Молекулярне клонування та характеристика дефензину 2 сосни звичайної
З кДНК бібліотеки семиденних проростків Pinus sylvestris L. ампліфіковано кДНК дефензину 2 (PsDef2) довжиною 252 п.н., що кодує білок з 83 амінокислотних залишків, до складу якого входить N-кінцевий сигнальний пептид з 33 амінокислот. Зріла форма дефензину 2 сосни звичайної містить домен gamma-thion...
Gespeichert in:
| Datum: | 2008 |
|---|---|
| Hauptverfasser: | , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Ukrainisch |
| Veröffentlicht: |
Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України
2008
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/8309 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Молекулярне клонування та характеристика дефензину 2 сосни звичайної / В.А. Ковальова, Р.Т. Гут // Цитология и генетика. — 2008. — Т. 42, № 6. — С. 55-60. — Бібліогр.: 15 назв. — укp. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859986829590134784 |
|---|---|
| author | Ковальова, B.А. Гут, Р.Т. |
| author_facet | Ковальова, B.А. Гут, Р.Т. |
| citation_txt | Молекулярне клонування та характеристика дефензину 2 сосни звичайної / В.А. Ковальова, Р.Т. Гут // Цитология и генетика. — 2008. — Т. 42, № 6. — С. 55-60. — Бібліогр.: 15 назв. — укp. |
| collection | DSpace DC |
| description | З кДНК бібліотеки семиденних проростків Pinus sylvestris L. ампліфіковано кДНК дефензину 2 (PsDef2) довжиною 252 п.н., що кодує білок з 83 амінокислотних залишків, до складу якого входить N-кінцевий сигнальний пептид з 33 амінокислот. Зріла форма дефензину 2 сосни звичайної містить домен gamma-thionin і характеризується наявністю специфічних консервативних залишків, які властиві всім рослинним дефензинам.
С кДНК библиотеки семидневных проростков Pinus sylvestris L. амплифицировано кДНК дефензина 2 (PsDef2) длиной 252 п.н., которая кодирует белок из 83 аминокислотных остатков, в состав которого входит N-концевой сигнальный пептид из 33 аминокислот. Зрелая форма дефензина 2 сосны обыкновенной содержит домен gamma-thionin і характеризуется наличием специфических консервативных остатков, свойственных всем дефензинам растений.
A full length coding sequence corresponding to Scotch pine defensin 2 (PsDef2) was achieved by a PCR approach using P. sylvestris сDNA library as a template. It has the potential to encode a protein of 83 amino acids in length. The first 33 amino acids correspond to the N-terminal signal peptide. The mature protein contains domain gammathionin and possesses conserved residues which are common to all plant defensins.
|
| first_indexed | 2025-12-07T16:28:59Z |
| format | Article |
| fulltext |
УДК [577+632.4+632.938]:582.475.4
B.А. КОВАЛЬОВА, Р.Т. ГУТ
Національний лісотехнічний університет МОН України, Львів
E�mail: romangout@yahoo.com
МОЛЕКУЛЯРНЕ КЛОНУВАННЯ
ТА ХАРАКТЕРИСТИКА
ДЕФЕНЗИНУ 2 СОСНИ ЗВИЧАЙНОЇ
З кДНК бібліотеки семиденних проростків Pinus
sylvestris L. ампліфіковано кДНК дефензину 2 (PsDef2)
довжиною 252 п.н., що кодує білок з 83 амінокислотних
залишків, до складу якого входить N�кінцевий сигнальний
пептид з 33 амінокислот. Зріла форма дефензину 2 сосни
звичайної містить домен gamma�thionin і характеризує�
ться наявністю специфічних консервативних залишків,
які властиві всім рослинним дефензинам.
Вступ. Підвищення продуктивності та біоло,
гічної стійкості хвойних деревних порід галь,
мується негативним впливом низки абіотич,
них та біотичних чинників, серед яких одним з
найбільш вагомих є фітопатогенні мікроорга,
нізми, що викликають лісові інфекції та епіфі,
тотії. Більшість патогенів хвойних порід нале,
жать до некротрофних організмів, стійкість
рослин до яких забезпечується кількома меха,
нізмами [1]. Одним з найбільш потужних з
них є ушкодження клітинних стінок фітопато,
гену антимікробними білками – хітиназами,
глюканазами і дефензинами [2].
