Выбор «xаускипинг-гена» для анализа уровня экспрессии генов методом количественной ОТ-ПЦР после криоконсервирования клеток
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Дата: | 2013 |
| Автори: | , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Russian |
| Опубліковано: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2013
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69114 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Выбор «xаускипинг-гена» для анализа уровня экспрессии генов методом количественной ОТ-ПЦР после криоконсервирования клеток / П.А. Борисов, А.Ю. Димитров, А.Н. Гольцев // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 2. — С. 169. — рос., англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-69114 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Борисов, П.А. Димитров, А.Ю. Гольцев, А.Н. 2014-10-05T09:25:59Z 2014-10-05T09:25:59Z 2013 Выбор «xаускипинг-гена» для анализа уровня экспрессии генов методом количественной ОТ-ПЦР после криоконсервирования клеток / П.А. Борисов, А.Ю. Димитров, А.Н. Гольцев // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 2. — С. 169. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69114 ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Тезисы Выбор «xаускипинг-гена» для анализа уровня экспрессии генов методом количественной ОТ-ПЦР после криоконсервирования клеток Selection of Housekeeping Gene for Analysis of Gene Expression Level by Quantitative RT-PCR Method after Cell Cryopreservation Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Выбор «xаускипинг-гена» для анализа уровня экспрессии генов методом количественной ОТ-ПЦР после криоконсервирования клеток |
| spellingShingle |
Выбор «xаускипинг-гена» для анализа уровня экспрессии генов методом количественной ОТ-ПЦР после криоконсервирования клеток Борисов, П.А. Димитров, А.Ю. Гольцев, А.Н. Тезисы |
| title_short |
Выбор «xаускипинг-гена» для анализа уровня экспрессии генов методом количественной ОТ-ПЦР после криоконсервирования клеток |
| title_full |
Выбор «xаускипинг-гена» для анализа уровня экспрессии генов методом количественной ОТ-ПЦР после криоконсервирования клеток |
| title_fullStr |
Выбор «xаускипинг-гена» для анализа уровня экспрессии генов методом количественной ОТ-ПЦР после криоконсервирования клеток |
| title_full_unstemmed |
Выбор «xаускипинг-гена» для анализа уровня экспрессии генов методом количественной ОТ-ПЦР после криоконсервирования клеток |
| title_sort |
выбор «xаускипинг-гена» для анализа уровня экспрессии генов методом количественной от-пцр после криоконсервирования клеток |
| author |
Борисов, П.А. Димитров, А.Ю. Гольцев, А.Н. |
| author_facet |
Борисов, П.А. Димитров, А.Ю. Гольцев, А.Н. |
| topic |
Тезисы |
| topic_facet |
Тезисы |
| publishDate |
2013 |
| language |
Russian |
| container_title |
Проблемы криобиологии и криомедицины |
| publisher |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Selection of Housekeeping Gene for Analysis of Gene Expression Level by Quantitative RT-PCR Method after Cell Cryopreservation |
| issn |
0233-7673 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69114 |
| citation_txt |
Выбор «xаускипинг-гена» для анализа уровня экспрессии генов методом количественной ОТ-ПЦР после криоконсервирования клеток / П.А. Борисов, А.Ю. Димитров, А.Н. Гольцев // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 2. — С. 169. — рос., англ. |
| work_keys_str_mv |
AT borisovpa vyborxauskipinggenadlâanalizaurovnâékspressiigenovmetodomkoličestvennoiotpcrposlekriokonservirovaniâkletok AT dimitrovaû vyborxauskipinggenadlâanalizaurovnâékspressiigenovmetodomkoličestvennoiotpcrposlekriokonservirovaniâkletok AT golʹcevan vyborxauskipinggenadlâanalizaurovnâékspressiigenovmetodomkoličestvennoiotpcrposlekriokonservirovaniâkletok AT borisovpa selectionofhousekeepinggeneforanalysisofgeneexpressionlevelbyquantitativertpcrmethodaftercellcryopreservation AT dimitrovaû selectionofhousekeepinggeneforanalysisofgeneexpressionlevelbyquantitativertpcrmethodaftercellcryopreservation AT golʹcevan selectionofhousekeepinggeneforanalysisofgeneexpressionlevelbyquantitativertpcrmethodaftercellcryopreservation |
| first_indexed |
2025-11-25T20:34:21Z |
| last_indexed |
2025-11-25T20:34:21Z |
| _version_ |
1850525381407277056 |
| fulltext |
Выбор «хаускипинг-гена» для анализа уровня экспрессии генов методом
количественной ОТ-ПЦР после криоконсервирования клеток
П.А. Борисов, А.Ю. Димитров, А.Н. Гольцев
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
Selection of Housekeeping Gene for Analysis of Gene Expression
Level in Post-Thaw Cells Using Quantitative RT-PCR Method
P.A. Borisov, A.Yu. Dimitrov, A.N. Goltsev
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Криоконсервирование является эффективным спосо-
бом долгосрочного хранения биообъектов, а также муль-
тифакторным стрессом, который заключается в воздей-
ствии физических и химических факторов, обусловли-
вающих, как следствие, множество изменений структур-
ного и функционального характера в криоконсерви-
рованном материале. В результате этого может происхо-
дить модификация биообъекта, которая затрагивает не
только метаболические процессы, но и самый низкий
уровень их регуляции – геномный [B. Fuller, 2004]. Более
того, различные режимы криоконсервирования могут
по-разному влиять на работу генома одной и той же
клетки.
