Роль фактора росту Flt-3 у регуляції проліферативної активності АС133+ клітин кордової крові
Фракція клітин АС133⁺, яка була виділена із кордової крові за допомогою магнітного сортингу, інкубувалася із фактором росту Flt-3 у концентрації 10 нг/мл протягом 12–18 годин. Це сприяло статистично достовірному збільшенню колонієутворення у культурі in vitro функціонально активних кровотворних кліт...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Дата: | 2008 |
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Українська |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2008
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69038 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Роль фактора росту Flt-3 у регуляції проліферативної активності АС133+ клітин кордової крові / Н.М. Білько, С.В. Василовська, Д.І. Білько, І.А. Вотякова // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 3. — С. 352-354. — Бібліогр.: 5 назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860132622156431360 |
|---|---|
| author | Білько, Н.М. Василовська, С.В. Білько, Д.І. Вотякова, І.А. |
| author_facet | Білько, Н.М. Василовська, С.В. Білько, Д.І. Вотякова, І.А. |
| citation_txt | Роль фактора росту Flt-3 у регуляції проліферативної активності АС133+ клітин кордової крові / Н.М. Білько, С.В. Василовська, Д.І. Білько, І.А. Вотякова // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 3. — С. 352-354. — Бібліогр.: 5 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| description | Фракція клітин АС133⁺, яка була виділена із кордової крові за допомогою магнітного сортингу, інкубувалася із фактором росту Flt-3 у концентрації 10 нг/мл протягом 12–18 годин. Це сприяло статистично достовірному збільшенню колонієутворення у культурі in vitro функціонально активних кровотворних клітин-попередників.
Фракция АС133⁺ клеток, выделенных из кордовой крови при помощи магнитного сортинга, инкубировалась с фактором роста Flt-3 в концентрации 10 нг/мл на протяжении 12–18 ч. Это способствовало статистически достоверному увеличению колониеобразования в культуре in vitro функционально активных кроветворных клеток-предшественников.
AC133⁺ fraction of the cord blood cells separated by magnetic bead sorting was incubated with (10 ng/ml) during 12–18 hours that induced statistically significant enrichment of the colony formation in vitro of functionally active hematopoietic progenitor cells.
|
| first_indexed | 2025-12-07T17:45:06Z |
| format | Article |
| fulltext |
352 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №3
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №3
УДК 57.085.23:611.018
Н.М. БіЛЬКО1* , С.В. ВАСИЛОВСЬКА1, Д.І. БіЛЬКО1, І.А. ВОТЯКОВА2
Роль фактора росту Flt-3 у регуляції проліферативної
активності АС133+ клітин кордової крові
UDC 57.085.23:611.018
N.M. BILKO1*, S.V. VASILOVSKAYA1, D.I. BILKO1, I.A. VOTYAKOVA2
Role of Flt-3 Growth Factor in Regulation of AC133+ Cells
of Cord Blood Proliferative Activity
Фракція клітин АС133+, яка була виділена із кордової крові за допомогою магнітного сортингу, інкубувалася із фактором
росту Flt-3 у концентрації 10 нг/мл протягом 12–18 годин. Це сприяло статистично достовірному збільшенню колонієутворення
у культурі in vitro функціонально активних кровотворних клітин-попередників.
Ключові слова: гемопоетичні клітини-попередники, АС133+ клітини кордової крові, фактор росту Flt-3, клоногенний
аналіз in vitro.
Фракция АС133+ клеток, выделенных из кордовой крови при помощи магнитного сортинга, инкубировалась с фактором
роста Flt-3 в концентрации 10 нг/мл на протяжении 12–18 ч. Это способствовало статистически достоверному увеличению
колониеобразования в культуре in vitro функционально активных кроветворных клеток-предшественников.
Ключевые слова: гемопоэтические клетки-предшественники, АС133+ клетки кордовой крови, фактор роста Flt-3,
клоногенный анализ in vitro.
AC133+ fraction of the cord blood cells separated by magnetic bead sorting was incubated with (10 ng/ml) during 12–18 hours that
induced statistically significant enrichment of the colony formation in vitro of functionally active hematopoietic progenitor cells.
Key-words: hematopoietic progenitor cells, АС133+ cord blood-derived hematopoietic cells, Flt-3 growth factor, in vitro clonogenic assay.
Кордова кров (КК) людини є джерелом гемопо-
етичних стовбурових клітин (ГСК) і гемопоетичних
клітин-попередників (ГКП), що володіють високим
проліферативним потенціалом і відносно низькою
імунореактивністю у порівнянні з кістковим мозком
(КМ) [1].
