МЕТОД ОТРИМАННЯ ОЧИЩЕНИХ ПРЕПАРАТІВ ВІРУСІВ РОСЛИН
It has been proposed the method for the concentration and final purifying of plant viruses from cleared virus suspension. This method includes the virus electpophoretic precipitation through the sucrose pillow on the polyacrylamide gel layer. It may use in addition to the chromatographically and sed...
Збережено в:
| Дата: | 2006 |
|---|---|
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | Українська |
| Опубліковано: |
Institute of Agrocultural Microbiology and Agro-industrial Manufacture of NAAS of Ukraine
2006
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://smic.in.ua/index.php/journal/article/view/484 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Agriciltural microbiology |
| Завантажити файл: |  |
Репозитарії
Agriciltural microbiology| _version_ | 1871466276192256000 |
|---|---|
| author | Мамчур , О.Є. Дмитрук , О.О. Коломiєць , Л.П. Зарицький , М.М. |
| author_facet | Мамчур , О.Є. Дмитрук , О.О. Коломiєць , Л.П. Зарицький , М.М. |
| author_institution_txt_mv | [
{
"author": "О.Є. Мамчур ",
"institution": "Інститут сільськогосподарської мікробіології та агропромислового виробництва НААН"
},
{
"author": "О.О. Дмитрук ",
"institution": "Інститут сільськогосподарської мікробіології та агропромислового виробництва НААН"
},
{
"author": "Л.П. Коломiєць ",
"institution": "Інститут сільськогосподарської мікробіології та агропромислового виробництва НААН"
},
{
"author": "М.М. Зарицький ",
"institution": "Інститут сільськогосподарської мікробіології та агропромислового виробництва НААН"
}
] |
| author_sort | Мамчур , О.Є. |
| baseUrl_str | https://smic.in.ua/index.php/journal/oai |
| collection | OJS |
| datestamp_date | 2026-07-22T10:10:51Z |
| description | It has been proposed the method for the concentration and final purifying of plant viruses from cleared virus suspension. This method includes the virus electpophoretic precipitation through the sucrose pillow on the polyacrylamide gel layer. It may use in addition to the chromatographically and sedimentatical methods and independently in the individual cases. |
| doi_str_mv | 10.35868/1997-3004.3.165-170 |
| first_indexed | 2025-07-17T12:26:35Z |
| format | Article |
| fulltext |
164 165
МЕТОДИ
УДК 578.083
МЕТОД ОТРИМАННЯ ОЧИЩЕНИХ ПРЕПАРАТІВ ВІРУСІВ
РОСЛИН
Мамчур О.Є., Дмитрук О.О., Коломiєць Л.П.,
Зарицький М.М.
Інститут сільськогосподарської мікробіології УААН
вул. Шевченка, 97, Чернігів, 14027, Україна
Пропонується метод концентрування та остаточного очищення
вiрусiв рослин з освітленої вірусної суспензії шляхом електрофоре-
тичного осадження через сахарозну подушку на полiакриламiдний
гель. Метод може використовуватись на доповнювнення хрома-
тографiчних та седиментацiйних методів, а в окремих випадках
і самостійно.
Ключові слова: електрофорез, сахарозна подушка, полiакриламiд-
ний гель, вiрусний антиген.
Осадження вiрусiв є одним з важливих етапiв їх видiлення та от-
римання очищених препаратів. Вiдомо багато методiв осадження
фiтопатогенних вiрусiв, в основi яких лежить фiзичний та хiмiч-
ний вплив на суспензiю, що мiстить вiрус [3]. Вибiр конкретного
методу залежить вiд властивостей вiрусу, а також наявностi вiдпо-
вiдного обладнання та реактивiв. В умовах серiйного виробництва
дiагностичних сироваток доступнiсть та економiчнiсть методiв
набуває особливого значення, оскiльки собiвартiсть вiрусних анти-
генiв впливає на цiну, а, отже, i на конкурентоздатнiсть кiнцевої
продукцiї.