Рослинні дефензини – це група невеликих
(45–54 а.з.) основних білків з високим вмістом
цистеїну, яким властивий широкий спектр ак,
тивностей – антифунгальна [3], антибактері,
альна [4], інсектицидна [5]. Крім того, вони
здатні інгібувати протеїнази [6]. Локалізація
дефензинів у поверхневих шарах клітин різних
органів та в клітинах продихів, тобто в най,
більш ймовірних місцях проникнення патоге,
нів, свідчить про стратегічну роль цих білків у
захисті рослинних організмів, що також під,
тверджується підвищенням стійкості трансген,
них рослин з надекспресією дефензину до фіто,
захворювань [7].
Нещодавно нами ідентифіковано новий
рослинний дефензин – дефензин 1 сосни зви,
чайної (PsDef1) і клоновано його кДНК [8, 9].
Очищений препарат ендогенного PsDef1 вия,
вив високу активність щодо низки фітопатоген,
них грибів, що дало підстави розглядати його
як потенційний фунгістатичний препарат.
У даній роботі представлено молекулярне
клонування кДНК ще одного представника
групи рослинних дефензинів у Pinus sylvestris
L. – дефензину 2 (PsDef2).
Матеріали і методи. У роботі використовува,
ли клітини Escherichia coli: штамів XL,1,Blue
та BL21(DE3), а також плазміду pET23d (+)
(«Novagen», США).
Послідовність праймерів для ампліфікації
кДНК повнорозмірної форми добиралась з
використанням даних про нуклеотидні послі,
довністі гомологічних EST клонів з бібліотек
кДНК Pinus pinaster та P. taeda. Одержали кДНК
дефензину в полімеразно,ланцюговій реакції з
використанням як матриці 1 мкл первинної біб,
ліотеки кДНК P. sylvestris (1,2 · 106 БУО/мл),
яка була створена нами на основі мРНК із ко,
ренів проростків сосни звичайної [10]. Прямим
ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2008. № 6 55
© В.А. КОВАЛЬОВА, Р.Т. ГУТ, 2008
праймером слугував олігонуклеотид СR 763
(5',CCATTCCATGGCGGGCAAGGGAGT,
3'), що вміщував сайт рестрикції ендонуклеази
Nco1, ініціюючий метіонін та 5',кінцеву послі,
довність відкритої рамки зчитування кДНК
клону BX 678613. Обернений праймер CR 764
(5',CATGAGAATTCTCAAGGGCAGGGTTT,
GTA,3') включав послідовності для ендонуклеа,
зи рестрикції EcoR1, стоп,кодону та 3',кінцево,
го кодуючого фрагменту вищезгаданого клону.
ПЛР проводили в ампліфікаторі «Proteus »
(«Helena BioSciences », Велика Британія) з вико,
ристанням реактивів виробництва «Fermentas»
(Литва) у такому режимі: 94 °С, 3 хв та 30 цик,
лів (94 °С, 1 хв; 60 °С, 1 хв; 72 °С, 1 хв) і після
останнього циклу 5 хв при 72 °С. Продукти
ПЛР аналізували в 1,5%,ному агарозному гелі
в трис,боратному буфері pH 8,3 (50 мM трис,
Н3ВО3, 2 мМ ЕДТА) за напруги 20 В/см2. Спе,
цифічний продукт елюювали з гелю за допо,
могою набору для екстракції ДНК («Qiagen »,
Німеччина). Одержану ДНК та вектори гідро,
лізували рестриктазами Nco1/EcoR1 та осад,
жували ДНК за стандартною методикою [11].
