Клонування та особливості клітинної локалізації калієвих каналів родини TPK із тютюну
Дослiджено особливостi клiтинної локалiзацiї двох калiєвих каналiв родини ТРК з рослин тютюну. Послiдовностi кДНК NtTPK1а та NtTPK1b було клоновано у вектори для створення злитих з EYFP химерних бiлкiв. Завдяки транзiєнтнiй трансформацiї протопластiв рослин NtTPK1а–EYFP та NtTPK1b–EYFP конструкцiя...
Saved in:
| Published in: | Доповіді НАН України |
|---|---|
| Date: | 2014 |
| Main Authors: | , |
| Format: | Article |
| Language: | Ukrainian |
| Published: |
Видавничий дім "Академперіодика" НАН України
2014
|
| Subjects: | |
| Online Access: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/88451 |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Journal Title: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Cite this: | Клонування та особливості клітинної локалізації калієвих каналів родини TPK із тютюну / С.В. Iсаєнков, Ф.Й.М. Маатхаус // Доповiдi Нацiональної академiї наук України. — 2014. — № 10. — С. 154-160. — Бібліогр.: 11 назв. — укр. |
Institution
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| _version_ | 1859602293293318144 |
|---|---|
| author | Ісаєнков, С.В. Маатхаус, Ф.Й.М. |
| author_facet | Ісаєнков, С.В. Маатхаус, Ф.Й.М. |
| citation_txt | Клонування та особливості клітинної локалізації калієвих каналів родини TPK із тютюну / С.В. Iсаєнков, Ф.Й.М. Маатхаус // Доповiдi Нацiональної академiї наук України. — 2014. — № 10. — С. 154-160. — Бібліогр.: 11 назв. — укр. |
| collection | DSpace DC |
| container_title | Доповіді НАН України |
| description | Дослiджено особливостi клiтинної локалiзацiї двох калiєвих каналiв родини ТРК з рослин тютюну. Послiдовностi кДНК NtTPK1а та NtTPK1b було клоновано у вектори
для створення злитих з EYFP химерних бiлкiв. Завдяки транзiєнтнiй трансформацiї
протопластiв рослин NtTPK1а–EYFP та NtTPK1b–EYFP конструкцiями було встановлено вiдмiнностi у клiтиннiй локалiзацiї NtTPK1а та NtTPK1b. Показано, що NtTPK1b
локалiзується у везикулярних структурах, що вiдрiзняються вiд “класичних” лiтичних вакуоль.
Исследованы особенности клеточной локализации двух калиевых каналов семейства ТРК
из растений табака. Последовательности кДНК NtTPK1а и NtTPK1b были клонированы в векторы для создания слитых с EYFP химерных белков. Благодаря транзиентной
трансформации протопластов растений NtTPK1а–EYFP и NtTPK1b–EYFP конструкциями были установлены отличия в клеточной локализации NtTPK1а и NtTPK1b. Показано,
что NtTPK1b локализируется в везикулярних структурах, которые отличаются от “классических” литических вакуолей.
The characters of the subcellular localization of two TPK potassium channels from Tobacco were
investigated. In order to create EYFP fusions, the cDNAs of NtTPK1а and NtTPK1b were cloned
into specific vectors. The transient transformation of plant protoplast by created constructs revealed
the differences in the subcellular localization for two TPK channels from tobacco. The localization
of NtTPK1b in vesicular structures that are different from “typical” lytic vacuoles was detected.
|
| first_indexed | 2025-11-28T00:59:49Z |
| format | Article |
| fulltext |
оповiдi
НАЦIОНАЛЬНОЇ
АКАДЕМIЇ НАУК
УКРАЇНИ
10 • 2014
БIОХIМIЯ
УДК 57.023 581.1
С.В. Iсаєнков, Ф.Й. М. Маатхаус
Клонування та особливостi клiтинної
локалiзацiї калiєвих каналiв родини TPK iз тютюну
(Представлено академiком НАН України Я.Б. Блюмом)
Дослiджено особливостi клiтинної локалiзацiї двох калiєвих каналiв родини ТРК з рос-
лин тютюну. Послiдовностi кДНК NtTPK1а та NtTPK1b було клоновано у вектори
для створення злитих з EYFP химерних бiлкiв. Завдяки транзiєнтнiй трансформацiї
протопластiв рослин NtTPK1а–EYFP та NtTPK1b–EYFP конструкцiями було встанов-
лено вiдмiнностi у клiтиннiй локалiзацiї NtTPK1а та NtTPK1b. Показано, що NtTPK1b
локалiзується у везикулярних структурах, що вiдрiзняються вiд “класичних” лiтичних
вакуоль.