Електрофоретичне осадження використовується в промис-
ловостi при нанесеннi захисного композиційного покриття на
металеві вироби. Для надання полiмерним молекулам необхiдного
позитивного заряду їх ацетоновi розчини змiшують з водними роз-
чинами детергентiв та гальванiчних електролiтiв з iонами металу i
диспергують за допомогою ультразвуку. При пропусканні постiй-
ного електричного струму через таку емульсiю на катодi утворю-
ються композицiйнi покриття [1].
Частково очищений вiрусний препарат являє собою водну
суспензiю вiрусних часток та компонентiв рослинних клiтин, звiль-
166 167
нену вiд дейтритних домiшок [5]. З електрофiзичної точки зору
така суспензiя подiбна до згаданої вище емульсiї, вiдрiзняючись
вiд неї за ступенем дисперсностi, величиною та концентрацiєю за-
ряджених часток.
Значення ізоелектричної точки бiльшостi фiтопатогенних
вiрусiв перебувають у кислiй зонi рН. Отже, в нейтральному або
слаболужному середовищi їх віріони мають виражений негативний
заряд i в електричному полi рухаються в бік аноду, що уможливлює
використання електрофоретичних методiв [6]. Однак через склад-
нiсть їх застосування та погану вiдтворюванiсть результатiв цi ме-
тоди використовуються рiдко.
В Інститутi сiльськогосподарської мiкробiологiї УААН роз-
роблено простий пристрiй для препаративного електрофорезу бiл-
кiв у гранульованому середовищi [7]. Внаслідок мiнiмальних змiн у
конструкцiї цей пристрiй пристосовано нами до роботи з частково
очищеними вiрусними препаратами, зокрема, для електрофоретич-
ного осадження вiрусів рослин з освітлених рослинних екстрактів.
Осаджувати вiруснi частки безпосередньо на анодi неможливо че-
рез видiлення на ньому iонiв водню та молекулярного кисню, здат-
них iнактивувати вiрус. Крiм того, при прямому осадженнi разом
з вiрусними частками осаджуватимутися всi негативно зарядженi
домiшки незалежно вiд їх величини. Тому осадження доцiльно
проводити на промiжну (вiдносно аноду) основу у середовищi з
пiдвищеною в’язкiстю. Як промiжну основу використовували по-
лiакриламiдний гель (ПААГ), в’язкiсть середовища пiдвищували
за допомогою сахарози. Принципова схема пристрою показана на
рис. 1.
Рис. 1. Принципова схема при-
строю для електрофоретичного осад-
ження вiрусів рослин із освітлених
рослинних екстрактів
166 167
Пристрiй складається з двох вкладених одна в одну скляних
посудин, які мають цилiндричні вiдростки (1, 2). Посудини
виконують роль електрофоретичних колонок та резервуарiв
електродного буфера. Зовнiшня посудина знизу щiльно закривається
гумовою пробкою (3) з капiлярним краном (4). У цилiндричному
вiдростку внутрiшньої посудини попередньо формується стовпчик
10% ПААГ (5). В зовнiшню i внутрiшню посудину заливається
електродний 0,005 М трис-глiциновий буфер, рН 8,3 (6). Пiд
буфер через капiлярний кран за допомогою шприца обережно
нашаровується частково очищений препарат вiрусу з додаванням
10% сахарози та 1-2 крапель барвника бромфенолового синього (7).
У той же спосіб пiд зразок нашаровується 40%-ний розчин сахарози
в електродному буферi (8). Пристрiй пiдключається до джерела
живлення таким чином, щоб анод був у внутрiшнiй посудинi.
В електричному полi вiруснi частки із зони зразка (7) руха-
ються через сахарозну подушку (8) спочатку донизу, а потiм у на-
прямку аноду (суцiльна стрiлка). На шляху свого руху вони зустрi-
чають перепону у виглядi стовпчика ПААГ (5). 10%-ний ПААГ не
впливає на електропровiднiсть системи, вiн проникний для бiлкiв
та дрiбнiших молекул i непроникний для вiрусiв. Внаслiдок цього
вiруси осiдають на поверхні гелю подiбно до того, як вони осiдають
на дно пробiрки при ультрацентрифугуваннi. ПААГ має дуже низь-
кий показник електроосмосу, а тому не спостерігалося зустрiчного
руху води – вiд аноду до катоду (ефект Бете-Торопова), внаслідок
чого електрофоретичне осадження вiрусiв на ПААГ відбувається
активніше, нiж при використанні напiвпроникних мембран [4].
