Фракціонування і властивості протеїназ клітин мишачої лімфоми NK/Ly
Виявлено, що лізат клітин мишачої лімфоми NK/Ly містить протеїнази, активність яких за рівнем гідролізу казеїну при рН 5,4 становить 26,3 мкг казеїну за хвилину на мг білка, а при рН 8,0 - 15,0 мкг казеїну за хвилину на мг білка. Для очистки
 протеїназ і дослідження їх властивостей проведено...
Saved in:
| Published in: | Праці наукового товариства ім. Шевченка |
|---|---|
| Date: | 2010 |
| Main Authors: | , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Ukrainian |
| Published: |
Західний науковий центр НАН України і МОН України
2010
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/74474 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Фракціонування і властивості протеїназ клітин мишачої лімфоми NK/Ly / М. Луцик, С. Навитка, О. Придатко, Р. Стойка // Праці Наукового товариства ім. Шевченка. — Л., 2010. — Т. XXV: Хемія і біохемія. — С. 250-262. — Бібліогр.: 43 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1862565860256776192 |
|---|---|
| author | Луцик, М. Навитка, С. Придатко, О. Стойка, Р. |
| author_facet | Луцик, М. Навитка, С. Придатко, О. Стойка, Р. |
| citation_txt | Фракціонування і властивості протеїназ клітин мишачої лімфоми NK/Ly / М. Луцик, С. Навитка, О. Придатко, Р. Стойка // Праці Наукового товариства ім. Шевченка. — Л., 2010. — Т. XXV: Хемія і біохемія. — С. 250-262. — Бібліогр.: 43 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Праці наукового товариства ім. Шевченка |
| description | Виявлено, що лізат клітин мишачої лімфоми NK/Ly містить протеїнази, активність яких за рівнем гідролізу казеїну при рН 5,4 становить 26,3 мкг казеїну за хвилину на мг білка, а при рН 8,0 - 15,0 мкг казеїну за хвилину на мг білка. Для очистки
протеїназ і дослідження їх властивостей проведено фракціонування лізату клітин
NK/Ly за допомогою ступеневого висолювання амонію сульфатом, диференційного
осадження глобулінів за умов низької іонної сили і поступового зниження рН, хроматографії на колонці цібакрон-сефарози та афінної хроматографії на Т-гелі, а також шляхом імунопреципітації. Використання різних способів фракціонування дозволило досягти певного підвищення питомої протеолітичної активності препаратів, проте при цьому не вдалося одержати препарати протеїназ, які б були гомогенними за білковим складом. Результати електрофоретичного аналізу досліджуваних зразків протеїназ вказують на значну агрегацію білкових комплексів, до яких вони входять. Іншою особливістю протеїназ клітин лімфоми NK/Ly є нечутливість до
інгібувальної дії йодацетаміду, α-2 макроглобуліну і трасилолу. Обговорено роль різних типів протеїназ при пухлинному рості.
Ключові слова: пухлини, лімфома NK/Ly, протеїнази.
Proteolytic activity, purification and properties of proteinases from murine lymphoma NK/Ly ascitic cells
were investigated. In cell lysates proteolytic activity as measured by hydrolysis of casein was on the level 26.3
ug of casein/min per mg of protein at pH 5,4 and 15.0 ug of casein /min per mg of protein at pH 8,0. By
fractional precipitation with ammonium sulfate proteins of lysates were separated into three fractions –
immunoglobulin-like, albumin and post-albumin. The highest specific proteolytic activity was detected in postalbumin
fraction, but the yield of protein material was the lowest. Disc electrophoresis of obtained fractions in
standard conditions at pH 8,9 revealed serum albumin as a predominant protein in albumin and post-albumin
fractions. In all fractions the substantial quantity of protein did not enter the gel and was retained in start
position, indicating on the presence of highly aggregated protein complexes. For elimination of blood plasma
proteins from post-albumin fraction immunoprecipitation with antibodies towards mouse blood proteins was
applied, providing three-fold increase in specific proteolytic activity. By chromatography on Cibacron blue
sepharose it was revealed that proteinases were not retained on the sorbent and passed through the column
resulting in three fold increase of proteolytic activity. Proteinases of immunoglobulin fraction were purified by
fractional precipitation of globulins by stepwise lowering of pH at low ionic strength. This approach was
however non effective as it did not provide an increase in proteolytic activity apparently due to damaging
effect on enzymes. Detectable proteolytic activity was revealed in subcellular particles obtained from ascitic
fluid by high speed centrifugation after elimination of cells. SDS PAGE revealed a numerous bands in each
fraction, derived mainly from material not entering the gel in non denaturating electrophoresis. This indicates
on association of proteinases with multimolecular complexes or subcellular particles. Purified proteinases
obtained from NK/Ly cells were insensitive to commonly used inhibitors trasylol, iodoacetamide and α-2
macroglobulin. The role of different types of proteinases in metastasis and other harmful effects during tumor
growth is discussed.
