Відщеплення фібринопептиду А викликає структурні перебудови в 118-134 ділянці Вβ-ланцюга молекули фібрин(оген)у
Дослiджено механiзм експонування виявленої ранiше неоантигенної детермiнанти (NAD) фiбринспецифiчного моноклонального антитiла (монАТ) I-3c у 118-134 дiлянцi Вβ-ланцюга фiбрину. З використанням електрофоретичного i паралельно IФА та ППР аналiзу взаємодiї фiбрину desA з монАТ I-3c у присутностi пе...
Saved in:
| Date: | 2012 |
|---|---|
| Main Authors: | , , , , , , , , , |
| Format: | Article |
| Language: | Ukrainian |
| Published: |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
2012
|
| Series: | Доповіді НАН України |
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/84316 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Відщеплення фібринопептиду А викликає структурні перебудови в 118-134 ділянці Вβ-ланцюга молекули фібрин(оген)у / Л.П. Урвант, Є.М. Макогоненко, Г.К. Березницький, Н.Е. Луговська, Е.В. Луговськой, I.М. Колеснiкова, М.О. Пидюра, Т.А. Позняк, Н.С. Сторожилова, С.В. Комiсаренко // Доп. НАН України. — 2012. — № 7. — С. 170-175. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-84316 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-843162025-02-09T14:23:30Z Відщеплення фібринопептиду А викликає структурні перебудови в 118-134 ділянці Вβ-ланцюга молекули фібрин(оген)у Отщепление фибринопептида А вызывает структурные перестройки в 118-134 участке Вβ-цепи молекулы фибрин(оген)а Сleavage of fibrinopeptide A induces structural changes in 118-134 site of Вβ-chain of fibrin(ogen) Урвант, Л.П. Макогоненко, Є.М. Березницький, Г.К. Луговська, Н.Е. Луговськой, Е.В. Колеснікова, І.М. Пидюра, М.О. Позняк, Т.А. Сторожилова, Н.С. Комісаренко, С.В. Біохімія Дослiджено механiзм експонування виявленої ранiше неоантигенної детермiнанти (NAD) фiбринспецифiчного моноклонального антитiла (монАТ) I-3c у 118-134 дiлянцi Вβ-ланцюга фiбрину. З використанням електрофоретичного i паралельно IФА та ППР аналiзу взаємодiї фiбрину desA з монАТ I-3c у присутностi пептиду GPRP показано, що експонування NAD є результатом внутрiшньомолекулярної перебудови Е-регiону мономера молекули фiбрин(оген)у, яка iнiцiюється вiдщепленням фiбринопептиду А. Исследован механизм экспонирования обнаруженной ранее неоантигенной детерминанты (NAD) фибринспецифического моноклонального антитела (монАТ) I-3c в 118-134 участке Вβ-цепи фибрина. С использованием электрофоретического и параллельно ИФА и ППР анализа взаимодействия фибрина desA с монАТ I-3c в присутствии пептида GPRP показано, что экспонирование NAD является результатом внутримолекулярной перестройки E-региона мономера молекулы фибрин(оген)а, инициируемой отщеплением фибринопептида А. The mechanism of exposition of monoclonal antibody I-3c neoantigenic determinant (NAD) previously localized within 118-134 site of fibrinogen Вβ-chain has been investigated. Data obtained with the use of electrophoretic and parallel ELISA analyses and SPR analysis of the desA fibrin to monAb I-3c interaction in the GPRP peptide presence demonstrate that the NAD exposition is a result of the intramolecular rearrangement in the E region of a fibrin(ogen) monomer molecule triggered by the fibrinopeptide A cleavage. 