ТРК канали рослин вiдiграють важливу роль у широкому спектрi клiтинних та фiзiоло-
гiчних процесiв рослин. Вони є важливими регуляторами гомеостазу калiю, тургорного
тиску. ТРК канали беруть участь при формуваннi вiдповiдi на дiю рiзноманiтних типiв
абiотичного стресу [1]. Селективнi по калiю канали родини TPK були знайденi в геномах
багатьох видiв рослин, а саме арабiдопсису, рису, евкалiпту, тополi, ячменю та iн. [1]. За
винятком однопорового AtKCO3, усi iншi вiдомi калiєвi канали мають два порових домени
з характерною для них послiдовнiстю GYGD, що вiдповiдає за селективнiсть по калiю та
належать до родини ТРК (Two pore potassium channels) [1, 2]. Пiзнiше було показано, що
навiть однопоровий AtKCO3 формує функцiональнi димери [3]. Усi канали родини ТРК
є мембранними протеїнами та мають чотири трансмембранних домени. Завдяки наявностi
EF-доменiв у C-термiналi в бiльшостi представникiв ТРК каналiв, цi бiлки можуть регулю-
ватись iонами кальцiю. Бiльшiсть представникiв каналiв родини ТРК мають вакуолярну
локалiзацiю. Наприклад, найбiльш вивчений представник AtTPK1 з арабiдопсису є чутли-
вим до концентрацiї кальцiю в цитозолi та pH i локалiзований у тонопластi великих лi-
тичних вакуоль. Крiм AtTPK1 подiбний характер клiтинної локалiзацiї спостерiгався i для
iнших представникiв родини ТРК, зокрема було показано, що AtTPK2 та AtTPK5 також
локалiзованi в мембранi лiтичних вакуоль [4, 5].
На вiдмiну вiд “класичної” локалiзацiї в тонопластi центральної вакуолi, деякi пред-
ставники ТРК каналiв локалiзуються на мембранах iнших типiв. Зокрема, AtTPK4 з ара-
© С.В. Iсаєнков, Ф.Й.М. Маатхаус, 2014
154 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2014, №10
Рис. 1. Порiвняльний аналiз амiнокислотних послiдовностей двох iзоформ ТРК каналiв тютюну iз AtTPK1
арабiдопсису
бiдопсису локалiзується в плазматичнiй мембранi [6], а AtTPK3 — у тилакоїдах хлороплас-
тiв [3]. ТРК-канали рису (OsTPKa та OsTPKb) мають рiзну вакуолярну спецiалiзацiю.
OsTPKa локалiзується в тонопластi лiтичної вакуолi, а тонопласт протеїнових вакуоль мiс-
тить OsTPKb [1, 7].
У рослин тютюну виявлено два представники родини каналiв ТРК, i обидва вони отри-
мали назву NtTPK1 [8, 9]. Для полегшення та запобiгання непорозумiнню в подальшому ми
називатимемо цi канали NtTPK1а (GenBank accession № EU161633) та NtTPK1b (GenBank
accession № AB353341). Функцiї, клiтинна локалiзацiя та фiзiологiчна роль цих каналiв за-
лишаються майже не вивченими. NtTPK1а було знайдено завдяки пошуку гомологiв ТРК
каналiв iз бази даних EST — послiдовностей BY-2 клiтин та RACE-ПЛР [8]. Шляхом бiо-
iнформацiйного пошуку встановлено послiдовнiсть завдовжки 684 пар нуклеотидiв, гомо-
логiчну до AtTPK2. Повна послiдовнiсть NtTPK1а була з’ясована завдяки застосуванню
RACE-ПЛР. За своєю послiдовнiстю NtTPK1а є бiльш подiбним до AtTPK5 та AtTPK3 iз
арабiдопсису (рис. 1). Цiкавим фактом є те, що другий поровий мотив NtTPK1а може мати
вiдмiнностi в канонiчнiй послiдовностi GYGD, а саме варiацiї VHGD чи GHGD [8]. Актив-
нiсть NtTPK1а є чутливою до дiї спермiдину та спермiну. Рiвень транскриптiв NtTPK1а пiд-
вищується при дiї сольового стресу чи осмотичного шоку [8]. Iснує припущення, що NtTPK1а
може брати участь у регуляцiї вiдповiдi на гiперосмотичний шок [8]. Крiм того, було показа-
но, що рекомбiнантний NtTPK1а локалiзується в тонопластi вакуоль дрiжджiв. А бiлок, ген
якого експресований пiд контролем 35S промотору, був iдентифiкований у фракцiї бiлкiв
тонопласта [8]. Це вказує на тонопластну локалiзацiю цього протеїну.