Key words: tumors, lymphoma NK/Ly, proteinases.
Установлено, что в лизате клеток мышиной лимфомы NK/Ly содержатся протеиназы, активность
которых по уровню гидролиза казеина при рН 5,4 составляет 26,3 мкг казеина в минуту на мг белка, а
при рН 8,0 −15,0 мкг казеина в минуту на мг белка. Для очистки протеиназ и изучения их свойств проведено фракционирование белков лизата клеток NK/Ly с помощью ступенчатого высаливания сульфатом аммония, дифференцированного осаждения глобулинов в условиях низкой ионной силы и постепенного снижения рН, хроматографии на колонке с цибакрон-сефарозой и аффинной хроматографии на
Т-геле, а также с помощью иммунопреципитации. Применение различных методов фракционирования
позволило достичь определенного повышения удельной протеолитической активности препаратов,
однако не при этом удалось получить препараты протеиназ, которые были бы гомогенны по белковому
составу. Результаты электрофоретического анализа исследуемых образцов протеиназ указывают на значительную аггрегацию белковых комплексов, в которых они содержатся. Другой особенностью протеиназ клеток лимфомы NK/Ly является их нечувствительность к ингибиторному действию иодацетамида,
α2-макроглобулина и трасилола. Обсуждена роль различных типов протеиназ в процесах опухолевого
роста.
Ключевые слова: опухоли, лимфома NK/Ly, протеиназы.
|
| first_indexed | 2025-11-26T00:06:55Z |
| format | Article |
| fulltext | |
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-74474 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 1563-3569 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-11-26T00:06:55Z |
| publishDate | 2010 |
| publisher | Західний науковий центр НАН України і МОН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Луцик, М. Навитка, С. Придатко, О. Стойка, Р. 2015-01-20T22:08:23Z 2015-01-20T22:08:23Z 2010 Фракціонування і властивості протеїназ клітин мишачої лімфоми NK/Ly / М. Луцик, С. Навитка, О. Придатко, Р. Стойка // Праці Наукового товариства ім. Шевченка. — Л., 2010. — Т. XXV: Хемія і біохемія. — С. 250-262. — Бібліогр.: 43 назв. — укр. 1563-3569 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/74474 616-006.44:577.15:577.122 Виявлено, що лізат клітин мишачої лімфоми NK/Ly містить протеїнази, активність яких за рівнем гідролізу казеїну при рН 5,4 становить 26,3 мкг казеїну за хвилину на мг білка, а при рН 8,0 - 15,0 мкг казеїну за хвилину на мг білка. Для очистки
 протеїназ і дослідження їх властивостей проведено фракціонування лізату клітин
 NK/Ly за допомогою ступеневого висолювання амонію сульфатом, диференційного
 осадження глобулінів за умов низької іонної сили і поступового зниження рН, хроматографії на колонці цібакрон-сефарози та афінної хроматографії на Т-гелі, а також шляхом імунопреципітації. Використання різних способів фракціонування дозволило досягти певного підвищення питомої протеолітичної активності препаратів, проте при цьому не вдалося одержати препарати протеїназ, які б були гомогенними за білковим складом. Результати електрофоретичного аналізу досліджуваних зразків протеїназ вказують на значну агрегацію білкових комплексів, до яких вони входять. Іншою особливістю протеїназ клітин лімфоми NK/Ly є нечутливість до
 інгібувальної дії йодацетаміду, α-2 макроглобуліну і трасилолу. Обговорено роль різних типів протеїназ при пухлинному рості.
 Ключові слова: пухлини, лімфома NK/Ly, протеїнази. Proteolytic activity, purification and properties of proteinases from murine lymphoma NK/Ly ascitic cells
 were investigated. In cell lysates proteolytic activity as measured by hydrolysis of casein was on the level 26.3
 ug of casein/min per mg of protein at pH 5,4 and 15.0 ug of casein /min per mg of protein at pH 8,0. By
 fractional precipitation with ammonium sulfate proteins of lysates were separated into three fractions –
 immunoglobulin-like, albumin and post-albumin. The highest specific proteolytic activity was detected in postalbumin
 fraction, but the yield of protein material was the lowest. Disc electrophoresis of obtained fractions in
 standard conditions at pH 8,9 revealed serum albumin as a predominant protein in albumin and post-albumin
 fractions. In all fractions the substantial quantity of protein did not enter the gel and was retained in start
 position, indicating on the presence of highly aggregated protein complexes. For elimination of blood plasma
 proteins from post-albumin fraction immunoprecipitation with antibodies towards mouse blood proteins was
 applied, providing three-fold increase in specific proteolytic activity. By chromatography on Cibacron blue
 sepharose it was revealed that proteinases were not retained on the sorbent and passed through the column
 resulting in three fold increase of proteolytic activity. Proteinases of immunoglobulin fraction were purified by
 fractional precipitation of globulins by stepwise lowering of pH at low ionic strength. This approach was
 however non effective as it did not provide an increase in proteolytic activity apparently due to damaging
 effect on enzymes. Detectable proteolytic activity was revealed in subcellular particles obtained from ascitic
 fluid by high speed centrifugation after elimination of cells. SDS PAGE revealed a numerous bands in each
 fraction, derived mainly from material not entering the gel in non denaturating electrophoresis. This indicates
 on association of proteinases with multimolecular complexes or subcellular particles. Purified proteinases
 obtained from NK/Ly cells were insensitive to commonly used inhibitors trasylol, iodoacetamide and α-2
 macroglobulin. The role of different types of proteinases in metastasis and other harmful effects during tumor
 growth is discussed.