2012 Article Відщеплення фібринопептиду А викликає структурні перебудови в 118-134 ділянці Вβ-ланцюга молекули фібрин(оген)у / Л.П. Урвант, Є.М. Макогоненко, Г.К. Березницький, Н.Е. Луговська, Е.В. Луговськой, I.М. Колеснiкова, М.О. Пидюра, Т.А. Позняк, Н.С. Сторожилова, С.В. Комiсаренко // Доп. НАН України. — 2012. — № 7. — С. 170-175. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. 1025-6415 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/84316 577.112;612.115 uk Доповіді НАН України application/pdf Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| language |
Ukrainian |
| topic |
Біохімія Біохімія |
| spellingShingle |
Біохімія Біохімія Урвант, Л.П. Макогоненко, Є.М. Березницький, Г.К. Луговська, Н.Е. Луговськой, Е.В. Колеснікова, І.М. Пидюра, М.О. Позняк, Т.А. Сторожилова, Н.С. Комісаренко, С.В. Відщеплення фібринопептиду А викликає структурні перебудови в 118-134 ділянці Вβ-ланцюга молекули фібрин(оген)у Доповіді НАН України |
| description |
Дослiджено механiзм експонування виявленої ранiше неоантигенної детермiнанти
(NAD) фiбринспецифiчного моноклонального антитiла (монАТ) I-3c у 118-134 дiлянцi
Вβ-ланцюга фiбрину. З використанням електрофоретичного i паралельно IФА та ППР
аналiзу взаємодiї фiбрину desA з монАТ I-3c у присутностi пептиду GPRP показано, що
експонування NAD є результатом внутрiшньомолекулярної перебудови Е-регiону мономера молекули фiбрин(оген)у, яка iнiцiюється вiдщепленням фiбринопептиду А. |
| format |
Article |
| author |
Урвант, Л.П. Макогоненко, Є.М. Березницький, Г.К. Луговська, Н.Е. Луговськой, Е.В. Колеснікова, І.М. Пидюра, М.О. Позняк, Т.А. Сторожилова, Н.С. Комісаренко, С.В. |
| author_facet |
Урвант, Л.П. Макогоненко, Є.М. Березницький, Г.К. Луговська, Н.Е. Луговськой, Е.В. Колеснікова, І.М. Пидюра, М.О. Позняк, Т.А. Сторожилова, Н.С. Комісаренко, С.В. |
| author_sort |
Урвант, Л.П. |
| title |
Відщеплення фібринопептиду А викликає структурні перебудови в 118-134 ділянці Вβ-ланцюга молекули фібрин(оген)у |
| title_short |
Відщеплення фібринопептиду А викликає структурні перебудови в 118-134 ділянці Вβ-ланцюга молекули фібрин(оген)у |
| title_full |
Відщеплення фібринопептиду А викликає структурні перебудови в 118-134 ділянці Вβ-ланцюга молекули фібрин(оген)у |
| title_fullStr |
Відщеплення фібринопептиду А викликає структурні перебудови в 118-134 ділянці Вβ-ланцюга молекули фібрин(оген)у |
| title_full_unstemmed |
Відщеплення фібринопептиду А викликає структурні перебудови в 118-134 ділянці Вβ-ланцюга молекули фібрин(оген)у |
| title_sort |
відщеплення фібринопептиду а викликає структурні перебудови в 118-134 ділянці вβ-ланцюга молекули фібрин(оген)у |
| publisher |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| publishDate |
2012 |
| topic_facet |
Біохімія |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/84316 |
| citation_txt |
Відщеплення фібринопептиду А викликає структурні перебудови в 118-134 ділянці Вβ-ланцюга молекули фібрин(оген)у / Л.П. Урвант, Є.М. Макогоненко, Г.К. Березницький, Н.Е. Луговська, Е.В. Луговськой, I.М. Колеснiкова, М.О. Пидюра, Т.А. Позняк, Н.С. Сторожилова, С.В. Комiсаренко // Доп. НАН України. — 2012. — № 7. — С. 170-175. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. |
