Клонування та картування гена, що кодує нову позамітохондріальну ізоформу амінотрансферази культурного томата, задіяну в деградації амінокислот з розгалуженим ланцюгом
Iдентифiковано новий ген томата (ВСАТ7), що кодує нову iзоформу амiнотрансфераз, задiяних у метаболiзмi амiнокислот з розгалуженим ланцюгом. Ген було картовано в геномному регiонi мiж маркерами TG71 i TG528 на хромосомi 1. Шляхом RACE-PCR встановлено повнорозмiрну кодуючу нуклеотидну послiдовнiст...
Gespeichert in:
| Veröffentlicht in: | Доповіді НАН України |
|---|---|
| Datum: | 2012 |
| Hauptverfasser: | , |
| Format: | Artikel |
| Sprache: | Ukrainian |
| Veröffentlicht: |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
2012
|
| Schlagworte: | |
| Online Zugang: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/84420 |
| Tags: |
Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Zitieren: | Клонування та картування гена, що кодує нову позамітохондріальну ізоформу амінотрансферази культурного томата, задіяну в деградації амінокислот з розгалуженим ланцюгом / А.С. Кочевенко, А.Р. Фернi // Доповiдi Нацiональної академiї наук України. — 2012. — № 9. — С. 148-153. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-84420 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Кочевенко, А.С. Ферні, А.Р. 2015-07-07T14:17:31Z 2015-07-07T14:17:31Z 2012 Клонування та картування гена, що кодує нову позамітохондріальну ізоформу амінотрансферази культурного томата, задіяну в деградації амінокислот з розгалуженим ланцюгом / А.С. Кочевенко, А.Р. Фернi // Доповiдi Нацiональної академiї наук України. — 2012. — № 9. — С. 148-153. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. 1025-6415 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/84420 577.152.2:575.116.4 Iдентифiковано новий ген томата (ВСАТ7), що кодує нову iзоформу амiнотрансфераз, задiяних у метаболiзмi амiнокислот з розгалуженим ланцюгом. Ген було картовано в геномному регiонi мiж маркерами TG71 i TG528 на хромосомi 1. Шляхом RACE-PCR встановлено повнорозмiрну кодуючу нуклеотидну послiдовнiсть цього гена. Вивчено його експресiю в рiзних типах тканин томата та визначено субклiтинну локалiзацiю протеїну, що ним кодується. Идентифицирован новый ген томата (ВСАТ7), кодирующий новую изоформу аминотрансфераз, задействованных в метаболизме аминокислот с разветвленной цепью. Ген был картирован в геномном регионе между маркерами TG71 и TG528 на хромосоме 1. Полноразмерная кодирующая нуклеотидная последовательность данного гена установлена с помощью RACE-PCR. Изучена экспрессия гена в разных типах тканей томата и определена субклеточная локализация кодируемого им протеина. New tomato gene BCAT7 encoding a new branched chain amino acid aminotransferase isoform is identified. The gene is mapped on chromosome 1 between markers TG71 and TG528. Full-length CDS of the gene was determined by RACE-PCR. Gene expression and subcellular localization of the encoded protein are characterized. uk Видавничий дім "Академперіодика" НАН України Доповіді НАН України Біологія Клонування та картування гена, що кодує нову позамітохондріальну ізоформу амінотрансферази культурного томата, задіяну в деградації амінокислот з розгалуженим ланцюгом Клонирование и картирование гена, кодирующего новую внемитохондриальную изоформу аминотрансферазы культурного томата, задействованную в деградации аминокислот с разветвленной цепью Cloning and mapping of the gene encoding a new extramitochondrial aminotransferase isoform of cultivated tomato which is involved in the degradation of branched chain amino acids Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Клонування та картування гена, що кодує нову позамітохондріальну ізоформу амінотрансферази культурного томата, задіяну в деградації амінокислот з розгалуженим ланцюгом |
