Влияние гипотермического хранения и криоконсервирования на сохранность кожи и фибробластов человека
Установлено, что у биоптатов кожи человека после гипотермического хранения в течение 14 суток (срок наблюдения) сохраняется способность к образованию фибробластов. После криоконсервирования под защитой ДМСО биоптаты теряли эту способность. Экспериментально показана возможность хранения фибробластов...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Дата: | 2008 |
| Автори: | , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2008
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69016 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Влияние гипотермического хранения и криоконсервирования на сохранность кожи и фибробластов человека / Л.Г. Абрафикова, Т.Ф. Петренко, И.П. Высеканцев // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 3. — С. 275-277. — Бібліогр.: 4 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860014734251655168 |
|---|---|
| author | Абрафикова, Л.Г. Петренко, Т.Ф. Высеканцев, И.П. |
| author_facet | Абрафикова, Л.Г. Петренко, Т.Ф. Высеканцев, И.П. |
| citation_txt | Влияние гипотермического хранения и криоконсервирования на сохранность кожи и фибробластов человека / Л.Г. Абрафикова, Т.Ф. Петренко, И.П. Высеканцев // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 3. — С. 275-277. — Бібліогр.: 4 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| description | Установлено, что у биоптатов кожи человека после гипотермического хранения в течение 14 суток (срок наблюдения) сохраняется способность к образованию фибробластов. После криоконсервирования под защитой ДМСО биоптаты теряли эту способность. Экспериментально показана возможность хранения фибробластов при 4°С в течение 2-х суток.
Встановлено, що біоптати шкіри людини після гіпотермічного зберігання протягом 14 діб (строк спостереження) зберігають здатність до формування фібробластів. Після кріоконсервування під захистом ДМСО біоптати втрачали цю здатність. Експериментально показана можливість збереження фібробластів при 4°С на протязі 2-х діб.
It has been found that the bioptates of human skin after hypothermal storage for 14 days (observation term) preserve the ability of fibroblast formation. After cryopreservation with DMSO protection the bioptates lost this ability. In the experiments there was shown the possibility of fibroblast storage at 4ºC for 48 hrs.
|
| first_indexed | 2025-12-07T16:44:18Z |
| format | Article |
| fulltext |
275 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №3
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №3
УДК 612.79.014.462.5
Л.Г. АБРАФИКОВА*, Т.Ф. ПЕТРЕНКО, И.П. ВЫСЕКАНЦЕВ
Влияние гипотермического хранения и криоконсервирования
на сохранность кожи и фибробластов человека
UDC 612.79.014.462.5
L.G. ABRAFIKOVA*, T.F. PETRENKO, I.P. VYSEKANTSEV
Effect of Hypothermic Storage and Cryopreservation on Survival
of Human Skin and Fibroblasts
Установлено, что у биоптатов кожи человека после гипотермического хранения в течение 14 суток (срок наблюдения)
сохраняется способность к образованию фибробластов. После криоконсервирования под защитой ДМСО биоптаты теряли
эту способность. Экспериментально показана возможность хранения фибробластов при 4°С в течение 2-х суток.
Ключевые слова: гипотермическое хранение, кожный биоптат, фибробласты человека, криоконсервирование.
Встановлено, що біоптати шкіри людини після гіпотермічного зберігання протягом 14 діб (строк спостереження) зберігають
здатність до формування фібробластів. Після кріоконсервування під захистом ДМСО біоптати втрачали цю здатність.
Експериментально показана можливість збереження фібробластів при 4°С на протязі 2-х діб.
Ключові слова: гіпотермічне зберігання, шкірний біоптат, фібробласти людини, кріоконсервування.
It has been found that the bioptates of human skin after hypothermal storage for 14 days (observation term) preserve the ability
of fibroblast formation. After cryopreservation with DMSO protection the bioptates lost this ability. In the experiments there was
shown the possibility of fibroblast storage at 4ºC for 48 hrs.