| series |
Доповіді НАН України |
| work_keys_str_mv |
AT urvantlp vídŝeplennâfíbrinopeptiduaviklikaêstrukturníperebudoviv118134dílâncívblancûgamolekulifíbrinogenu AT makogonenkoêm vídŝeplennâfíbrinopeptiduaviklikaêstrukturníperebudoviv118134dílâncívblancûgamolekulifíbrinogenu AT bereznicʹkijgk vídŝeplennâfíbrinopeptiduaviklikaêstrukturníperebudoviv118134dílâncívblancûgamolekulifíbrinogenu AT lugovsʹkane vídŝeplennâfíbrinopeptiduaviklikaêstrukturníperebudoviv118134dílâncívblancûgamolekulifíbrinogenu AT lugovsʹkojev vídŝeplennâfíbrinopeptiduaviklikaêstrukturníperebudoviv118134dílâncívblancûgamolekulifíbrinogenu AT kolesníkovaím vídŝeplennâfíbrinopeptiduaviklikaêstrukturníperebudoviv118134dílâncívblancûgamolekulifíbrinogenu AT pidûramo vídŝeplennâfíbrinopeptiduaviklikaêstrukturníperebudoviv118134dílâncívblancûgamolekulifíbrinogenu AT poznâkta vídŝeplennâfíbrinopeptiduaviklikaêstrukturníperebudoviv118134dílâncívblancûgamolekulifíbrinogenu AT storožilovans vídŝeplennâfíbrinopeptiduaviklikaêstrukturníperebudoviv118134dílâncívblancûgamolekulifíbrinogenu AT komísarenkosv vídŝeplennâfíbrinopeptiduaviklikaêstrukturníperebudoviv118134dílâncívblancûgamolekulifíbrinogenu AT urvantlp otŝepleniefibrinopeptidaavyzyvaetstrukturnyeperestrojkiv118134učastkevbcepimolekulyfibrinogena AT makogonenkoêm otŝepleniefibrinopeptidaavyzyvaetstrukturnyeperestrojkiv118134učastkevbcepimolekulyfibrinogena AT bereznicʹkijgk otŝepleniefibrinopeptidaavyzyvaetstrukturnyeperestrojkiv118134učastkevbcepimolekulyfibrinogena AT lugovsʹkane otŝepleniefibrinopeptidaavyzyvaetstrukturnyeperestrojkiv118134učastkevbcepimolekulyfibrinogena AT lugovsʹkojev otŝepleniefibrinopeptidaavyzyvaetstrukturnyeperestrojkiv118134učastkevbcepimolekulyfibrinogena AT kolesníkovaím otŝepleniefibrinopeptidaavyzyvaetstrukturnyeperestrojkiv118134učastkevbcepimolekulyfibrinogena AT pidûramo otŝepleniefibrinopeptidaavyzyvaetstrukturnyeperestrojkiv118134učastkevbcepimolekulyfibrinogena AT poznâkta otŝepleniefibrinopeptidaavyzyvaetstrukturnyeperestrojkiv118134učastkevbcepimolekulyfibrinogena AT storožilovans otŝepleniefibrinopeptidaavyzyvaetstrukturnyeperestrojkiv118134učastkevbcepimolekulyfibrinogena AT komísarenkosv otŝepleniefibrinopeptidaavyzyvaetstrukturnyeperestrojkiv118134učastkevbcepimolekulyfibrinogena AT urvantlp sleavageoffibrinopeptideainducesstructuralchangesin118134siteofvbchainoffibrinogen AT makogonenkoêm sleavageoffibrinopeptideainducesstructuralchangesin118134siteofvbchainoffibrinogen AT bereznicʹkijgk sleavageoffibrinopeptideainducesstructuralchangesin118134siteofvbchainoffibrinogen AT lugovsʹkane sleavageoffibrinopeptideainducesstructuralchangesin118134siteofvbchainoffibrinogen AT lugovsʹkojev sleavageoffibrinopeptideainducesstructuralchangesin118134siteofvbchainoffibrinogen AT kolesníkovaím sleavageoffibrinopeptideainducesstructuralchangesin118134siteofvbchainoffibrinogen AT pidûramo sleavageoffibrinopeptideainducesstructuralchangesin118134siteofvbchainoffibrinogen AT poznâkta sleavageoffibrinopeptideainducesstructuralchangesin118134siteofvbchainoffibrinogen AT storožilovans sleavageoffibrinopeptideainducesstructuralchangesin118134siteofvbchainoffibrinogen AT komísarenkosv sleavageoffibrinopeptideainducesstructuralchangesin118134siteofvbchainoffibrinogen |