 Key words: tumors, lymphoma NK/Ly, proteinases. Установлено, что в лизате клеток мышиной лимфомы NK/Ly содержатся протеиназы, активность
 которых по уровню гидролиза казеина при рН 5,4 составляет 26,3 мкг казеина в минуту на мг белка, а
 при рН 8,0 −15,0 мкг казеина в минуту на мг белка. Для очистки протеиназ и изучения их свойств проведено фракционирование белков лизата клеток NK/Ly с помощью ступенчатого высаливания сульфатом аммония, дифференцированного осаждения глобулинов в условиях низкой ионной силы и постепенного снижения рН, хроматографии на колонке с цибакрон-сефарозой и аффинной хроматографии на
 Т-геле, а также с помощью иммунопреципитации. Применение различных методов фракционирования
 позволило достичь определенного повышения удельной протеолитической активности препаратов,
 однако не при этом удалось получить препараты протеиназ, которые были бы гомогенны по белковому
 составу. Результаты электрофоретического анализа исследуемых образцов протеиназ указывают на значительную аггрегацию белковых комплексов, в которых они содержатся. Другой особенностью протеиназ клеток лимфомы NK/Ly является их нечувствительность к ингибиторному действию иодацетамида,
 α2-макроглобулина и трасилола. Обсуждена роль различных типов протеиназ в процесах опухолевого
 роста.
 Ключевые слова: опухоли, лимфома NK/Ly, протеиназы. uk Західний науковий центр НАН України і МОН України Праці наукового товариства ім. Шевченка Біохемія Фракціонування і властивості протеїназ клітин мишачої лімфоми NK/Ly Fractionation and properties of proteinases from murine NK/Ly lymphoma cells Фракционирование и свойства протеиназ клеток мышиной лимфомы NK/Ly Article published earlier |
| spellingShingle | Фракціонування і властивості протеїназ клітин мишачої лімфоми NK/Ly Луцик, М. Навитка, С. Придатко, О. Стойка, Р. Біохемія |
| title | Фракціонування і властивості протеїназ клітин мишачої лімфоми NK/Ly |
| title_alt | Fractionation and properties of proteinases from murine NK/Ly lymphoma cells Фракционирование и свойства протеиназ клеток мышиной лимфомы NK/Ly |
| title_full | Фракціонування і властивості протеїназ клітин мишачої лімфоми NK/Ly |
| title_fullStr | Фракціонування і властивості протеїназ клітин мишачої лімфоми NK/Ly |
| title_full_unstemmed | Фракціонування і властивості протеїназ клітин мишачої лімфоми NK/Ly |
| title_short | Фракціонування і властивості протеїназ клітин мишачої лімфоми NK/Ly |
| title_sort | фракціонування і властивості протеїназ клітин мишачої лімфоми nk/ly |
| topic | Біохемія |
| topic_facet | Біохемія |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/74474 |
| work_keys_str_mv | AT lucikm frakcíonuvannâívlastivostíproteínazklítinmišačoílímfominkly AT navitkas frakcíonuvannâívlastivostíproteínazklítinmišačoílímfominkly AT pridatkoo frakcíonuvannâívlastivostíproteínazklítinmišačoílímfominkly AT stoikar frakcíonuvannâívlastivostíproteínazklítinmišačoílímfominkly AT lucikm fractionationandpropertiesofproteinasesfrommurinenklylymphomacells AT navitkas fractionationandpropertiesofproteinasesfrommurinenklylymphomacells AT pridatkoo fractionationandpropertiesofproteinasesfrommurinenklylymphomacells AT stoikar fractionationandpropertiesofproteinasesfrommurinenklylymphomacells AT lucikm frakcionirovanieisvoistvaproteinazkletokmyšinoilimfomynkly AT navitkas frakcionirovanieisvoistvaproteinazkletokmyšinoilimfomynkly AT pridatkoo frakcionirovanieisvoistvaproteinazkletokmyšinoilimfomynkly AT stoikar frakcionirovanieisvoistvaproteinazkletokmyšinoilimfomynkly |