Анти-Hsp60 антитіла у клінічно здорових донорів та новонароджених із критичною вродженою вадою серця, яким переливали компоненти донорської крові
Встановлено, що плазма клiнiчно здорових донорiв може мати пiдвищений вмiст анти-Hsp60 антитiл. Вперше показано, що IgG антитiла, афiнно очищенi iз зразкiв високореактивної до Hsp60 за результатами ELISA сироватки клiнiчно здорових донорiв, розпiзнавали в сумарних лiзатах бiоптатiв правого передсер...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Доповіді НАН України |
|---|---|
| Дата: | 2013 |
| Автори: | , , , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Ukrainian |
| Опубліковано: |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
2013
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/85761 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Анти-Hsp60 антитіла у клінічно здорових донорів та новонароджених із критичною вродженою вадою серця, яким переливали компоненти донорської крові / Г.М. Воробйова, Я.В. Ткаченко, Л.Ф. Яковенко, Л.М. Капустян, Л.Л. Сидорик, І.М. Ємець // Доповiдi Нацiональної академiї наук України. — 2013. — № 6. — С. 169–176. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-85761 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Воробйова, Г.М. Ткаченко, Я.В. Яковенко, Л.Ф. Капустян, Л.М. Сидорик, Л.Л. Ємець, І.М. 2015-08-19T09:55:22Z 2015-08-19T09:55:22Z 2013 Анти-Hsp60 антитіла у клінічно здорових донорів та новонароджених із критичною вродженою вадою серця, яким переливали компоненти донорської крові / Г.М. Воробйова, Я.В. Ткаченко, Л.Ф. Яковенко, Л.М. Капустян, Л.Л. Сидорик, І.М. Ємець // Доповiдi Нацiональної академiї наук України. — 2013. — № 6. — С. 169–176. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. 1025-6415 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/85761 612.179.2 Встановлено, що плазма клiнiчно здорових донорiв може мати пiдвищений вмiст анти-Hsp60 антитiл. Вперше показано, що IgG антитiла, афiнно очищенi iз зразкiв високореактивної до Hsp60 за результатами ELISA сироватки клiнiчно здорових донорiв, розпiзнавали в сумарних лiзатах бiоптатiв правого передсердя новонароджених з транспозицiєю магiстральних судин (ТМС) бiлок з молекулярною масою близько 60 кДа. Встановлено пряму кореляцiю мiж об’ємом перелитої донорської плазми i термiном перебування новонароджених з ТМС у стацiонарi (r = 0,54, p < 0,05) та сироватковим рiвнем анти-Hsp60 антитiл у пiсляоперацiйний перiод (1-ша доба — r = 0,37; 3-тя доба — r = 0,4; p < 0,05). Установлено, что плазма клинически здоровых доноров может иметь повышенное содержание анти-Hsp60 антител. Впервые показано, что IgG антитела, афинно очищенные из образцов высокореактивной к Hsp60 по результатам ELISA сыворотки клинически здоровых доноров, узнавали в суммарных лизатах биоптатов правого предсердия новорожденных с транспозицией магистральных сосудов (ТМС) белок с молекулярной массой около 60 кДа. Установлена прямая корреляция между объемом перелитой донорской плазмы и термином пребывания пациентов в стационаре (r = 0,54, p < 0,05), а также сывороточным уровнем анти-Hsp60 антител в послеоперационный период (1-е сутки — r = 0,37; 3-и сутки — r = 0,4; p < 0,05). High level of anti-Hsp60 antibodies has been detected in the plasma of some clinically healthy donors. It is shown firstly that affinely purified IgG antibodies from antibody-positive to Hsp60 sera of clinically healthy donors are recognized by the 60 kDa protein band in cardiac bioptates total lysates of neonates with TGV. The direct correlation between the volume of transfused donor plasma, the term of patients hospital staying (r = 0.54, p < 0.05) and serum levels of anti-Hsp60 antibodies in the postoperative period (1 day — r = 0.37; 3 days — r = 0.4; p < 0.05) has been established. uk Видавничий дім "Академперіодика" НАН України Доповіді НАН України Медицина Анти-Hsp60 антитіла у клінічно здорових донорів та новонароджених із критичною вродженою вадою серця, яким переливали компоненти донорської крові Анти-Hsp60 антитела у клинически здоровых доноров и новорожденных с критическим врожденным пороком сердца, которым переливали компоненты донорской крови Anti-Hsp60 antibodies in clinically healthy donors and newborns with complex congenital heart defect after donor blood components transfusion Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Анти-Hsp60 антитіла у клінічно здорових донорів та новонароджених із критичною вродженою вадою серця, яким переливали компоненти донорської крові |