| first_indexed |
2025-11-26T20:11:15Z |
| last_indexed |
2025-11-26T20:11:15Z |
| _version_ |
1849885069134528512 |
| fulltext |
оповiдi
НАЦIОНАЛЬНОЇ
АКАДЕМIЇ НАУК
УКРАЇНИ
7 • 2012
БIОХIМIЯ
УДК 577.112;612.115
© 2012
Л.П. Урвант, Є. М. Макогоненко, Г. К. Березницький,
Н.Е. Луговська, член-кореспондент НАН України Е.В. Луговськой,
I.М. Колеснiкова, М. О. Пидюра, Т. А. Позняк,
Н.С. Сторожилова, академiк НАН України С. В. Комiсаренко
Вiдщеплення фiбринопептиду А викликає структурнi
перебудови в 118-134 дiлянцi Вβ-ланцюга молекули
фiбрин(оген)у
Дослiджено механiзм експонування виявленої ранiше неоантигенної детермiнанти
(NAD) фiбринспецифiчного моноклонального антитiла (монАТ) I-3c у 118-134 дiлянцi
Вβ-ланцюга фiбрину. З використанням електрофоретичного i паралельно IФА та ППР
аналiзу взаємодiї фiбрину desA з монАТ I-3c у присутностi пептиду GPRP показано, що
експонування NAD є результатом внутрiшньомолекулярної перебудови Е-регiону моно-
мера молекули фiбрин(оген)у, яка iнiцiюється вiдщепленням фiбринопептиду А.
Фiбриноген (Fg) — мультидоменний бiлок з багатьма внутрiшньомолекулярними взаємодiя-
ми, що пiдтримують його нативну конформацiю. Вiдщеплення фiбринопептидiв А (FрА)
тромбiном супроводжується перебудовою структури молекули: звiльненням А сайтiв по-
лiмеризацiї, дисоцiацiєю αС-регiонiв вiд FрА та один вiд iншого, експозицiєю прихованих
сайтiв мiжмолекулярної взаємодiї, серед яких є i нещодавно знайдена неоантигенна детер-
мiнанта (NAD) фiбринспецифiчних моноклональних антитiл I-3с у 118-134 дiлянцi Вβ-лан-
цюга молекули, що мiстить також сайт латеральної асоцiацiї (SLA) [1], та полiмеризацiєю
фiбрину дезА.
За даними лiтературних джерел [2–5], пiсля вiдщеплення FрА структурнi перебудови
в молекулi фiбрину вiдбуваються внаслiдок змiни взаємного розташування та структури
нестабiльних i рухливих Bβ N-доменiв Е-регiону та αC-регiонiв молекули [2–5]. Структурнi
перебудови в D-регiонi, що проявляються в експонуваннi сайтiв латеральної асоцiацiї [4]
та сайтiв зв’язування Pg, t-PA, Mac-1 рецепторiв [6, 7], є результатом взаємодiї молекул
фiбрин(оген)у за участю А:а й В:в сайтiв полiмеризацiї [4, 6, 7]. Однак у науковiй лiтера-
турi вiдсутнi вiдомостi про структурнi змiни в лейкоподiбному i суперспiральних доменах
Е-регiону молекули в процесi полiмеризацiї фiбрину [8]. Враховуючи цi данi, нами зробле-
но припущення про те, що експонування неоантигенної детермiнанти 118-134 у Вβ-ланцюзi
170 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2012, №7
пiсля вiдщеплення FрА вiдбувається завдяки структурнiй перебудовi αC-регiонiв молекули
i вiдходженню їх вiд Е-регiону молекули Fg, що призводить до вiдкриття 118-134 дiлянки
в Вβ-ланцюзi (NAD/SLA) на поверхнi мiжрегiонної суперспiральної областi молекули для
взаємодiї з монАТ i для латеральної асоцiацiї з сусiднiми протофiбрилами [1]. У даному
повiдомленнi представлено результати експериментального аналiзу цiєї гiпотези.