Key-words: hypothermal storage, skin bioptate, human fibroblasts, cryopreservation
* Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015; тел.:+38
(057) 373-31-26, факс: +38 (057) 373-30-84, электронная почта:
cryo@online.kharkov.ua
Институт проблем криобиологии и криомедицины
НАН Украины, г. Харьков
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na-
tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
* To whom correspondence should be addressed: 23,
Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 373
3126, fax: +380 57 373 3084, e-mail:cryo@online.kharkov.ua
В настоящее время в различных областях ме-
дицины широко используются аллогенные фибро-
бласты [2, 4], терапевтическое действие которых
основано на способности стимулировать процессы
заживления ран, вырабатывать про- и антивоспа-
лительные цитокины, продуцировать компоненты
внеклеточного матрикса: коллагены I и II типов,
нидоген, фибронектин, факторы роста, значительно
ускоряющие регенеративные процессы в организ-
ме [1]. Фибробласты получают из различных тка-
ней организма. Наиболее часто применяют фиб-
робласты, полученные из биоптатов кожи человека.
В настоящее время технологии получения фиб-
робластов находятся на стадии разработки [3].
Безальтернативным способом хранения кожных
биоптатов и фибробластов в течение различных
сроков является использование умеренно низких и
низких температур.
Наиболее исследовано хранение фибробластов
в криоконсервированном состоянии, однако единого
подхода к процессу криоконсервирования фибро-
бластов на сегодняшний день не существует.
Способы хранения фибробластов при умеренно
низких температурах для использования в клини-
ческих целях изучены недостаточно. Условия кон-
сервирования и хранения биоптатов кожи человека
исследовались, в основном, с точки зрения после-
дующей трансплантации. Характеристики выхода
фибробластов из кожи человека после криоконсер-
вирования или гипотермического хранения мало
изучались.
Цель работы – изучение влияния консервирова-
ния и гипотермического хранения на выселение
фибробластов из кожи человека и сохранность
фибробластов.
Материалы и методы
Объектами исследования были хирургические
остатки кожи после проведения плановых операций.
Биоптаты измельчали на кусочки размерами
0,1×0,1см и хранили в соответствующих средах:
1) раствор Хенкса;
2) сыворотка крови донора;
3) среда 199 с 10% сыворотки крови донора.
НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОЕ
КОНСЕРВИРОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ
ОБЪЕКТОВ
LOW TEMPERATURE
PRESERVATION OF BIOLOGICAL
OBJECTS
276 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №3
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №3
Биоптаты через каждые 7 суток извлекали из
сред хранения и помещали в чашку Петри, добав-
ляли среду 199 с 10% эмбриональной сыворотки
(фирма “Биолот”, Россия) и инкубировали в СО2-
инкубаторе.
Для криоконсервирования кожные биоптаты
помещали в криопробирки (“Nunc”, США). В
качестве сред консервирования применяли эмбрио-
нальную сыворотку, эмбриональную сыворотку с
10% ДМСО, среду 199. Образцы замораживали
со скоростью охлаждения 1°С/мин до –70°С при
последующем погружении в жидкий азот.
Культуры фибробластов получали из нативных
образцов биоптатов по стандартным протоколам.
Клетки культивировали на ростовой среде 199 с
добавлением 5% эмбриональной сыворотки круп-
ного рогатого скота. Для криоконсервирования и
гипотермического хранения фибробласты перево-
дили в суспензионное состояние. Суспензию клеток
в растворе Хенкса с концентрацией 1×106 кл/мл
хранили при 4°С или замораживали в сыворотке
без криопротектора и в сыворотке с 10% ДМСО.
Исходная концентрация клеток составляла
1×106 кл/мл. Образцы охлаждали со скоростью
1°С/мин до –70° С и погружали в жидкий азот.
Опыт проводили в течение 72 ч, после каждых
24 ч гипотермического хранения клетки подсчиты-
вали. Затем суспензию клеток помещали в росто-
вую среду и высевали в концентрации 20000 кл/см2
в культуральные матрасы. Пролиферативную
активность клеток оценивали визуально в инверти-
рованном микроскопе, фиксируя момент формиро-
вания монослоя.
Результаты и их обсуждение
В работе установлено, что в контрольных
образцах (время от забора до помещения биоптата
в растительную среду составляло 3–5 ч) проис-
ходило выселение фибробластов по периферии
эксплантантов через 7–11 суток (рис.1).
Рис. 1. Получение фибробластов из нативного биоптата
на 7-е сутки культивирования.
Фибробласты формировали участки моно-
слойного роста в течение 5–7 суток культивирования.
Биоптаты кожи в различных средах хранили 14
суток при 4°С. Способность этих образцов к
выселению фибробластов определяли на 7 и 14
сутки хранения.