| spellingShingle |
Клонування та картування гена, що кодує нову позамітохондріальну ізоформу амінотрансферази культурного томата, задіяну в деградації амінокислот з розгалуженим ланцюгом Кочевенко, А.С. Ферні, А.Р. Біологія |
| title_short |
Клонування та картування гена, що кодує нову позамітохондріальну ізоформу амінотрансферази культурного томата, задіяну в деградації амінокислот з розгалуженим ланцюгом |
| title_full |
Клонування та картування гена, що кодує нову позамітохондріальну ізоформу амінотрансферази культурного томата, задіяну в деградації амінокислот з розгалуженим ланцюгом |
| title_fullStr |
Клонування та картування гена, що кодує нову позамітохондріальну ізоформу амінотрансферази культурного томата, задіяну в деградації амінокислот з розгалуженим ланцюгом |
| title_full_unstemmed |
Клонування та картування гена, що кодує нову позамітохондріальну ізоформу амінотрансферази культурного томата, задіяну в деградації амінокислот з розгалуженим ланцюгом |
| title_sort |
клонування та картування гена, що кодує нову позамітохондріальну ізоформу амінотрансферази культурного томата, задіяну в деградації амінокислот з розгалуженим ланцюгом |
| author |
Кочевенко, А.С. Ферні, А.Р. |
| author_facet |
Кочевенко, А.С. Ферні, А.Р. |
| topic |
Біологія |
| topic_facet |
Біологія |
| publishDate |
2012 |
| language |
Ukrainian |
| container_title |
Доповіді НАН України |
| publisher |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Клонирование и картирование гена, кодирующего новую внемитохондриальную изоформу аминотрансферазы культурного томата, задействованную в деградации аминокислот с разветвленной цепью Cloning and mapping of the gene encoding a new extramitochondrial aminotransferase isoform of cultivated tomato which is involved in the degradation of branched chain amino acids |
| description |
Iдентифiковано новий ген томата (ВСАТ7), що кодує нову iзоформу амiнотрансфераз,
задiяних у метаболiзмi амiнокислот з розгалуженим ланцюгом. Ген було картовано
в геномному регiонi мiж маркерами TG71 i TG528 на хромосомi 1. Шляхом RACE-PCR
встановлено повнорозмiрну кодуючу нуклеотидну послiдовнiсть цього гена. Вивчено його експресiю в рiзних типах тканин томата та визначено субклiтинну локалiзацiю протеїну, що ним кодується.
Идентифицирован новый ген томата (ВСАТ7), кодирующий новую изоформу аминотрансфераз, задействованных в метаболизме аминокислот с разветвленной цепью. Ген был картирован в геномном регионе между маркерами TG71 и TG528 на хромосоме 1. Полноразмерная кодирующая нуклеотидная последовательность данного гена установлена с помощью RACE-PCR. Изучена экспрессия гена в разных типах тканей томата и определена субклеточная локализация кодируемого им протеина.
New tomato gene BCAT7 encoding a new branched chain amino acid aminotransferase isoform is
identified. The gene is mapped on chromosome 1 between markers TG71 and TG528. Full-length
CDS of the gene was determined by RACE-PCR. Gene expression and subcellular localization of
the encoded protein are characterized.
