохондрий, достигается только
через 12 ч. Такая динамика ТМП в клетках может отра-
жать изменения свойств разных мембран, а именно: их
вязкости и (или) ионной проницаемости (на фоне тем-
пературного скачка в среде после размораживания),
изменение протонного потенциала на мембранах мито-
хондрий в процессе метаболической активации и проли-
ферации [Добрецов Г.Е., 1989; Веренинов А.А., 1986;
Скулачев В.П., 1987].
При сопоставлении экспериментальных данных
установлено, что биофизический параметр F может быть
использован как оценка физиологического (прежде всего
энергетического) состояния клеток.
230 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №2
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №2
The method providing a long-term storage for cell lines
is their cryopreservation and cell suspension storage in a
liquid nitrogen.
The efficiency of applying the cell lines after freeze-
thawing mostly depends on the recovery degree of their
initial properties. The cells with higher level of energetic
metabolism were shown to preserve quite a high level of
functional activity [Toshchakov et al., 1989].
The research was targeted to study the state of trans-
membrane potentials (TMP) and mitochondrial activity in
nerve cells of ferret brain (Mpf) during freeze-thawing. To
investigate the processes, occurring in cells, we have used
the fluorescence of potential-sensitive probe: cation 4-(n-
dimetilaminostiril)-1-methylpyridinium (DSM), synthesized
at the Latvian Institute of Organic Synthesis [Morozo-
va et al.s, 1981]. In order to select the control cells in adequa-
te physiological (energetic) state the cells were studied in
different time intervals after their thawing (3–24 hrs).
The Mpf cell cultures were stained with DSM fluores-
cent probe when adding physiological solution with DSM
into cell suspension. In the first experimental series we have
determined the optimal regimen for cell incubation with
different probe concentrations (from 1 to 50 мM final
concentration). Cells were incubated with probe at 20 and
37°C for 15–60 min. All preparations were studied under
LUMAM I-2 luminescent microscope (LOMO). The inten-
sity of fluorescence (F) in each cell (in mitochondrial area)
was recorded with PMEL photometrical attachment via
optical probe. For each sample we measured 50–100 cells in
the experiment and the control. The concentration of 2 and
5 мM DSM in medium and 40 or 20 min incubation time with
probe at 20 and 37°C, correspondingly, were established as
optimal. Further experiments were performed under these
conditions.
There was established that F of DSM in cell mitochon-
dria depended on time of their culturing within a day after
thawing. The experimental assessments have demonstrated
that during 1–3 hrs from these cells’ culturing beginning
there is preserved a low level of TMP, and the highest one,
primarily conjugated with mitochondrial energization, is
only achieved in 12 hrs. This TMP dynamics in cells may
reflect the changes in properties of different membranes,
namely their viscosity and/or ion permeability (at the
background of temperature jump in the medium after tha-
wing), change in proton potential on mitochondrial membra-
ne during metabolic activation and proliferation [Dobretsov,
1989; Vereninov, 1986; Skulachev, 1987].
When comparing experimental data the biophysical para-
meter F was established as possible to be applied in estima-
ting physiological (primarily energetic) cell state.
|