| spellingShingle |
Анти-Hsp60 антитіла у клінічно здорових донорів та новонароджених із критичною вродженою вадою серця, яким переливали компоненти донорської крові Воробйова, Г.М. Ткаченко, Я.В. Яковенко, Л.Ф. Капустян, Л.М. Сидорик, Л.Л. Ємець, І.М. Медицина |
| title_short |
Анти-Hsp60 антитіла у клінічно здорових донорів та новонароджених із критичною вродженою вадою серця, яким переливали компоненти донорської крові |
| title_full |
Анти-Hsp60 антитіла у клінічно здорових донорів та новонароджених із критичною вродженою вадою серця, яким переливали компоненти донорської крові |
| title_fullStr |
Анти-Hsp60 антитіла у клінічно здорових донорів та новонароджених із критичною вродженою вадою серця, яким переливали компоненти донорської крові |
| title_full_unstemmed |
Анти-Hsp60 антитіла у клінічно здорових донорів та новонароджених із критичною вродженою вадою серця, яким переливали компоненти донорської крові |
| title_sort |
анти-hsp60 антитіла у клінічно здорових донорів та новонароджених із критичною вродженою вадою серця, яким переливали компоненти донорської крові |
| author |
Воробйова, Г.М. Ткаченко, Я.В. Яковенко, Л.Ф. Капустян, Л.М. Сидорик, Л.Л. Ємець, І.М. |
| author_facet |
Воробйова, Г.М. Ткаченко, Я.В. Яковенко, Л.Ф. Капустян, Л.М. Сидорик, Л.Л. Ємець, І.М. |
| topic |
Медицина |
| topic_facet |
Медицина |
| publishDate |
2013 |
| language |
Ukrainian |
| container_title |
Доповіді НАН України |
| publisher |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Анти-Hsp60 антитела у клинически здоровых доноров и новорожденных с критическим врожденным пороком сердца, которым переливали компоненты донорской крови Anti-Hsp60 antibodies in clinically healthy donors and newborns with complex congenital heart defect after donor blood components transfusion |
| description |
Встановлено, що плазма клiнiчно здорових донорiв може мати пiдвищений вмiст анти-Hsp60 антитiл. Вперше показано, що IgG антитiла, афiнно очищенi iз зразкiв високореактивної до Hsp60 за результатами ELISA сироватки клiнiчно здорових донорiв,
розпiзнавали в сумарних лiзатах бiоптатiв правого передсердя новонароджених з транспозицiєю магiстральних судин (ТМС) бiлок з молекулярною масою близько 60 кДа. Встановлено пряму кореляцiю мiж об’ємом перелитої донорської плазми i термiном перебування новонароджених з ТМС у стацiонарi (r = 0,54, p < 0,05) та сироватковим рiвнем
анти-Hsp60 антитiл у пiсляоперацiйний перiод (1-ша доба — r = 0,37; 3-тя доба — r = 0,4; p < 0,05).
Установлено, что плазма клинически здоровых доноров может иметь повышенное содержание анти-Hsp60 антител. Впервые показано, что IgG антитела, афинно очищенные из
образцов высокореактивной к Hsp60 по результатам ELISA сыворотки клинически здоровых доноров, узнавали в суммарных лизатах биоптатов правого предсердия новорожденных
с транспозицией магистральных сосудов (ТМС) белок с молекулярной массой около 60 кДа.
Установлена прямая корреляция между объемом перелитой донорской плазмы и термином
пребывания пациентов в стационаре (r = 0,54, p < 0,05), а также сывороточным уровнем анти-Hsp60 антител в послеоперационный период (1-е сутки — r = 0,37; 3-и сутки — r = 0,4; p < 0,05).
High level of anti-Hsp60 antibodies has been detected in the plasma of some clinically healthy donors.
It is shown firstly that affinely purified IgG antibodies from antibody-positive to Hsp60 sera of
clinically healthy donors are recognized by the 60 kDa protein band in cardiac bioptates total lysates
of neonates with TGV. The direct correlation between the volume of transfused donor plasma, the
term of patients hospital staying (r = 0.54, p < 0.05) and serum levels of anti-Hsp60 antibodies in
the postoperative period (1 day — r = 0.37; 3 days — r = 0.4; p < 0.05) has been established.
