Выживаемость эмбрионов лялиуса (Colisa Lalia, Hamilton-Buchanan, 1822) после инкубации в криозащитных средах
В работе изучали влияние криопротекторов на выживаемость эмбрионов Colisa lalia на стадии развития перед выклевом. Показано, что состав криозащитной среды и температура инкубации оказывают статистически значимое влияние на развитие эмбрионов; 30-минутная инкубация эмбрионов при температуре 2°С как в...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Дата: | 2008 |
| Автори: | , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2008
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69036 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Выживаемость эмбрионов лялиуса (Colisa Lalia, Hamilton-Buchanan, 1822) после инкубации в криозащитных средах / К.Б. Миксон, Е.Ф. Копейка, Т.П. Линник // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 3. — С. 343-347. — Бібліогр.: 21 назв. — рос. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859995111988920320 |
|---|---|
| author | Миксон, К.Б. Копейка, Е.Ф. Линник, Т.П. |
| author_facet | Миксон, К.Б. Копейка, Е.Ф. Линник, Т.П. |
| citation_txt | Выживаемость эмбрионов лялиуса (Colisa Lalia, Hamilton-Buchanan, 1822) после инкубации в криозащитных средах / К.Б. Миксон, Е.Ф. Копейка, Т.П. Линник // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 3. — С. 343-347. — Бібліогр.: 21 назв. — рос. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| description | В работе изучали влияние криопротекторов на выживаемость эмбрионов Colisa lalia на стадии развития перед выклевом. Показано, что состав криозащитной среды и температура инкубации оказывают статистически значимое влияние на развитие эмбрионов; 30-минутная инкубация эмбрионов при температуре 2°С как в контроле, так и в криозащитных средах приводит к значительным тератогенным изменениям в ходе дальнейшего онтогенеза; инкубация эмбрионов при 28°С в криозащитных средах, содержащих 1 М сахарозы и 1,32 М этиленгликоля, не оказывает статистически значимого негативного влияния на выживаемость и появление аномально развивающихся эмбрионов; включение в состав криозащитных сред таких криопротекторов, как ацетилэтаноламид, N,N-диметилформамид, формамид в концентрациях 0,96, 0,8 и 1,87М соответственно, при 15-минутной инкубации приводит к повышению смертности эмбрионов и поэтому их использование для разработки методов криоконсервирования эмбрионов рыб требует дальнейших исследований.
Вивчали вплив кріопротекторів на виживаність ембріонів Colisa lalia на стадії розвитку перед викльовуванням. Показано, що склад кріозахисного середовища і температура інкубації статистично значно впливають на розвиток ембріонів; 30-хвилинна інкубація ембріонів при 2°С як в контролі, так і в кріозахисних середовищах приводить до значних тератогенних змін в процесі подальшого онтогенезу; інкубація ембріонів при 28°С в кріозахисних середовищах, які містять 1 М сахарози і 1,32 М етиленгліколю, не має значного негативного впливу на виживаність і появу ембріонів, які аномально развиваються. Додавання до кріозахисних середовищ таких кріопротекторів, як ацетилетаноламід, N,N-диметилформамід, формамід в концентраціях 0,96; 0,8; 1,87 М відповідно, протягом 15-хвилинної інкубації збільшує смертність ембріонів, тому для розробки методів кріоконсервування ембріонів риб необхідні подальші дослідження.
The influence of cryoprotectants on survival rate of Calisa lalia at stage before hatching was studied. It was found that the composition and incubation temperature significantly influenced the embryonic development; incubation for 30 minutes at 2°С led to significant teratogenic alterations in ontogenesis of both control and cryoprotectant-treated experimental groups as well; incubation of embryos at 28°С with cryoprotective media, containing 1 M sucrose and 1.32 М ethylene glycol did not lead to significant decrease in survival rate and appearance of abnormally developing embryos; embryos incubation for 15 min with N-acetyl ethanolamide, N,Ndimethylformamide and formamide in concentration of 0.96, 0.8 and 1.87М, correspondingly led to the increase of mortality level and therefore the use of these cryoprotectants necessitated an additional study.