Вiруснi частки на поверхнi ПААГ додатково пiддаються дiї
електродiалiзу, в результатi чого видаляються низькомолекулярнi
домiшки рослинного походження, якi мають негативний заряд.
Електрично нейтральнi домiшки з високою плавучою щiльнiстю
пiд дiєю сили тяжіння проходять через сахарозну подушку i осiда-
ють на гумовiй пробцi (пунктирна стрiлка). Вiдносно легшi домiш-
ки затримуються в подушцi або зонi зразка. Позитивно заряджені
домiшки мiгрують в електродний буфер та осiдають на катодi. В
результатi частково очищений препарат вiрусу звiльняється вiд
бiльшої частини домiшок.
По закiнченні процесу, про що свiдчить вихiд барвника в
анодний буферний резервуар, пристрiй знеструмлюють, розбирають
i ресуспендують осад з нижнього кiнця стовпчика ПААГ. Оскільки
168 169
осад ресуспендують у невеликому об’ємi буферного розчину, вiдбу-
вається концентрування вiрусу. Звичайно при промиваннi гелевого
стовпчика не всi вiруснi частки переходять у ресуспендуючий роз-
чин, оскiльки частина з них утворює малорозчиннi комплекси за
рахунок гiдрофобних та iнших нековалентних зв’язкiв. Розчиннiсть
осаду можна пiдвищити, використовуючи такі фактори впливу на
ПААГ, як детергенти і температура. Однак наявнiсть ПААГ в анти-
генi не перешкоджає одержанню якiсних дiагностичних сироваток,
оскільки ПААГ може слугувати ад’ювантом при iмунiзації тварин
[2]. Тому, крiм промивання гелю, доцiльно відбирати поверхневий
його шар i, пiсля подрiбнення, використовувати для пiдшкiрних та
внутрiшньом’язових ін’єкцій.
Важливою перевагою електрофоретичного осадження вi-
русiв рослин є можливiсть його постiйного контролю і активного
впливу на процес, змiнюючи товщину сахарозної подушки, напру-
гу, силу струму, полярність, температуру та iнші чинники. Залежно
вiд об’єму частково очищеного вiрусного препарату, враховуючи
властивості кожного конкретного вiрусу, процес електрофоретич-
ного осадження при напрузi 200-600 В i силi струму до 10 мА може
тривати вiд 3 до 8 годин. Тому необхiдно забезпечити циркуляцію
електродного буфера мiж анодним та катодним резервуарами для
запобiгання змiни його рН.
Таким чином, електрофоретичне осадження вiрусiв рослин
можна розглядати як перспективний метод, який доповнює хрома-
тографiчні та седиментацiйні методи. Враховуючи те, що для до-
слідження деяких вiрусiв традицiйнi методи не прийнятнi, розро-
блений нами метод може стати реальною альтернативою. Як його
застосовувати – чи як допомiжний чи самостiйний – може залежати
також вiд наявностi в частково очищеному вiрусному препаратi фе-
нольних сполук, пектинiв та iнших домiшок, якi можуть впливати
на процес осадження.
Шляхом електрофоретичного осадження Х-вірусу картоплі
та вірусу аукуба мозаїки картоплі одержанi препарати з виходом
вiрусу до 300мг/кг та 280 мг/кг, вiдповiдно. Спiввiдношення Д260/280
для препарату ВАМК дорівнювало 1,2, для препарату ХВК – 1,3, що
свiдчить про досить високу ефективнiсть використаного методу.
Отже запропонований метод електрофоретичного осадження
вірусів рослин із освітлених рослинних екстрактів доповнює мето-
дичний арсенал фітовiрусологiї.