|
| issn |
1025-6415 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/85761 |
| citation_txt |
Анти-Hsp60 антитіла у клінічно здорових донорів та новонароджених із критичною вродженою вадою серця, яким переливали компоненти донорської крові / Г.М. Воробйова, Я.В. Ткаченко, Л.Ф. Яковенко, Л.М. Капустян, Л.Л. Сидорик, І.М. Ємець // Доповiдi Нацiональної академiї наук України. — 2013. — № 6. — С. 169–176. — Бібліогр.: 15 назв. — укр. |
| work_keys_str_mv |
AT vorobiovagm antihsp60antitílauklíníčnozdorovihdonorívtanovonarodženihízkritičnoûvrodženoûvadoûsercââkimperelivalikomponentidonorsʹkoíkroví AT tkačenkoâv antihsp60antitílauklíníčnozdorovihdonorívtanovonarodženihízkritičnoûvrodženoûvadoûsercââkimperelivalikomponentidonorsʹkoíkroví AT âkovenkolf antihsp60antitílauklíníčnozdorovihdonorívtanovonarodženihízkritičnoûvrodženoûvadoûsercââkimperelivalikomponentidonorsʹkoíkroví AT kapustânlm antihsp60antitílauklíníčnozdorovihdonorívtanovonarodženihízkritičnoûvrodženoûvadoûsercââkimperelivalikomponentidonorsʹkoíkroví AT sidorikll antihsp60antitílauklíníčnozdorovihdonorívtanovonarodženihízkritičnoûvrodženoûvadoûsercââkimperelivalikomponentidonorsʹkoíkroví AT êmecʹím antihsp60antitílauklíníčnozdorovihdonorívtanovonarodženihízkritičnoûvrodženoûvadoûsercââkimperelivalikomponentidonorsʹkoíkroví AT vorobiovagm antihsp60antitelaukliničeskizdorovyhdonorovinovoroždennyhskritičeskimvroždennymporokomserdcakotorymperelivalikomponentydonorskoikrovi AT tkačenkoâv antihsp60antitelaukliničeskizdorovyhdonorovinovoroždennyhskritičeskimvroždennymporokomserdcakotorymperelivalikomponentydonorskoikrovi AT âkovenkolf antihsp60antitelaukliničeskizdorovyhdonorovinovoroždennyhskritičeskimvroždennymporokomserdcakotorymperelivalikomponentydonorskoikrovi AT kapustânlm antihsp60antitelaukliničeskizdorovyhdonorovinovoroždennyhskritičeskimvroždennymporokomserdcakotorymperelivalikomponentydonorskoikrovi AT sidorikll antihsp60antitelaukliničeskizdorovyhdonorovinovoroždennyhskritičeskimvroždennymporokomserdcakotorymperelivalikomponentydonorskoikrovi AT êmecʹím antihsp60antitelaukliničeskizdorovyhdonorovinovoroždennyhskritičeskimvroždennymporokomserdcakotorymperelivalikomponentydonorskoikrovi AT vorobiovagm antihsp60antibodiesinclinicallyhealthydonorsandnewbornswithcomplexcongenitalheartdefectafterdonorbloodcomponentstransfusion AT tkačenkoâv antihsp60antibodiesinclinicallyhealthydonorsandnewbornswithcomplexcongenitalheartdefectafterdonorbloodcomponentstransfusion AT âkovenkolf antihsp60antibodiesinclinicallyhealthydonorsandnewbornswithcomplexcongenitalheartdefectafterdonorbloodcomponentstransfusion AT kapustânlm antihsp60antibodiesinclinicallyhealthydonorsandnewbornswithcomplexcongenitalheartdefectafterdonorbloodcomponentstransfusion AT sidorikll antihsp60antibodiesinclinicallyhealthydonorsandnewbornswithcomplexcongenitalheartdefectafterdonorbloodcomponentstransfusion AT êmecʹím antihsp60antibodiesinclinicallyhealthydonorsandnewbornswithcomplexcongenitalheartdefectafterdonorbloodcomponentstransfusion |
| first_indexed |
2025-11-25T21:12:28Z |
| last_indexed |
2025-11-25T21:12:28Z |
| _version_ |
1850553872081223680 |
| fulltext |
оповiдi
НАЦIОНАЛЬНОЇ
АКАДЕМIЇ НАУК
УКРАЇНИ
6 • 2013
МЕДИЦИНА
УДК 612.179.2
Г.М. Воробйова, Я.В. Ткаченко, Л.Ф. Яковенко, Л. М. Капустян,
Л.Л. Сидорик, I.М. Ємець
Анти-Hsp60 антитiла у клiнiчно здорових донорiв
та новонароджених iз критичною вродженою вадою
серця, яким переливали компоненти донорської кровi
(Представлено членом-кореспондентом НАН України О. I. Корнелюком)
Встановлено, що плазма клiнiчно здорових донорiв може мати пiдвищений вмiст ан-
ти-Hsp60 антитiл. Вперше показано, що IgG антитiла, афiнно очищенi iз зразкiв ви-
сокореактивної до Hsp60 за результатами ELISA сироватки клiнiчно здорових донорiв,
розпiзнавали в сумарних лiзатах бiоптатiв правого передсердя новонароджених з транс-
позицiєю магiстральних судин (ТМС) бiлок з молекулярною масою близько 60 кДа. Вста-
новлено пряму кореляцiю мiж об’ємом перелитої донорської плазми i термiном перебу-
вання новонароджених з ТМС у стацiонарi (r = 0,54, p < 0,05) та сироватковим рiвнем
анти-Hsp60 антитiл у пiсляоперацiйний перiод (1-ша доба — r = 0,37; 3-тя доба —
r = 0,4; p < 0,05).