|
| first_indexed | 2025-12-07T16:33:51Z |
| format | Article |
| fulltext |
343 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №3
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №3
УДК 547.42:591.3
К.Б. МИКСОН*, Е.Ф. КОПЕЙКА, Т.П. ЛИННИК
Выживаемость эмбрионов лялиуса (Colisa Lalia,
Hamilton–Buchanan, 1822) после инкубации в криозащитных средах
UDC 547.42:591.3
K.B. MIKSON*, YE.F. KOPEJKA, T.P. LINNIK
Survival of Dwarf Gourami (Colisa Lalia, Hamilton–Buchanan, 1822)
Embryos After Incubation in Cryoprotective Media
В работе изучали влияние криопротекторов на выживаемость эмбрионов Colisa lalia на стадии развития перед выклевом.
Показано, что состав криозащитной среды и температура инкубации оказывают статистически значимое влияние на развитие
эмбрионов; 30-минутная инкубация эмбрионов при температуре 2°С как в контроле, так и в криозащитных средах приводит
к значительным тератогенным изменениям в ходе дальнейшего онтогенеза; инкубация эмбрионов при 28°С в криозащитных
средах, содержащих 1 М сахарозы и 1,32 М этиленгликоля, не оказывает статистически значимого негативного влияния на
выживаемость и появление аномально развивающихся эмбрионов; включение в состав криозащитных сред таких крио-
протекторов, как ацетилэтаноламид, N,N-диметилформамид, формамид в концентрациях 0,96, 0,8 и 1,87М соответственно,
при 15-минутной инкубации приводит к повышению смертности эмбрионов и поэтому их использование для разработки
методов криоконсервирования эмбрионов рыб требует дальнейших исследований.
Ключевые слова: эмбрионы рыб, Сolisa lalia, криопротекторы, амиды.
Вивчали вплив кріопротекторів на виживаність ембріонів Colisa lalia на стадії розвитку перед викльовуванням. Показано,
що склад кріозахисного середовища і температура інкубації статистично значно впливають на розвиток ембріонів; 30-хвилинна
інкубація ембріонів при 2°С як в контролі, так і в кріозахисних середовищах приводить до значних тератогенних змін в процесі
подальшого онтогенезу; інкубація ембріонів при 28°С в кріозахисних середовищах, які містять 1 М сахарози і 1,32 М
етиленгліколю, не має значного негативного впливу на виживаність і появу ембріонів, які аномально развиваються. Додавання
до кріозахисних середовищ таких кріопротекторів, як ацетилетаноламід, N,N-диметилформамід, формамід в концентраціях
0,96; 0,8; 1,87 М відповідно, протягом 15-хвилинної інкубації збільшує смертність ембріонів, тому для розробки методів
кріоконсервування ембріонів риб необхідні подальші дослідження.
Ключові слова: ембріони риб, Сolisa lalia, кріопротектори, аміди.
The influence of cryoprotectants on survival rate of Calisa lalia at stage before hatching was studied. It was found that the
composition and incubation temperature significantly influenced the embryonic development; incubation for 30 minutes at 2°С led to
significant teratogenic alterations in ontogenesis of both control and cryoprotectant-treated experimental groups as well; incubation
of embryos at 28°С with cryoprotective media, containing 1 M sucrose and 1.32 М ethylene glycol did not lead to significant decrease
in survival rate and appearance of abnormally developing embryos; embryos incubation for 15 min with N-acetyl ethanolamide, N,N-
dimethylformamide and formamide in concentration of 0.96, 0.8 and 1.87М, correspondingly led to the increase of mortality level and
therefore the use of these cryoprotectants necessitated an additional study.
Key-words: fish embryos, Сolisa lalia, cryoprotectants, amides.