Осади ДНК розчиняли в 10 мкл ТЕ буфера
(20 мМ трис,HCl pH 8,0, 1 мМ ЕДТА). Для лі,
гування застосовували молярне співвідношення
між вектором і вставкою 1 : 3. Реакцію лігуван,
ISSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2008. № 656
В.А. Ковальова, Р.Т. Гут
Рис. 1. Клонування кДНК дефензину 2 сосни звичайної: а – продукт ПЛР, який одержано ампліфікацією бібліоте,
ки кДНК (доріжка 1), М – 1 тис.п.н. Plus DNA Ladder «GibсoBRL» ; б – аналіз плазміди pET23d/PsDef2 полімераз,
но,ланцюговою реакцією (доріжка 1), М – 1 тис.п.н. DNA Ladder «Fermentas »; в – рестрикційний аналіз плазміди
pET23d/PsDef2 за допомогою ендонуклеаз EcoR1 та Nco1 (доріжка 1). М – 1 тис.п.н. DNA Ladder «Fermentas»
ня проводили впродовж 2 год при кімнатній тем,
пературі в буфері, що містив 30 мМ трис,HCl
pH 7,8, 10 мМ MgCl2, 10 мМ ДTT, 1 мМ ATФ
за присутності 2 U T4 ДНК,лігази («Fermen,
tas»). Для інактивації лігази реакційну суміш
прогрівали 10 хв при 65 °С. Половину (10 мкл)
суміші використовували для трансформації
клітин E. coli штаму XL,1 Blue.
Наявність вставки у векторі визначали ре,
стрикцією ендонуклеазами Nco1 та EcoR1 і по,
лімеразно,ланцюговою реакцією з праймерами
CR763 та CR764. Нуклеотидну послідовність
клонованих фрагментів отримали за допомогою
автоматичного ДНК секвенатора ABI 73TM.
Результати досліджень та їх обговорення. Для
молекулярного клонування дефензину 2 вико,
ристали бібліотеку кДНК семиденних пророст,
ків сосни звичайної [10], клони якої слугували
матрицями у полімеразно,ланцюговій реакції
за присутності специфічних праймерів СR
763 та СR 764. Електрофоретичний аналіз про,
дуктів ПЛР показав наявність ампліфікованої
ДНК очікуваної довжини – 270 п.н. (рис. 1, а).
Ампліфіковані кДНК вирізали з гелю, елю,
вали, гідролізували рестриктазами Nco1 та
EcoR1 та зшивали з рестриктованим вектором
pET 23d (+). Лігазною сумішшю трансформува,
ли клітини E. coli штаму XL,1 Blue, cелекцію
трансформантів проводили на середовищі з ам,
піциліном. Ефективність лігазної реакції оці,
нювали за співвідношенням клітин, трансфор,
мованих лігазною сумішшю із вставкою (до,
слід) і без неї (контроль). У досліді виявлено
146 колоній, в контролі – 105. З 10 дослідних
колоній, вирощених у селективному середо,
вищі, виділено плазмідну ДНК. ПЛР з прай,
мерами CR763 та CR764 (рис. 1, б) і рестрик,
цією ендонуклеазами Nco1 та EcoR1 (рис. 1, в)
визначено наявність клонованого фрагменту
ДНК у трьох клонах.
ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2008. № 6 57
Молекулярне клонування та характеристика дефензину 2 сосни звичайної
Рис. 2. Нуклеотидна послідовность кДНК дефензину 2 сосни звичайної (а) та порівняльний аналіз ДНК послідов,
ності PsDef1 та PsDef2 (б)
У результаті секвенування клонованих ді,
лянок ДНК отримано нуклеотидну послідов,
ність довжиною 252 п.н., ідентичність якої з
кДНК дефензину 1 сосни звичайної (PsDef1)
склала 87 %. Послідовність було названо
PsDef2 і депоновано до GenBank під номером
EF455617.1 (рис. 2).
Для порівняння послідовності кДНК PsDef2
з послідовностями, які кодують відомі рос,
линні дефензини, використовували електрон,
ну пошукову службу BLAST 2.0 Національно,
го центру біотехнологічної інформації (NCBI)
США. Встановлено, що кДНК PsDef2 на 84 %
ідентична з іншими дефензинами рослин з роду
Piсеа і на 77 % з представником родини Gink,
goaceae. Аналіз EST бази даних дозволив вияви,
ти клон DR389152 з бібліотеки кДНК P. taeda,
який на 98 % ідентичний до нуклеотидної по,
слідовності PsDef2. Отже у результаті клону,
вання фрагментів ДНК, ампліфікованих з
кДНК бібліотеки сосни звичайної, нами отри,
мано нуклеотидну послідовность, яка кодує
новий дефензин сосни – PsDef2.
