Анализ состояния клеточных культур после криоконсервирования с использованием флуоресцентных зондов
Исследовали взаимодействие люминесцентных зондов различной структуры с культивированными клетками до и после процессов криоконсервирования. Отмечено, что оптимальными красителями для мониторинга функционального состояния клеток после криовоздействия являются зонды карбоцианинового ряда. Досліджували...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Datum: | 2008 |
| Hauptverfasser: | , , , , , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Russisch |
| Veröffentlicht: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2008
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69021 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Анализ состояния клеточных культур после криоконсервирования с использованием флуоресцентных зондов / Е.В. Онищенко, Е.И. Гончарук, Т.Ф. Петренко, И.А. Боровой, Ю.В. Малюкин, В.И. Грищенко // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 3. — С. 292-296. — Бібліогр.: 8 назв. — рос. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860244036523130880 |
|---|---|
| author | Онищенко, Е.В. Гончарук, Е.И. Петренко, Т.Ф. Боровой, И.А. Малюкин, Ю.В. Грищенко, В.И. |
| author_facet | Онищенко, Е.В. Гончарук, Е.И. Петренко, Т.Ф. Боровой, И.А. Малюкин, Ю.В. Грищенко, В.И. |
| citation_txt | Анализ состояния клеточных культур после криоконсервирования с использованием флуоресцентных зондов / Е.В. Онищенко, Е.И. Гончарук, Т.Ф. Петренко, И.А. Боровой, Ю.В. Малюкин, В.И. Грищенко // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 3. — С. 292-296. — Бібліогр.: 8 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| description | Исследовали взаимодействие люминесцентных зондов различной структуры с культивированными клетками до и после процессов криоконсервирования. Отмечено, что оптимальными красителями для мониторинга функционального состояния клеток после криовоздействия являются зонды карбоцианинового ряда.
Досліджували взаємодію люмінесцентних зондів різної структури з культивованими клітинами до та після процесів кріоконсервування. Відмічено, що оптимальними барвниками для моніторінгу функціонального стану клітин після кріовпливу є зонди карбоціанінового ряду.
Interaction of fluorescent probes of different structures with cultured cells prior to and after cryopreservation were investigated. It has been noted that optimal dyes for monitoring of functional state of cells after cryo-effect are the probes of carbocyanine series.
|
| first_indexed | 2025-12-07T18:34:01Z |
| format | Article |
| fulltext |
292 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №3
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №3
УДК 57.043.085:577.336
Е.В. ОНИЩЕНКО1*, Е.И. ГОНчАРУК1, Т.Ф. ПЕТРЕНКО1, И.А. БОРОВОЙ2,
Ю.В. МАЛЮКИН2, В.И. ГРИЩЕНКО1
Анализ состояния клеточных культур после криоконсервирования
с использованием флуоресцентных зондов
UDC 57.043.085:577.336
E.V. ONISCHENKO1*, E.I. GONCHARUK1, T.F. PETRENKO1, I.A. BOROVOY2,
YU.V. MALYUKIN2, V.I. GRISCHENKO1
State Analysis of Cell Culture after Cryopreservation
with Fluorescent Probes
Исследовали взаимодействие люминесцентных зондов различной структуры с культивированными клетками до и после
процессов криоконсервирования. Отмечено, что оптимальными красителями для мониторинга функционального состояния
клеток после криовоздействия являются зонды карбоцианинового ряда.
Ключевые слова: зонды, криоконсервирование, культура клеток, фибробласты человека.
Досліджували взаємодію люмінесцентних зондів різної структури з культивованими клітинами до та після процесів
кріоконсервування. Відмічено, що оптимальними барвниками для моніторінгу функціонального стану клітин після кріовпливу
є зонди карбоціанінового ряду.
Ключові слова: зонди, кріоконсервування, культура клітин, фібробласти людини.
Interaction of fluorescent probes of different structures with cultured cells prior to and after cryopreservation were investigated. It has
been noted that optimal dyes for monitoring of functional state of cells after cryo-effect are the probes of carbocyanine series.