* Автор, которому необходимо направлять корреспонденцию:
ул. Переяславская, 23, г. Харьков, Украина 61015; тел.:+38
(057) 373-31-26, факс: +38 (057) 373-30-84, электронная почта:
cryo@online.kharkov.ua
Институт проблем криобиологии и криомедицины
НАН Украины, г. Харьков
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the Na-
tional Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
* To whom correspondence should be addressed: 23,
Pereyaslavskaya str., Kharkov, Ukraine 61015; tel.:+380 57 373
3126, fax: +380 57 373 3084, e-mail: cryo@online.kharkov.ua
До настоящего времени задача криоконсерви-
рования яйцеклеток и эмбрионов рыб не решена
[8, 18]. Основными причинами этого являются
большие размеры яйцеклеток, высокая гетероген-
ность внутриклеточных структур, низкая проницае-
мость мембран и большой объем желточного меш-
ка эмбрионов [20]. Насыщение криозащитными
средами и дегидратация биологических объек-
тов – существенный этап криоконсервирования,
однако, несмотря на большое количество работ,
посвященных подготовке к криоконсервированию
эмбрионов и ооцитов пресноводных рыб [4, 6], до
настоящего времени поиск эффективных криоза-
щитных сред остается актуальной задачей.
Основными модельными объектами, на кото-
рых проводились эксперименты по подготовке эмб-
рионов рыб к замораживанию, служили эмбрионы
Brachidanio rerio [10, 13, 14], Carassius auratus
[17], Cyprinus carpio [7, 9, 21], у которых диаметр
оплодотворенной икринки соответствовал 1,2–
2,5 мм. В ходе экспериментов была показана
низкая выживаемость эмбрионов при обработке
их такими криопротекторами, как диметилсуль-
фоксид (ДМСО), метанол (МЕ), глицерин (Гл) и
их комбинациями [5, 10, 17]. В связи с низкой
проницаемостью хориона и эмбриональных мемб-
ран увеличивается время инкубации эмбрионов в
криозащитных средах, что приводит к их гибели
344 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №3
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №3
еще до замораживания вследствие токсичности
криопротекторов [4, 19].
Для уменьшения времени контакта эмбрионов
с криопротекторами повышали проницаемость
хориона, используя аквапорин [11] выбирали стадии
развития эмбрионов с наибольшей проницаемостью
[21] и подбирали подходящие температурные
условия насыщения [13, 21]. Однако эмбрионы при
замораживании погибали от внутриклеточной
кристаллизации [13].
Учитывая, что скорость насыщения эмбрионов
рыб криопротекторами зависит от их поверхностно-
объемных характеристик, определяемых наруж-
ным диаметром икринки [12, 13], нам представ-
ляется перспективным использование в исследова-
ниях более мелких объектов, например эмбрионов
C. lalia.
Мы предположили, что эмбрионы C. lalia,
развивающиеся в икринке диаметром 0,6–0,7 мм,
имеющей маленькое перивителлиновое простран-
ство, могут быстрее насыщаться криопротекто-
ром, чем более крупные эмбрионы рыб.
Наиболее устойчивые стадии развития эмбрио-
нов к токсичности криопротекторов – стадии с
наименьшим содержанием желтка и более гомо-
генными структурами эмбриональных клеток [4].
Цель данной работы – изучение влияния крио-
протекторов на выживаемость эмбрионов C. lalia
на стадии развития перед выклевом.
Материалы и методы
Работу выполняли на эмбрионах лялиуса
(Сolisa lalia, Hamilton–Buchanan, 1822). Оплодот-
воренную икру получали от половозрелых особей
при естественном нересте в условиях ex situ.
Производителей отбирали из общей стаи. Самцов
и самок содержали раздельно в стеклянных аква-
риумах емкостью 40 л при контролируемой тем-
пературе 28°С. Подготовленных для нереста
производителей отсаживали попарно в нерестовые
емкости объемом 10 л. Качество подготовленных
производителей определяли визуально. Нерест, как
правило, происходил на вторые сутки после отсажи-
вания производителей в нерестовые емкости. Это
время необходимо самцу для постройки гнезда.
Для контроля эмбрионы на разных стадиях раз-
вития отбирали микропипеткой и их развитие оце-
нивали визуально с помощью микроскопа МБС-9.
В экспериментах использовали эмбрионы на
стадии развития 28 ч (рис. 1).
Для определения влияния на развитие и выжива-
емость эмбрионов применяли 8 криопротекторов:
сахароза (Сах), этиленгликоль (ЭГ), ацетамид
(АА), N,N-диметилацетамид (ДМАЦ), ацетилмор-
фолин (АЦМОР), ацетилэтаноламид (АЭА), N,N-
диметилформамид (ДМФА), формамид (ФА).
