Generation of HEK-293 stable cell lines with disrupted expression of ribosomal protein S6 kinase (S6K1) isoforms using the CRISPR/Cas9 genome editing system
Aim. To generate HEK-293 cells with disrupted expression of S6K1 isoforms: p85, p70 and p60. Methods. CRISPR/Cas9 gene editing, Western blotting, immunofluorescent analysis, RT-PCR analysis, MTT assay, scratch assay. Results. Several clones of HEK-293 cells with a complete loss of p85/p70/p60-S6K1 p...
Збережено в:
| Опубліковано в: : | Вiopolymers and Cell |
|---|---|
| Дата: | 2017 |
| Автори: | , , , |
| Формат: | Стаття |
| Мова: | English |
| Опубліковано: |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України
2017
|
| Теми: | |
| Онлайн доступ: | https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152987 |
| Теги: |
Додати тег
Немає тегів, Будьте першим, хто поставить тег для цього запису!
|
| Назва журналу: | Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| Цитувати: | Generation of HEK-293 stable cell lines with disrupted expression of ribosomal protein S6 kinase (S6K1) isoforms using the CRISPR/Cas9 genome editing system / I.V. Zaiets, A.S. Sivchenko, A.I. Khoruzhenko, V.V. Filonenko // Вiopolymers and Cell. — 2017. — Т. 33, № 5. — С. 356-366. — Бібліогр.: 39 назв. — англ. |
Репозитарії
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine| id |
nasplib_isofts_kiev_ua-123456789-152987 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
Zaiets, I.V. Sivchenko, A.S. Khoruzhenko, A.I. Filonenko, V.V. 2019-06-13T12:04:15Z 2019-06-13T12:04:15Z 2017 Generation of HEK-293 stable cell lines with disrupted expression of ribosomal protein S6 kinase (S6K1) isoforms using the CRISPR/Cas9 genome editing system / I.V. Zaiets, A.S. Sivchenko, A.I. Khoruzhenko, V.V. Filonenko // Вiopolymers and Cell. — 2017. — Т. 33, № 5. — С. 356-366. — Бібліогр.: 39 назв. — англ. 0233-7657 DOI: http://dx.doi.org/10.7124/bc.00095F https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152987 576.322 577.22 Aim. To generate HEK-293 cells with disrupted expression of S6K1 isoforms: p85, p70 and p60. Methods. CRISPR/Cas9 gene editing, Western blotting, immunofluorescent analysis, RT-PCR analysis, MTT assay, scratch assay. Results. Several clones of HEK-293 cells with a complete loss of p85/p70/p60-S6K1 protein expression were generated. The effects of p85/p70/p60-S6K1 knockout on Akt/mTORC1/S6K1 signaling and cell proliferation and migration were assessed. Conclusions. The generated cell lines can be used to study a role played by S6K1 in cell physiology and to gain more detailed insight into cellular functions of the S6K1 isoforms. The HEK-293 cells exhibit down-regulation of Akt phosphorylation on Ser473 and subsequent attenuation of cell growth rate, as well as inhibition of cell motility. Мета. Створити клітини HEK293 з порушеною експресією S6K1 ізоформ: p85, p70 і Р60. Методи. CRISPR/cas9 система редагування генома, Вестерн-блот, імунофлуоресцентний аналіз, ПЛР-аналіз, MTT тест, метод «раневої поверхні». Результати. Отримано декілька клонів клітин НЕК-293 з повною втратою експресії білка p85/p70/p60-S6K1. Було оцінено ефект нокауту p85/p70/p60-S6K1 на Akt/mTORC1/S6K1 сигналінг та клітинні проліферацію і міграцію. Висновки. Створені клітинні лінії можуть бути використані для вивчення ролі, яку відіграє S6K1 в фізіології клітини, що дозволяє отримати більш детальне уявлення про клітинні функції ізоформ S6K1. Клітини / / HEK-293 виявляють знижений рівень фосфорилювання Akt по Сер473 і подальше пригнічення швидкості клітинного росту разом з інгібуванням клітинної рухливості. Цель. Создать клетки HEK293 с нарушенной экспрессией S6K1 изоформ: p85, p70 и Р60. Методы. CRISPR/cas9 система редактирования генома, Вестерн-блот, иммунофлуоресцентный анализ, ПЦР-анализ, MTT тест, метод «раневой поверхности». Результаты. Получено несколько клонов клеток НЕК-293 с полной потерей экспрессии белка p85/p70/p60-S6K1. Была проведена оценка влияния нокаута p85/p70/p60-S6K1 на Akt/mTORC1/S6K1 сигналинг и клеточные пролиферацию и миграцию. Выводы. Созданные клеточные линии могут быть использованы для изучения роли, которую играет S6K1 в физиологии клетки и позволить получить более детальное представление о клеточных функциях изоформ S6K1. Клетки / / HEK-293 показывают пониженный уровень фосфорилирования Akt по Сер473 и дальнейшее угнетение скорости клеточного роста вместе с ингибированием клеточной подвижности. This work was supported in part by a fellowship from Boehringer Ingelheim Fonds (BIF) awarded to Igor Zaiets. en Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Вiopolymers and Cell Molecular and Cell Biotechnologies Generation of HEK-293 stable cell lines with disrupted expression of ribosomal protein S6 kinase (S6K1) isoforms using the CRISPR/Cas9 genome editing system Створення стабільних ліній клітин HEK-293 з порушеною експресією ізоформ кінази рибосомного білка S6 (S6K1) за допомогою системи редагування генома CRISPR/Cas9 Создание стабильных линий клеток HEK-293 с нарушенной экспрессией изоформ киназы рибосомного белка S6 (S6K1) при помощи системы редактирования генома CRISPR/Cas9 Article published earlier |