АС133+ (CD133) як маркер поліпотентних стов-
бурових клітин був запропонований і описаний в 1997
році. Він характеризує популяцію клітин, які вва-
жаються їх найближчими нащадками [2, 3]. Його
коекспресія виявлена на 20–60% CD34+ клітин.
Останніми роками обговорюються перспективи
клінічного застосування АС133+-клітин як альтер-
нативи CD34+. Саме їм притаманна здатність до
довготривалої підтримки гемопоезу in vitro, таким
чином, вони є перспективною моделлю для експан-
сії ранніх клітин-попередників гемопоезу.
Мета роботи – дослідження клоногенного потен-
ціалу клітин фракції АС133+ кордової крові в системі
in vitro та визначення впливу інкубації з фактором
росту Flt-3 на їх функціональні властивості.
Матеріали і методи
Виділення фракції АС133+ клітин здійснювали
методом позитивної селекції (Miltenyi Biotec, Ні-
меччина). Інкубацію АС133+ клітин з фактором
росту Flt-3 у концентрації 10 нг/мл (Sigma, США)
проводили впродовж 12, 16 і 18 годин, після чого
клітини культивували в середовищі DMEM з 15%
FCS, 10 нг/мл LIF, 10 нг/мл IL-3, 10 нг/мл GM-CSF
(Sigma, США) у СО2-інкубаторі (Leec, Великобри-
танія). Для оцінки функціональної активності гемо-
поетичних клітин використовували клоногенний
аналіз у напіврідкому одношаровому агаровому
середовищі з визначенням гранулоцитарно-мак-
рофагальних колонієутворюючих одиниць (КУО-
ГМ), для стимуляції утворення яких використову-
вали GM-CSF (Sigma, США) в концентрації
10 нг/мл. Кількість клітинних агрегатів оцінювали
на 14-ту добу культивування [4]. Обробці піддавали
середні значення колоній (КУОк) трьох типів, клас-
терів (КлУО), суму колоній, кластерів і загальну
кількість всіх клітинних агрегатів при експлантації
в агар 1×103 клітин фракції АС133+. Проліфератив-
ний потенціал (ПП) популяції клітин АС133+
визначали як співвідношення колоній до кластерів.
Статистичну обробку отриманих результатів про-
водили з використанням t-критерію Стьюдента.
Результати та обговорення
Клітини початкової популяції АС133+ (контроль
без інкубації) утворювали в агарі колонії трьох типів,
* Автор, якому необхідно направляти кореспонденцію:
вул. Сковороди, 2, м. Київ, Україна 04655; тел.:+38 (044)
425-60-57, електронна пошта: nbilko@ukma.kiev.ua
1Центр молекулярних і клітинних досліджень Національного
університету “Києво-Могилянська академія”, м. Київ
2Медичний центр тканинної і клітинної терапії “Ембріотек”,
м. Київ
1Center of Molecular and Cellular Research at National Univer-
sity of “Kyiv-Mohyla Academy”, Kyiv, Ukraine
2Medical Center of Tissue and Cell Therapy “Embryotech”, Kyiv,
Ukraine.
* To whom correspondence should be addressed: 2, Skovorada
str., Kyiv, Ukraine 04655; tel.:+380 44 4256057,e-mail:
nbilko@ukma.kiev.ua
353 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №3
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №3
Вплив тривалості інкубації з Flt-3 на показники клоногенної активності АС133+ клітин кордової крові в умовах
культивування in vitro: – КУКк; – КлУО.
Термін інкубації, години
Кі
ль
кіс
ть
к
лі
ти
нн
их
а
гр
ег
ат
ів
х
10
3
П
ро
лі
ф
ер
ат
ив
ни
й
по
те
нц
іа
л
Термін інкубації, години
сума яких на 14-ту добу культивування становила
31,4±8,18 (рисунок, а). Сума кластерів склала
17,76±3,82. Проліферативний потенціал популяції
клітин АС133+ в контролі був на низькому рівні
1,97±0,81 (рисунок, б). Таким чином, невисокий рі-
вень клоногенної активності початкової популяції
АС133+ зумовлений їх примітивністю і обмеженою
здатністю реагувати на присутність GM-CSF в
культурі, що не дозволяє в даних умовах розкрити
їх проліферативний потенціал.
Інкубація з Flt-3 протягом 12 годин з подальшим
культивуванням клітин призводила до зростання
кількості колонієутворюючих одиниць КУОк в
агаровому середовищі до 66,69±19,07, що у 2 рази
перевищує цей показник в культурах без інкубації
(р<0,01). Достовірно не змінювалися кількість
великих і малих кластерів, а також їх сума. Таким
чином, сумарна кількість всіх клітинних агрегатів
зростала завдяки збільшенню кількості КУОк, од-
нак проліферативний потенціал залишався на рівні
контрольних значень.