Heat shock proteins (HSP) — висококонсервативнi стресовi бiлки, якi однi iз перших синтезу-
ються пiд час гамето- та ембрiогенезу. Hsp60 є основним мiтохондрiальним шапероном, який
забезпечує правильний фолдинг мiтохондрiальних бiлкiв, а також присутнiй у цитоплазмi,
де виконує антиапоптичну функцiю [1]. Локалiзацiя Hsp60 на клiтиннiй мембранi асоцi-
йована з мембранним транспортом та сигнальними процесами. Hsp60 може вивiльнятися
в позаклiтинне середовище (у кардiомiоцитах — екзосомальним шляхом) [2]. Позаклiтин-
ний Hsp60 вiдiграє роль лiганду для Toll-подiбного рецептора 4 (TLR4) i розглядається як
можливий сигнал “небезпеки” для iмунної системи [3].
Показано, що iндукцiя Hsp60 у кардiомiоцитах помiрним стресом запобiгає негативним
наслiдкам дiї бiльш сильного стресу. Встановлено, що рiвень Hsp60 у кардiомiоцитах па-
цiєнтiв iз фiбриляцiєю передсердя достовiрно не вiдрiзняється вiд такого у пацiєнтiв кон-
трольної групи, проте у пацiєнтiв з помiрним, сильним та дуже сильно вираженим мiолi-
зисом вiн достовiрно нижчий порiвняно з пацiєнтами зi слабо вираженим мiолiзисом [4].
На клiтиннiй поверхнi кардiомiоцитiв Hsp60 експонується в пiдвищенiй кiлькостi пiсля дiї
будь-яких стресових факторiв, у тому числi при гiпоксiї та хiрургiчному втручаннi [5].
© Г.М. Воробйова, Я.В. Ткаченко, Л.Ф. Яковенко, Л.М. Капустян, Л.Л. Сидорик, I.М. Ємець, 2013
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2013, №6 169
Локалiзацiя Hsp60 на мембранi кардiомiоцитiв, а також його наявнiсть у позаклiтинному
просторi може являти потенцiйну мiшень для перехресно-реактивних антитiл до мiкробних
Hsp60. Такi антитiла можуть бути в донорськiй кровi, компоненти якої використовуються,
зокрема, при хiрургiчнiй корекцiї критичних вроджених вад серця (ВВС). Встановлено, що
перехресно-реактивнi антитiла до мiкробних Hsp60 здатнi опосередковувати комплемент-
залежну цитотоксичнiсть, зумовлювати лiзис або апоптоз клiтин, на поверхнi яких лока-
лiзований ендогенний Hsp60 [6]. Вони можуть утворювати iмуннi комплекси з ендогенним
Hsp60 (мембраноасоцiйованим та/або циркулюючим у плазмi). Такi iмуннi комплекси мо-
жуть зумовлювати активацiю комплементу, iндукувати продукцiю прозапальних цитокiнiв,
а також накопичуватись у органах, здiйснюючи патологiчний вплив на тканини [7]. Експе-
риментально показано, що моноклональнi анти-Hsp60 антитiла здатнi пiдсилювати запальнi
реакцiї, iндукованi Hsp60 (продукцiю фактору некрозу пухлин-α, iнтерлейкiну-8) [8]. Вста-
новлено зв’язок мiж наявнiстю в дооперацiйний перiод циркулюючих анти-Hsp65 антитiл
класу IgG у дорослих пацiєнтiв з операцiями на серцi та розвитком фiбриляцiї передсердя
у пiсляоперацiйний перiод [5].
Ми ставили за мету дослiдження рiвня анти-Hsp60 антитiл в сироватцi клiнiчно здо-
рових донорiв, а також новонароджених з критичною ВВС, яким пiд час хiрургiчної опе-
рацiї з використанням апарату штучного кровообiгу переливали компоненти донорської
кровi.
Матерiали та методи дослiджень. Обстежено 112 клiнiчно здорових донорiв вiком
вiд 20 до 48 рокiв, 20 клiнiчно здорових новонароджених та 60 новонароджених з критичною
ВВС — транспозицiєю магiстральних судин (ТМС), яким пiд час операцiї з використанням
апарату штучного кровообiгу переливали компоненти донорської кровi. Дозвiл на отри-
мання бiоптату правого передсердя новонароджених пiд час хiрургiчної корекцiї критичної
ВВС було схвалено етичною комiсiєю ДУ “Науково-практичний медичний центр дитячої
кардiологiї та кардiохiрургiї МОЗ України”.
Рiвень IgG анти-Hsp60 антитiл у сироватцi визначали ELISA з модифiкацiями [9]. Як
антиген використовували рекомбiнантний бiлок GroEl Escherihia coli (прокарiотний гомо-
лог Hsp60 людини). Одержання та очистку рекомбiнантного бiлка GroEl E. coli проводили
за розробленою методикою [10]. Як позитивний контроль використовували полiклональнi
антитiла до GroEl E. coli. Антитiлопозитивною вважали сироватку, оптична густина якої
у розведеннi 1 : 50 перевищувала середнє значення оптичної густини на два стандартних
вiдхилення (m+2sd). Усi дослiджуванi зразки сироватки було проскриновано на наявнiсть
анти-Hsp60 антитiл одночасно (5 вiдтворюваних повторiв), у роботi представлено резуль-
тати останньої постановки.