Для виведення амінокислотної послідовнос,
ті PsDef2, яку представлено на рис. 3, а, ми ско,
ристалися сервісною програмою Translate Tool
(http://www.expasy.org/cgi,bin/dna_aa). За до,
помогою програми SignalP (http://www.cbs. dtu.
dk/services/SignalP) виявлено, що первинна
структура PsDef2 містить N,кінцевий сигналь,
ний пептид, відщеплення якого відбувається
між 33 і 34 а.з. Наявність сигнального пептиду –
це характерна ознака рослинних дефензинів,
які є секреторними білками і синтезуються
у вигляді попередників [12]. Зріла форма
PsDef2, як і інших дефензинів голонасінних,
складається з 50 амінокислот [13]. Пошук ві,
домих доменів у амінокислотній послідовнос,
ті PsDef2 з використанням програми Motif
Scan (http://scansite.mit.edu/motifscan) виявив,
що амінокислоти з 35 по 83 утворюють струк,
туру, відому як gamma,thionin, звідси і похо,
дить перша назва рослинних дефензинів – γ,
тіоніни. Цей домен складається з α,спіралі та
трьох антипаралельних β,шарів, які з’єднані
чотирма дисульфідними мостиками [12]. Ха,
рактерною особливістю цього домену є те,
що тільки 23 % амінокислот є консервативни,
ми – це 8 цистеїнів (позиції 3, 14, 20, 24, 34,
43, 45 та 49), два гліцини (12 та 32), серин (7),
ароматичний залишок на 10,й позиції та глута,
мінова кислота на 27,й (відлік відносно основ,
ISSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2008. № 658
В.А. Ковальова, Р.Т. Гут
Рис. 3. Дедукована амінокислотна послідовність дефензину 2 сосни звичайної (а) та порівняльний аналіз первин,
них структур PsDef1 та PsDef2 (б). У прямокутнику послідовність сигнального пептиду
ного домену – зрілої форми). Консерватив,
ність згаданих амінокислотних залишків спо,
стерігається і в дефензину 2 сосни звичайної.
Використавши програму pI/Mw, ми визна,
чили, що розрахункова молекулярна маса
PsDef2 – 5635,6 Да, ізоелектрична точка – 8,9
і заряд при рН 7,0 cтановить +6,7. Ці значення
відповідають характеристикам рослинних де,
фензинів.
У попередніх роботах нами було показано,
що препарат ендогенного PsDef1 за концент,
рації ‹1 мкМ пригнічував ріст низки фітопато,
генних грибів та спричиняв морфологічні змі,
ни їх міцелію. За структурною та функціональ,
ною подібністю цей білок віднесено до першої
(морфогенної) групи рослинних дефензинів
[9]. Детальний аналіз первинних структур
РsDef1 та РsDef2 виявив 86%,ну ідентичність
та 93%,ну подібність їх амінокислотних послі,
довностей, які відрізняються за 11 а.з., з яких
5 а.з. є подібними, збігаються локалізація та
розмір триптичних пептидів (рис. 3, б). Беручи
до уваги високий ступінь гомології амінокис,
лотних послідовностей обох дефензинів сосни
звичайної, однаковий високий позитивний
заряд при нейтральному рН, а також ідентич,
ність амінокислотних залишків, які є критич,
ними для активності рослинних дефензинів
першої групи [14], можно припустити і подіб,
ність біологічної активності РsDef1 та РsDef2.
Отже, отримані нами результати свідчать
про існування у сосни звичайної мультигенної
родини дефензинів, подібно до покритонасін,
них [15]. Чи належить виявлений нами дефен,
зин 2 сосни звичайної до одної функціональної
групи з PsDef1 і як впливають їх структурні
відмінності на спектр біологічної активності?
Виділення ендогенного або отримання реком,
бінантного PsDef2 дозволило б з’ясувати ці
питання, а також встановити його роль у за,
хисті хвойних дерев від фітозахворювань.
V.A. Kovalyova, R.T. Gout
MOLECULAR CLONING
AND CHARACTERIZATION OF SCOTCH
PINE DEFENSIN 2
A full length coding sequence corresponding to Scotch
pine defensin 2 (PsDef2) was achieved by a PCR approach
using P. sylvestris сDNA library as a template. It has the
potential to encode a protein of 83 amino acids in length.
The first 33 amino acids correspond to the N,terminal sig,
nal peptide. The mature protein contains domain gamma,
thionin and possesses conserved residues which are com,
mon to all plant defensins.
