Влияние разных протоколов замораживания на экспрессию поверхностных маркеров клеток фетальной печени разных сроков гестации
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Дата: | 2013 |
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Російська |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2013
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69110 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Влияние разных протоколов замораживания на экспрессию поверхностных маркеров клеток фетальной печени разных сроков гестации / Н.А. Бондарович, А.В. Кузняков, М.В. Останков, О.В. Челомбитько // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 2. — С. 165. — рос., англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860065712544940032 |
|---|---|
| author | Бондарович, Н.А. Кузняков, А.В. Останков, М.В. Челомбитько, О.В. |
| author_facet | Бондарович, Н.А. Кузняков, А.В. Останков, М.В. Челомбитько, О.В. |
| citation_txt | Влияние разных протоколов замораживания на экспрессию поверхностных маркеров клеток фетальной печени разных сроков гестации / Н.А. Бондарович, А.В. Кузняков, М.В. Останков, О.В. Челомбитько // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 2. — С. 165. — рос., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| first_indexed | 2025-12-07T17:07:25Z |
| format | Article |
| fulltext |
Влияние разных протоколов замораживания на экспрессию
поверхностных маркеров клеток фетальной
печени разных сроков гестации
Н.А. Бондарович, А.В. Кузняков, М.В. Останков, О.В. Челомбитько
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
Effect of Different Freezing Protocols on Expression of Surface
Markers of Fetal Liver Cells of Various Gestation Terms
N.A. Bondarovich, A.V. Kuznyakov, M.V. Ostankov, O.V. Chelombitko
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Клетки фетальной печени (КФП) широко исполь-
зуются в клеточной терапии. Обязательным этапом в их
использовании является криоконсервирование. Часто в
клинической практике применяют КФП разных сроков
гестации, которые a priori имеют различную криола-
бильность в связи со значительной модификацией по
мере гестации. Подбор оптимальных условий заморажи-
вания КФП разных сроков гестации (скорости охлажде-
ния, концентрации криопротектора) и использование
адекватных методов оценки деконсервированного мате-
риала остаются актуальными. В связи с этим целью ис-
следования было изучение влияния различных протоко-
лов замораживания на экспрессию фенотипических
маркеров КФП разных сроков гестации.
Объектом исследования были КФП мышей С57Bl 14
и 18 суток гестации (КФП-14 и КФП-18). Криоконсервиро-
вание КФП проводили под защитой ДМСО в концентра-
циях 7,5; 10 и 12,5% с использованием двух программ
охлаждения: I – со скоростью 1 град/мин до –25°С; II – со
скоростью 1 град/мин до –40°С, затем – 10 град/мин до
–90°С; далее в обоих случаях следовало погружение в
жидкий азот. Образцы отогревали на водяной бане при
41°С. Жизнеспособность клеток определяли по окраши-
ванию пропидий йодидом. Оценку фенотипии суспензии
КФП проводили методом проточной цитометрии на
цитофлуориметре «FACS Calibur» («BD», США) с ис-
пользованием моноклональных антител («BD Bioscien-
ces», США) к молекулам СD34, СD38, Sca1, CD73 и CD44.
После замораживания-отогрева суспензии КФП-14,
независимо от программы охлаждения, отмечено обога-
щение CD34–Sca1+ клетками. Данный эффект не наблю-
дался у КФП-18, в которых после замораживания-отогре-
ва наблюдали снижение данного показателя. Использова-
ние ДМСО в концентрации 7,5% при обеих программах
охлаждения позволило сохранить количество клеток
CD34+CD38– в КФП-14 на уровне первоначальных значе-
ний. При этом использование 12,5%-го раствора ДМСО
было неоптимальным для сохранения данной популяции
клеток, что выражалось в существенном снижении
количества CD34+CD38–-клеток. С увеличением срока
гестации чувствительность CD34+CD38–-клеток к кон-
центрации криопротектора существенно изменялась,
что было подтверждено данными о наибольшем
количестве CD34+CD38–-клеток среди КФП-18 при исполь-
зовании программы II с 12,5% ДМСО. Наиболее высокое
содержание CD44+CD73+-клеток в КФП 14 и 18 суток гес-
тации было получено после их замораживания-отогрева
с использованием программы I и 10% ДМСО. Получен-
ные данные подтверждают необходимость тщательного
подбора программы криоконсервирования для КФП
разных сроков гестации.
Fetal liver cells (FLCs) have been widely used in cell
therapy. Mandatory component of technological process
of their application is cryopreservation. It is of common
occurence that applied FLCs are of different gestation terms,
and a priori are of various cryolability due to their significant
modification during gestation. Selection of optimal freezing
conditions for FLCs of different gestation terms (cooling
rate, cryoprotectant concentration) and application of
adequate methods of assessing frozen-thawed material has
remained an actual task. In this connection the research aim
was to study the effect of different freezing protocols on
expression of phenotype markers of FLCs of different
gestation terms.