Key-words:probes, cryopreservation, cell culture, human fibroblasts.
* Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015; тел.:+38
(057) 373-31-19, факс: +38 (057) 373-30-84, электронная почта:
cryo@online.kharkov.ua
1Институт проблем криобиологии и криомедицины
НАН Украины, г. Харьков
2Институт сцинтилляционных материалов НТК «Институт
монокристаллов» НАН Украины, г. Харьков
При криоконсервировании необходимо отслежи-
вать морфологическую и функциональную сохран-
ность криоконсервированного материала [1, 4].
Метод флуоресцентной микроскопии является наи-
более наглядным и информативным для изучения
состояния внутриклеточных структур под дейст-
вием различных факторов [3, 7]. Высокочувст-
вительные люминесцентные красители, связы-
ваясь с различными органеллами клетки, позво-
ляют визуально наблюдать процессы, происходя-
щие внутри клетки.
Представляло интерес изучить поведение флуо-
ресцентных зондов разной структуры при культиви-
ровании их в клетках монослойных культур.
Применение зондов обеспечивает возможность
мониторинга клетки во время ее функционирования
in vitro как до, так и после криоконсервирования.
Перспективой подобных исследований является
также возможность наблюдения за конкретными
мечеными клетками in vivo и in vitro.
Цель работы – исследование возможности оцен-
ки эффекта криоконсервирования на состояние
культивированных клеток с применением инкор-
порированных флуоресцентных зондов.
Материалы и методы
В работе были использованы зонды BQBF,
F2N8, PPZ8 (3-(4-(4-(4’-(3-гидрокси-6-октилокси-
флавонил) фенил) пиперазино)-1-пиридиниумил)-1-
пропансульфонат), ДСМ (4-(N-диметиламино-
стирил)-1-метилпиридин N-толуенсульфонат),
ФМЕ (3-гидрокси-4’-(N,N-диметиламино)флавон),
С2 (3,3’-диэтилоксакарбоцианин бромид) и С9 (3,3’-
диоктадецилоксакарбоцианин бромид) и JC-1
(5,5',6,6'-тетрахлор-1,1',3,3'-тетраэтил-бензоими-
дазолилкарбоцианин иодид). Зонды были синтези-
рованы И.А. Боровым в Институте сцинтилляцион-
ных материалов НТК «Институт монокристаллов»
НАНУ, А.С. Климченко и В.Г. Пивоваренко (Киев-
ский национальный университет им. Т.Г. Шевчен-
ко). Диплоидную линию фибробластов человека
(ФЧ) и культуру СПЭВ (перевиваемая клеточная
линия почки свиньи) культивировали в ростовой
среде Eagle MEM (Sigma) с добавлением 10% FСS
[5]. После окрашивания флуоресцентными краси-
телями клетки инкубировали при 37°С в атмосфере
с 5% СО2.
Меченые клетки криоконсервировали в прог-
раммном замораживателе по двухэтапной прог-
* To whom correspondence should be addressed: 23,
Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 373
3119, fax: +380 57 373 3084, e-mail:cryo@online.kharkov.ua
1Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na-
tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
2Institute for Scintillation Matherials of Institute of Solid Crystals of
National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
293 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №3
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №3
рамме с последующим погружением в жидкий
азот. В качестве криопротектора использовали
10% ДМСО. Состояние нативных и криоконсер-
вированных клеток оценивали с помощью флуо-
ресцентного инвертированного микроскопа Olym-
pus IX71 и проточного цитофлуориметра FACS
Calibur фирмы (Becton Dickinson, США) с исполь-
зованием реагентов этой же фирмы.
Результаты и обсуждение
На первом этапе изучали пролиферацию клеток
монослойных культур в присутствии зондов раз-
личной структуры. Вопрос о длительном нахож-
дении зондов в культивированных клетках имеет
несколько аспектов. Одной из точек приложения
люминесцентных зондов является возможность
непосредственного наблюдения за клеткой в
процессе ее функционирования in vitro. Наши
исследования по культивированию клеток, мечен-
ных зондами, проведены в рамках этого направ-
ления. Изменение свечения окрашенных клеток в
режиме реального времени позволяет отслеживать
изменения, происходящие, например, в процессе
реабилитации клеток после криоконсервирования.