|
| issn |
1025-6415 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/84420 |
| citation_txt |
Клонування та картування гена, що кодує нову позамітохондріальну ізоформу амінотрансферази культурного томата, задіяну в деградації амінокислот з розгалуженим ланцюгом / А.С. Кочевенко, А.Р. Фернi // Доповiдi Нацiональної академiї наук України. — 2012. — № 9. — С. 148-153. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. |
| work_keys_str_mv |
AT kočevenkoas klonuvannâtakartuvannâgenaŝokoduênovupozamítohondríalʹnuízoformuamínotransferazikulʹturnogotomatazadíânuvdegradacííamínokislotzrozgaluženimlancûgom AT ferníar klonuvannâtakartuvannâgenaŝokoduênovupozamítohondríalʹnuízoformuamínotransferazikulʹturnogotomatazadíânuvdegradacííamínokislotzrozgaluženimlancûgom AT kočevenkoas klonirovanieikartirovaniegenakodiruûŝegonovuûvnemitohondrialʹnuûizoformuaminotransferazykulʹturnogotomatazadeistvovannuûvdegradaciiaminokislotsrazvetvlennoicepʹû AT ferníar klonirovanieikartirovaniegenakodiruûŝegonovuûvnemitohondrialʹnuûizoformuaminotransferazykulʹturnogotomatazadeistvovannuûvdegradaciiaminokislotsrazvetvlennoicepʹû AT kočevenkoas cloningandmappingofthegeneencodinganewextramitochondrialaminotransferaseisoformofcultivatedtomatowhichisinvolvedinthedegradationofbranchedchainaminoacids AT ferníar cloningandmappingofthegeneencodinganewextramitochondrialaminotransferaseisoformofcultivatedtomatowhichisinvolvedinthedegradationofbranchedchainaminoacids |
| first_indexed |
2025-11-26T14:06:03Z |
| last_indexed |
2025-11-26T14:06:03Z |
| _version_ |
1850624329875718144 |
| fulltext |
УДК 577.152.2:575.116.4
© 2012
А.С. Кочевенко, А.Р. Фернi
Клонування та картування гена, що кодує нову
позамiтохондрiальну iзоформу амiнотрансферази
культурного томата, задiяну в деградацiї амiнокислот
з розгалуженим ланцюгом
(Представлено академiком НАН України Ю.Ю. Глебою)
Iдентифiковано новий ген томата (ВСАТ7), що кодує нову iзоформу амiнотрансфераз,
задiяних у метаболiзмi амiнокислот з розгалуженим ланцюгом. Ген було картовано
в геномному регiонi мiж маркерами TG71 i TG528 на хромосомi 1. Шляхом RACE-PCR
встановлено повнорозмiрну кодуючу нуклеотидну послiдовнiсть цього гена. Вивчено йо-
го експресiю в рiзних типах тканин томата та визначено субклiтинну локалiзацiю
протеїну, що ним кодується.
В рослинних та тваринних органiзмах амiнокислоти з розгалуженим ланцюгом (ВСАА)
лейцин, валiн та iзолейцин виконують важливi регуляторнi та структурнi функцiї [1, 2].
Однак за певних умов, як то порушення процесу деградацiї, високий рiвень бiосинтезу або
швидкий кругообiг бiлкiв, концентрацiя ВСАА та їх α-кетокислотних похiдних може пiд-
вищуватися у рази та сягати токсичного рiвня. Катаболiзм ВСАА є важливим механiзмом
детоксифiкацiї клiтин, вiн забезпечує пiдтримання запасу цих амiнокислот на певному рiв-
нi, необхiдному для бiосинтезу бiлкiв.
Як було встановлено в багатьох дослiдженнях, процес бiосинтезу ВСАА вiдбуваєтся
в хлоропластах [3, 4], тодi як щодо локалiзацiї процесу деградацiї ВСАА iснують суперечли-
вi повiдомлення. Дослiдження, проведенi в декiлькох лабораторiях, переконливо показали,
що цiлий ряд ферментiв, задiяних у деградацiї ВСАА, локалiзовано в мiтохондрiях; подаль-
ший аналiз їх ферментативної активностi та субстратної специфiчностi довiв, що мiтохондрiї
дiйсно здатнi катаболiзувати ВСАА [5, 6]. З iншого боку, вiдомо, що альфа-кетокислоти, якi
формуються внаслiдок реакцiї трансамiнацiї ВСАА, можуть бути катаболiзованi в перокси-
сомах рослин до 2-метил-пропаноiл-КоА [7, 8]. Також було виявлено, що мутацiя гена СНУ1
у Arabidopsis, який кодує пероксисомальний фермент 3-гiдроксиiзобутирил-КоА гiдролазу,
призводить до порушення катаболiзму валiну [9]. Таким чином, базуючись на сучасних
лiтературних даних, цiлком правомiрно припустити, що у рослин можуть iснувати обидва
шляхи (мiтохондрiальний та пероксисомальний) катаболiзму ВСАА або промiжнi продукти
пероксисомального шляху можуть бути в подальшому метаболiзованi в мiтохондрiях.