Клiтинна локалiзацiя iншого представника цiєї родини в тютюнi — NtTPK1b залишаєть-
ся невiдомою. Функцiї цього каналу, iдентифiкованого з рослин тютюну завдяки застосу-
ванню ПЛР з дегенеративними праймерами, також невiдомi [9]. Проте було показано, що
рiвень транскриптiв NtTPK1b збiльшується протягом клiтинного подiлу та зменшується за
умови дефiциту ауксинiв [9].
Метою нашого дослiдження було клонування ТРК каналiв тютюну, злитих iз флуоре-
сцентним бiлком EYFP, та з’ясування їх клiтинної локалiзацiї за допомогою конфокальної
мiкроскопiї.
Матерiали i методи. кДНК для NtTPK1a та NtTPK1b були отриманi шляхом ПЛР iз
зворотною транскрипцiєю iз загальної РНК рослин тютюну. Кодуючi послiдовностi повної
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2014, №10 155
довжини NtTPK1a та NtTPK1b без стоп-кодону були амплiфiкованi за ПЛР iз застосу-
ванням специфiчних праймерiв, що мiстили вiдповiднi сайти рестрикцiї. Для амплiфiкацiї
повної кодуючої послiдовностi NtTPK1a використовували таку пару праймерiв:
NtTPK1aEcoRI_for gcсaattcatggagaaagagcctcttct,
NtTPK1aSmaI_rev gccccgggatggtggtggctttccattagatc.
Для амплiфiкацiї кодуючої послiдовностi NtTPKb було застосовано iншу пару прай-
мерiв:
NtTPK1bXhoI_for gcctcgagatggcagacagcaacataaa,
NtTPK1bSmaI_rev gccccgggagatgattgagcaagtgtca.
ПЛР проводили, використовуючи 20 нг кДНК, в об’ємi 50 мкл, що мiстила 1xPhusion HF
ПЛР буфер, 200 мкМ дНТП сумiшi, 3% ДМСО та 1 мкл Phusion polymerase (“Finnzymes”,
Фiнляндiя). Програма ПЛР амплiфiкацiї мала такi параметри: 98 ◦C 30 c; 36 циклiв: 98 ◦C
10 с, 72 ◦C 30 с; 72 ◦C 10 хв. Амплiфiкованi за допомогою ПЛР NtTPK1 -фрагменти повної
довжини були клонованi у вектор pART7-EYFP [7] за допомогою рестрикцiї ферментами
EcoRI та SmaI для NtTPK1a i XhoI та SmaI для NtTPK1b (NEB, Великобританiя) та лi-
гування T4-ДНК лiгазою (NEB). Клонування AtTPK1-EYFP та OsTPKb-EYFP описано
в наших попереднiх роботах [5, 7]. Протопласти з коренiв арабiдопсису були iзольованi та
трансформованi конструкцiями pART7-NtTPK1a/NtTPK1b-EYFP вiдповiдно до методики,
описаної в роботi [7]. Аналiз флуоресценцiї репортерних EYFP протеїнiв, злитих iз NtTPK1a
чи NtTPK1b, проводили за допомогою конфокальної скануючої мiкроскопiї (Zeiss LSM510
Meta). Перевiрку флуоресценцiї EYFP протеїну виконували за допомогою лямбда-моду мiк-
роскопа. Сигнали спектрально роздiляли за допомогою заздалегiдь прописаних i збереже-
них спектрiв автофлуоресценцiї та EYFP. Флуоресценцiю EYFP у протопластах арабiдоп-
сису перевiряли через 18 год пiсля трансформацiї. Загалом вiд 30 до 50 протопластiв ана-
лiзували щодо флуоресценцiї та клiтинної локалiзацiї. Трансформацiю та мiкроскопiчний
аналiз протопластiв повторювали тричi.