Очищення IgG антитiл iз зразкiв високореактивної до Hsp60 за результатами ELISA
сироватки клiнiчно здорових донорiв проводили методом афiнної хроматографiї на Protein
G-сефарозi.
Сумарний лiзат iз бiоптату правого передсердя мiокарда новонароджених з ТМС (n = 9)
отримували з використанням Ripa буферу (20 мМ трис-НСl, pH 7,5; 150 мМ NaСl; 1 мМ
ЕДТА; 1% NP-40; 1% дезоксихолат натрiю; 0,1% додецилсульфат натрiю; 0,1% SDS, 0,1%
розчин сумiшi iнгiбiторiв протеаз (“Sigma”, США), PMSF).
Електрофорез отриманих бiлкових препаратiв проводили у 12% ПААГ в денатуруючих
умовах за Леммлi.
Вестерн-блотинг (iмуноблотинг) проводили за стандартною методикою, використовува-
ли полiклональнi анти-GroEl антитiла та очищенi на Protein G-сефарозi IgG антитiла iз
170 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2013, №6
Рис. 1. Рiвень анти-Hsp60 антитiл у сироватцi клiнiчно здорових донорiв (iндивiдуальнi показники в зрос-
таючому порядку), визначений ELISA.
Анти-Hsp60-позитивною (штрихова лiнiя) вважали сироватку, оптична густина якої перевищувавла середнє
значення оптичної густини на два стандартних вiдхилення (m + 2sd). Суцiльна лiнiя — середнє значення
дослiджуваного показника (m)
зразкiв високореактивної до Hsp60 за результатами ELISA сироватки клiнiчно здорових
донорiв.
Статистичну обробку результатiв дослiджень здiйснювали за допомогою пакета програм
STATISTICA 8.0 (Stat-Soft, 2007, США). Результати подано у виглядi середнiх значень (m)
з вказiвкою на стандартне вiдхилення (sd). Для порiвняння вибiрок дослiджуваних груп
використовували U -критерiй Манна–Уiтнi (Mann-Whitney U -test), для порiвняння вибiрко-
вих часток — критерiй Фiшера.
Коефiцiєнт взаємного спряження визначали згiдно з [11].
Результати дослiджень та їх обговорення. У сироватцi усiх обстежених клiнiчно
здорових донорiв виявлено анти-Hsp60 антитiла (рис. 1). У 8,93% (10/112) донорiв сиро-
ватка була анти-Hsp60-позитивною (штрихова лiнiя), ще у 25% (28/112) дослiджуваний
показник перевищував середнє значення (суцiльна лiнiя).
Компоненти донорської кровi застосовували пiд час хiрургiчної корекцiї вади у новона-
роджених з ТМС, тому ми визначали рiвень анти-Hsp60 антитiл у даних пацiєнтiв у дина-
мiцi: до операцiї та на 1-шу, 3-тю, 7-му добу пiсля неї. За результатами проведених дослiд-
жень, у 67,5% пацiєнтiв сироватка була анти-Hsp60-негативною протягом всього перiоду
спостереження (I пiдгрупа), у 20% — анти-Hsp60-позитивною як до операцiї, так i в пiсляо-
перацiйний перiод (II пiдгрупа), у 12,5% — анти-Hsp60-позитивна сироватка детектувалася
лише в пiсляоперацiйний перiод (III пiдгрупа). Мiж зазначеними пiдгрупами не виявлено
статистично достовiрної рiзницi за середнiми значеннями клiнiчних показникiв (табл. 1).
За результатами частотного аналiзу, у реанiмацiї бiльше 144 год (6 дiб) перебувало: серед
новонароджених I пiдгрупи — 25,7%, II пiдгрупи — 50%, III пiдгрупи — 42,85% пацiєнтiв,
у стацiонарi бiльше 20 днiв пiсля операцiї — 12, 10 та 42,85% пацiєнтiв вiдповiдно, гiпер-
термiя в пiсляоперацiйний перiод спостерiгалася у 51,35, 88,9 та 100% пацiєнтiв, тривалiсть
антибiотикотерапiї понад 7 дiб мала мiсце у 19,35, 62,5 та 50% пацiєнтiв (p > 0,05). На
рис. 2 наведено графiчне зображення клiнiчних показникiв у формi порiвнюваних площин.
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2013, №6 171
Рис. 2. Графiчний аналiз за клiнiчними показниками пацiєнтiв з транспозицiєю магiстральних судин, яким
переливали компоненти донорської кровi. Клiнiчнi показники: 1 — термiн перебування пацiєнтiв у реанi-
мацiї бiльше 144 год; 2 — термiн перебування у стацiонарi бiльше 20 днiв пiсля операцiї; 3 — гiпертермiя
у пiсляоперацiйний перiод).