Эмбрионы (15–20 штук) переносили в 0,5 мл
1М раствора Сах на 10 мин, после чего к этому
раствору добавляли 40 мкл ЭГ и выдерживали их
еще 5 мин. Затем эмбрионы помещали на шугу
льда, к ним добавляли 30 мкл АА или 40 мкл
одного из исследуемых криопротекторов и выдер-
живали в полученных криозащитных растворах в
течение 15 мин.
Таким образом, конечная концентрация криопро-
текторов составляла 1М Сах (рис. 2. I, J), 1,32М
ЭГ (рис. 2. A, B, C, D, E, F, G, H) и 0,94, 0,8, 0,64,
0,8, 0,96 и 1,87М для растворов, содержащих АА
(рис. 2. A), ДМАЦ (рис. 2. B), АЦМОР (рис. 2. C),
АЭА (рис. 2. D), ДМФА (рис. 2. E) и ФА (рис. 2. F)
соответственно.
После этого эмбрионы 3-кратно отмывали во-
дой комнатной температуры (20°С) и помещали в
воду с оптимальными условиями инкубации (28°С).
Для определения влияния криозащитных сред
в экспериментах подсчитывали количество выжив-
ших и аномально развивающихся эмбрионов. После
чего по общему количеству эмбрионов рассчитывали
процент выживших и аномально развивающихся
эмбрионов.
Эмбриональное и постэмбриональное развитие
оценивали визуально в течение 3-х суток в условиях
оптимального содержания до перехода предличи-
нок на активное питание.
Статистический анализ результатов проводили
с помощью компьютерной программы “Statistica”
[2]. Статистическую значимость различий в
экспериментальных группах определяли методом
ANOVA (тест Дункана, р<0,05). На рис. 2 и 3
результаты представлены как среднее ± стандарт-
ная ошибка с указанием статистически значимых
различий между экспериментальными группами.
Результаты и обсуждение
Для достижения витрификации, которая в насто-
ящее время является наиболее перспективным
направлением в криобиологических исследованиях
Рис. 1. Эмбрион С. lalia на стадии развития 28 ч (перед
выклевом, хорион удален).
1 мм
345 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №3
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №3
Рис. 2. Общая схема эксперимента.
на эмбрионах рыб, необходимо использовать
высокие концентрации криопротекторов [12].
Поэтому в наших исследованиях использовались
высокие концентрации веществ, обладающих
криозащитными свойствами.
На рис. 3 представлены результаты выживае-
мости эмбрионов в криозащитных средах при раз-
личных температурах. Установлено, что наиболь-
ший процент выживших эмбрионов при инкубации
c температурой 2°С наблюдался при их обработке
криопротекторами АА 82,72±1,31 (рис. 3. A);
АЦМОР 82,97±9,7 (рис. 3. C); Cах+ЭГ 91,17±2,35
(рис. 3. G) и Сах 94,9±2,0 (рис. 3. I).
Криопротекторы АЭА (рис. 3. D), ДМФА
(рис. 3. E), ФА (рис.3. F) в комбинациях с Сах (рис.
3. I) и Cах + ЭГ (рис. 3. G) оказались наиболее
токсичными для эмбрионов, в то время как исполь-
зование криопротекторов AА (рис. 3. А) и АЦМОР
(рис. 3, C) не приводило к
статистически значимому
увеличению показателя
смертности.
Мы считаем, что для оп-
ределения криозащитных
сред можно использовать
Сах (рис. 2, 3. J) и ЭГ в
комбинации с Сах (рис. 2, 3.
H). Выживаемость при дан-
ных концентрациях в опти-
мальных температурных
условиях инкубации (28 °С)
составляет 94,3±2,4% в от-
личие от метанола (1–3 M)
в комбинациях с Сах (0,5 M).
В данном случае макси-
мальная выживаемость
составляла 55±5% [3]. При
обработке эмбрионов этими
же криопротекторами (рис.
2, 3. G, I) при температуре
2°С в течение последующих
15 мин статистически зна-
чимых отличий не установ-
лено (94,9±2,0 и 91,17±2,28)
по сравнению с эмбриона-
ми, инкубиррованными при
28°С (96,53±1,95 и 94,3±2,4).
