Использование β-дикетонов Eu как метчика в клетках при криоконсервировании
Saved in:
| Published in: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Date: | 2008 |
| Main Authors: | , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2008
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68981 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Использование β-дикетонов Eu как метчика в клетках при криоконсервировании / Е.И. Гончарук, Е.В. Онищенко, П.Н. Жмурин, Н.А. Волкова // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 232. — рос., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859654584197185536 |
|---|---|
| author | Гончарук, Е.И. Онищенко, Е.В. Жмурин, П.Н. Волкова, Н.А. |
| author_facet | Гончарук, Е.И. Онищенко, Е.В. Жмурин, П.Н. Волкова, Н.А. |
| citation_txt | Использование β-дикетонов Eu как метчика в клетках при криоконсервировании / Е.И. Гончарук, Е.В. Онищенко, П.Н. Жмурин, Н.А. Волкова // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 232. — рос., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| first_indexed | 2025-12-07T13:38:12Z |
| format | Article |
| fulltext |
After cells’ freeze-thawing of importance is to confirm
their integrity and authenticity. The europium ions, charac-
terized by a narrow-band luminescence, may be used for
cell culture labeling and testing. The research was targeted
to study the interaction of Eu β-diketones (europium aceto-
tienyltrifluoracetone) with human fibroblast cell diploid
culture prior to and after cryopreservation.
The culturing was carried-out under the standard con-
ditions up to cell achieving 70% confluent, afterwards cells
were stained with Eu β-diketone solutions, synthesized at
the Institute for Scintillation Materials of State Scientific
Institution “Institute for Single Crystals” of NAS of Ukraine.
The absorption and emission spectra of cells, labeled with
this dye, were recorded with Flouoro-Max-4 spectrofluori-
meter (Horiba). Labeled cells were cryopreserved by the
3-step program with 7% DMSO. Dye distribution in cells
was assessed using the scanning confocal microscope
(Zeiss) at 488 nm excitation. Staining was quantitatively
estimated using the cytoflurimetry method (FACS Calibur,
BD). Non-cryopreserved cell cultures served as the control.
Fluorescence spectrum at 350 nm excitation of cell cultu-
re, stained with Eu β-diketones, was characterized by a nar-
row peak with the maximum at λ=616 nm, significantly
exceeding the own cell fluorescence by the intensity. Stu-
dying the Eu β-diketone distribution in proliferating cell
culture has demonstrated the dye binding with cell cyto-
plasm organelles, the luminescence was noted in red range.
Statistically significant decrease in adhesive ability and
growth rate was noted under long-term culturing of labeled
cells. Confocal microscopy has shown the dye release into
an extracellular space, that may testify to the unstable dye
binding with organelles. This fact is confirmed by cytofluo-
rimetric data: a number of stained cells after cryopreser-
vation decreased in 2.5 times. The thermograms of frozen
native and labeled cells did not differ, i.e. the integration of
this chelative compound did not affect the cryopreservation.
The results obtained testify to the fact that the Eu β-
diketones may be used for cell culture study and identifi-
cation. Such capability of this marker as a narrow-band
luminescence is the unique bar-code to confirm the authen-
ticity of long-term stored and transported samples.
The research was carried-out under STCU grant 4358
support.
Использование βββββ-дикетонов Eu как метчика в клетках при криоконсервировании
Е.И. ГОНЧАРУК1, Е.В. ОНИЩЕНКО1, П.Н. ЖМУРИН2, Н.А. ВОЛКОВА1
1Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
2Институт сцинтилляционных материалов НТК “Институт монокристаллов” НАН Украины, г. Харьков
Usage of Eu βββββ-diketones as Marker in Cells Under Cryopreservation
E.I. GONCHARUK1, E.V. ONISCHENKO1, P.N. ZHMURIN2, N.A. VOLKOVA1
1Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine
of the National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
2Institute for Scintillation Materials of State Scientific Institution “Institute for Single Crystals” of
National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
232 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №2
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №2
После деконсервирования клеток важно подтвердить
их сохранность и аутентичность. Ионы европия, характе-
ризующиеся узкополосной люминесценцией, могут
быть использованы для мечения и тестирования клеточ-
ных культур. Цель работы – исследование взаимодейст-
вия β-дикетонов Eu (ацетотиенилтрифторацетон евро-
пия) с диплоидной культурой клеток фибробластов чело-
века до и после криоконсервирования.
Культивирование проводили в стандартных условиях
до достижения клетками 70% конфлюэнта, после чего
клетки окрашивали растворами β-дикетонов Eu, синте-
зированных в ИСМА НТК “Институт монокристаллов”.