Фiбриноген, тромбiн, Х1-, Х2-фрагменти Fg було отримано з плазми кровi донорiв ме-
тодом Варецької [9], Fenton [10] i Медведя [11] вiдповiдно. Плазмiн був люб’язно наданий
д-ром бiол. наук Т.В. Гриненко, а анцистрон Н — д-ром бiол. наук Т.М. Платоновою (Iнсти-
тут бiохiмiї iм. О.В. Палладiна НАН України). Електрофорез у ПААГ з SDS виконували
методом Laemmli [12].
Експозицiю неоантигенної детермiнанти в Fg, Х1-, й Х2-фрагментах визначали методом
iмуноферментного аналiзу (IФА). Спочатку бiлок (Fg, Х1-, Х2-фрагменти) додавали в сере-
довище, що мiстило 0,02 моль/л HEPES, pH 7,4 з 0,3 моль/л NaCl, у концентрацiї 0,2 мг/мл.
Реакцiю розпочинали додаванням тромбiну або анцистрону Н у концентрацiї 0,005 NIH/мл.
У вказанi моменти часу реакцiю зупиняли додаванням iнгiбiторiв тромбiну — PMSF (до
концентрацiї 1 ммоль/л) та плазмiну — контрикалу (до концентрацiї 10 мг/мл). Алiквоти
вносили в лунки мiкропланшета, експонований епiтоп визначали, використовуючи монАт
I-3с як первиннi, а овечi антимишинi IgG-HRP кон’югати як вториннi антитiла. Гiдролiз
Fg i фiбрину проводили в тих самих умовах, молярнi спiввiдношення Fg (фiбрин) : плазмiн
вiдповiдно 1000 : 1.
Експозицiю неоантигенної детермiнанти в реальному часi детектували методом плаз-
монного резонансу за допомогою приладу “Плазмон 3” (виробництво Iнституту фiзики на-
пiвпровiдникiв iм. В.Є. Лашкарьова НАН України). На бiосенсорний чiп ковалентно iмо-
бiлiзували монАт I-3c. У контрольнiй комiрцi знаходився Fg (Х1) у концентрацiї 5 мг/мл
у 0,02 моль/л HEPES, pH 7,4 з 0,3 моль/л NaCl, у вимiрювальнiй комiрцi — Fg (Х1) та
анцистрон Н (0,01 NIH/ml) у тому самому середовищi з доданим синтетичним пептидом
GPRP у концентрацiї 1 ммоль/л.
Кiнетику експозицiї NAD у Fg пiд дiєю тромбiну дослiджували при дуже малих концент-
рацiях тромбiну (0,001–0,0005 NIH/мл), коли вiдщепляється тiльки FрА [13]. За цих умов,
як свiдчить електрофореграма (рис. 1), зменшується iнтенсивнiсть зони Аα-ланцюга Fg
i зростає така α-ланцюга, що вказує на вiдщеплення тромбiном FрА та утворення фiбрину
desA. У паралельному експериментi з застосуванням IФА спостерiгали зростання кiлькостi
зв’язаних монАТ I-3с з продуктами реакцiї зi збiльшенням часу iнкубацiї та iнтенсивностi
зони α-ланцюга фiбрину. Наведенi данi свiдчать, що вiдщеплення тромбiном FрА вiд Fg
та поява фiбрину desA супроводжується одночасним зростанням експозицiї епiтопу монАТ
I-3с. Як зазначалося ранiше, видалення FрА викликає змiни в положеннi αC-регiонiв вiд-
носно Е-регiонiв Fg [14], що може спричинювати вiдкриття доступу монАТ I-3с до епiтопу,
прихованого в нативнiй молекулi αC-регiоном.