Выживаемость эмбрио-
нов в контроле, инкубируе-
мых 30 мин при темпера-
туре 2°С, составляла 100%.
Для дальнейшего изуче-
ния влияния криозащитных
сред на постэмбриональное
развитие эмбрионы содер-
жались в течение 3-х суток в оптимальных
условиях до перехода предличинок на активное
питание. При этом учитывалось появление ано-
мальных признаков развития (рис. 4).
Для снижения токсичного влияния криопротек-
торов на эмбрионы в процессе их обработки темпе-
ратуру инкубации временно (на 15 мин) понижали
до 2°С [15, 16].
Во время инкубации эмбрионов в растворах 1М
Сах и 1,32 М ЭГ в течение 30 мин при оптимальной
температуре (28°С) статистически значимых от-
личий, влияющих на тератогенные изменения в ходе
дальнейшего постэмбрионального развития, не
выявлено (рис. 5. J, H). Добавление в криозащит-
ные среды таких криопротекторов, как А, B, C, Е
вызвало серьезные отклонения в постэмбриональ-
ном развитии 50,81±5,42, 52,42±12,38, 65,97±11,03 и
47,27±4,1% соответственно.
346 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №3
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №3
Вы
жи
ва
ем
ос
ть
,
%
Условия инкубации
Рис. 3. Выживаемость эмбрионов С. lalia после инкубации в криозащитных средах
при различных температурах. Статистически значимые различия наблюдались у
групп, не содержащих одинаковые символы (ANOVA, тест Дункана, p < 0,05, n=5).
– среднее ± ст. ошибка; – среднее.
Выживаемость эмбрионов при обработке их
криозащитными средами 1М Сах и 1,32М ЭГ
(рис. 3. G, I) достаточно высокая, но при охлаж-
дении до 2°С наблюдаются значительные откло-
нения от нормального развития (рис. 5. G, I). Мы
предполагаем, что на аномальное развитие повли-
яло также охлаждение эмбрионов во время инку-
бации в криозащитных средах. О видоспецифи-
ческой чувствительности эмбрионов к охлаждению
сообщалось ранее в работах [12, 15].
Криопротекторные свойства амидов на эмб-
рионах рыб в настоящее время не исследованы.
Мы изучили влияние амидов в связи с их высокой
проницаемостью, которая была показана на клетках
другого типа – спермиях петухов [1]. Таким обра-
зом, представленные в работе результаты по
токсическому действию этой группы криопротек-
торов являются новыми.
Полученные в работе данные позволяют сде-
лать выводы о том, что не только токсичность
криопротекторов, но и временное охлаждение су-
щественно влияют на дальнейшие условия инку-
бации эмбрионов С. lalia и являются определяю-
щими при поиске метода криоконсервирования.
Выводы
Состав криозащитной среды и температура ин-
кубации оказывают статистически значимое влия-
ние на развитие эмбрионов С. lalia.
Инкубация эмбрионов С. lalia в течение 30 мин
при температуре 2°С как в контроле, так и в крио-
защитных средах приводит к значительным тера-
тогенным изменениям при дальнейшем онто-
генезе.
Инкубация эмбрионов
С. lalia при 28°С в крио-
защитных средах, содер-
жащих 1М Сах и 1,32М ЭГ,
в течение 30 мин не оказы-
вает статистически значи-
мых негативных влияний
на выживаемость и появ-
ление аномально разви-
вающихся эмбрионов.
Включение в состав
криозащитных сред таких
криопротекторов, как
АЭА, ДМФА, ФА в кон-
центрациях 0,96, 0,8 и
1,87 М соответственно в
течение 15 мин увеличи-
вает смертность эмбрио-
нов после инкубации, поэ-
тому их использование для
разработки методов крио-
консервирования эмбрио-
нов рыб требует дальней-
ших исследований.
Полученные результаты важны при опреде-
лении состава криозащитных сред для криокон-
Рис. 4. Фотографии эмбрионов C. lalia на стадии
развития 40 ч: а – нормальное развитие (28°С); б –
аномальное развитие после охлаждения в течение 30 мин
(К) при 2° С.