Спектры поглощения и испускания клеток, меченных
данным красителем, регистрировали на спектрофлуо-
риметре FluoroMax-4 (Horiba, США). Криоконсер-
вирование меченых клеток проводили по 3-этапной
программе с использованием 7% ДМСО. Распределение
красителя в клетках оценивали с помощью сканирую-
щего конфокального микроскопа (Zeiss) при возбужде-
нии 488 нм. Количественную оценку окрашивания
проводили методом проточной цитофлуориметрии
(FACS Calibur, BD). Контролем служили некриоконсер-
вированные культуры клеток.
Спектр флуоресценции при возбуждении на 350 нм
культуры клеток, меченных β-дикетонами европия,
характеризовался узким пиком с максимумом при
λ = 616 нм, значительно превышающим по интенсив-
ности собственную флуоресценцию клеток. Исследова-
ние распределения β-дикетонов европия в пролифери-
рующей культуре клеток показало связывание красителя
с органеллами цитоплазмы клеток, свечение наблюда-
лось в красной области. При долгосрочном культивиро-
вании меченых клеток отмечено достоверное снижение
их адгезивной способности и скорости роста. Конфокаль-
ная микроскопия показала выход красителя во внеклеточ-
ное пространство, что может свидетельствовать о не-
прочном связывании красителя с органеллами. Этот факт
подтверждается данными цитофлуориметрии: количест-
во окрашенных клеток после криоконсервирования
снижается в 2,5 раза. Термограммы замораживания
нативных и меченых клеток не отличались, т.е. интеграция
данного хелатного соединения не оказывала влияния на
криоконсервирование.
Полученные результаты свидетельствуют, что β-дике-
тоны Eu могут использоваться для исследования и иден-
тификации культур клеток. Такая особенность данного
метчика как узкополосная люминесценция является
уникальным штрих-кодом для подтверждения аутентич-
ности длительно сохраняемых или транспортируемых
образцов.
Работа выполнена при поддержке гранта УНТЦ 4358.
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-68981 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T13:38:12Z |
| publishDate | 2008 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Гончарук, Е.И. Онищенко, Е.В. Жмурин, П.Н. Волкова, Н.А. 2014-10-03T07:11:28Z 2014-10-03T07:11:28Z 2008 Использование β-дикетонов Eu как метчика в клетках при криоконсервировании / Е.И. Гончарук, Е.В. Онищенко, П.Н. Жмурин, Н.А. Волкова // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 232. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68981 Работа выполнена при поддержке гранта УНТЦ 4358. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Cтендовые доклады Использование β-дикетонов Eu как метчика в клетках при криоконсервировании Usage of Eu β-diketones as Marker in Cells Under Cryopreservation Article published earlier |
| spellingShingle | Использование β-дикетонов Eu как метчика в клетках при криоконсервировании Гончарук, Е.И. Онищенко, Е.В. Жмурин, П.Н. Волкова, Н.А. Cтендовые доклады |
| title | Использование β-дикетонов Eu как метчика в клетках при криоконсервировании |
| title_alt | Usage of Eu β-diketones as Marker in Cells Under Cryopreservation |
| title_full | Использование β-дикетонов Eu как метчика в клетках при криоконсервировании |
| title_fullStr | Использование β-дикетонов Eu как метчика в клетках при криоконсервировании |
| title_full_unstemmed | Использование β-дикетонов Eu как метчика в клетках при криоконсервировании |
| title_short | Использование β-дикетонов Eu как метчика в клетках при криоконсервировании |
| title_sort | использование β-дикетонов eu как метчика в клетках при криоконсервировании |
| topic | Cтендовые доклады |
| topic_facet | Cтендовые доклады |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/68981 |
| work_keys_str_mv | AT gončarukei ispolʹzovanieβdiketonoveukakmetčikavkletkahprikriokonservirovanii AT oniŝenkoev ispolʹzovanieβdiketonoveukakmetčikavkletkahprikriokonservirovanii AT žmurinpn ispolʹzovanieβdiketonoveukakmetčikavkletkahprikriokonservirovanii AT volkovana ispolʹzovanieβdiketonoveukakmetčikavkletkahprikriokonservirovanii AT gončarukei usageofeuβdiketonesasmarkerincellsundercryopreservation AT oniŝenkoev usageofeuβdiketonesasmarkerincellsundercryopreservation AT žmurinpn usageofeuβdiketonesasmarkerincellsundercryopreservation AT volkovana usageofeuβdiketonesasmarkerincellsundercryopreservation |