Амiнотрансферази амiнокислот з розгалуженим ланцюгом (ВСАТs) є ключовим класом
ферментiв, що задiянi не тiльки в бiосинтезi ВСАА, але i в їх деградацiї. Оскiльки нако-
пичення ВСАА у надмiрних концентрацiях є токсичним, то ВСАТs вiдiграють певну роль
у детоксифiкацiї клiтин. У ходi попереднiх дослiджень нами було клоновано i картовано по-
над 30 генiв, що кодують ферменти, задiянi в метаболiзмi амiнокислот з розгалуженим лан-
цюгом в культурному томатi. Було також встановлено, що у Solanum lycopersicum ВСАТs
кодуються невеликою родиною генiв. Шiсть членiв цiєї родини iдентифiковано i локалiзова-
148 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2012, №9
но на хромосомнiй картi томата за допомогою методу полiморфiзму довжини рестрикцiй-
них фрагментiв [10]. Метою ж проведеного дослiдження було клонування, картування та
характеристика гена ВСАТ7, що кодує нову iзоформу амiнотрансфераз амiнокислот з роз-
галуженим ланцюгом у томата.
Клон cLEM-6-A9, що мiстив кДНК ВСАТ7, було iдентифiковано в загальнодоступнiй
TIGR Tomato EST колекцiї. Для визначення нуклеотидної послiдовностi кДНК використо-
вували автоматичний сиквенатор ABI PRISM® 310 (PE Applied Biosystems, Нiмеччина)
та набiр BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit. За результатами сиквенс-аналiзу встанов-
лено, що кДНК вставка має розмiр 607 п. н. i мiстить усiчену кодуючу послiдовнiсть гена
ВСАТ7. Аналiз кластеру (SGN-U565 681) послiдовностей, що вiдповiдає гену ВСАТ7 у базi
даних SOL Genomics Network tomato EST database (http://solgenomics.net/index.pl; [11]),
виявив, що вiдповiдний кластер мiстить 24 гомологiчних EST послiдовностей, iзольованих
в основному з насiння i незрiлих зелених плодiв.
Для встановлення повної кодуючої послiдовностi використовували метод полiмеразної
ланцюгової реакцiї з швидкою амплiфiкацiєю кiнцiв кДНК (RACE-PCR). 5′- та 3′-RACE
виконували за допомогою набору реактивiв Gene Racer Kit (“Invitrogen“, Нiмеччина) згiдно
з протоколом виробника, використовуючи таку комбiнацiю геноспецифiчного i унiверсаль-
ного праймерiв: GeneRacer 5′ i 5RaceReBCAT7, 3RaceFrBCAT7 i GeneRacer 3′ (табл. 1).
Амплiфiкованi продукти було клоновано у вектор pCR4Blunt-TOPO i сиквеновано. Визна-
чена нуклеотидна послiдовнiсть кДНК ВСАТ7 культурного томата мiстила кодуючу послi-
довнiсть розмiром 1674 п. н. i 5′-3′- нетрансльованi регiони 79 п. н. i 82 п. н. тощо (рис. 1).
Бiлок, що кодується геном ВСАТ7, складається з 557 амiнокислотних залишкiв i виявляє
14–16% iдентичностi до амiнокислотної послiдовностi амiнотрансфераз ВСАТ1 Arabidopsis
thaliana i ВСАТ1 та ВСАТ2 Solanum lycopersicum, що задiянi в катаболiзмi амiнокислот
з розгалуженим ланцюгом.