а
б
100
80
60
40
20
0
E I G A B D F C J H
b c
d e d e
c d e
c d
a b
a
c d e
e d e
Литература
Линник Т.П., Бизикина О.В.
Криоконсервирование спер-
мы петухов. II. Криопротектор-
ная активность амидов и
диолов // Пробл. криобиоло-
гии.– 2001.– №4.– С. 43–51.
Реброва О.Ю. Статистический
анализ медицинских данных.
Применение пакета приклад-
ных программ Statistica.– М.:
МедиаСфера, 2002.– 312 с.
Ahammad M.M., Bhattacha-
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №3
PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №3
347
Hagedorn M., Kleinhans F.W., Wildt D.E., Rall W.F. Chilling
sensitivity and cryoprotectant permeability of dechorionated
zebrafish embryos, Brachydanio rerio // Cryobiology.– 1997,
N3.– Vol. 34.– P. 251–263.
Hagedorn M., Hsu E.W., Pilatus U. et al. Magnetic resonance
microscopy and spectroscopy reveal kinetics of cryopro-
tectant permeation in a multicompartment biological system //
Proc. Natl. Acad. Sci. USA.– 1996.– Vol. 93.– P. 7454–7459.
Isayeva A., Zhang T., Rawson D.M. Studies on chilling
sensitivity of zebra-fish (Danio rerio) oocytes // Cryobiology.–
2004.– Vol. 49, N2.– P. 114–122.
Liu X.H., Zhang T., Rawson D.M. Effect of cooling rate and
partial removal of yolk on the chilling injury in zebrafish (Danio
rerio) embryos // Theriogenology.– 2001.– Vol. 55, N8.– P.
1719–1731.
Liu K.C., Chou T.C., Lin H.D. Cryosurvival of goldfish embryo
after subzero freezing // Aquat. Living Resour.– 1993.– Vol.
6, N1.– P. 63–66.
Lubzens E., Pekarsky I., Blais I. Cryopreservation of Fish
Oocytes: Can this be Achieved? / The First International
Workshop on the Biology of Fish Sperm.– Vodnany, Czech
Republic, 2007.– P. 60.
Robles V., Cabrita E., Fletcher G.L. et al. Vitrification assays
with embryos from a cold tolerant sub-arctic fish species //
Teriogenology.– 2005.– Vol. 64.– N 7.– P. 1633–1646.
Zhang T.T. Cryopreservation of Gametes and Embryos of
Aquatic Species / In: Life in the Frozen State. Ed. by B.J.
Fuller, N. Lane, E.E. Benson.– London: CRC Press, 2004.–
P. 415– 436.
Zhang X.S., Zhao L., Hua T.C. et al. A study on the cryo-
preservation of common carp (Cyprinus carpio) embryos //
Cryo-Letters.– 1989.– Vol. 10.– P. 271–278.
Поступила 28.08.2008
сервирования эмбрионов
пресноводных рыб.
Дальнейшие исследова-
ния по криоконсервирова-
нию эмбрионов рыб необхо-
димо проводить с учетом оп-
тимальных температур ин-
кубации и использованием
наименее токсичных крио-
протекторов, входящих в
состав криозащитных сред.
Вы
жи
ва
ем
ос
ть
,
%
Условия инкубации
Рис. 5. Аномальное развитие эмбрионов С. lalia после инкубации в криозащит-
ных средах при различных температурах. Статистически значимые различия
наблюдались для групп, не имеющих одинаковых символов (ANOVA, тест Дункана,
p<0,05, n=5). – среднее ± ст. ошибка; – среднее.
E I G A B D F C J H K
80
70
60
50
40
30
20
10
0
b c d e
b c d b c d
c d e
d e
b c
b
e
a a
b c d
ryya D., Jana B.B. Effect of different concentrations of
cryoprotectant and extender on the hatching of indian major
carp embryos (Labeo rohita, Catla catla, and Cirrhinus mrigala)
stored at low temperature // Cryobiology.– 1998.– Vol. 37, N4.–
P. 318–324.
Bart A.N. New approaches in cryopreservation of fish
embryos / In: Cryopreservation in Aquatic Species. Ed. by
T.R. Tiersch, P.M. Mazik.– Baton Rouge, USA: The World
Aquaculture Society, 2000.– P. 179–187.
