Эффективность применения линейной и экспоненциальной программ замораживания лейкоцитов до –80°C
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Дата: | 2008 |
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2008
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69005 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Эффективность применения линейной и экспоненциальной программ замораживания лейкоцитов до –80°C / А.Н. Худяков, Е.П. Сведенцов, Т.В. Туманова, А.А. Костяев // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 256. — рос., англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860212407432904704 |
|---|---|
| author | Худяков, А.Н. Сведенцов, Е.П. Туманова, Т.В. Костяев, А.А. |
| author_facet | Худяков, А.Н. Сведенцов, Е.П. Туманова, Т.В. Костяев, А.А. |
| citation_txt | Эффективность применения линейной и экспоненциальной программ замораживания лейкоцитов до –80°C / А.Н. Худяков, Е.П. Сведенцов, Т.В. Туманова, А.А. Костяев // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 256. — рос., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| first_indexed | 2025-12-07T18:14:48Z |
| format | Article |
| fulltext |
Эффективность применения линейной и экспоненциальной программ
замораживания лейкоцитов до –80°C
А.Н. ХУДЯКОВ1, Е.П. СВЕДЕНЦОВ1, Т.В. ТУМАНОВА1, А.А. КОСТЯЕВ2
1Институт физиологии Коми НЦ УрО РАН, г. Сыктывкар
2Кировский НИИ гематологии и переливания крови Росмедтехнологий
Efficiency of Applying Linear and Exponential Programs
for Leukocyte Freezing Down to –80°C
A.N. KHUDYAKOV1, E.P. SVEDENTSOV1, T.V. TUMANOVA1, A.A. KOSTYAEV2
1Institute of Physiology of Komi Scientific Center of Ural Division
of Russian Academy of Sciences, Syktyvkar, Russia
2Kirov Research Institute of Hematology and Blood Transfusion, Russia
В настоящее время для замораживания клеток крови
и костного мозга широко используются линейные прог-
раммы, тогда как раньше ряд авторов [Гордиенко Е.А. и
соавт., 1994; Сведенцов Е.П. и соавт., 1987; Костяев А.А.
и соавт., 2003] предложили применять и экспоненциаль-
ные. Цель данного исследования − изучение эффектив-
ности применения линейной и экспоненциальной прог-
рамм замораживания лейкоцитов до –80°С.
Объектом исследования служил концентрат лейкоци-
тов, выделенный из цельной донорской крови при цита-
ферезе. Использовали оригинальный малотоксичный
хладоограждающий раствор (Пат. № 2290808, 2007), содер-
жащий криопротектор смешанного действия гексамети-
ленбистетраоксиэтилмочевину, криопротектор эндоцел-
люлярного действия ДМСО и “реставрирующую”
добавку широкого спектра действия. Биообъект смеши-
вали с раствором в соотношении 1:1 и выдерживали при
комнатной температуре 20 мин. Замораживание прово-
дили по двум программам: экспоненциальной (серия 1)
и линейной (серия 2). В серии 1 контейнер с лейкоцитами
погружали в заполненную хладоносителем (96% этило-
вым спиртом) ванну камеры электроморозильника
(объем 4 л) “Криостат”. Клеточную взвесь выдерживали
при –28°C(температура адаптации) в течение 15–18 мин
в зависимости от объема среды и переносили для даль-
нейшего замораживания и хранения в электроморо-
зильник (–80°С). В серии 2 контейнер с лейкоцитами
помещали в программный замораживатель УОП и замо-
раживали биообъект по следующей программе: на 1-м
этапе со скоростью 1°C/мин от 22 до – 7°C, на 2-м этапе –
–10°C/мин от –7 до –40°C, на 3-м этапе – –20°C/мин от
–40 до –80°C. Образцы хранили при –80°С в течение
суток в электрическом морозильнике, отогревали в водя-
ной ванне при 38°С в течение 35–50 с при интенсивном
покачивании контейнера.
Установлено, что количество клеток, устойчивость
их мембран к витальному красителю эозину, содержание
лизосомально-катионных белков в нейтрофилах после
отогрева в сериях 1 (n=12) и 2 (n=12) достоверно (p<0,05)
не отличаются. При оценке морфологического состава
лейкоцитов, замороженных по линейной программе,
количество гранулоцитов составило 87,5±6,55% (от
исходного уровня), а при использовании экспоненциаль-
ной – достоверно выше (94,5±6,9%), однако фагоцитар-
ная активность нейтрофилов данной серии была ниже
(78,13±5,9%), чем в серии с применением линейной прог-
раммы (88,9±5,41%).
Следовательно, линейная и экспоненциальная прог-
раммы замораживания лейкоцитов до –80°С с приме-
ненным криоконсервантом по эффективности значи-
тельно не отличаются, но экспоненциальная программа
имеет низкую экономическую стоимость и является
более доступной в методическом плане.
Nowadays there are widely used the linear programs for
blood and bone marrow cell freezing, meanwhile some
authors [Gordienko E.A. et al., 1994; Svedentsov E.P. et al,
1987; Kostyaev A.A. et al., 2003] previously proposed to
use the exponential programs as well. This research aim
was to study the efficiency of applying the linear and expo-
nential programs for erythrocyte freezing down to –80°C.