Люминесцентные зонды могут предоставить так-
же возможность мечения и наблюдения за введен-
ными в организм клетками в рамках изучения
механизма их действия.
Одной из задач было исследование токсичности
зондов для культивированных клеточных линий.
При исследовании клеточных суспензий и культиви-
рованных клеток в течение 72 ч было установлено,
что карбоцианиновые зонды С2, С9 и JC-1 не
влияют на рост клеток, что доказывает отсут-
ствие их токсического эффекта.
При культивировании клеток, окрашенных
зондами BQBF, F2N8, PPZ8 и ФМЕ, в течение 48 ч
существенно снижается способность клеток к
адгезии и пролиферации. Следовательно, зонды
группы флавонолов проявляют токсичность и не
могут быть использованы при длительном культи-
вировании. Зонд ДСМ слаботоксичен и не снижает
способности клеток к адгезии, частично замедляя
пролиферацию клеток. Морфология клеток в этих
линиях была изменена, клетки имели сферическую
форму и наблюдалась вакуолизация цитоплазмы.
Динамика роста клеток культуры фибробластов
человека в присутствии исследованных зондов
показала, что зонды флавоновой группы проявляют
токсичность и не могут быть использованы в
интегрированном в клетки состоянии in vitro.
Однако уникальные спектральные свойства этих
зондов могут быть использованы для характерис-
тики клеток при кратковременном контакте (рис. 1).
Следует отметить, что люминесценция клеток,
окрашенных карбоцианиновыми зондами, была
Рис. 1. Нативная культура клеток СПЭВ, окрашенная
флуоресцентными зондами: а – зонд ДСМ (×600); б –
зонд PPZ8 (×600).
более интенсивной по сравнению с люминесцен-
цией клеток, окрашенных зондами другого ряда во
всех случаях наблюдения.
Таким образом, сравнение влияния карбоциани-
новых, флавоновых и стириловых производных на
линии клеточных культур показало, что карбоциани-
новые зонды наиболее пригодны для долговремен-
ного культивирования и мониторинга состояния
клеток при нормальных условиях и под действием
физических факторов in vitro.
Следующим этапом было изучение возмож-
ности оценки эффекта криоконсервирования на
состояние культивированных клеток с примене-
нием инкорпорированных флуоресцентных зондов.
При культивировании клеток, меченных флуорес-
центными карбоцианиновыми зондами, наблюдали
свечение внутриклеточных органелл (рис. 2).
При окрашивании клеток зондом JС-1 в клетках
видны структуры митохондрий, окрашенные в зелё-
ный цвет, и скопления ярких оранжевых участков,
соответствующих образованным красителем J-аг-
регатам. Их наличие определяется высокой функ-
циональной активностью митохондрий [2].
a
б
294 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №3
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №3
Изменения в характере свечения и локализации
зондов C2, С9 и JC-1 приведены в таблице.
Для клеток, окрашенных зондом JC-1, после
замораживания-отогрева выявлен частичный пе-
реход J-агрегатов (оранжевое свечение) в моно-
мерную форму (зеленое свечение), что связано со
a
б
Рис. 2. Клетки культуры фибробластов, меченные
флуоресцентными зондами: а – С2 (×900); б – С9 (×600);
в – JС-1 (×600).
в
снижением функциональной активности митохонд-
рий. Для зонда С9 различий в клетках до и после
криоконсервирования при анализе методом люми-
несцентной микроскопии не наблюдали, но по дан-
ным проточной цитофлуориметрии происходит
усиление рассеянного свечения. При процессах ад-
гезии и пролиферации клеток после деконсерви-
рования локализация зонда не изменилась по
сравнению с таковой в нативной культуре.