Пiдгрупи пацiєнтiв: I — анти-Hsp60-негативна сироватка до та пiсля операцiї; II — анти-Hsp60-позитивна
сироватка до та пiсля операцiї; III — анти-Hsp60-позитивна сироватка лише пiсля операцiї
Коефiцiєнт взаємного спряження гiпертермiї та наявностi анти-Hsp60-позитивної сироватки
в пiсляоперацiйний перiод становив K = 0,374. Виявлено пряму кореляцiю мiж об’ємом пе-
релитої донорської плазми та термiном перебування новонароджених з ТМС у стацiонарi
(r = 0,54, p < 0,05), а також мiж об’ємом перелитої донорської плазми та рiвнем анти-Hsp60
Таблиця 1. Клiнiчнi показники у новонароджених iз транспозицiєю магiстральних судин, яким пiд час
хiрургiчної операцiї переливали компоненти донорської кровi
Показник
I пiдгрупа,
антитiлонегативна
сироватка до
та пiсля операцiї
II пiдгрупа,
антитiлопозитивна
сироватка до
та пiсля операцiї
III пiдгрупа,
антитiлопозитивна
сироватка пiсля
операцiї
Норма
Термiн перебування 153,4 ± 66,40 204,1 ± 100,73 171,42 ± 52,18 —
в реанiмацiї, год
Термiн перебування 15,0± 6,14 15,0± 3,52 16,7 ± 5,5 —
в стацiонарi
пiсля операцiї, дiб
Тривалiсть 6,96± 4,94 9,5± 5,83 8,8 ± 2,28 —
антибiотикотерапiї, дiб
Швидкiсть осiдання 15,31 ± 11,59 13,0± 13,83 23,83 ± 18,17 1–20
еритроцитiв (8-ма доба),
мм/год
Iнтерлейкiн-8 40,86 ± 27,82 92,47 ± 84,34 86,76 ± 96,41 12,54 ± 3,8
(8-ма доба), пг/мл
172 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2013, №6
Рис. 3. Виявлення Hsp60 у cумарних лiзатах правого передсердя новонароджених з ТМС методом вес-
терн-блотингу.
1–9 — iндивiдуальнi сумарнi лiзати бiоптатiв правого передсердя новонароджених з ТМС;
а — вестерн-блотинг з використанням полiклональних анти-GroEl антитiл; б — вестерн-блотинг з вико-
ристанням IgG антитiл, афiнно очищених на Protein G сефарозi iз зразкiв високореактивної до Hsp60 (за
результатами ELISA) сироватки клiнiчно здорових донорiв
антитiл у новонароджених з ТМС (1-ша доба — r = 0,37; 3-тя доба — r = 0,4; p < 0,05). Тоб-
то чим бiльший об’єм донорської плазми переливали новонародженим з ТМС, тим довше
пацiєнти перебували в стацiонарi i тим вищим був сироватковий рiвень анти-Hsp60 антитiл
у пiсляоперацiйний перiод. Новонародженi III пiдгрупи мали ускладнення з боку дихальної
системи.
Iз зразкiв високореактивної до Hsp60 (за результатами ELISA) сироватки донорiв на
ProteinG сефарозi були почищенi IgG антитiла. Встановлено, що такi антитiла розпiзна-
вали в сумарних лiзатах правого передсердя новонароджених з ТМС бiлок з молекуляр-
ною масою близько 60 кДа, що вiдповiдає молекулярнiй масi дослiджуваного бiлка Hsp60
(рис. 3).
За даними лiтератури, анти-Hsp60 антитiла виявляються в сироватцi клiнiчно здоро-
вих осiб, їх вмiст широко варiює i з вiком рiвень анти-Hsp60 антитiл зростає [7, 12, 13]. На
сьогоднi не встановлено, який рiвень анти-Hsp60 антитiл у сироватцi слiд вважати нормою,
вiдкритим також залишається питання про специфiчнiсть анти-Hsp60 антитiл та їх авiднiсть
у клiнiчно здорових донорiв. Важливими завданнями є створення панелi добре охарактери-
зованих антигенiв для оцiнки спектра специфiчних анти-Hsp60 антитiл у сироватцi клiнiчно
здорових донорiв, а також стандартизацiя методу [7]. Аналiз даних лiтератури та результати
власних дослiджень дають можливiсть припустити, що у сироватцi кровi клiнiчно здорових
донорiв, найiмовiрнiше, представлено сукупнiсть анти-Hsp60 антитiл рiзної специфiчностi.
Це можуть бути антитiла до Hsp60 нормальної мiкрофлори шлункового тракту людини
або мiкроорганiзмiв, наявних у перидонтальних кишенях [7, 13]. Антитiла до Hsp60 люди-
ни можуть бути присутнiми в сироватцi клiнiчно здорових осiб i представляти природнi
(нормальнi) аутоантитiла (“natural autoantibody”) [13, 14]. Вважається, що такi аутоантитi-
ла вiдiграють важливу роль у регуляцiї аутоiмунних процесiв [14]. Проте їх вмiст у нормi
знаходиться на низькому рiвнi, до того ж, це переважно низькоафiннi антитiла класу IgM,
тодi як при патологiчних процесах найчастiше продукуються високоафiннi IgG аутоанти-
тiла в пiдвищених кiлькостях. Оскiльки Hsp60 є загальним iмунодомiнантним антигеном
рiзних патогенних мiкроорганiзмiв, якi спричинюють гострi або хронiчнi захворювання,
анти-Hsp60 антитiла можуть синтезуватися у вiдповiдь на такi мiкробнi патогени [13]. На
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2013, №6 173
думку деяких дослiдникiв [14], пiдвищений рiвень анти-Hsp60 антитiл є лише своєрiдним
“пiдписом” про наявнiсть у минулому iнфекцiйного захворювання. Iншi дослiдники вва-
жають, що високий рiвень анти-Hsp60 антитiл слiд розглядати як бiологiчний маркер не-
сприятливого стану органiзму, у тому числi наявностi хронiчного запалення, аутоiмунних
процесiв тощо [15].