Результати та їх обговорення. У результатi проведення ПЛР були отриманi кодую-
чi послiдовностi вiдповiдних NtTPK1 калiєвих каналiв (див. рис. 1). Попри невизначенiсть
рослинних тканин, в яких гени, що кодують цi канали, мають найвищий рiвень експресiї,
застосування загальної РНК iз молодих рослин тютюну для синтезу та амплiфiкацiї кДНК
вiдповiдних генiв цих каналiв було успiшним. Цiлком ймовiрно, що гени цих каналiв є до-
сить активними в клiтинах бiльшостi типiв тканин тютюну. Незважаючи на такий характер
експресiї генiв вищезазначених каналiв, цi бiлки iстотно вiдрiзняються за своєю амiнокис-
лотною послiдовнiстю i цiлком ймовiрно, що їх клiтиннi та фiзiологiчнi функцiї є рiзними
(рис. 2). Функцiональнi характеристики та особливостi клiтинної локалiзацiї NtTPK1а ще
недостатньо вивченi. На вiдмiну вiд NtTPK1а, роль NtTPK1b у пiдтримуваннi калiєвого
гомеостазу рослини, клiтинна локалiзацiя, профiль експресiї та електрофiзiологiчнi харак-
теристики нiколи не вивчалися i залишаються невiдомими. Тому подальшi дослiдження
ролi та функцiй цього каналу є вкрай необхiдними.
Ранiше вже було показано, що бiльшiсть представникiв ТРК каналiв iз арабiдопсису
та рису (AtTPK1, AtTPK2, AtTPK5 та OsTPKa) локалiзованi в тонопластi лiтичних ва-
куоль [4, 7, 10]. Для того щоб зрозумiти потенцiйну роль ТРК каналiв у клiтинах тютюну,
було отримано та клоновано двi iзоформи ТРК, функцiї яких та клiтинна локалiзацiя оста-
точно ще не визначенi. Двi повнi послiдовностi, що кодують NtTPK1а та NtTPK1b, були
амплiфiкованi та вставленi в плазмiдну конструкцiю для транзiєнтної експресiї химерного
злитого EYFP бiлка. Створенi ДНК конструкцiї NtTPK1а–EYFP та NtTPK1b–EYFP ви-
156 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2014, №10
Рис. 2. Результати амплiфiкацiї повних кодуючих послiдовностей NtTPK1a/NtTPK1b iз кДНК загальної
РНК рослин тютюну
Рис. 3. Клiтинна локалiзацiя NtTPK1a порiвняно iз AtTPK1 у протопластах арабiдопсису.
а — EYFP-флуоресценцiя в протопластах арабiдопсису, що були трансформованi плазмiдними констру-
кцiями NtTPK1a/AtTPK1–EYFP, спостерiгається в центральних лiтичних вакуолях (ЛВ). AtTPK1–EYFP
є специфiчним маркером лiтичних вакуоль.
б — розподiл флуоресценцiї NtTPK1a та AtTPK1-залежної флуоресценцiї в рiзних частинах протопласта, що
був трансформований NtTPK1a/AtTPK1–EYFP плазмiдними конструкцiями. Пiдрахунок розподiлу флуо-
ресценцiї по органелах проводили для трьох незалежних подiй трансформацiї протопластiв
користовували для трансформацiї протопластiв арабiдопсису. У ходi аналiзу протопластiв
трансформованих NtTPK1а–EYFP було виявлено, що EYFP-флуоресценцiя спостерiгається
по периметру великої лiтичної вакуолi i за характером вона подiбна до флуоресценцiї про-
топластiв трансформованих AtTPK1–EYFP (рис. 3). Залишковий незначний рiвень флуо-
ресценцiї вiдмiчений i в ЕР, але бiльшiсть химерного злитого NtTPK1а–EYFP виявлено
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2014, №10 157
Рис. 4. Клiтинна локалiзацiя NtTPK1b порiвняно iз OsTPKb у протопластах арабiдопсису.
а — EYFP-флуоресценцiя в протопластах арабiдопсису, що були трансформованi плазмiдними конструкцiя-
ми NtTPK1b/OsTPKb–EYFP, спостерiгається в малих везикулярних утвореннях, подiбних до протеїнових
вакуоль. OsTPKb–EYFP є специфiчним маркером протеїнових вакуоль.
