Синтез афінних сорбентів для очищення аргінази і людини із рекомбінантних дріжджів Hansenula polymorpha - Стасюк, Н.; Гайда, Г.; Гайда, А.; Стасик, О.; Карп'як, В.; Ковальчук, Є.; Гончар, М. (Праці наукового товариства ім. Шевченка, 2011)
Здійснено синтез афінних сорбентів із використанням мінеральних матриць: силохрому С-120 амінопропілового (розмір пор 50 нм), макропористого скла із контрольованим розміром пор (3680 нм) і силохромів С-80 та С-120 (65 та 44 нм). Для
активації силохрому амінопропілового було використано глутаровий альдегід, для
макропористого скла і силохромів С-80 та С-120 – γ-гліцидооксипропіл-три-етоксисилан. Активовані матриці було функціоналізовано L-аргініном. Порівняння
різних афінних сорбентів показало, що аргінін-модифікований сорбент на основі
макропористого скла з контрольованим розміром пор є оптимальним для виділення
аргінази І печінки людини із безклітинних екстрактів рекомбінантних штамівнадпродуцентів, сконструйованих на основі дріжджів Hansenula polymorpha.
Запропоновано спосіб виділення та очищення аргінази І людини, який дозволяє в одну
стадію афінної колонкової хроматографії отримати з 11 %-ним виходом 200-кратно очищені (за питомою активністю) препарати фермента, гомогенні за результатами електрофоретичного аналізу в денатуруючому поліакриламідному гелі.
Ключові слова: рекомбінантна аргіназа, афінний сорбент, макропористе скло, силохром, дріжджі Нansenula polymorpha. The synthesis of affinity sorbents was performed using mineral matrixes: aminopropyl-silochrome C-120
(pore diameter – 50 nm), controlled pore glass (3680 nm), silochromes S-80 and S-120 (pore diameter – 65 and
44 nm). For activation of aminopropyl-silochrome and – glutaric aldehyde was used; for activation of
controlled pore glass and silochromes – γ-glycidoxypropyltriethoxysilane was used. For functionlization of the
sorbents, the L-arginine was coupled to the synthesized glycidyl- and aldehyde-containing matrixes.
Comparison of different sorbents allowed to conclude that arginine-modified sorbent based on controlled pore
glass, is optimal for isolation of human arginase I from the cell-free extracts of the recombinant yeast
Hansenula polymorpha.
One-step column affinity chromatography was developed and, as a result, a 200-fold purified preparation
of recombinant arginase was obtained with 11% yield. The homogeneity of the arginase preparation was
approved by PAAGE-SDS electrophoresis.
Keywords: recombinant arginase, affinity sorbent, macroporous glass, silochrome, yeasts Hansenula
polymorpha. Осуществлен синтез аффинных сорбентов с использованием минеральных матриц: силохрому С-
120 аминопропилового (размер пор 50 нм), макропористого стекла с контролируемым размером пор
(3680 нм) и силохромов С-80 и С-120 (65 и 44 нм). Для активации силохрома аминопропилового был
использован глутаровый альдегид, для макропористого стекла и силохромов С-80 и С-120 - γ-глицидооксипропил-три-этоксисилан. Активированные матрицы были функционализированы L-аргинином.
Сравнение различных аффинных сорбентов показало, что аргинин-модифицированный сорбент на
основе макропористого стекла с контролируемым размером пор является оптимальным для выделения
аргиназы І печени человека из бесклеточных экстрактов рекомбинантных штаммовнадпродуцентов,
сконструированных на основе дрожжей Hansenula polymorpha. Предложен способ выделения и очистки
аргиназы І человека, который позволяет в одну стадию аффинной колоночной хроматографии получить
с 11%-ным выходом 200-кратно очищенные (по удельной активности) препараты фермента, гомогенные по результатам электрофоретического анализа в денатурирующем полиакриламидном геле.
Ключевые слова: рекомбинантная аргиназа, аффинный сорбент, макропористое стекло, силохром,
дрожжи Нansenula polymorpha.