168 169
1. Дейнека Ю.Ф., Ульберг З.Ф., Эстрела-Льопис В.Р. Элек-
трофоретическое осаждение металлополимеров. – К.: Наук. думка,
1976. – 165 с.
2. Кэтти Д., Райкундалиа Ч. Иммуноферментный анализ
// Антитела. Методы. Кн. 1 / Под ред. Д. Кэтти; Пер. с англ. – М.:
Мир, 1991. – С. 33-76.
3. Мэтьюз Р. Вирусы растений / Под ред. Атабекова И.Г.; Пер.
с англ. – М.: Мир, 1973. – С. 37-52.
4. Тихо ненко Т.И. Методические основы биохимии вирусов.
– М.: Медицина, 1973. – С. 81-84.
5. Шелудько Ю.М. Фітовірусологія. – К.:Вища шк., 1970.
– 271 с.
6. Van Regenmortel M.H.V., Purification of plant viruses by zone
electrophoresis // Virology. – 1964. – Vol. 23. – P. 495-503.
7. Пат. 64377А Україна, МПК7 C 12 N 7/00. Пристрiй для
препаративного електрофорезу в гранульованому середовищi /
О.Є. Мамчур, О.О. Дмитрук, М.М. Зарицький // Заявл. 22.05.2003;
Опубл. 16.02.2004, Бюл. No 2.
170 171
МЕТОД ПОЛУЧЕНИЯ ЧИСТЫХ ПРЕПАРАТОВ ВИРУСОВ
РАСТЕНИЙ
Мамчур А.Е., Дмитрук О.А., Коломиец Л.П., Зарицкий Н.М.
Институт сельскохозяйственной микробиологии УААН, г. Чернигов
Предлагается метод концентрирования и конечной очистки виру-
сов растений из осветленной вирусной суспензии путем електро-
форетического осаждения через сахарозную подушку на полиакри-
ламидный гель. Метод может использоваться в дополнение к хро-
матографическим и седиментационным методам, а в отдельных
случаях и самостоятельно.
Ключевые слова: електрофорез, сахарозная подушка, полиакрила-
мидный гель, вирусный антиген.
THE METHOD FOR THE OBTAINING PURE PREPARATIONS
OF THE PLANT VIRUSES
Mamchur A.E., Dmitruk О.A., Kolomietz L.P., Zaritsky M.M.
Institute of Agricultural Microbiology, UAAS, Chernihiv
It has been proposed the method for the concentration and final purifyi-
ng of plant viruses from cleared virus suspension. This method includes
the virus electpophoretic precipitation through the sucrose pillow on the
polyacrylamide gel layer. It may use in addition to the chromatograph-
ically and sedimentatical methods and independently in the individual
cases.
Key words: electpophoresis, sucrose pillow, polyacrylamide gel, virus
antigen.
Titul_1.pdf
Page 1
|
| id | oai:ojs2.smic.in.ua:article-484 |
| institution | Agriciltural microbiology |
| keywords_txt_mv | keywords |
| language | Ukrainian |
| last_indexed | 2026-07-23T01:15:21Z |
| publishDate | 2006 |
| publisher | Institute of Agrocultural Microbiology and Agro-industrial Manufacture of NAAS of Ukraine |
| record_format | ojs |
| resource_txt_mv | smicinua/f8/a6948e09b2744d2dbb89942e0c6742f8.pdf |
| spelling | oai:ojs2.smic.in.ua:article-4842026-07-22T10:10:51Z THE METHOD FOR THE OBTAINING PURE PREPARATIONS OF THE PLANT VIRUSES МЕТОД ОТРИМАННЯ ОЧИЩЕНИХ ПРЕПАРАТІВ ВІРУСІВ РОСЛИН Мамчур , О.Є. Дмитрук , О.О. Коломiєць , Л.П. Зарицький , М.