The research objects were FLCs derived from C57Bl mice
of 14 and 18 gestation day (FLC-14 and FLC-18). FLCs were
cryopreserved under protection of DMSO in concentrations
of 7.5%; 10% and 12.5% utilizing two programs: I – cooling
rate of 1 deg/min down to –25°C; II – cooling rate of 1 deg/min
down to –40°C and 10 deg/min down to –90°C; in both
cases with following plunging into liquid nitrogen. The
samples were thawed in water bath at 41°C. Cell viability
was examined by staining with propidium iodide. The
phenotype of FLCs was assessed by flow cytometry with
FACS Calibur (BD, USA) using monoclonal antibodies (BD,
USA) against molecules CD34, CD38, Scal, CD73 and CD44.
After freeze-thawing of FLC-14 suspension indepen-
dently on cooling program we noted a rised content of CD34–
Scal+ cells. This effect was not found in FLC-18 suspension,
where this index reduced after freeze-thawing. Use of DMSO
in concentration of 7.5% in all the cryopreservation
programs allowed the preservation of the number of
CD34+CD38– cells at the level of the control values in FLC-14.
Application of 12.5% DMSO solution was not optimal to
preserve this cell population, that was manifested in a
significant reduction of CD34+CD38– cell number. It is of
interest that with a rise in gestation term the sensitivity of
CD34+CD38– cells to cryoprotectant concentration signifi-
cantly altered, which was confirmed by the data on the
highest amount of CD34+CD38– cells among FLC-18 after
application of program II with 12.5% DMSO. The highest
number of CD44+CD73+ cells in FLC of 14 and 18 gestation
days were obtained after freeze-thawing using program I
and 10% DMSO. The findings focus the attention to the
need of thorough selection of cryopreservation program
for FLCs of different gestation terms.
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 2, 2013
165
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-69110 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T17:07:25Z |
| publishDate | 2013 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Бондарович, Н.А. Кузняков, А.В. Останков, М.В. Челомбитько, О.В. 2014-10-05T09:20:08Z 2014-10-05T09:20:08Z 2013 Влияние разных протоколов замораживания на экспрессию поверхностных маркеров клеток фетальной печени разных сроков гестации / Н.А. Бондарович, А.В. Кузняков, М.В. Останков, О.В. Челомбитько // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 2. — С. 165. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69110 ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Тезисы Влияние разных протоколов замораживания на экспрессию поверхностных маркеров клеток фетальной печени разных сроков гестации Effect of Various Freezing Protocols on Expression of Surface Markers of Fetal Liver Cells of Different Gestation Terms Article published earlier |
| spellingShingle | Влияние разных протоколов замораживания на экспрессию поверхностных маркеров клеток фетальной печени разных сроков гестации Бондарович, Н.А. Кузняков, А.В. Останков, М.В. Челомбитько, О.В. Тезисы |
| title | Влияние разных протоколов замораживания на экспрессию поверхностных маркеров клеток фетальной печени разных сроков гестации |
| title_alt | Effect of Various Freezing Protocols on Expression of Surface Markers of Fetal Liver Cells of Different Gestation Terms |
| title_full | Влияние разных протоколов замораживания на экспрессию поверхностных маркеров клеток фетальной печени разных сроков гестации |
| title_fullStr | Влияние разных протоколов замораживания на экспрессию поверхностных маркеров клеток фетальной печени разных сроков гестации |
| title_full_unstemmed | Влияние разных протоколов замораживания на экспрессию поверхностных маркеров клеток фетальной печени разных сроков гестации |
| title_short | Влияние разных протоколов замораживания на экспрессию поверхностных маркеров клеток фетальной печени разных сроков гестации |
| title_sort | влияние разных протоколов замораживания на экспрессию поверхностных маркеров клеток фетальной печени разных сроков гестации |
| topic | Тезисы |
| topic_facet | Тезисы |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69110 |
| work_keys_str_mv | AT bondarovična vliânieraznyhprotokolovzamoraživaniânaékspressiûpoverhnostnyhmarkerovkletokfetalʹnoipečeniraznyhsrokovgestacii AT kuznâkovav vliânieraznyhprotokolovzamoraživaniânaékspressiûpoverhnostnyhmarkerovkletokfetalʹnoipečeniraznyhsrokovgestacii AT ostankovmv vliânieraznyhprotokolovzamoraživaniânaékspressiûpoverhnostnyhmarkerovkletokfetalʹnoipečeniraznyhsrokovgestacii AT čelombitʹkoov vliânieraznyhprotokolovzamoraživaniânaékspressiûpoverhnostnyhmarkerovkletokfetalʹnoipečeniraznyhsrokovgestacii AT bondarovična effectofvariousfreezingprotocolsonexpressionofsurfacemarkersoffetallivercellsofdifferentgestationterms AT kuznâkovav effectofvariousfreezingprotocolsonexpressionofsurfacemarkersoffetallivercellsofdifferentgestationterms AT ostankovmv effectofvariousfreezingprotocolsonexpressionofsurfacemarkersoffetallivercellsofdifferentgestationterms AT čelombitʹkoov effectofvariousfreezingprotocolsonexpressionofsurfacemarkersoffetallivercellsofdifferentgestationterms |