Стадии апоптоза ядросодержащих клеток кордовой крови в зависимости от метода криоконсервирования
Saved in:
| Published in: | Проблемы криобиологии и криомедицины |
|---|---|
| Date: | 2013 |
| Main Authors: | , |
| Format: | Article |
| Language: | Russian |
| Published: |
Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України
2013
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69115 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Стадии апоптоза ядросодержащих клеток кордовой крови в зависимости от метода криоконсервирования / О.А. Михайлова, П.М. Зубов // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 2. — С. 170. — рос., англ. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1860154613444902912 |
|---|---|
| author | Михайлова, О.А. Зубов, П.М. |
| author_facet | Михайлова, О.А. Зубов, П.М. |
| citation_txt | Стадии апоптоза ядросодержащих клеток кордовой крови в зависимости от метода криоконсервирования / О.А. Михайлова, П.М. Зубов // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 2. — С. 170. — рос., англ. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Проблемы криобиологии и криомедицины |
| first_indexed | 2025-12-07T17:52:47Z |
| format | Article |
| fulltext |
Стадии апоптоза ядросодержащих клеток кордовой крови
в зависимости от метода криоконсервирования
О.А. Михайлова, П.М. Зубов
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины, г. Харьков
Apoptosis Stages in Cord Blood Nucleated Cells
Depending on Cryopreservation Method
O.A. Mykhailova, P.M. Zubov
Institute for Problems of Cryobiology and Cryomedicine of the National Academy of Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
Cryopreservation of cord blood (CB) nucleated cells
(NCs), widely used in treatment of various diseases, is the
only way of their long-term storage. Identification of cell
death pathways following cryopreservation is important for
the selection of the optimal cryoprotective media and freez-
ing regimens. The aim of this study was to assess the stages
of apoptosis/necrosis of CB nucleated cells, depending on
the cryopreservation method.
The object of study were human CB NCs. Assessment
of apop-tosis stages was performed by flow cytometry
method using the combination of Annexin V and vital dye
7AAD, that allows to identify four types of cells: living
cells (AnnexinV–7AAD–); the cells at the early stages of
apoptosis (AnnexinV+7AAD–); the cells at the stage of late
apoptosis/necrosis (AnnexinV+7AAD+); and dead necrotic
cells (AnnexinV–7AAD+).
It was shown that the method of NCs isolation using
polyglucinum and subsequent freezing with 5% DMSO, as
well as by developed two-step centrifugation method and
subsequent freezing with 10% PEO-1500 allowed to preserve
up to 80 and 73% living AnnexinV–7AAD– cells, respecti-
vely. Freezing of the cells isolated by ficoll density gradient
reduced this index down to 56% when using 5% DMSO,
and down to 47% in the case of 10% PEO-1500. Evaluation
of apoptosis/necrosis stages in injured cells showed that
regardless of the cryopreservation method, most of them
were characterized by membrane damage and fragmentation
of nuclear DNA, while phospholipids arrangement was
preserved, that was characteristic for the cells at the stage
of necrosis (AnnexinV–7AAD+). It is evident that cryopre-
servation leads to a cell loss mainly due to their rapid
destruction caused by freezing and thawing factors, which
the cells can not or have no time to react using protective
systems. There were found only few cells on the initial stage
of apoptosis (AnnexinV+7AAD–). Small amount of all da-
maged during cryopreservation NCs, were the cells at a late
stage of apoptosis/necrosis (AnnexinV+7AAD+), which had
disturbances of the plasma membrane and phospholipids
arrangement.
The analysis of apoptosis/necrosis stages of NC popula-
tions (lymphocytes, monocytes, granulocytes) showed that
the major damages following from cryopreservation occured
in granulocytes, while lymphocytes and monocytes were
shown as suffering less from apoptosis, that indicated their
greater resistance to the factors of cryopreservation.
Криоконсервирование ядросодержащих клеток (ЯСК)
кордовой крови (КК), широко используемых для лечения
различных заболеваний, является единственным спосо-
бом их долгосрочного хранения. Определение путей ги-
бели клеток в процессе криоконсервирования важно при
подборе оптимальных криозащитных сред и условий за-
мораживания клеток. Целью данной работы было оце-
нить стадии апоптоза/некроза ЯСК КК в зависимости от
метода криоконсервирования.
Объектом исследования служили ЯСК КК человека.
Стадии апоптоза оценивали методом проточной цито-
метрии с использованием комбинации Annexin V и ви-
тального красителя 7AAD, который позволяет идентифи-
цировать четыре типа клеток: живые (AnnexinV–7AAD–);
находящиеся на начальной стадии апоптоза (Anne-
xinV+7AAD–); на стадии позднего апоптоза/некроза (An-
nexinV+7AAD+) и мертвые некротические (AnnexinV–
7AAD+).