Подовження терміну інкубації до 16 годин дозво-
лило значно підвищити клоногенну активність
клітин фракції АС133+. Сума колонієутворюючих
одиниць збільшувалася до 212,5±24,95, що більше
приблизно в 3,2 рази, ніж при інкубації 12 годин
(р < 0,001) і приблизно в 6,8 рази за дані у контроль-
ному варіанті (р < 0,001). Таке збільшення кількості
колоній під впливом Flt-3 може свідчити про вклю-
чення в проліферацію і диференціювання ранніх
клітин-попередників фракції АС133+ клітин, що
знаходяться у стані спокою у вихідному стані. Підт-
вердженням цього є збільшення показника проліфе-
ративного потенціалу АС133+ клітин у культурі до
10,04±1,90, значення якого також було в 3,6 рази
вище, ніж після 12-годинної інкубації (р < 0,01) і в 5
разів відносно контролю (р < 0,01).
Інкубація протягом 18 годин не приводила до
збільшення клоногенної активності клітин відносно
показника 16-годинної інкубації, хоча значно пере-
вищувала його при 12-годинній інкубації і в конт-
рольному варіанті (р < 0,001). Достовірної зміни
показника ПП після 18 годин перебування клітин з
Flt-3 не виявлено.
Отримані в роботі результати свідчать про те,
що стимулюючий ефект фактора росту Flt-3 визна-
чається впродовж 12-18 годин, проте його дія най-
більш виражена після 16 годин, що сприяє підви-
щенню загального відсотка клоногенних поперед-
ників у суспензії з 4,2% (у вихідній фракції АС133+)
до 23,4% [5]. Відомо, що рецептор Flt-3, або CD135
належить до класу рецепторів факторів росту,
залучених до раннього гемопоезу. Він є представ-
ником родини клітинних білків, які поєднують
функції рецептора і внутрішньоклітинної тирозин-
кінази. Експресія рецептора Flt-3 відмічена на лім-
фоїдних, проте більш виражена на мієлоїдних кліти-
нах-попередниках. В неактивному стані рецептор
Flt-3 представлений у вигляді одиничних молекул.
Взаємодія ліганда з рецептором викликає димери-
зацію двох одиничних молекул, і в цьому стані
рецептор стає активним. Цей процес супрово-
джується фосфорилюванням тирозинових залишків
тирозинкіназного домену TK 2, що приводить до
запуску каскаду реакцій (по Map-кіназному шляху
для Flt-3), результатом яких є експресія генів, що
відповідають за проліферацію і диференціювання
клітин.
Висновки
Призначенням Flt-3 є сприяння просуванню пер-
вісної популяції на наступні етапи розвитку, в резуль-
таті підвищується чутливість клітин до цитокінів,
накопичуються функціонально активні нащадки
0
50
100
150
200
250
контроль 12 16 18
0,0
2,0
4,0
6,0
8,0
10,0
12,0
контроль 12 16 18Контроль
(без інкубації) 12 16 18 Контроль
(без інкубації) 12 16 18
а б
354 PROBLEMS
OF CRYOBIOLOGY
Vol. 18, 2008, №3
ПРОБЛЕМЫ
КРИОБИОЛОГИИ
Т. 18, 2008, №3
Література
Гольдберг Е.Д., Дыгай А.М., Шахов В.П. Методы культуры
ткани в гематологии.– Томск: Изд-во Томск. ун-та, 1992.–
264 с.
Патент України №16917U, МПК С12N 5/00, C12N
5/08. Спосіб культивування клітин кордової крові /
Н.М. Білько, С.В. Василовська, Д.І. Білько, І.А. Вотякова,
Р.В. Бойко. Опубл. 15.08.06. Бюл. №8.
1.
2.
стовбурових клітин і, як наслідок, підвищується
рівень колонієутворення в культурі in vitro.
Bilko N.M., Votyakova I.A., Vasylovska S.V., Bilko D.I.
Characterization of the interaction between stromal and
haematopoietic progenitor cells in expansion cell culture
models // Cell Biol. Int.– 2005.– Vol. 29, N1.– P. 83–86.
Broxmeyer H.E., Srour E., Orschell C. et al. Cord blood stem
and progenitor cells // Methods Enzymol.– 2006.– Vol. 419.–
P. 439–473.
Yin A.H., Miraglia S., Zanjani E.D. et al. AC133, a novel
marker for human hematopoietic stem and progenitor cells //
Blood.– 1997.– Vol. 90, N12.– Р. 5002 –5012.