б — розподiл флуоресценцiї NtTPK1b та OsTPKb-залежної флуоресценцiї в рiзних частинах протоплас-
та, що був трансформований NtTPK1b/OsTPKb–EYFP плазмiдними конструкцiями. Пiдрахунок розподiлу
флуоресценцiї по органелах проводили для трьох незалежних подiй трансформацiї протопластiв
в тонопластi лiтичних вакуоль. Слiд зауважити, що AtTPK1 iз арбiдопсису локалiзується
в тонопластi лiтичних вакуоль [4, 5]. Подiбнiсть до AtTPK1–EYFP в клiтиннiй локалiзацiї
химерного бiлка NtTPK1а–EYFP вказує на те, що NtTPK1а належить до системи тоноплас-
та лiтичної вакуолi. Бiльш того, нашi данi пiдтверджують ранiше висунуте припущення,
що цей iонний канал локалiзується на мембранi лiтичних вакуоль, бо саме вiн був iзольо-
ваний iз фракцiї бiлкiв тонопласта [8]. Експресiя NtTPK1а у дрiжджових клiтинах також
пiдтверджує вакуолярну локалiзацiю цього каналу [8]. Зазначимо, що вакуоль дрiжджових
клiтин та лiзосоми тваринних клiтин є аналогами лiтичної вакуолi в рослинi. Всi цi клiтиннi
органели мають кисле pH та вiдiграють лiтичну функцiю [11].
При трансформацiї протопластiв химерним бiлком NtTPK1b-EYFP вiдмiчалася зовсiм
iнша картина порiвняно з NtTPK1а–EYFP (рис. 4). Флуоресценцiя химерного NtTPK1b–
EYFP спостерiгалась у малих везикулярних структурах, що iнодi дуже важко видiлити при
аналiзi протопластiв при видимому свiтлi, але при застосуваннi флуоресцентного свiтла цi
структури демонструють чiтку i сильну флуоресценцiю (див. рис. 3). Подiбний характер
клiтинної локалiзацiї був показаний для протопластiв рослин, що були трансформованi ге-
ном злитого бiлка OsTPKb–EYFP [7]. Вiдомо, що OsTPKb є бiлковим маркером тонопласта
бiлкових вакуоль, якi є унiкальними структурами рослинних клiтин. Цiлком ймовiрно, що
NtTPK1b має локалiзацiю в тонопластi бiлкової вакуолi. Можливо, що саме NtTPK1b ви-
конує функцiї калiєвого каналу в бiлкових вакуолях клiтин тютюну.
158 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2014, №10
Таким чином, нашi данi свiдчать про те, що двi iзоформи ТРК каналiв iз тютюну, а са-
ме NtTPK1а та NtTPK1b мають рiзну клiтинну локалiзацiю. Порiвнюючи клiтиннi профiлi
флуоресценцiї цих химерних бiлкiв, злитих iз EYFP, з великою часткою вiрогiдностi мож-
на допустити, що цi два калiєвi канали тютюну мають рiзну вакуолярну спецiалiзацiю.
Слiд зазначити, що отриманi данi щодо вакуолярної локалiзацiї NtTPK1а пiдтверджують
припущення про те, що цей канал, як бiльшiсть ТРК каналiв iнших рослин, локалiзується
в тонопластi лiтичної вакуолi.
Майже зовсiм не вивченими залишаються клiтиннi та фiзiологiчнi функцiї NtTPK1b.
Згiдно з отриманими нами даними, скорiше за все цей канал локалiзується в малих вези-
кулярних структурах. Є велика частка вiрогiдностi, що саме цей канал є специфiчним для
мембрани бiлкових вакуоль. Зважаючи на вищесказане дослiдження клiтинної локалiзацiї
потрiбно продовжувати. Необхiдно, по-перше, визначити реакцiю pH цих малих везику-
лярних утворень, по-друге, провести дослiдження iз колокалiзацiї цього каналу з iншими
маркерними бiлками для окремих клiтинних структур, по-третє, з’ясувати його фiзiологiч-
ну роль та електрофiзiологiчнi характеристики. Вiдомо, що цей калiєвий канал задiяний
у клiтинному подiлi, але, на наш погляд, його роль у клiтинi та рослинi в цiлому може
бути набагато ширшою.
Нашi данi свiдчать про те, що попри велику спорiдненiсть цих каналiв до AtTPK1 [1],
NtTPK1а та NtTPK1b мають рiзну субклiтинну локалiзацiю, NtTPK1b накопичується у ве-
зикулярних структурах, вiдмiнних вiд “класичних” лiтичних вакуоль.