Показано, что метод выделения ЯСК с помощью по-
лиглюкина и последующее их замораживание под за-
щитой 5% ДМСО, а также выделение разработанным
методом двухэтапного центрифугирования с последую-
щим замораживанием под защитой 10% ПЭО-1500
позволяют сохранить до 80 и 73% живых (AnnexinV–
7AAD–) клеток соответственно. Замораживание клеток,
выделенных в градиенте плотности фиколла, снижает
данный показатель до 56% при использовании 5% ДМСО
и до 47% – 10% ПЭО-1500. Оценка стадий апоптоза/не-
кроза поврежденных клеток показала, что независимо
от метода криоконсервирования для большей их части
характерны нарушение целостности мембраны и фраг-
ментация ДНК в ядре при сохранении в ней упорядо-
ченности фосфолипидов, что свойственно клеткам,
находящимся на стадии некроза (AnnexinV–7AAD+).
Установлено, что в процессе криоконсервирования ос-
новные потери клеток происходят в результате их быст-
рой гибели под влиянием повреждающих факторов
замораживания-отогрева, на которые клетки не могут
или не успевают отреагировать с помощью своих защит-
ных систем. Клеток, находящихся на начальной стадии
апоптоза (AnnexinV+7AAD–), гораздо меньше. Неболь-
шой процент из всех поврежденных в процессе криокон-
сервирования ЯСК составляют клетки, находящиеся на
поздней стадии апоптоза/некроза (AnnexinV+7AAD+), т. е.
которые имеют нарушения целостности плазматической
мембраны и упорядоченности в ней фосфолипидов.
При анализе стадий апоптоза/некроза в популяциях
ЯСК (лимфоциты, моноциты, гранулоциты) было пока-
зано, что основные повреждения при криоконсерви-
ровании происходят в гранулоцитах, а в лимфоцитах и
моноцитах процессы апоптоза инициируются в меньшей
степени, что указывает на большую их устойчивость к
факторам криоконсервирования.
170 проблемы криобиологии и криомедицины
problems of cryobiology and cryomedicine
том/volume 23, №/issue 2, 2013
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-69115 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0233-7673 |
| language | Russian |
| last_indexed | 2025-12-07T17:52:47Z |
| publishDate | 2013 |
| publisher | Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Михайлова, О.А. Зубов, П.М. 2014-10-05T09:27:06Z 2014-10-05T09:27:06Z 2013 Стадии апоптоза ядросодержащих клеток кордовой крови в зависимости от метода криоконсервирования / О.А. Михайлова, П.М. Зубов // Проблемы криобиологии и криомедицины. — 2013. — Т. 23, № 2. — С. 170. — рос., англ. 0233-7673 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69115 ru Інститут проблем кріобіології і кріомедицини НАН України Проблемы криобиологии и криомедицины Тезисы Стадии апоптоза ядросодержащих клеток кордовой крови в зависимости от метода криоконсервирования Apoptosis Stages of Cord Blood Nucleated Cells Depending on Cryopreservation Method Article published earlier |
| spellingShingle | Стадии апоптоза ядросодержащих клеток кордовой крови в зависимости от метода криоконсервирования Михайлова, О.А. Зубов, П.М. Тезисы |
| title | Стадии апоптоза ядросодержащих клеток кордовой крови в зависимости от метода криоконсервирования |
| title_alt | Apoptosis Stages of Cord Blood Nucleated Cells Depending on Cryopreservation Method |
| title_full | Стадии апоптоза ядросодержащих клеток кордовой крови в зависимости от метода криоконсервирования |
| title_fullStr | Стадии апоптоза ядросодержащих клеток кордовой крови в зависимости от метода криоконсервирования |
| title_full_unstemmed | Стадии апоптоза ядросодержащих клеток кордовой крови в зависимости от метода криоконсервирования |
| title_short | Стадии апоптоза ядросодержащих клеток кордовой крови в зависимости от метода криоконсервирования |
| title_sort | стадии апоптоза ядросодержащих клеток кордовой крови в зависимости от метода криоконсервирования |
| topic | Тезисы |
| topic_facet | Тезисы |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/69115 |
| work_keys_str_mv | AT mihailovaoa stadiiapoptozaâdrosoderžaŝihkletokkordovoikrovivzavisimostiotmetodakriokonservirovaniâ AT zubovpm stadiiapoptozaâdrosoderžaŝihkletokkordovoikrovivzavisimostiotmetodakriokonservirovaniâ AT mihailovaoa apoptosisstagesofcordbloodnucleatedcellsdependingoncryopreservationmethod AT zubovpm apoptosisstagesofcordbloodnucleatedcellsdependingoncryopreservationmethod |