Синтез афінних сорбентів для очищення аргі­на­зи і людини із рекомбінантних дріжджів Hansenula polymorpha

• Veröffentlicht in: Праці наукового товариства ім. Шевченка
• Datum: 2011
• Hauptverfasser: Стасюк, Н., Гайда, Г., Гайда, А., Стасик, О., Карп'як, В., Ковальчук, Є., Гончар, М.
• Format: Artikel
• Sprache: Ukrainian
• Veröffentlicht: Західний науковий центр НАН України і МОН України 2011
• Schlagworte: Біохемія
• Online Zugang: https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/75042
• Назва журналу: Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
• Zitieren: Синтез афінних сорбентів для очищення аргі­на­зи і людини із рекомбінантних дріжджів Hansenula polymorpha / Н. Стасюк, Г. Гайда, А. Гайда, О. Стасик, В. Карп'як, Є. Ковальчук, М. Гончар // Праці Наукового товариства ім. Шевченка. — Л., 2011. — Т. XXVIII: Хемія і біохемія. — С. 139-149. — Бібліогр.: 18 назв. — укр.

Здійснено синтез афінних сорбентів із використанням мінеральних матриць: силохрому С-120 амінопропілового (розмір пор 50 нм), макропористого скла із контрольованим розміром пор (3680 нм) і силохромів С-80 та С-120 (65 та 44 нм). Для активації силохрому амінопропілового було використано глутаровий альдегід, для макропористого скла і силохромів С-80 та С-120 – γ-гліцидооксипропіл-три-етоксисилан. Активовані матриці було функціоналізовано L-аргініном. Порівняння різних афінних сорбентів показало, що аргінін-модифікований сорбент на основі макропористого скла з контрольованим розміром пор є оптимальним для виділення аргінази І печінки людини із безклітинних екстрактів рекомбінантних штамівнадпродуцентів, сконструйованих на основі дріжджів Hansenula polymorpha. Запропоновано спосіб виділення та очищення аргінази І людини, який дозволяє в одну стадію афінної колонкової хроматографії отримати з 11 %-ним виходом 200-кратно очищені (за питомою активністю) препарати фермента, гомогенні за результатами електрофоретичного аналізу в денатуруючому поліакриламідному гелі. Ключові слова: рекомбінантна аргіназа, афінний сорбент, макропористе скло, силохром, дріжджі Нansenula polymorpha. The synthesis of affinity sorbents was performed using mineral matrixes: aminopropyl-silochrome C-120 (pore diameter – 50 nm), controlled pore glass (3680 nm), silochromes S-80 and S-120 (pore diameter – 65 and 44 nm). For activation of aminopropyl-silochrome and – glutaric aldehyde was used; for activation of controlled pore glass and silochromes – γ-glycidoxypropyltriethoxysilane was used. For functionlization of the sorbents, the L-arginine was coupled to the synthesized glycidyl- and aldehyde-containing matrixes. Comparison of different sorbents allowed to conclude that arginine-modified sorbent based on controlled pore glass, is optimal for isolation of human arginase I from the cell-free extracts of the recombinant yeast Hansenula polymorpha. One-step column affinity chromatography was developed and, as a result, a 200-fold purified preparation of recombinant arginase was obtained with 11% yield. The homogeneity of the arginase preparation was approved by PAAGE-SDS electrophoresis. Keywords: recombinant arginase, affinity sorbent, macroporous glass, silochrome, yeasts Hansenula polymorpha. Осуществлен синтез аффинных сорбентов с использованием минеральных матриц: силохрому С- 120 аминопропилового (размер пор 50 нм), макропористого стекла с контролируемым размером пор (3680 нм) и силохромов С-80 и С-120 (65 и 44 нм). Для активации силохрома аминопропилового был использован глутаровый альдегид, для макропористого стекла и силохромов С-80 и С-120 - γ-глицидооксипропил-три-этоксисилан. Активированные матрицы были функционализированы L-аргинином. Сравнение различных аффинных сорбентов показало, что аргинин-модифицированный сорбент на основе макропористого стекла с контролируемым размером пор является оптимальным для выделения аргиназы І печени человека из бесклеточных экстрактов рекомбинантных штаммовнадпродуцентов, сконструированных на основе дрожжей Hansenula polymorpha. Предложен способ выделения и очистки аргиназы І человека, который позволяет в одну стадию аффинной колоночной хроматографии получить с 11%-ным выходом 200-кратно очищенные (по удельной активности) препараты фермента, гомогенные по результатам электрофоретического анализа в денатурирующем полиакриламидном геле. Ключевые слова: рекомбинантная аргиназа, аффинный сорбент, макропористое стекло, силохром, дрожжи Нansenula polymorpha.