Пiдвищений рiвень анти-Hsp60 антитiл виявляється при багатьох аутоiмунних захворю-
ваннях — артериїтi Такаяшу, полiартритi, гранулематозi Вегенера, системному червоному
вовчаку, ревматоїдному артритi, аутоiмунному гломерулонефритi, ювенiльному дермато-
мiозитi, псорiазi, при рiзних серцево-судинних патологiях (коронарних захворюваннях сер-
ця, iнфарктi мiокарда, iнсультi, гiпертензiї, рестенозi пiсля ангiопластики). Вважається,
що анти-Hsp60 антитiла є фактором ризику розвитку серцево-судинних (насамперед атеро-
склерозу) та церебральних захворювань [7]. Специфiчнiсть анти-Hsp60 антитiл та їх роль
у патогенезi захворювань залишається остаточно не визначеною.
За результатами проведених дослiджень, у 8,93% обстежених нами клiнiчно здорових
донорiв сироватка була анти-Hsp60-позитивною, ще 25% донорiв мали пiдвищений рiвень
анти-Hsp60 антитiл. Вiдкритими на сьогоднi залишаються питання, чи може пiдвищений
рiвень анти-Hsp60 антитiл у обстежених нами донорiв свiдчити про наявнiсть у них не
дiагностованих хронiчних бактерiальних iнфекцiй, патологiчних процесiв тощо, чи мо-
жуть циркулюючi у плазмi донорiв анти-Hsp60 антитiла бути цитотоксичними для кар-
дiомiоцитiв новонародженого, як вiдбувається нейтралiзацiя чужорiдних донорських ан-
титiл у органiзмi новонародженого i якi вiддаленi наслiдки буде мати переливання до-
норської плазми з пiдвищеним рiвнем анти-Hsp60 антитiл на органiзм новонародженого
з ТМС.
Таким чином, встановлено, що плазма клiнiчно здорових донорiв може мати пiдви-
щений вмiст анти-Hsp60 антитiл. Вперше показано, що IgG антитiла, афiнно очищенi iз
зразкiв високореактивної до Hsp60 за результатами ELISA сироватки клiнiчно здорових
донорiв, розпiзнавали в сумарних лiзатах бiоптатiв правого передсердя новонароджених
з ТМС бiлок з молекулярною масою близько 60 кДа. Виявлено пряму кореляцiю мiж
об’ємом перелитої донорської плазми та термiном перебування новонароджених з ТМС
у стацiонарi (r = 0,54, p < 0,05) та сироватковим рiвнем анти-Hsp60 антитiл у пiсляо-
перацiйний перiод (1-ша доба — r = 0,37; 3-тя доба — r = 0,4; p < 0,05). У всiх ново-
нарожених з ТМС, у яких пiсля операцiї детектувалася анти-Hsp60-позитивна сироватка,
спостерiгалася гiпертермiя в пiсляоперацiйний перiод, серед них був вищим процент па-
цiєнтiв, якi перебували в реанiмацiї бiльше 144 год, у стацiонарi — бiльше 20 дiб, курс
антибiотикотерапiї у яких перевищував 7 дiб, порiвняно з пацiєнтами, сироватка яких бу-
ла анти-Hsp60-негативною протягом всього перiоду спостереження (до та пiсля операцiї —
7 дiб).
1. Gupta S., Knowlton A. Cytosolic heat shock protein 60, hypoxia, and apoptosis // Circulation. – 2002. –
106. – P. 2727–2733.
2. Gupta S., Knowlton A. Hsp60 trafficking in adult cardiac myocytes: role of the exosomal pathway // Amer.
J. Physiol. Heart and Circulat. Physiol. – 2007. – 292, No 6. – P. 3052–3056.
3. Osterloh A., Meier-Stiegen F., Veit A. et al. Lipopolysaccharide-free heat shock protein 60 activates T
cells // J. Biol. Chem. – 2004. – 279. – P. 47906–47911.
4. Yang M., Tan H., Cheng L. et al. Expression of heat shock proteins in myocardium of patients with atrial
fibrillation // Cell Stress and Chaperones. – 2007. – 12, No 2. – P. 142–150.
5. Mandal K., Jahangiri M., Mukhin M. et al. Association of anti-heat shock protein 65 antibodies with
development of postoperative atrial fibrillation // Circulation. – 2004. – 110. – P. 2588–2590.