Для з’ясування ролi αC-регiонiв молекули в експонуваннi NAD було дослiджено зв’язок
мiж руйнуванням Fg й фiбрину desAB пiд дiєю плазмiну i експозицiєю NAD. Як вiдомо,
гiдролiз Fg плазмiном i фiбрину desAB починається з вiдщеплення вiд молекул αC-регiонiв
i утворення Х-фрагментiв. Руйнування Fg плазмiном не приводить до появи NAD у жод-
ному з утворюваних фрагментiв (Х, Y, D, E) (рис. 2, а, в), що свiдчить про вiдсутнiсть
NAD у молекулi Fg та непричетнiсть αC-регiонiв до механiзму експозицiї NAD, а також,
iмовiрно, й SLA на молекулi фiбрину. Гiдролiз фiбрину desAB вказує на те, що NAD спос-
терiгається тiльки в фiбринi та Х-фрагментах фiбрину — молекулах з цiлiсною коровою
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2012, №7 171
Рис. 1. Електрофоретичний аналiз (а) та ELISA аналiз (б ) експозицiї NAD у процесi активацiї Fg тромбiном
при концентрацiї 0,0005 NIH/мл.
Електрофорез зразкiв Fg зроблено у вiдновлювальних дисульфiднi зв’язки бiлкiв умовах.
М — маркери молекулярної маси
Рис. 2. Електрофоретичний аналiз (а, б ) та IФА (в, г) експозицiї NAD у процесi руйнування Fg (а, в)
i фiбрину desAB (б, г) пiд дiєю плазмiну. f — фiбрин desAB
172 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2012, №7
Рис. 3. IФА експозицiї NAD у процесi активацiї Х2-фрагмента Fg анцистроном (в). Електрофоретичний
аналiз препаратiв Х1 (а), Х2 (б ) у вiдновлювальних дисульфiднi зв’язки умовах
суперспiральною мiждоменною структурою (рис. 2, б, г). Розщеплення Х-фрагмента до
Y- й D-фрагментiв руйнує Bβ-ланцюг та iнактивує NAD. Цi данi дозволили припустити
про те, що NAD не експонована в Fg i експозицiя NAD є результат внутрiшньомолекулярної
перебудови структури Е-регiону пiсля вiдщеплення FрА тромбiном.
У зв’язку з цим припущенням постало питання про те, в якiй молекулярнiй формi фiб-
рину експонується NAD пiсля видалення FрА — в мономерному або олiгомерному фiбринi
desA? Розв’язання цього питання важливе для розумiння механiзму, за яким вiдбувається
експозицiя NAD, а саме: внаслiдок взаємодiї Е- i D-регiонiв за участю А:а й С:с сайтiв полi-
меризацiї в процесi утворення протофiбрил, або як результат перебудови Е-регiону в моно-
мернiй молекулi пiсля вiдщеплення FрА вiд Fg. З цiєю метою ми використали Х2-фрагмент
Fg, який не мав αC-регiонiв i 1-42 дiлянок Вβ-ланцюга молекули (рис. 3, б ). Х2-фрагмент
Fg пiсля активацiї анцистроном i утворення desA Х2-фрагмента в IФА продемонстрував
здатнiсть взаємодiяти з монАТ I-3с (рис. 3, в).
Оскiльки desA Х2-фрагмент позбавлений здатностi утворювати олiгомери [11, 15], цi
данi побiчно вказували на можливiсть експозицiї NAD у мономерному фiбринi. Прямий до-
каз експозицiї NAD у мономерному Х1-фрагментi та фiбринi desA був отриманий в процесi
ППР аналiзу взаємодiї Х1-фрагмента (рис. 4, а) та фiбрину desA (рис. 4, б ), що утворював-
ся in situ з Fg пiд дiєю анцистрону з iмобiлiзованими на iмуносенсерному чiпi монАт I-3с,
у присутностi/вiдсутностi 1 ммоль/л пептиду GPRP, який утримує фiбрин desA в мономер-
нiй формi, повнiстю блокуючи його полiмеризацiю. Цi данi свiдчили про те, що кiнетика
взаємодiї фiбрину desA з монАт I-3с не залежила вiд мономерної або олiгомерної форми
фiбрину, а значить, i вiд взаємодiї А:а й С:с сайтiв полiмеризацiї. Таким чином, отрима-
нi данi вказують на те, що вiдщеплення FрА викликає структурну перебудову в Е-регiонi
мономерного фiбрину desA i спричинює появу NAD/SLA, яка детектується монАТ I-3с.