Надійшла 10.06.2008
3.
4.
5.
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-69038 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T17:45:06Z |
| publishDate | 2008 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Білько, Н.М. Василовська, С.В. Білько, Д.І. Вотякова, І.А. 2014-10-04T06:59:12Z 2014-10-04T06:59:12Z 2008 Роль фактора росту Flt-3 у регуляції проліферативної активності АС133+ клітин кордової крові / Н.М. Білько, С.В. Василовська, Д.І. Білько, І.А. Вотякова // Проблемы криобиологии. — 2008. — Т. 18, № 3. — С. 352-354. — Бібліогр.: 5 назв. — укр. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69038 57.085.23:611.018 Фракція клітин АС133⁺, яка була виділена із кордової крові за допомогою магнітного сортингу, інкубувалася із фактором росту Flt-3 у концентрації 10 нг/мл протягом 12–18 годин. Це сприяло статистично достовірному збільшенню колонієутворення у культурі in vitro функціонально активних кровотворних клітин-попередників. Фракция АС133⁺ клеток, выделенных из кордовой крови при помощи магнитного сортинга, инкубировалась с фактором роста Flt-3 в концентрации 10 нг/мл на протяжении 12–18 ч. Это способствовало статистически достоверному увеличению колониеобразования в культуре in vitro функционально активных кроветворных клеток-предшественников. AC133⁺ fraction of the cord blood cells separated by magnetic bead sorting was incubated with (10 ng/ml) during 12–18 hours that induced statistically significant enrichment of the colony formation in vitro of functionally active hematopoietic progenitor cells. uk Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Секция «Криобанк пуповинной крови. Перспективы применения криоконсервированных препаратов пуповинной крови в медицине» Роль фактора росту Flt-3 у регуляції проліферативної активності АС133+ клітин кордової крові Role of Flt-3 Growth Factor in Regulation of AC133+ Cells of Cord Blood Proliferative Activity Article published earlier |
| spellingShingle | Роль фактора росту Flt-3 у регуляції проліферативної активності АС133+ клітин кордової крові Білько, Н.М. Василовська, С.В. Білько, Д.І. Вотякова, І.А. Секция «Криобанк пуповинной крови. Перспективы применения криоконсервированных препаратов пуповинной крови в медицине» |
| title | Роль фактора росту Flt-3 у регуляції проліферативної активності АС133+ клітин кордової крові |
| title_alt | Role of Flt-3 Growth Factor in Regulation of AC133+ Cells of Cord Blood Proliferative Activity |
| title_full | Роль фактора росту Flt-3 у регуляції проліферативної активності АС133+ клітин кордової крові |
| title_fullStr | Роль фактора росту Flt-3 у регуляції проліферативної активності АС133+ клітин кордової крові |
| title_full_unstemmed | Роль фактора росту Flt-3 у регуляції проліферативної активності АС133+ клітин кордової крові |
| title_short | Роль фактора росту Flt-3 у регуляції проліферативної активності АС133+ клітин кордової крові |
| title_sort | роль фактора росту flt-3 у регуляції проліферативної активності ас133+ клітин кордової крові |
| topic | Секция «Криобанк пуповинной крови. Перспективы применения криоконсервированных препаратов пуповинной крови в медицине» |
| topic_facet | Секция «Криобанк пуповинной крови. Перспективы применения криоконсервированных препаратов пуповинной крови в медицине» |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69038 |
| work_keys_str_mv | AT bílʹkonm rolʹfaktorarostuflt3uregulâcííprolíferativnoíaktivnostías133klítinkordovoíkroví AT vasilovsʹkasv rolʹfaktorarostuflt3uregulâcííprolíferativnoíaktivnostías133klítinkordovoíkroví AT bílʹkodí rolʹfaktorarostuflt3uregulâcííprolíferativnoíaktivnostías133klítinkordovoíkroví AT votâkovaía rolʹfaktorarostuflt3uregulâcííprolíferativnoíaktivnostías133klítinkordovoíkroví AT bílʹkonm roleofflt3growthfactorinregulationofac133cellsofcordbloodproliferativeactivity AT vasilovsʹkasv roleofflt3growthfactorinregulationofac133cellsofcordbloodproliferativeactivity AT bílʹkodí roleofflt3growthfactorinregulationofac133cellsofcordbloodproliferativeactivity AT votâkovaía roleofflt3growthfactorinregulationofac133cellsofcordbloodproliferativeactivity |