Характеристика панели одноцепочечных антител мыши против рекомбинантного интерферона β1b человека

• Datum: 2008
• Hauptverfasser: Павлова, М.В., Николаев, Ю.С., Иродов, Д.М., Окунев, О.В., Кордюм, В.А., Гильчук, П.В.
• Format: Artikel
• Sprache: Russian
• Veröffentlicht: Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України 2008
• Schlagworte: Оригинальные работы
• Online Zugang: https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/8208
• Назва журналу: Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine
• Zitieren: Характеристика панели одноцепочечных антител мыши против рекомбинантного интерферона β1b человека / М.В. Павлова, Ю.С. Николаев, Д.М. Иродов, О.В. Окунев, В.А. Кордюм, П.В. Гильчук // Цитология и генетика. — 2008. — Т. 42, № 4. — С. 3-11. — Бібліогр.: 13 назв. — рос.

Из иммунной и неиммунной комбинаторных библиотек кДНК вариабельных генов иммуноглобулинов мыши получена панель одноцепочечных антител (ScFv’s – single-chain Fv-antibodies) против рекомбинантного интерферона β1b человека (rhIFN-β1b), которые были экспрессированы в клетках Escherichia coli. Для изолированных из иммунной библиотеки продуцентов показана разница в уровнях продукции ScFv’s в периплазму и среду для культивирования, а также стабильность экспрессии при пересевах и хранении. После секвенирования целевой ДНК было проведено множественное выравнивание и структурный анализ последовательностей ScFv’s с разной первичной структурой, в результате чего были выявлены существенные отличия как в антиген-связывающих (CDR), так и в каркасных (FR) участках их вариабельных доменов. Методами ELISA и вестерн-блоттинга показана специфичность взаимодействия полученных из иммунной библиотеки ScFv’s как с нативным, так и с денатурированным rhIFN-β1b, а также их стабильность при хранении. Для каждого представителя панели ScFv’s были определены константы аффинности, которые находились в диапазоне от 1,96•10^-8 до 1,69•10^- 9 М.