Отриманi результати дозволяють стверджувати, що вiдщеплення FpA вiд Fg тромбi-
ном/анцистроном iндукує експозицiю NAD й SLA у Bβ-ланцюзi 118-138 регiонi молеку-
ли. NAD/SLA не експоноване в молекулi Fg i не приховується її αC-регiоном. Експози-
цiя NAD/SLA також не є результатом взаємодiї A:a й С:с сайтiв полiмеризацiї в процесi
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2012, №7 173
Рис. 4. ППР аналiз зв’язування Х1-фрагмента Fg (а: 1 — 0,3 моль/л NaCl; 2 — 0,5 моль/л NaCl) i Fg
(б : 1 — Fg + анцистрон + GPRP; 2 — Fg + анцистрон; 3 — Fg), що активуються анцистроном, з монАТ
I-3с, iмобiлiзованими на iмуносенсорний чiп. Активацiю Х1-фрагмента Fg (а) проведено у присутностi 0,3
й 0,5 моль/л NaCl, уповiльнюючого швидкiсть полiмеризацiї; активацiю Fg — у присутностi/вiдсутностi
1 ммоль/л GPRP
формування олiгомерiв фiбрину, оскiльки експонується в мономерному фiбринi; вказана
експозицiя є результатом внутрiшньомолекулярної перебудови лейкоподiбного та суперспi-
рилiзованого доменiв Е-регiону Fg пiсля вiдщеплення FpA.
Повертаючись до питання про структурнi перебудови в молекулi Fg пiсля вiдщеплен-
ня FрА, можна вiдзначити, що, згiдно з отриманими експериментальними даними, вперше
показано: структурнi змiни проходять також i в Е-регiонi молекули та зачiпають, ймовiр-
но, лейкоподiбний i суперспiральний домени. Внаслiдок цiєї перебудови в 118-134 дiлянцi
Вβ-ланцюга фiбрину виникає нова стабiльна структура, яка руйнується або шляхом гiдро-
лiзу плазмiном або денатурацiєю SDS. За попереднiми даними [1], ця структура бере участь
у латеральнiй асоцiацiї протофiбрил. З певною мiрою обережностi можна вiдзначити, що
вiдщеплення FрА не тiльки вiдкриває на мономерному фiбринi сайт А, необхiдний для пер-
винної полiмеризацiї фiбрину desA — утворення протофiбрил, а й формує сайт латеральної
взаємодiї, необхiдний молекулi фiбрину для забезпечення подальшого етапу полiмеризацiї —
латеральної асоцiацiї протофiбрил та утворення фiбрил.
1. Lugovskoy E.V., Gritsenko P.G., Kolesnikova I.N. et al. A neoantigenic determinant in coiled coil region
of human fibrin β-chain // Thromb. Res. – 2009. – 123, No 5. – P. 765–770.
2. Pandya B.V., Gabriel J. L., O’Brien J., Budzynski A. Z. Polymerization site in the beta chain of fibrin:
mapping of the B beta 1–55 sequence // Biochemistry. – 1991. – 30, No 1. – P. 162–168.
3. Doolittle R. F., Kollman J.M. Natively unfolded regions of the vertebrate fibrinogen molecule // Proteins. –
2006. – 63, No 2. – P. 391–397.
4. Kollman J.M., Pandi L., Sawaya M.R. et al. Crystal structure of human fibrinogen // Biochemistry. –
2009. – 48, No 18. – P. 3877–3886.
5. Litvinov R. I., Yakovlev S., Tsurupa G. et al. Direct evidence for specific interactions of the fibrinogen
αC-domains with the central E region and with each other // Ibid. – 2007. – 46, No 31. – P. 9133–9142.
6. Yakovlev S., Makogonenko E., Kurochkina N. et al. Conversion of fibrinogen to fibrin: mechanism of
exposure of tPA – and plasminogen-binding sites // Ibid. – 2000. – 39, No 51. – P. 15730–15741.
7. Lishko V.K., Podolnikova N.P., Yakubenko V. P. et al. Multiple binding sites in fibrinogen for integrin
alphaMbeta2 (Mac – 1) // J. Biol. Chem. – 2004. – 279, No 43. – P. 44897–44906.