В условиях хранения биоптатов при 4°С способ-
ность к выселению фибробластов зависела от
среды хранения. Биоптаты, находившиеся в сыво-
ротке 7 суток, давали выход фибробластов на 7–11
сутки последующего культивирования. Из биоп-
тата, хранящегося 14 суток, выселение фибро-
бластов зарегистрировано на 16–18 сутки, а фор-
мирование участков монослоя – на 23–25 сутки
культивирования.
При хранении кожного биоптата в растворе
Хенкса в течение 7 суток выселение фибробластов
начиналось на 9–12 сутки, а участки монослоя
формировались на 14–15 сутки культивирования.
После хранения биоптатов в растворе Хенкса в
течение 14 суток фибробласты появлялись на 14–
15 сутки, однако они обладали слабой адгезией и
распластыванием, участки монослоя они не форми-
ровали.
При хранении биоптатов в среде 199 с добав-
лением 10% эмбриональной сыворотки в течение
14–15 суток выход фибробластов не наблюдали.
В результате культивирования кожных биоптатов,
предварительно замороженных в эмбриональной
сыворотке, выселение фибробластов также не
установлено.
При культивировании кожных биоптатов, пред-
варительно замороженных в эмбриональной сыво-
ротке с добавлением 10% ДМСО, выселение фиб-
робластов происходило на 9–13 сутки. Однако
морфология этих клеток отличалась от нативных
образцов: преобладание округлых клеток, слабо
адгезированных к субстрату (у 20–30 % отмечена
тенденция к распластыванию). Клетки после
распластывания имели веретенообразную форму,
Рис. 2. Фибробласты после криоконсервирования
биоптатов кожи на 14-е сутки культивирования.
277 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №3
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №3
меньший размер и характеризовались отсутствием
вытянутых ламелоподий. Культивирование в тече-
ние последующих 7 суток показало, что количество
прикрепленных и распластанных клеток не увели-
чилось. На 14 сутки культивирования вся популяция
клеток приобретала шаровидную форму (рис. 2.).
В экспериментах с суспензиями клеток фибро-
бластов установлено, что после гипотермического
хранения суспензии фибробластов в первые 24 ч
сохранными оставались 87,4% клеток, через 48 ч –
около 73,4%, а 72 ч – 30,1%. Клетки после гипотер-
мического хранения в течение 24–48 ч сохраняли
пролиферативную активность, но при дальнейшем
культивировании монослой формировался в более
поздние сроки по сравнению с нативными клетка-
ми. При культивировании клеток, хранившихся в
условиях гипотермии, монослой не формировался.
В результате криоконсервирования клеток фибро-
бластов, суспензированных в эмбриональной
сыворотке и эмбриональной сыворотке с добавле-
нием 10% ДМСО, сохранность клеток составила
66,4 и 84,7% соответственно. При последующем
культивировании клетки сохраняли пролифе-
ративные свойства, но монослой формировался на
2–3 суток позже по сравнению с контролем.
Выводы
1. Впервые показана способность биоптатов
кожи человека к формированию зоны роста фибро-
бластов после гипотермического хранения в
течение 7–14 суток. Способность к образованию
фибробластов после гипотермического хранения
зависела от среды хранения. Эмбриональная сыво-
ротка и раствор Хенкса обеспечивали сохранность
биоптатов к выселению фибробластов. После хра-
нения в среде 199 с добавлением 10% эмбрио-
нальной сыворотки фибробласты не выселялись.
Литература
Жилина Н.М, Иванов В.Б., Корень Н.Н. и др. Сравни-
тельный анализ кожной аутопластики традиционными
методами и с использованием клеточной культуры фиб-
робластов // Вест. новых мед. технологий.– 1997.– Т. 4,
№1.– С. 88.
Саркисов В.В., Алексеев А.А., Туманов В.П. и др. Лечение
ожогов с использованием культивированных клеток
кожи человека // Хирургия.– 1993.– № 3.– С. 22–26.
Терехов С.М. Усовершенствованный метод клониро-
вания диплоидных фибробластов человека // Цито-
логия.– 1981.– Т. 23, №6.– С. 717–718.
Федоров В.Д., Саркисов Д.С., Алексеев и др. Пластичес-
кое восстановление кожных покровов с использова-
нием культивированных фибробластов // Анналы хирур-
гии.– 1996.– №4.– С. 16–19.
Поступила 7.07.2008
1.
2.
3.
4.