Beirao J., Robles V., Herraez M.P. et al. Cryoprotectant micro-
injection toxicity and chilling sensitivity in gilthead seabream
(Sparus aurata) embryos // Aquaculture.– 2006.– Vol. 261,
N3.– Р. 897–903.
Blaxter J.H.S. Development: Eggs and larve / In: Fish
Physiology. Ed. by W.S. Hoar, D.J. Randall.– New York:
Academic Press, 1955.– Vol. III.– P. 177–253.
Calvi S.L., Maisse G. Cryopreservation of carp (Cyprinus
carpio) blastomers // Aquat. Living Resour.– 1999.– Vol. 12,
N1.– P. 71–74.
Ding F.H., Xiao Z.Z., Li J. Preliminary studies on the vitrification
of red sea bream (Pagrus major) embryos // Theriogenology.–
2007.– Vol. 68, N5.– P. 702–708.
Dinnyes A., Urbanyi B., Baranyai B., Magyary I. Chilling
sensitivity of carp (Cyprinus carpio) embryos at different
development stages in the presence or absence of cryopro-
tectants: work in progress // Theriogenology.– 1998.– Vol.
50, N1.– P. 1–13.
Hagedorn M., Peterson A., Mazur P., Kleinhans F.W. High
ice nucleation temperature of zebrafish embryos: slow–
freezing is not an option // Cryobiology.– 2004.– Vol. 49, N2.–
P. 181–189.
Hagedorn M., Lance S.L., Fonseca D.M. et al. Altering fish
embryos with aquaporin-3: an essential step toward
successful cryopreservation // Biol. Reprod.– 2002.– Vol.
67, N3.– P. 961–966.
Hagedorn M., Kleinhans F.W. Problems and prospects in cryo-
preservation of fish embryos / In: Cryopreservation in Aquatic
Species. Ed. by T.R. Tiersch, P.M. Mazik.– Baton Rouge,
USA: The World Aquaculture Society, 2000.– P. 161–178.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-69036 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T16:33:51Z |
| publishDate | 2008 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Миксон, К.Б. Копейка, Е.Ф. Линник, Т.П. 2014-10-04T06:54:07Z 2014-10-04T06:54:07Z 2008 Выживаемость эмбрионов лялиуса (Colisa Lalia, Hamilton-Buchanan, 1822) после инкубации в криозащитных средах / К.Б. Миксон, Е.Ф. Копейка, Т.П. Линник // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 3. — С. 343-347. — Бібліогр.: 21 назв. — рос. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69036 47.42:591.3 В работе изучали влияние криопротекторов на выживаемость эмбрионов Colisa lalia на стадии развития перед выклевом. Показано, что состав криозащитной среды и температура инкубации оказывают статистически значимое влияние на развитие эмбрионов; 30-минутная инкубация эмбрионов при температуре 2°С как в контроле, так и в криозащитных средах приводит к значительным тератогенным изменениям в ходе дальнейшего онтогенеза; инкубация эмбрионов при 28°С в криозащитных средах, содержащих 1 М сахарозы и 1,32 М этиленгликоля, не оказывает статистически значимого негативного влияния на выживаемость и появление аномально развивающихся эмбрионов; включение в состав криозащитных сред таких криопротекторов, как ацетилэтаноламид, N,N-диметилформамид, формамид в концентрациях 0,96, 0,8 и 1,87М соответственно, при 15-минутной инкубации приводит к повышению смертности эмбрионов и поэтому их использование для разработки методов криоконсервирования эмбрионов рыб требует дальнейших исследований. Вивчали вплив кріопротекторів на виживаність ембріонів Colisa lalia на стадії розвитку перед викльовуванням. Показано, що склад кріозахисного середовища і температура інкубації статистично значно впливають на розвиток ембріонів; 30-хвилинна інкубація ембріонів при 2°С як в контролі, так і в кріозахисних середовищах приводить до значних тератогенних змін в процесі подальшого онтогенезу; інкубація ембріонів при 28°С в кріозахисних середовищах, які містять 1 М сахарози і 1,32 М етиленгліколю, не має значного негативного впливу на