1. Isayenkov S., Isner J. C., Maathuis F. J.M. Membrane localisation diversity of TPK channels and their
physiological role // Plant Signal. Behav. – 2011. – 6. – P. 1201–1205.
2. Isayenkov S., Isner J. C., Maathuis F. J.M. Plant vacuolar ion channels // FEBS Lett. – 2010. – 584. –
P. 1982. – 1988.
3. Carraretto L., Formentin E., Teardo E. et al. Thylakoid-Located Two-Pore K+ Channel Controls Photosyn-
thetic Light Utilization in Plants // Science. – 2013. – 342. – P. 114–118.
4. Voelker C., Schmidt D., Mueller-Roeber B., Czempinski K. Members of the Arabidopsis AtTPK/KCO
family form homomeric vacuolar channels in planta // Plant J. – 2006. – 48. – P. 296–306.
5. Gobert A., Isayenkov S., Voelker C., Czempinski K., Maathuis F. J.M. The two-pore channel TPK1 gene
encodes the vacuolar K+ conductance and plays a role in K+ homeostasis // Proc Natl. Acad. Sci. USA. –
2007. – 104. – P. 10726–10731.
6. Becker D., Geiger D., Dunkel M. et al. AtTPK4, an Arabidopsis tandem-pore K+ channel, poised to
control the pollen membrane voltage in a pH- and Ca2+-dependent manner // Ibid. – 2004. – 101. –
P. 15621–15626.
7. Isayenkov S., Isner J. C., Maathuis F. J.M. Rice two-pore K+ channels are expressed in different types of
vacuoles // Plant Cell. – 2011. – 23. – P. 756–768.
8. Hamamoto S., Marui J., Matsuoka K. et al. Characterization of a tobacco TPK-type K+ channel as a
novel tonoplast K+ channel using yeast tonoplasts // J. Biol. Chem. – 2008. – 283. – P. 1911. – 1920.
9. Sano T., Kutsuna N., Becker D. et al. Outward-rectifying K+ channel activities regulate cell elongation
and cell division of tobacco BY-2 cells // Plant J. – 2009. – 57. – P. 55–64.
10. Latz A., Becker D., Hekman M. et al. TPK1, a Ca(2+)-regulated Arabidopsis vacuole two-pore K(+)
channel is activated by 14–3–3 proteins // Plant J. – 2007. – 52. – P. 449–459.
11. Iсаєнков С.В. Особливостi органельного розпiзнавання, везикулярного транспорту та фiзiологiчна
роль рослинних вакуоль // Цитология и генетика. – 2014. – 48. – P. 71–82.
Надiйшло до редакцiї 11.06.2014ДУ “Iнститут харчової бiотехнологiї
та геномiки” НАН України, Київ
Унiверситет м. Йорк, Великобританiя
ISSN 1025-6415 Доповiдi Нацiональної академiї наук України, 2014, №10 159
С.В. Исаєнков, Ф. Й.М. Маатхаус
Клонирование и особенности клеточной локализации калиевих
каналов семейства TPK из табака
Исследованы особенности клеточной локализации двух калиевых каналов семейства ТРК
из растений табака. Последовательности кДНК NtTPK1а и NtTPK1b были клонирова-
ны в векторы для создания слитых с EYFP химерных белков. Благодаря транзиентной
трансформации протопластов растений NtTPK1а–EYFP и NtTPK1b–EYFP конструкция-
ми были установлены отличия в клеточной локализации NtTPK1а и NtTPK1b. Показано,
что NtTPK1b локализируется в везикулярних структурах, которые отличаются от “клас-
сических” литических вакуолей.
S.V. Isayenkov, F. J. M. Maathuis
The cloning and peculiarities of the cellular localization of tobacco TPK
potassium channels
The characters of the subcellular localization of two TPK potassium channels from Tobacco were
investigated. In order to create EYFP fusions, the cDNAs of NtTPK1а and NtTPK1b were cloned
into specific vectors. The transient transformation of plant protoplast by created constructs revealed
the differences in the subcellular localization for two TPK channels from tobacco. The localization
of NtTPK1b in vesicular structures that are different from “typical” lytic vacuoles was detected.