174 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2012, №7
8. Yang Z., Mochalkin I., Doolittle R. F. A model of fibrin formation based on crystal structures of fibrinogen
and fibrin fragments complexed with synthetic peptides // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. – 2000. – 97,
No 26. – P. 14156–14161.
9. Варецька Т.В. Мiкрогетерогеннiсть фiбриногену. Крiофiбриноген // Укр. бiохiм. журн. – 1960. – 32,
№ 1. – С. 13–24.
10. Thompson A.R., Enfield D. L., Ericsson L.H. et al. Human thrombin: partial primary structure // Arch.
Biochem. and Biophys. – 1977. – 178, No 2. – P. 356–367.
11. Медведь Л.В., Горкун О.В., Маняков В. Ф., Белицер В.А. αС-Домены молекулы фибриногена как
структуры, ускоряющие самосборку фибрина // Молекул. биология. – 1986. – 20, № 2. – С. 461–470.
12. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 //
Nature. – 1970. – 227, No 5259. – P. 680–685.
13. Belitser V.A., Lugovskoi E.V., Ugarova T. P., Derzskaia S.G. Interaction of fibrinogen with two forms of
fibrin differing in the degree of activation by thrombin // Biokhimiia. – 1985. – 50. – P. 1336–1341.
14. Gorkun O.V., Veklich Y. I., Medved L.V. et al. Role of the αC domains of fibrin in clot formation //
Biochemistry. – 1994. – 33. – P. 6986–6997.
15. Siebenlist K. R., DiOrio J. P., Budzynski A. Z., Mosesson M.W. The polymerization and thrombin-binding
properties of des – (Bbeta 1–42)-fibrin // J. Biol. Chem. – 1990. – 265, No 30. – P. 18650–18655.
Надiйшло до редакцiї 13.01.2012Iнститут бiохiмiї iм. О.В. Палладiна
НАН України, Київ
Л.П. Урвант, Е.М. Макогоненко, Г. К. Березницкий, Н.Э. Луговская,
член-корреспондент НАН Украины Э.В. Луговской, И. Н. Колесникова,
Н.А. Пыдюра, Т.А. Позняк, Н. С. Сторожилова,
академик НАН Украины С.В. Комисаренко
Отщепление фибринопептида А вызывает структурные перестройки
в 118-134 участке Вβ-цепи молекулы фибрин(оген)а
Исследован механизм экспонирования обнаруженной ранее неоантигенной детерминанты
(NAD) фибринспецифического моноклонального антитела (монАТ) I-3c в 118-134 участке
Вβ-цепи фибрина. С использованием электрофоретического и параллельно ИФА и ППР ана-
лиза взаимодействия фибрина desA с монАТ I-3c в присутствии пептида GPRP показано,
что экспонирование NAD является результатом внутримолекулярной перестройки E-ре-
гиона мономера молекулы фибрин(оген)а, инициируемой отщеплением фибринопептида А.
L.P. Urvant, E.M. Makogonenko, G.K. Bеrеznitskiy, N. E. Lugovskaya,
Corresponding Member of the NАS of Ukraine E.V. Lugovskoу, I.M. Kolesnikova,
N.A. Pydiura, Т. А. Pozniak, N. S. Storozhylova,
Academician of the NАS of Ukraine S.V. Kоmisarenko
Сleavage of fibrinopeptide A induces structural changes in 118-134 site
of Вβ-chain of fibrin(ogen)
The mechanism of exposition of monoclonal antibody I-3c neoantigenic determinant (NAD) pre-
viously localized within 118-134 site of fibrinogen Вβ-chain has been investigated. Data obtained
with the use of electrophoretic and parallel ELISA analyses and SPR analysis of the desA fibrin
to monAb I-3c interaction in the GPRP peptide presence demonstrate that the NAD exposition is
a result of the intramolecular rearrangement in the E region of a fibrin(ogen) monomer molecule
triggered by the fibrinopeptide A cleavage.
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2012, №7 175
|