Для вивчення внутрiшньоклiтинної локалiзацiї нової iзоформи нуклеотидну послiдов-
нiсть ВСАТ7 без стоп-кодону було клоновано у вектор pK7FWG2, який сконструйовано
для отримання GFP-мiчених протеїнiв [12]. Векторну конструкцiю ВСАТ7-GFP було введе-
но в мезофiльнi протопласти N . tabacum за допомогою методу ПЕГ-обумовленої трансфор-
мацiї [13]. За даними конфокальної мiкроскопiї, яку застосовували для вiзуалiзацiї тимча-
сової експресiї химерного протеїну ВСАТ7-GFP у протопластах тютюну, встановлено, що
ВСАТ7-GFP не локалiзовано нi в хлоропластах, нi в мiтохондрiях (рис. 2). Беручи до ува-
ги форму i розмiр субклiтинних органел, в яких було виявлено сигнал флуоресценцiї, ми
вважаємо, що найбiльш вiрогiдним мiсцем локалiзацiї ВСАТ7 протеїну є пероксисоми.
Таблиця 1. Праймери, якi були використанi в дослiдженнi
Назва праймеру Нуклеотидна послiдовнiсть
GeneRacer 5′ CGACTGGAGCACGAGGACACTGA
5RaceReBCAT7 TAACTGGTGGGGGTCTTCCTGATT
GeneRacer 3′ GCTGTCAACGATACGCTACGTAACG
3RaceFrBCAT7 TCGAGTGTATGGCGGAAAGGTATT
FrqRTUBI3 GGTTAAGCTCGCTGTGTTGCA
ReqRTUBI3 CGAAGCCTCTGAACCTTTCCA
FrqRTBCAT7 AGAGGTCATCTTTGGTGCAGGAG
ReqRTBCAT7 GTCAAACCTGGCACACGTTGTT
FrGFPBCAT7 CACCATGGGAGAAGAAATTGAAGTGATA
ReGFPBCAT7 GTGCCCATACCAACTTATGAGAAGAGC
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2012, №9 149
Рис. 1. Нуклеотидна послiдовнiсть кДНК ВСАТ7 та виведена амiнокислотна послiдовнiсть культурного
томата S. lycopersicum
150 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2012, №9
Рис. 3. Встановлення локалізації гена ВСАТ7 на хромосомній карті культурного томата. а — ло-
калізація на хромосомній карті; б — результати блотингу за Саузерном; IL1–1 – IL1–4 інтрогресивні
лінії томата; Sl — S. lycopersicum; Sp — S. pennellii. Зірочкою відмічено лінію, що успадкувала
даний ген від дикого виду S. pennellii
Рис. 2. Експресія химерного протеїну ВСАТ7-GFP у мезофільних протопластах тютюну. Флуорес-
центні маркери: а — зелений флуоресцентний протеїн GFP; б — барвник MitoTracker; в — авто-
флуоресценція хлорофілу, GFPі MitoTracker. Масштаб — 19 мкм
а б в
Виявлення факту екстрамiтохондрiальної локалiзацiї нової iзоформи ВСАТ, ключового
ферменту, задiяного в процесi деградацiї ВСАА, свiдчить на користь iснування додаткового
шляху катаболiзму амiнокислот з розгалуженим ланцюгом або деяких його етапiв у пе-
роксисомах, як було запропоновано ранiше [7, 9, 14].
Для подальшого з’ясування функцiональної ролi гена ВСАТ7 у рiзних типах тканин то-
мата було проведено аналiз профiлю його експресiї. Рiвень експресiї в листках, суцвiттях,
зелених (10 д. п. а.) та червоних (40 д. п. а.) плодах томата вивчали за допомогою методу
qRT-PCR. Специфiчнi пари праймерiв для генiв ВСАТ7 та убiквiтину (UBI3 ), який ви-
користовували як внутрiшнiй амплiфiкацiйний стандарт, були синтезованi за допомогою
програми Primer Express (див. табл. 1). Видiлення сумарної РНК, синтез одноланцюгової
кДНК та RT-PCR аналiз проводили вiдповiдно до ранiше опублiкованого протоколу [15].
Згiдно з отриманими результатами, всi проаналiзованi типи тканин мали вiдносно високий
рiвень експресiї гена ВСАТ7. Однак кiлькiсть транскрипту ВСАТ7 у незрiлих плодах була
нижчою, нiж у суцвiттях, листках i червоних стиглих плодах томата (табл. 2).