160 ISSN 1025-6415 Reports of the National Academy of Sciences of Ukraine, 2014, №10
|
| id | nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-88451 |
| institution | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| issn | 1025-6415 |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2025-11-28T00:59:49Z |
| publishDate | 2014 |
| publisher | Видавничий дім "Академперіодика" НАН України |
| record_format | dspace |
| spelling | Ісаєнков, С.В. Маатхаус, Ф.Й.М. 2015-11-14T15:53:34Z 2015-11-14T15:53:34Z 2014 Клонування та особливості клітинної локалізації калієвих каналів родини TPK із тютюну / С.В. Iсаєнков, Ф.Й.М. Маатхаус // Доповiдi Нацiональної академiї наук України. — 2014. — № 10. — С. 154-160. — Бібліогр.: 11 назв. — укр. 1025-6415 https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/88451 57.023 581.1 Дослiджено особливостi клiтинної локалiзацiї двох калiєвих каналiв родини ТРК з рослин тютюну. Послiдовностi кДНК NtTPK1а та NtTPK1b було клоновано у вектори для створення злитих з EYFP химерних бiлкiв. Завдяки транзiєнтнiй трансформацiї протопластiв рослин NtTPK1а–EYFP та NtTPK1b–EYFP конструкцiями було встановлено вiдмiнностi у клiтиннiй локалiзацiї NtTPK1а та NtTPK1b. Показано, що NtTPK1b локалiзується у везикулярних структурах, що вiдрiзняються вiд “класичних” лiтичних вакуоль. Исследованы особенности клеточной локализации двух калиевых каналов семейства ТРК из растений табака. Последовательности кДНК NtTPK1а и NtTPK1b были клонированы в векторы для создания слитых с EYFP химерных белков. Благодаря транзиентной трансформации протопластов растений NtTPK1а–EYFP и NtTPK1b–EYFP конструкциями были установлены отличия в клеточной локализации NtTPK1а и NtTPK1b. Показано, что NtTPK1b локализируется в везикулярних структурах, которые отличаются от “классических” литических вакуолей. The characters of the subcellular localization of two TPK potassium channels from Tobacco were investigated. In order to create EYFP fusions, the cDNAs of NtTPK1а and NtTPK1b were cloned into specific vectors. The transient transformation of plant protoplast by created constructs revealed the differences in the subcellular localization for two TPK channels from tobacco. The localization of NtTPK1b in vesicular structures that are different from “typical” lytic vacuoles was detected. uk Видавничий дім "Академперіодика" НАН України Доповіді НАН України Біохімія Клонування та особливості клітинної локалізації калієвих каналів родини TPK із тютюну Клонирование и особенности клеточной локализации калиевих каналов семейства TPK из табака The cloning and peculiarities of the cellular localization of tobacco TPK potassium channels Article published earlier |
| spellingShingle | Клонування та особливості клітинної локалізації калієвих каналів родини TPK із тютюну Ісаєнков, С.В. Маатхаус, Ф.Й.М. Біохімія |
| title | Клонування та особливості клітинної локалізації калієвих каналів родини TPK із тютюну |
| title_alt | Клонирование и особенности клеточной локализации калиевих каналов семейства TPK из табака The cloning and peculiarities of the cellular localization of tobacco TPK potassium channels |
| title_full | Клонування та особливості клітинної локалізації калієвих каналів родини TPK із тютюну |
| title_fullStr | Клонування та особливості клітинної локалізації калієвих каналів родини TPK із тютюну |
| title_full_unstemmed | Клонування та особливості клітинної локалізації калієвих каналів родини TPK із тютюну |
| title_short | Клонування та особливості клітинної локалізації калієвих каналів родини TPK із тютюну |
| title_sort | клонування та особливості клітинної локалізації калієвих каналів родини tpk із тютюну |
| topic | Біохімія |
| topic_facet | Біохімія |
| url | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/88451 |
| work_keys_str_mv | AT ísaênkovsv klonuvannâtaosoblivostíklítinnoílokalízacííkalíêvihkanalívrodinitpkíztûtûnu AT maathausfim klonuvannâtaosoblivostíklítinnoílokalízacííkalíêvihkanalívrodinitpkíztûtûnu AT ísaênkovsv klonirovanieiosobennostikletočnoilokalizaciikalievihkanalovsemeistvatpkiztabaka AT maathausfim klonirovanieiosobennostikletočnoilokalizaciikalievihkanalovsemeistvatpkiztabaka AT ísaênkovsv thecloningandpeculiaritiesofthecellularlocalizationoftobaccotpkpotassiumchannels AT maathausfim thecloningandpeculiaritiesofthecellularlocalizationoftobaccotpkpotassiumchannels |