The research object was the leukocyte concentrate, iso-
lated from the whole donor blood under cytapheresis. We
used the original low toxic cold-protecting solution (Patent
N 2290808, 2007), containing hexamethylene-bis-tetetra-
oxyethyl-urea cryoprotectant of mixed effect, DMSO
cryoprotectant of endocellular effect and a “renewing” addi-
tive of wide spectrum. Bioobjects were mixed with solution
in 1:1 ratio and exposed at room temperature for 20 min.
Freezing was carried-out by two programs: exponential (1st
series) and linear (2nd series) ones. In the 1st series the contai-
ner with leukocytes was immersed into the bath of “Krio-
stat” electrofreezer chamber (4 l volume), filled with coolant
(96% ethyl alcohol) bath. Cell suspension was exposed at
–28°C (adaptation temperature) within 15–18 min depending
on the medium volume and transferred into electrofreezer
at –80°C for further freezing and storage. In the 2nd series
the container with leukocytes was placed into the UOP
programmed freezer and the bioobject was frozen according
to the following program: at the 1st step with 1°C/min rate
from 22 to –7°C, at the 2nd step with 10°C/min from –7 to –
40°C, and with 20°C/min from 40 to –80°C at the 3rd one.
Samples were stored at –80°C for 1 day in electric freezer,
thawed with water bath at 38°C for 35–50 sec under intensive
shaking of container.
The number of cells, their membrane resistance to eosin
vital dye, content of lysosome-cation proteins in neutrophils
after thawing in 1st (n=12) and 2nd (n=12) series were
established as not statistically and significantly differed
(p<0.05). When estimating a morphologic composition of
leukocytes, frozen by a linear program, the granulocyte
number was 87.5±6.55% (of initial level), and with the
exponential one it was statistically and significantly higher
(94.5±6.9%), but neutrophil phagocyte activity in these
series was lower (78.13±5.9%), than in the series with linear
program (88.9±5.41%).
Consequently, the linear and exponential programs for
leukocyte freezing down to –80°C with cryopreservative
do not considerably differ by the efficiency, but the
exponential program has low economic value and is more
available in methodical aspect.
256 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №2
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №2
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-69005 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T18:14:48Z |
| publishDate | 2008 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Худяков, А.Н. Сведенцов, Е.П. Туманова, Т.В. Костяев, А.А. 2014-10-03T14:13:09Z 2014-10-03T14:13:09Z 2008 Эффективность применения линейной и экспоненциальной программ замораживания лейкоцитов до –80°C / А.Н. Худяков, Е.П. Сведенцов, Т.В. Туманова, А.А. Костяев // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 2. — С. 256. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69005 ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Cтендовые доклады Эффективность применения линейной и экспоненциальной программ замораживания лейкоцитов до –80°C Efficiency of Applying Linear and Exponential Programs for Leukocyte Freezing Down to –80°C Article published earlier |
| spellingShingle | Эффективность применения линейной и экспоненциальной программ замораживания лейкоцитов до –80°C Худяков, А.Н. Сведенцов, Е.П. Туманова, Т.В. Костяев, А.А. Cтендовые доклады |
| title | Эффективность применения линейной и экспоненциальной программ замораживания лейкоцитов до –80°C |
| title_alt | Efficiency of Applying Linear and Exponential Programs for Leukocyte Freezing Down to –80°C |
| title_full | Эффективность применения линейной и экспоненциальной программ замораживания лейкоцитов до –80°C |
| title_fullStr | Эффективность применения линейной и экспоненциальной программ замораживания лейкоцитов до –80°C |
| title_full_unstemmed | Эффективность применения линейной и экспоненциальной программ замораживания лейкоцитов до –80°C |
| title_short | Эффективность применения линейной и экспоненциальной программ замораживания лейкоцитов до –80°C |
| title_sort | эффективность применения линейной и экспоненциальной программ замораживания лейкоцитов до –80°c |
| topic | Cтендовые доклады |
| topic_facet | Cтендовые доклады |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69005 |
| work_keys_str_mv | AT hudâkovan éffektivnostʹprimeneniâlineinoiiéksponencialʹnoiprogrammzamoraživaniâleikocitovdo80c AT svedencovep éffektivnostʹprimeneniâlineinoiiéksponencialʹnoiprogrammzamoraživaniâleikocitovdo80c AT tumanovatv éffektivnostʹprimeneniâlineinoiiéksponencialʹnoiprogrammzamoraživaniâleikocitovdo80c AT kostâevaa éffektivnostʹprimeneniâlineinoiiéksponencialʹnoiprogrammzamoraživaniâleikocitovdo80c AT hudâkovan efficiencyofapplyinglinearandexponentialprogramsforleukocytefreezingdownto80c AT svedencovep efficiencyofapplyinglinearandexponentialprogramsforleukocytefreezingdownto80c AT tumanovatv efficiencyofapplyinglinearandexponentialprogramsforleukocytefreezingdownto80c AT kostâevaa efficiencyofapplyinglinearandexponentialprogramsforleukocytefreezingdownto80c |