Ген ВСАТ7 було картовано шляхом аналiзу полiморфiзму довжини рестрикцiйних фраг-
ментiв у популяцiї iнтрогресивних лiнiй томата, отриманих вiд схрещування культурного
томата S. lycopersicum (сорту M82) з його диким родичем S. pennellii (LA 716), як деталь-
но описано ранiше [9]. Сумарну ДНК гiдролiзували ендонуклеазою DraI i гiбридизували
з фрагментом кДНК ВСАТ7, що був видiлений iз клону cLEM-6-A9 як продукт рестрик-
цiї ферментами EcoRI i XhoI. ДНК треки, що вiдповiдали S. lycopersicum сорту М82 або
iнтрогресивним лiнiям, якi мiстили ВСАТ7 алель культурного томата, характеризувалися
наявнiстю двох гiбридизацiйних смуг величиною 4,7 i 2,2 т. п. н., тодi як для лiнiй, що ма-
ли S. pennellii алель, була характерна наявнiсть однiєї гiбридизацiйної смуги розмiром 3,5 т.
п. н. За результатами Саузерн-блот-гiбридизацiї встановлено, що ген ВСАТ7 знаходиться
на хромосомi 1 мiж маркерами TG71 i TG528 (рис. 3).
Порiвняння даних локалiзацiї гена ВСАТ7 i кiлькiсних метаболiчних локусiв (QTLs),
що контролюють вмiст ВСАА [9], свiдчить про те, що ВСАТ7 за нормальних умов не впли-
ває iстотно на кiлькiсть амiнокислот з розгалуженим ланцюгом у зрiлих плодах томата. Це
може бути обумовлено, наприклад, iснуванням додаткового механiзму на бiлковому рiвнi,
який контролює ензиматичну активнiсть протеїну ВСАТ7. Крiм того, це, можливо, по-
в’язано з надлишком вуглеводiв, який iснує у тканинах плодiв томата i може запобiгати
використанню ВСАА як альтернативного джерела дихальних субстратiв.
Таким чином, отриманi результати свiдчать про наявнiсть у геномi томата гена ВСАТ7,
що кодує нову iзоформу амiнотрансфераз, задiяних у метаболiзмi амiнокислот з розгалу-
женим ланцюгом томата. Наведенi данi щодо структури, хромосомної локалiзацiї та спе-
цифiчностi експресiї гена ВСАТ7. Виявлення позахлоропластної та позамiтохондрiальної
субклiтинної локалiзацiї цього ферменту вказує на складну органiзацiю процесу деградацiї
ВСАА, який потребує узгодженої взаємодiї трьох рiзних клiтинних компартментiв.
Таблиця 2. Органоспецифiчна експресiя гена ВСАТ7
Тип тканини
томата
Рiвень експресiї ВСАТ7,
qRT-PCR (40-∆Ct)
Суцвiття 36,85 ± 0,08
Листя 35,48 ± 0,14
Зеленi плоди 34,04 ± 0,07
Червонi плоди 35,46 ± 0,09
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2012, №9 151
1. Yoshizawa F. Regulation of protein synthesis by branched-chain amino acids in vivo // Biochem. Biophys.
Research Com. – 2004. – 313. – P. 417–422.
2. Binder S. Branched-Chain Amino Acid Metabolism in Arabidopsis thaliana // The Arabidopsis Book. –
2010. – 8. – doi:10.1199/tab.0137.
3. Singhl B.K., Shaner D. L. Biosynthesis of branched chain amino acids: from test tube to field // Plant
Cell. – 1995. – 7. – P. 935–944.
4. Hagelstein P., Sieve B., Klein M. et al. Leucine synthesis in chloroplasts: Leucine/isoleucine aminotransfe-
rase and valine aminotransferase are different enzymes in spinach chloroplasts // J. Plant Physiol. – 1997. –
150. – P. 23–30.