Проведенные исследования показали, что зонд
С2 в растворе не меняет флуоресцентные свойст-
ва под действием замораживания и последующего
отогрева и не является криочувствительным. Сле-
дует отметить, что наблюдаемое в клетках фибро-
бластов после деконсервирования изменение све-
чения красителя, который в нативных клетках
связан с митохондриями, на его диффузное свече-
ние в цитоплазме, вероятно, происходит вследствие
неспецифического окрашивания органелл зондом
С2 при изменении трансмембранного потенциала
митохондрий.
Согласно методу проточной цитофлуориметрии
клетки фибробластов, меченные зондом JC-1
(рис. 3), люминесцируют в оранжевой области
спектра (λ = 585 ± 20 нм) и распределены двумя
группами. После замораживания-отогрева клеточ-
ной суспензии, меченной JC-1, в 66,53±3% клеток
зонд находится в мономерной форме (зеленая
область спектра), что может служить показате-
лем снижения функциональной активности мито-
хондрий исследуемых клеток.
Флуоресценция клеток культуры ФЧ, окрашен-
ной С2 до и после криоконсервирования, находится
в зелёной области (λ = 530 нм), как и для клеток
культуры, меченной зондом С9.
Показатели свечения зондов в культуре ФЧ до и после
замораживания-отогрева
аднозеинавзаН еинавишаркО яицазилакоЛ
адноз
ьнепетС
итсокря
яинечевс
2С еонелеЗ моирдноХ яяндерС
елсоп2С
яинавижаромаз -
авергото
еонелеЗ
еонзуффиД
еинечевс
ымзалпотиц
еинелисУ
итсокря
9С еонелеЗ моирдноХ яяндерС
елсоп9С
яинавижаромаз -
авергото
еонелеЗ моирдноХ еинелисУ
итсокря
CJ -1
еовежнарО
еинечевс
J- вотагерга
моирдноХ яяндерС
CJ - елсоп1
яинавижаромаз -
авергото
иеовежнарО
еонелез
еинечевс
J- ивотагерга
воремоном
моирдноХ еинешуТ
295 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №3
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №3
могут быть проведены с использованием описан-
ной системы ФЧ-потенциал-зависимый зонд.
Может быть обеспечена неинвазивная быстрая
оценка состояния энергетической системы клеток
после криоконсервирования.
Как известно, мембранные структуры являют-
ся уязвимыми при криоконсервировании клеток.
Возникает вопрос, что происходит с потенциалом
митохондриальных и плазматической мембран при
криоконсервировании В исследовании [2] показаны
электронно-микроскопически ультраструктурные
изменения митохондрий при криоконсервировании
нейрона моллюска. Однако после реабилитации в
виде длительной инкубации в физиологическом
растворе ультраструктурные различия мито-
хондрий, вызванные охлаждением, ДМСО или
криоконсервированием, сглаживались, и через 8 ч
ультраструктурная организация крист митохондрий
всех клеток (независимо от воздействия) не разли-
чалась. Относительно клеток млекопитающих еще
в конце 90-х годов было установлено [6], что как
процесс замораживания-оттаивания, так и криопро-
текторы сами по себе влияют на электрические
свойства мембраны, сильно уменьшая проводи-
мость клеточной мембраны для ионов. Однако па-
раметры мембраны восстанавливались через два
часа после культивирования размороженных кле-
ток в среде, содержащей клеточные метаболиты.
Таким образом, можно говорить о завершении ре-
паративных процессов и восстановлении гомео-
стаза мембраны клетки через указанный срок.
Почему важно знать состояние митохондриаль-
ных мембран и плазматической мембраны клетки
в случае использования карбоцианиновых зондов?
JC-1 является классическим красителем, который
отражает состояние митохондриального аппарата.
Его поведение в клетке зависит от потенциала внут-
ренней мембраны митохондрий. Он устойчив к
воздействию агентов, деполяризующих плазмати-
ческую мембрану, чего нельзя однозначно сказать
о карбоцианиновых зондах С2 и С9. Известно, что
гомолог этого ряда DIOC6(3) реагирует на измене-
ние как ∆ψ, так и потенциала плазматической мем-
браны [8] снижением уровня своей флюорес-
ценции. Таким образом, DIOC6(3) и, возможно, его
гомологи обладают широким спектром отражения
состояния как митохондриальных, так и плазма-
тической мембран клетки. Можно предполагать,
что восстановление флюоресценции интегриро-
ванных в клетку зондов до исходных значений
будет свидетельствовать о восстановлении функ-
ционального состояния мембран клетки.