В.А. Ковалева, Р.Т. Гут
МОЛЕКУЛЯРНОЕ КЛОНИРОВАНИЕ
И ХАРАКТЕРИСТИКА ДЕФЕНЗИНА 2
СОСНЫ ОБЫКНОВЕННОЙ
С кДНК библиотеки семидневных проростков Pinus
sylvestris L. амплифицировано кДНК дефензина 2
(PsDef2) длиной 252 п.н., которая кодирует белок из
83 аминокислотных остатков, в состав которого входит
N,концевой сигнальный пептид из 33 аминокислот.
Зрелая форма дефензина 2 сосны обыкновенной содер,
жит домен gamma,thionin і характеризуется наличием
специфических консервативных остатков, свойствен,
ных всем дефензинам растений.
СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ
1. Franceschi V., Krokene P., Christiansen E., Krekling T.
Anatomical and chemical defences of conifer bark bee,
tles and other pests // New Phytologist. – 2005. – 167,
№ 2. – P. 353–376.
2. Nagy N., Fossdal C., Krokene P., Krekling T., Lonneborg
A., Solheim H. Induced responses to pathogen infection
in Norway spruce phloem: changes in polyphenolic
parenchyma cells, chalcone synthase transcript levels
and peroxidase activity // Tree Physiology. – 2004. –
24, № 3. – P. 505–515.
3. Terras F., Eggermont K., Kovaleva V., Raikhel N.,
Osborn R., Kester A., Rees S.B., Torrekens S., van
Leuven F., Vanderleyden J. Small cysteine,rich antifun,
ga1 proteins from radish (Raphanus sativus L.). Their
role in host defense // Plant Cell. – 1995. – 7, № 4. –
P. 573–588.
4. Broekaert W., Terras F., Cammue B., Osborn R. Plant
defensins: novel antimicrobial peptides as components
of the host defense system // Plant Physiol. – 1995. –
108, № 10. – P. 1353–1358.
5. Chen K., Lin C., Kuan C., Sung H., Chen C. A novel
defensin encoded by a mungbean cDNA exhibits insecti,
cidal activity against bruchid // J. Agric. Food. Chem. –
2002. – 50, № 12. – P. 7258–7263.
6. Wijaya R., Neumann G., Condron R., Hughes A., Polya G.
Defense proteins from seed of Cassia fistula include a
lipid transfer protein homologue and a protease
inhibitory plant defensin // Plant Sci. – 2000. – 159,
№ 2. – P. 243–255.
7. Gao A.G., Hakimi S.M., Mittanck C.A., Wu Y., Woerner
B.M., Stark D.M., Shah D.M., Liang J., Rommens C.M.
Fungal pathogen protection in potato by expression of
a plant defensin peptide // Nat. Biotechnol. – 2000. –
18, № 10. – P. 1307–1310.
8. Ковальова В.А., Гут І.Т., Гут Р.Т. Характеристика
ІSSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2008. № 6 59
Молекулярне клонування та характеристика дефензину 2 сосни звичайної
двох дефензиноподібних білків з проростків сосни
звичайної // Біополімери і клітина. – 2006. – 22,
№ 2. – C. 126–131.
9. Ковальова В.А., Гут І.Т., Киямова Р.Г., Філоненко В.В.,
Гут Р.Т. Клонування та аналіз кДНК дефензину 1
сосни звичайної// Біополімери і клітина. – 2007. –
23, № 5. – C. 398–404.
10. Ковальова В.А., Гут Р.Т. Створення та аналіз біб,
ліотеки генів сосни звичайної // Наук. вісн. НЛТУ
України. – 2007. – Вип. 17.3. – С. 65–69.
11. Sambrook J., Russell D. Molecular cloning: a laborato,
ry manual. – Cold Spring Harbor, New York : Cold
Spring Harbor Laboratory Press, 2001. – 565 p.
12. Yount N., Yeaman M. Multidimensional signatures in
antimicrobial peptides // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. –
2004. – 101, № 21. – P. 7363–7368.
13. Sharma P., Lonneborg A. Isolation and characterization
of a cDNA encoding a plant defensin,like protein from
roots of Norway spruce // Plant Mol. Biol. – 1996. –
31, № 4. – P. 707–712.
