Изучение влияния lox-сайтов Cre-lox системы рекомбинации на экспрессию беспромоторного bar гена в трансгенных растениях

• Datum: 2006
• Hauptverfasser: Щербак, Н.Л., Белокурова, В.Б., Гецко, И.О., Комарницкий, И.К., Кучук, Н.В.
• Format: Artikel
• Sprache: Russian
• Veröffentlicht: Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України 2006
• Schriftenreihe: Цитология и генетика
• Schlagworte: Оригинальные работы
• Online Zugang: https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/82000
• Назва журналу: Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
• Zitieren: Изучение влияния lox-сайтов Cre-lox системы рекомбинации на экспрессию беспромоторного bar гена в трансгенных растениях / Н.Л. Щербак, В.Б. Белокурова, И.О. Гецко, И.К. Комарницкий, Н.В. Кучук // Цитология и генетика. — 2006. — Т. 40, № 1. — С. 3-9. — Бібліогр.: 22 назв. — рос.

Показано, что при размещении lox-сайта в генетических конструкциях в непосредственной близости от правой границы Т-ДНК (RB – lox – bar –) происходит стабильная экспрессия следующего за lox-сайтом беспромоторного bar гена. Генетические конструкции, которые были использованы в работе, содержали также ген неомицинфосфотрансферазы II (npt II) под контролем nos промотора. Трансформированные растения Nicotiana tabacum и N. africana были отобраны по способности расти на среде, содержащей канамицин, а затем протестированы на селективной среде, содержащей фосфинотрицин. У 80 % трансгенных растений, отобранных по устойчивости к канамицину, экспрессия bar гена происходила на таком же уровне, как и у растений, трансформированных конструкциями, в которых bar ген находится под сильным конститутивным промотором. При использовании конструкции без lox-сайта, в которой беспромоторный bar ген находится возле правой границы Т-ДНК (RB – bar –), либо конструкций, в которых lox-сайт и беспромоторный bar ген расположены в середине конструкции (– lox – bar –), частота РРТ-устойчивых растений составила не более 4,5 %. Анализ с помощью ПЦР не выявил возможных тандемных повторов или рекомбинации, в результате которых беспромоторный bar ген мог оказаться под контролем промотора, находящегося в плазмиде. При встраивании nos-терминатора в вектор между lox-сайтом и правым бордером частота РРТ-устойчивых трансгенных растений не изменилась.