2. Хранение кожных биоптатов в условиях
гипотермии сохраняло их способность к проли-
ферации фибробластов, однако выселение фибро-
бластов и образование ими монослоя происходило
в более поздние сроки по сравнению с нативными
биоптатами.
3. После криоконсервирования образцов кожи в
условиях эксперимента рост фибробластов отмечен
не был.
4. Показана возможность хранения при 4°С сус-
пензии фибробластов в растворе Хенкса в течение
2-х суток.
5. Сохранность фибробластов в процессе крио-
консервирования зависит от состава среды консер-
вирования. Наличие в среде криопротектора ДМСО
повысило количество сохранных клеток. Пролифе-
ративная способность фибробластов после крио-
консервирования достоверно снижалась.
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-69016 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T16:44:18Z |
| publishDate | 2008 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Абрафикова, Л.Г. Петренко, Т.Ф. Высеканцев, И.П. 2014-10-04T06:11:41Z 2014-10-04T06:11:41Z 2008 Влияние гипотермического хранения и криоконсервирования на сохранность кожи и фибробластов человека / Л.Г. Абрафикова, Т.Ф. Петренко, И.П. Высеканцев // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 3. — С. 275-277. — Бібліогр.: 4 назв. — рос. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69016 612.79.014.462.5 Установлено, что у биоптатов кожи человека после гипотермического хранения в течение 14 суток (срок наблюдения) сохраняется способность к образованию фибробластов. После криоконсервирования под защитой ДМСО биоптаты теряли эту способность. Экспериментально показана возможность хранения фибробластов при 4°С в течение 2-х суток. Встановлено, що біоптати шкіри людини після гіпотермічного зберігання протягом 14 діб (строк спостереження) зберігають здатність до формування фібробластів. Після кріоконсервування під захистом ДМСО біоптати втрачали цю здатність. Експериментально показана можливість збереження фібробластів при 4°С на протязі 2-х діб. It has been found that the bioptates of human skin after hypothermal storage for 14 days (observation term) preserve the ability of fibroblast formation. After cryopreservation with DMSO protection the bioptates lost this ability. In the experiments there was shown the possibility of fibroblast storage at 4ºC for 48 hrs. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Секция «Низкотемпературное консервирование биологических объектов» Влияние гипотермического хранения и криоконсервирования на сохранность кожи и фибробластов человека Effect of Hypothermal Storage and Cryopreservation on Survival of Human Skin and Fibroblasts Article published earlier |
| spellingShingle | Влияние гипотермического хранения и криоконсервирования на сохранность кожи и фибробластов человека Абрафикова, Л.Г. Петренко, Т.Ф. Высеканцев, И.П. Секция «Низкотемпературное консервирование биологических объектов» |
| title | Влияние гипотермического хранения и криоконсервирования на сохранность кожи и фибробластов человека |
| title_alt | Effect of Hypothermal Storage and Cryopreservation on Survival of Human Skin and Fibroblasts |
| title_full | Влияние гипотермического хранения и криоконсервирования на сохранность кожи и фибробластов человека |
| title_fullStr | Влияние гипотермического хранения и криоконсервирования на сохранность кожи и фибробластов человека |
| title_full_unstemmed | Влияние гипотермического хранения и криоконсервирования на сохранность кожи и фибробластов человека |
| title_short | Влияние гипотермического хранения и криоконсервирования на сохранность кожи и фибробластов человека |
| title_sort | влияние гипотермического хранения и криоконсервирования на сохранность кожи и фибробластов человека |
| topic | Секция «Низкотемпературное консервирование биологических объектов» |
| topic_facet | Секция «Низкотемпературное консервирование биологических объектов» |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69016 |
| work_keys_str_mv | AT abrafikovalg vliâniegipotermičeskogohraneniâikriokonservirovaniânasohrannostʹkožiifibroblastovčeloveka AT petrenkotf vliâniegipotermičeskogohraneniâikriokonservirovaniânasohrannostʹkožiifibroblastovčeloveka AT vysekancevip vliâniegipotermičeskogohraneniâikriokonservirovaniânasohrannostʹkožiifibroblastovčeloveka AT abrafikovalg effectofhypothermalstorageandcryopreservationonsurvivalofhumanskinandfibroblasts AT petrenkotf effectofhypothermalstorageandcryopreservationonsurvivalofhumanskinandfibroblasts AT vysekancevip effectofhypothermalstorageandcryopreservationonsurvivalofhumanskinandfibroblasts |