виживаність і появу ембріонів, які аномально развиваються. Додавання до кріозахисних середовищ таких кріопротекторів, як ацетилетаноламід, N,N-диметилформамід, формамід в концентраціях 0,96; 0,8; 1,87 М відповідно, протягом 15-хвилинної інкубації збільшує смертність ембріонів, тому для розробки методів кріоконсервування ембріонів риб необхідні подальші дослідження. The influence of cryoprotectants on survival rate of Calisa lalia at stage before hatching was studied. It was found that the composition and incubation temperature significantly influenced the embryonic development; incubation for 30 minutes at 2°С led to significant teratogenic alterations in ontogenesis of both control and cryoprotectant-treated experimental groups as well; incubation of embryos at 28°С with cryoprotective media, containing 1 M sucrose and 1.32 М ethylene glycol did not lead to significant decrease in survival rate and appearance of abnormally developing embryos; embryos incubation for 15 min with N-acetyl ethanolamide, N,Ndimethylformamide and formamide in concentration of 0.96, 0.8 and 1.87М, correspondingly led to the increase of mortality level and therefore the use of these cryoprotectants necessitated an additional study. ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Секция «Новые репродуктивные криотехнологии в медицине и животноводстве» Выживаемость эмбрионов лялиуса (Colisa Lalia, Hamilton-Buchanan, 1822) после инкубации в криозащитных средах Survival of Dwarf Gourami (Colisa Lalia, Hamilton–Buchanan, 1822) Embryos After Incubation in Cryoprotective Media Article published earlier |
| spellingShingle | Выживаемость эмбрионов лялиуса (Colisa Lalia, Hamilton-Buchanan, 1822) после инкубации в криозащитных средах Миксон, К.Б. Копейка, Е.Ф. Линник, Т.П. Секция «Новые репродуктивные криотехнологии в медицине и животноводстве» |
| title | Выживаемость эмбрионов лялиуса (Colisa Lalia, Hamilton-Buchanan, 1822) после инкубации в криозащитных средах |
| title_alt | Survival of Dwarf Gourami (Colisa Lalia, Hamilton–Buchanan, 1822) Embryos After Incubation in Cryoprotective Media |
| title_full | Выживаемость эмбрионов лялиуса (Colisa Lalia, Hamilton-Buchanan, 1822) после инкубации в криозащитных средах |
| title_fullStr | Выживаемость эмбрионов лялиуса (Colisa Lalia, Hamilton-Buchanan, 1822) после инкубации в криозащитных средах |
| title_full_unstemmed | Выживаемость эмбрионов лялиуса (Colisa Lalia, Hamilton-Buchanan, 1822) после инкубации в криозащитных средах |
| title_short | Выживаемость эмбрионов лялиуса (Colisa Lalia, Hamilton-Buchanan, 1822) после инкубации в криозащитных средах |
| title_sort | выживаемость эмбрионов лялиуса (colisa lalia, hamilton-buchanan, 1822) после инкубации в криозащитных средах |
| topic | Секция «Новые репродуктивные криотехнологии в медицине и животноводстве» |
| topic_facet | Секция «Новые репродуктивные криотехнологии в медицине и животноводстве» |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69036 |
| work_keys_str_mv | AT miksonkb vyživaemostʹémbrionovlâliusacolisalaliahamiltonbuchanan1822posleinkubaciivkriozaŝitnyhsredah AT kopeikaef vyživaemostʹémbrionovlâliusacolisalaliahamiltonbuchanan1822posleinkubaciivkriozaŝitnyhsredah AT linniktp vyživaemostʹémbrionovlâliusacolisalaliahamiltonbuchanan1822posleinkubaciivkriozaŝitnyhsredah AT miksonkb survivalofdwarfgouramicolisalaliahamiltonbuchanan1822embryosafterincubationincryoprotectivemedia AT kopeikaef survivalofdwarfgouramicolisalaliahamiltonbuchanan1822embryosafterincubationincryoprotectivemedia AT linniktp survivalofdwarfgouramicolisalaliahamiltonbuchanan1822embryosafterincubationincryoprotectivemedia |