5. Anderson M.D., Che P., Song J. et al. 3-Methylcrotonyl-coenzyme A carboxylase is a component of the
mitochondrial leucine catabolic pathway in plants // Plant Physiol. – 1998. – 118. – P. 1127–1138.
6. Schuster J., Binder S. The mitochondrial branched-chain aminotransferase (AtBCAT-1) is capable to
initiate degradation of leucine, isoleucine and valine in almost all tissues in Arabidopsis thaliana // Plant.
Mol. Biol. – 2005. – 57. – P. 241–254.
7. Gerbling H., Gerhardt B. Peroxisomal Degradation of branched-chain 2-oxo acids // Plant. Physiol. –
1989. – 91. – P. 1387–1392.
8. Reumann S., Ma C., Lemke S., Babujee L. AraPerox. A Database of Putative Arabidopsis Proteins from
Plant Peroxisomes // Ibid. – 2004. – 136. – P. 2587–2608.
9. Lange P.R., Eastmond P. J., Madagan K., Graham I.A. An Arabidopsis mutant disrupted in valine
catabolism is also compromised in peroxisomal fatty acid beta-oxidation // FEBS Lett. – 2004. – 571. –
P. 147–153.
10. Кочевенко А.С., Фернi А.Р. Картування генiв томата, задiяних у метаболiзмi амiнокислот з розга-
луженим ланцюгом // Доп. НАН України. – 2011. – № 7. – С. 156–160.
11. Mueller L. A., Solow T.H., Taylor N. et al. The SOL Genomics Network: a comparative resource for
Solanaceae biology and beyond // Plant Physiol. – 2005. – 138. – P. 1310–1317.
12. Karimi M., Inze D., Depicker A. GATEWAY(™) vectors for Agrobacterium-mediated plant transformati-
on // Trends Plant Sci. – 2002. – 7. – P. 193–195.
13. Paszkowski J., Shillito R.D., Saul M. et al. Direct gene transfer to plants // EMBO J. – 1984. – 3. –
P. 2717–2722.
14. Gerbling H., Gerhardt B. Oxidative decarboxylation of branched-chain 2-oxo fatty acids by higher plant
peroxisomes // Plant Physiol. – 1988. – 88. – P. 13–15.
15. Кочевенко А.С., Фернi А. Р. Характеристика гена IPMD-SSU1 Lycopersicon esculentum та його роль
у бiосинтезi лейцину // Доп. НАН України. – 2011. – № 9. – С. 153–158.
Надiйшло до редакцiї 20.01.2012Iнститут клiтинної бiологiї та генетичної
iнженерiї НАН України, Київ
Макс-Планк-Iнститут молекулярної фiзiологiї
рослин, Гольм, Нiмеччина
А.С. Кочевенко, А.Р. Ферни
Клонирование и картирование гена, кодирующего новую
внемитохондриальную изоформу аминотрансферазы культурного
томата, задействованную в деградации аминокислот с разветвленной
цепью
Идентифицирован новый ген томата (ВСАТ7), кодирующий новую изоформу аминотранс-
фераз, задействованных в метаболизме аминокислот с разветвленной цепью. Ген был кар-
тирован в геномном регионе между маркерами TG71 и TG528 на хромосоме 1. Полнораз-
мерная кодирующая нуклеотидная последовательность данного гена установлена с помо-
щью RACE-PCR. Изучена экспрессия гена в разных типах тканей томата и определена
субклеточная локализация кодируемого им протеина.
152 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2012, №9
A. S. Kochevenko, A.R. Fernie
Cloning and mapping of the gene encoding a new extramitochondrial
aminotransferase isoform of cultivated tomato which is involved in the
degradation of branched chain amino acids
New tomato gene BCAT7 encoding a new branched chain amino acid aminotransferase isoform is
identified. The gene is mapped on chromosome 1 between markers TG71 and TG528. Full-length
CDS of the gene was determined by RACE-PCR. Gene expression and subcellular localization of
the encoded protein are characterized.
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2012, №9 153
|