М. electpophoresis, sucrose pillow, polyacrylamide gel, virus antigen електрофорез, сахарозна подушка, полiакриламiдний гель, вiрусний антиген It has been proposed the method for the concentration and final purifying of plant viruses from cleared virus suspension. This method includes the virus electpophoretic precipitation through the sucrose pillow on the polyacrylamide gel layer. It may use in addition to the chromatographically and sedimentatical methods and independently in the individual cases. Пропонується метод концентрування та остаточного очищення вiрусiв рослин з освітленої вірусної суспензії шляхом електрофоретичного осадження через сахарозну подушку на полiакриламiдний гель. Метод може використовуватись на доповнювнення хроматографiчних та седиментацiйних методів, а в окремих випадках і самостійно. Institute of Agrocultural Microbiology and Agro-industrial Manufacture of NAAS of Ukraine 2006-08-10 Article Article Рецензована Стаття application/pdf https://smic.in.ua/index.php/journal/article/view/484 10.35868/1997-3004.3.165-170 Agricultural microbiology; Vol. 3 (2005): Agriciltural microbiology; 165-170 Сільськогосподарська мікробіологія; Том 3 (2005): Сільськогосподарська мікробіологія; 165-170 1997-3004 10.35868/1997-3004.3 uk https://smic.in.ua/index.php/journal/article/view/484/558 Авторське право (c) 2006 A.E. Mamchur , О.A. Dmitruk , L.P. Kolomietz , M.M. Zaritsky https://creativecommons.org/licenses/by/4.0 |
| spellingShingle | електрофорез сахарозна подушка полiакриламiдний гель вiрусний антиген Мамчур , О.Є. Дмитрук , О.О. Коломiєць , Л.П. Зарицький , М.М. МЕТОД ОТРИМАННЯ ОЧИЩЕНИХ ПРЕПАРАТІВ ВІРУСІВ РОСЛИН |
| title | МЕТОД ОТРИМАННЯ ОЧИЩЕНИХ ПРЕПАРАТІВ ВІРУСІВ РОСЛИН |
| title_alt | THE METHOD FOR THE OBTAINING PURE PREPARATIONS OF THE PLANT VIRUSES |
| title_full | МЕТОД ОТРИМАННЯ ОЧИЩЕНИХ ПРЕПАРАТІВ ВІРУСІВ РОСЛИН |
| title_fullStr | МЕТОД ОТРИМАННЯ ОЧИЩЕНИХ ПРЕПАРАТІВ ВІРУСІВ РОСЛИН |
| title_full_unstemmed | МЕТОД ОТРИМАННЯ ОЧИЩЕНИХ ПРЕПАРАТІВ ВІРУСІВ РОСЛИН |
| title_short | МЕТОД ОТРИМАННЯ ОЧИЩЕНИХ ПРЕПАРАТІВ ВІРУСІВ РОСЛИН |
| title_sort | метод отримання очищених препаратів вірусів рослин |
| topic | електрофорез сахарозна подушка полiакриламiдний гель вiрусний антиген |
| topic_facet | electpophoresis sucrose pillow polyacrylamide gel virus antigen електрофорез сахарозна подушка полiакриламiдний гель вiрусний антиген |
| url | https://smic.in.ua/index.php/journal/article/view/484 |
| work_keys_str_mv | AT mamčuroê themethodfortheobtainingpurepreparationsoftheplantviruses AT dmitrukoo themethodfortheobtainingpurepreparationsoftheplantviruses AT kolomiêcʹlp themethodfortheobtainingpurepreparationsoftheplantviruses AT zaricʹkijmm themethodfortheobtainingpurepreparationsoftheplantviruses AT mamčuroê metodotrimannâočiŝenihpreparatívvírusívroslin AT dmitrukoo metodotrimannâočiŝenihpreparatívvírusívroslin AT kolomiêcʹlp metodotrimannâočiŝenihpreparatívvírusívroslin AT zaricʹkijmm metodotrimannâočiŝenihpreparatívvírusívroslin AT mamčuroê methodfortheobtainingpurepreparationsoftheplantviruses AT dmitrukoo methodfortheobtainingpurepreparationsoftheplantviruses AT kolomiêcʹlp methodfortheobtainingpurepreparationsoftheplantviruses AT zaricʹkijmm methodfortheobtainingpurepreparationsoftheplantviruses |