174 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2013, №6
6. Perschinka H., Mayr M., Millonig G. et al. Cross-reactive B-cell epitopes of microbial and human heat
shock protein 60/65 in atherosclerosis // Arteriscler. Thromb. Vasc. Biol. – 2003. – 23, No 6. – P. 1060–1065.
7. Cappello F., de Macario E., Di Felice V. et al. Chlamydya trachomatis infection and anti-Hsp60 immunity:
the two sides of the coin // Plos Pathogens. – 2009. – 5, No 8. – P. 1–9.
8. Yokota S., Minota S., Nobuhiro F. Anti-HSP auto-antibodies enhance HSP-induced pro-inflammatory
cytokine production in human monocytic cells via Toll-like receptors // Intern. Immun. – 2006. – 18. –
P. 573–580.
9. Ткаченко Я.В., Яковенко Л.Ф., Жовнiр В.А., Часовський К.С., Федевич О. М, Капустян Л.М.,
Саламанiна А.О., Воробйова Г.М., Сидорик Л.Л., Ємець I.М. Анти-Hsp60 антитiла у новонародже-
них зi складними вродженими вадами серця при застосуваннi компонентiв пуповинної та донорської
кровi // Вiсн. Київ. нац. ун-ту iм. Тараса Шевченка. – 2011. – 14. – С. 24–28.
10. Капустян Л.Н., Киямова Р. Г., Гришкова В.С., Терентьев А. Г., Филоненко В. В., Сидорик Л.Л.
Получение рекомбинантного шаперона GroEL и его иммунологическая кросс-реактивность с Hsp60 //
Biopolym. Cell. – 2006. – 22, № 2. – P. 117–121.
11. Урбах В.Ю. Математическая статистика для биологов и медиков. – Москва: Изд-во АН СССР, 1963. –
333 с.
12. Rea I., McNerlan S., Pockley A. Serum heat shock protein and anti-heat shock protein antibody levels in
aging // Exp. Gerontol. – 2001. – 36. – P. 341–346.
13. Uray K., Hudecz F., Fust G., Prohaszka Z. Comparative analysis of linear antibody epitopes on human
and mycobacterial 60-kDa heat shock proteins using samples of healthy blood donors // Int. Immunol. –
2003. – 15. – P. 1229–1236.
14. Varbiro Sz., Biro A., Cervenak J. et al. Human anti-60 kD heat shock protein autoantibodies are characteri-
zed by basic features of natural autoantibodies // Acta Physiol. Hungar. – 2010. – 97, No 1. – P. 1–10.
15. Wu T., Tanguay R. Antibodies against heat shock proteins in environmental stresses and diseases: friend
or foe? // Cell Stress Chaper. – 2006. – 11, No 1. – P. 1–12.
Надiйшло до редакцiї 29.11.2012ДУ “Науково-практичний медичний центр
дитячої кардiологiї та кардiохiрургiї
МОЗ України”, Київ
Iнститут молекулярної бiологiї i генетики
НАН України, Київ
А.М. Воробйова, Я. В. Ткаченко, Л.Ф. Яковенко, Л. М. Капустян,
Л.Л. Сидорик, И.М. Емец
Анти-Hsp60 антитела у клинически здоровых доноров
и новорожденных с критическим врожденным пороком сердца,
которым переливали компоненты донорской крови
Установлено, что плазма клинически здоровых доноров может иметь повышенное содер-
жание анти-Hsp60 антител. Впервые показано, что IgG антитела, афинно очищенные из
образцов высокореактивной к Hsp60 по результатам ELISA сыворотки клинически здоро-
вых доноров, узнавали в суммарных лизатах биоптатов правого предсердия новорожденных
с транспозицией магистральных сосудов (ТМС) белок с молекулярной массой около 60 кДа.
Установлена прямая корреляция между объемом перелитой донорской плазмы и термином
пребывания пациентов в стационаре (r = 0,54, p < 0,05), а также сывороточным уров-
нем анти-Hsp60 антител в послеоперационный период (1-е сутки — r = 0,37; 3-и сутки —
r = 0,4; p < 0,05).
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2013, №6 175
G. М. Vorobyova, Y.V. Tkachenko, L. F. Yakovenko, L. M. Kapustian,
L. L. Sidorik, I.M. Yemets
Anti-Hsp60 antibodies in clinically healthy donors and newborns with
complex congenital heart defect after donor blood components
transfusion
High level of anti-Hsp60 antibodies has been detected in the plasma of some clinically healthy donors.
It is shown firstly that affinely purified IgG antibodies from antibody-positive to Hsp60 sera of
clinically healthy donors are recognized by the 60 kDa protein band in cardiac bioptates total lysates
of neonates with TGV. The direct correlation between the volume of transfused donor plasma, the
term of patients hospital staying (r = 0.54, p < 0.05) and serum levels of anti-Hsp60 antibodies in
the postoperative period (1 day — r = 0.37; 3 days — r = 0.4; p < 0.05) has been established.
176 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2013, №6
|