Выводы
Таким образом, изменение свечения зондов С9
и JC-1 отражает функциональное состояние клетки
Рис. 3. Цитофлуориметрический анализ клеток, окрашен-
ных флуоресцентным зондом JC-1: (а) до (FL1 (X-axis) и
FL2 (Y-axis) R1 = 19,03% R2 = 79,72%) и (б) после
криоконсервирования (FL1 (X-axis) и FL2 (Y-axis) R1 =
66,53% R2 = 20,49%).
Для клеток, меченных зондами С2 и С9, после
криоконсервирования наблюдается интенсивное
внутриклеточное свечение красителей, что может
свидетельствовать об их неспецифическом связы-
вании с органеллами клетки. После реабилитации
путем инкубирования клеточной суспензии в
ростовой среде при 37°С интенсивное свечение
красителей исчезает.
Полученные нами результаты позволяют
наблюдать за репаративными процессами в клет-
ке, связанными с системами ее энергообеспечения,
в процессе длительного культивирования, которые
a
б
Литература
Белоус А.М., Грищенко В.И. Криобиология.– Киев: Наук.
думка, 1994.– 430 с.
Дмитриева Е.В., Мошков Д.А., Гахова Э.Н. Ультраструк-
турные изменения нейрона МПЗ моллюска Lymnaea
stagnalis после криоконсервации изолированного мозга //
Цитология.– Т. 48, №6.– С. 480–485.
296 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №3
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №3
и является показательным тестом для выявления
ее криоповреждений. Поведение зонда С2 может
свидетельствовать о его высокой чувствительнос-
ти к изменению состояния митохондрий клеток
после замораживания-отогрева; зонды С2, С9 и
JC-1 могут быть использованы для мониторинга
функционального состояния клеточных линий при
криоконсервировании.
Авторы выражают благодарность сотруднику
отдела криобиофизики Института проблем криобио-
логии и криомедицины НАН Украины Дюбко Т.С. за
плодотворное сотрудничество в обсуждении резуль-
татов.
Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании
клеток, мембран и липопротеинов.– М.: Наука, 1989.–
277 с.
Криоконсервирование клеточных суспензий / Под общ.
ред. А.А. Цуцаевой.– Киев: Наук. думка, 1983.– 240 с.
Культура животных клеток. Методы. / Под ред. Р. Фреш-
ни.– М.: Мир, 1989.– 333 с.
Чекурова Н.Р., Кислов А. Н., Венринцев Б.Н. Действие
криопротекторов на электрические характеристики кле-
точной мембраны эмбрионов мыши // Криобиология.–
1990.– №1.– С. 25–29.
Lakowicz J.R. Principles of Fluorescence Spectroscopy.–
New York: Kluwer Academic/Plenum, 1999.– 698 p.
Salvioli S., Ardizzoni A., Franceschi C., Cossarizza A. JC-1,
but not DiOC6(3) or rhodamine 123, is a reliable fluorescent
probe to assess ∆ψ changes in intact cells: implications for
studies on mitochondrial functionality during apoptosis // FEBS
Letters.– 1997.– Vol. 411, N1.– Р. 77–82.