На сегодня наиболее точным и чувствительным спо-
собом количественного определения изменений экс-
прессии генов является проведение обратной транскрип-
ционной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) в
реальном времени. Определение относительного уровня
представленности транскриптов позволяет сравнить
контрольный и опытный экспериментальные образцы.
При этом проводится нормирование общего количества
РНК в образцах, которое позволяет нивелировать разли-
чия в количестве и/или качестве стартового материала, а
также в условиях пробоподготовки. Для этого исполь-
зуют транскрипты «хаускипинг-генов», имеющих отно-
сительно стабильный уровень экспрессии во всех типах
клеток, а также, предположительно, не поддающихся
влиянию экспериментальных воздействий [Д. Ребриков,
2009]. Однако согласно данным литературы не сущест-
вует такого «хаускипинг-гена», уровень экспрессии кото-
рого был бы стабильным при различных эксперимен-
тальных условиях [E. Spanakis, 1993; R. Hanafy, 2011]. Пока
не существует данных о влиянии криоконсервирования
на экспрессию «хаускипинг-генов», что не исключает
ее изменение после замораживания-оттаивания.
Поэтому при использовании конкретного референс-
ного гена необходимо экспериментально подтвердить
постоянство уровня его представленности в исследуемых
образцах. Вариантом решения такой задачи является
параллельное определение уровня представленности
транскриптов и их стабильности для нескольких «хаус-
кипинг-генов». В результате такого исследования можно
будет объяснить выбор референсного гена, наиболее
подходящего для конкретного исследования, в частности
для определенного режима криоконсервирования.
Cryopreservation is an effective method for long-term
storage of bioobjects, on another hand it causes a multifactor
stress consisting in physical and chemical exposures resul-
ting in stipulation of multiple structural and functional chan-
ges in cryopreserved specimens. Finally these may lead to
the bioobject modification affecting metabolic processes
as well as the basic level of their regulation, the genome
[B. Fuller, 2004]. Moreover, different cryopreservation
regimens may affect the functioning of genome of the same
cell in a various way.
Nowadays the real time reverse transcription polymerase
chain reaction (RT-PCR) is the most accurate and sensitive
method of estimation of gene expression changes. Assess-
ment of relative transcript representation allows to com-
pare control and experimental samples. Total RNA amount
in the samples is usually normalized, that enables to balance
the differences in quantity and/or quality of initial material
and during sample preparing as well. The transcripts of
housekeeping genes are used for this purpose, they possess
relatively stable expression in all cell types, as well as are
presumably non-sensitive to experiment conditions [D. Reb-
rikov, 2009]. However there is no reports on housekeeping
gene, which expression level is stable in different experi-
mental conditions [E. Spanakis, 1993; R. Hanafy, 2011].
Moreover, there is no data on how cryopreservation affect
housekeeping genes expression, but the post-thaw changes
could not be excluded.
Thus, using the particular reference gene requires the
experimental evidence for stability of its representation level
in the studied samples. Simultaneous assessment of trans-
cript representation level and their stability for some house-
keeping genes is likely to solve this task. Such a research
will allow to explain the selection of reference gene, the
most appropriate for certain investigation, in particular, for
specific cryopreservation regimen.
проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 2, 2013
169
|