14. Thevissen K., Ferket K., Franqois I., Cammue B. Inter,
action of antifungal plant defensins with fungal mem,
brane components // Peptides. – 2003. – 24, № 9. –
P. 1705–1712.
15. Silvestein K., Graham M., Paape T., VandenBosh K.
Genome organization of more 300 defensin,like genes
in Arabidopsis // Plant Physiol. – 2005. – 138, № 4. –
P. 600–610.
Надійшла 17.03.08
ISSN 0564–3783. Цитология и генетика. 2008. № 660
В.А. Ковальова, Р.Т. Гут
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-8309 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 0564-3783 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-12-07T16:28:59Z |
| publishDate | 2008 |
| publisher | Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Ковальова, B.А. Гут, Р.Т. 2010-05-20T12:28:50Z 2010-05-20T12:28:50Z 2008 Молекулярне клонування та характеристика дефензину 2 сосни звичайної / В.А. Ковальова, Р.Т. Гут // Цитология и генетика. — 2008. — Т. 42, № 6. — С. 55-60. — Бібліогр.: 15 назв. — укp. 0564-3783 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/8309 [577+632.4+632.938]:582.475.4 З кДНК бібліотеки семиденних проростків Pinus sylvestris L. ампліфіковано кДНК дефензину 2 (PsDef2) довжиною 252 п.н., що кодує білок з 83 амінокислотних залишків, до складу якого входить N-кінцевий сигнальний пептид з 33 амінокислот. Зріла форма дефензину 2 сосни звичайної містить домен gamma-thionin і характеризується наявністю специфічних консервативних залишків, які властиві всім рослинним дефензинам. С кДНК библиотеки семидневных проростков Pinus sylvestris L. амплифицировано кДНК дефензина 2 (PsDef2) длиной 252 п.н., которая кодирует белок из 83 аминокислотных остатков, в состав которого входит N-концевой сигнальный пептид из 33 аминокислот. Зрелая форма дефензина 2 сосны обыкновенной содержит домен gamma-thionin і характеризуется наличием специфических консервативных остатков, свойственных всем дефензинам растений. A full length coding sequence corresponding to Scotch pine defensin 2 (PsDef2) was achieved by a PCR approach using P. sylvestris сDNA library as a template. It has the potential to encode a protein of 83 amino acids in length. The first 33 amino acids correspond to the N-terminal signal peptide. The mature protein contains domain gammathionin and possesses conserved residues which are common to all plant defensins. uk Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України Оригинальные работы Молекулярне клонування та характеристика дефензину 2 сосни звичайної Молекулярное клонирование и характеристика дефензина 2 сосны обыкновенной Molecular cloning and characterization of scotch pine defensin 2 Article published earlier |
| spellingShingle | Молекулярне клонування та характеристика дефензину 2 сосни звичайної Ковальова, B.А. Гут, Р.Т. Оригинальные работы |
| title | Молекулярне клонування та характеристика дефензину 2 сосни звичайної |
| title_alt | Молекулярное клонирование и характеристика дефензина 2 сосны обыкновенной Molecular cloning and characterization of scotch pine defensin 2 |
| title_full | Молекулярне клонування та характеристика дефензину 2 сосни звичайної |
| title_fullStr | Молекулярне клонування та характеристика дефензину 2 сосни звичайної |
| title_full_unstemmed | Молекулярне клонування та характеристика дефензину 2 сосни звичайної |
| title_short | Молекулярне клонування та характеристика дефензину 2 сосни звичайної |
| title_sort | молекулярне клонування та характеристика дефензину 2 сосни звичайної |
| topic | Оригинальные работы |
| topic_facet | Оригинальные работы |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/8309 |
| work_keys_str_mv | AT kovalʹovaba molekulârneklonuvannâtaharakteristikadefenzinu2sosnizvičainoí AT gutrt molekulârneklonuvannâtaharakteristikadefenzinu2sosnizvičainoí AT kovalʹovaba molekulârnoeklonirovanieiharakteristikadefenzina2sosnyobyknovennoi AT gutrt molekulârnoeklonirovanieiharakteristikadefenzina2sosnyobyknovennoi AT kovalʹovaba molecularcloningandcharacterizationofscotchpinedefensin2 AT gutrt molecularcloningandcharacterizationofscotchpinedefensin2 |