Поступила 7.07.2008
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-69021 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T18:34:01Z |
| publishDate | 2008 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Онищенко, Е.В. Гончарук, Е.И. Петренко, Т.Ф. Боровой, И.А. Малюкин, Ю.В. Грищенко, В.И. 2014-10-04T06:22:04Z 2014-10-04T06:22:04Z 2008 Анализ состояния клеточных культур после криоконсервирования с использованием флуоресцентных зондов / Е.В. Онищенко, Е.И. Гончарук, Т.Ф. Петренко, И.А. Боровой, Ю.В. Малюкин, В.И. Грищенко // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 3. — С. 292-296. — Бібліогр.: 8 назв. — рос. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69021 57.043.085:577.336 Исследовали взаимодействие люминесцентных зондов различной структуры с культивированными клетками до и после процессов криоконсервирования. Отмечено, что оптимальными красителями для мониторинга функционального состояния клеток после криовоздействия являются зонды карбоцианинового ряда. Досліджували взаємодію люмінесцентних зондів різної структури з культивованими клітинами до та після процесів кріоконсервування. Відмічено, що оптимальними барвниками для моніторінгу функціонального стану клітин після кріовпливу є зонди карбоціанінового ряду. Interaction of fluorescent probes of different structures with cultured cells prior to and after cryopreservation were investigated. It has been noted that optimal dyes for monitoring of functional state of cells after cryo-effect are the probes of carbocyanine series. Авторы выражают благодарность сотруднику отдела криобиофизики Института проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины Дюбко Т.С. за плодотворное сотрудничество в обсуждении результатов. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Секция «Низкотемпературное консервирование биологических объектов» Анализ состояния клеточных культур после криоконсервирования с использованием флуоресцентных зондов State Analysis of Cell Culture after Cryopreservation with Fluorescent Probes Article published earlier |
| spellingShingle | Анализ состояния клеточных культур после криоконсервирования с использованием флуоресцентных зондов Онищенко, Е.В. Гончарук, Е.И. Петренко, Т.Ф. Боровой, И.А. Малюкин, Ю.В. Грищенко, В.И. Секция «Низкотемпературное консервирование биологических объектов» |
| title | Анализ состояния клеточных культур после криоконсервирования с использованием флуоресцентных зондов |
| title_alt | State Analysis of Cell Culture after Cryopreservation with Fluorescent Probes |
| title_full | Анализ состояния клеточных культур после криоконсервирования с использованием флуоресцентных зондов |
| title_fullStr | Анализ состояния клеточных культур после криоконсервирования с использованием флуоресцентных зондов |
| title_full_unstemmed | Анализ состояния клеточных культур после криоконсервирования с использованием флуоресцентных зондов |
| title_short | Анализ состояния клеточных культур после криоконсервирования с использованием флуоресцентных зондов |
| title_sort | анализ состояния клеточных культур после криоконсервирования с использованием флуоресцентных зондов |
| topic | Секция «Низкотемпературное консервирование биологических объектов» |
| topic_facet | Секция «Низкотемпературное консервирование биологических объектов» |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69021 |
| work_keys_str_mv | AT oniŝenkoev analizsostoâniâkletočnyhkulʹturposlekriokonservirovaniâsispolʹzovaniemfluorescentnyhzondov AT gončarukei analizsostoâniâkletočnyhkulʹturposlekriokonservirovaniâsispolʹzovaniemfluorescentnyhzondov AT petrenkotf analizsostoâniâkletočnyhkulʹturposlekriokonservirovaniâsispolʹzovaniemfluorescentnyhzondov AT borovoiia analizsostoâniâkletočnyhkulʹturposlekriokonservirovaniâsispolʹzovaniemfluorescentnyhzondov AT malûkinûv analizsostoâniâkletočnyhkulʹturposlekriokonservirovaniâsispolʹzovaniemfluorescentnyhzondov AT griŝenkovi analizsostoâniâkletočnyhkulʹturposlekriokonservirovaniâsispolʹzovaniemfluorescentnyhzondov AT oniŝenkoev stateanalysisofcellcultureaftercryopreservationwithfluorescentprobes AT gončarukei stateanalysisofcellcultureaftercryopreservationwithfluorescentprobes AT petrenkotf stateanalysisofcellcultureaftercryopreservationwithfluorescentprobes AT borovoiia stateanalysisofcellcultureaftercryopreservationwithfluorescentprobes AT malûkinûv stateanalysisofcellcultureaftercryopreservationwithfluorescentprobes AT griŝenkovi stateanalysisofcellcultureaftercryopreservationwithfluorescentprobes |