| institution |
Digital Library of Periodicals of National Academy of Sciences of Ukraine |
| collection |
DSpace DC |
| title |
Generation of HEK-293 stable cell lines with disrupted expression of ribosomal protein S6 kinase (S6K1) isoforms using the CRISPR/Cas9 genome editing system |
| spellingShingle |
Generation of HEK-293 stable cell lines with disrupted expression of ribosomal protein S6 kinase (S6K1) isoforms using the CRISPR/Cas9 genome editing system Zaiets, I.V. Sivchenko, A.S. Khoruzhenko, A.I. Filonenko, V.V. Molecular and Cell Biotechnologies |
| title_short |
Generation of HEK-293 stable cell lines with disrupted expression of ribosomal protein S6 kinase (S6K1) isoforms using the CRISPR/Cas9 genome editing system |
| title_full |
Generation of HEK-293 stable cell lines with disrupted expression of ribosomal protein S6 kinase (S6K1) isoforms using the CRISPR/Cas9 genome editing system |
| title_fullStr |
Generation of HEK-293 stable cell lines with disrupted expression of ribosomal protein S6 kinase (S6K1) isoforms using the CRISPR/Cas9 genome editing system |
| title_full_unstemmed |
Generation of HEK-293 stable cell lines with disrupted expression of ribosomal protein S6 kinase (S6K1) isoforms using the CRISPR/Cas9 genome editing system |
| title_sort |
generation of hek-293 stable cell lines with disrupted expression of ribosomal protein s6 kinase (s6k1) isoforms using the crispr/cas9 genome editing system |
| author |
Zaiets, I.V. Sivchenko, A.S. Khoruzhenko, A.I. Filonenko, V.V. |
| author_facet |
Zaiets, I.V. Sivchenko, A.S. Khoruzhenko, A.I. Filonenko, V.V. |
| topic |
Molecular and Cell Biotechnologies |
| topic_facet |
Molecular and Cell Biotechnologies |
| publishDate |
2017 |
| language |
English |
| container_title |
Вiopolymers and Cell |
| publisher |
Інститут молекулярної біології і генетики НАН України |
| format |
Article |
| title_alt |
Створення стабільних ліній клітин HEK-293 з порушеною експресією ізоформ кінази рибосомного білка S6 (S6K1) за допомогою системи редагування генома CRISPR/Cas9 Создание стабильных линий клеток HEK-293 с нарушенной экспрессией изоформ киназы рибосомного белка S6 (S6K1) при помощи системы редактирования генома CRISPR/Cas9 |
| description |
Aim. To generate HEK-293 cells with disrupted expression of S6K1 isoforms: p85, p70 and p60. Methods. CRISPR/Cas9 gene editing, Western blotting, immunofluorescent analysis, RT-PCR analysis, MTT assay, scratch assay. Results. Several clones of HEK-293 cells with a complete loss of p85/p70/p60-S6K1 protein expression were generated. The effects of p85/p70/p60-S6K1 knockout on Akt/mTORC1/S6K1 signaling and cell proliferation and migration were assessed. Conclusions. The generated cell lines can be used to study a role played by S6K1 in cell physiology and to gain more detailed insight into cellular functions of the S6K1 isoforms. The HEK-293 cells exhibit down-regulation of Akt phosphorylation on Ser473 and subsequent attenuation of cell growth rate, as well as inhibition of cell motility.
Мета. Створити клітини HEK293 з порушеною експресією S6K1 ізоформ: p85, p70 і Р60. Методи. CRISPR/cas9 система редагування генома, Вестерн-блот, імунофлуоресцентний аналіз, ПЛР-аналіз, MTT тест, метод «раневої поверхні». Результати. Отримано декілька клонів клітин НЕК-293 з повною втратою експресії білка p85/p70/p60-S6K1. Було оцінено ефект нокауту p85/p70/p60-S6K1 на Akt/mTORC1/S6K1 сигналінг та клітинні проліферацію і міграцію. Висновки. Створені клітинні лінії можуть бути використані для вивчення ролі, яку відіграє S6K1 в фізіології клітини, що дозволяє отримати більш детальне уявлення про клітинні функції ізоформ S6K1. Клітини / / HEK-293 виявляють знижений рівень фосфорилювання Akt по Сер473 і подальше пригнічення швидкості клітинного росту разом з інгібуванням клітинної рухливості.
Цель. Создать клетки HEK293 с нарушенной экспрессией S6K1 изоформ: p85, p70 и Р60. Методы. CRISPR/cas9 система редактирования генома, Вестерн-блот, иммунофлуоресцентный анализ, ПЦР-анализ, MTT тест, метод «раневой поверхности». Результаты. Получено несколько клонов клеток НЕК-293 с полной потерей экспрессии белка p85/p70/p60-S6K1. Была проведена оценка влияния нокаута p85/p70/p60-S6K1 на Akt/mTORC1/S6K1 сигналинг и клеточные пролиферацию и миграцию. Выводы. Созданные клеточные линии могут быть использованы для изучения роли, которую играет S6K1 в физиологии клетки и позволить получить более детальное представление о клеточных функциях изоформ S6K1. Клетки / / HEK-293 показывают пониженный уровень фосфорилирования Akt по Сер473 и дальнейшее угнетение скорости клеточного роста вместе с ингибированием клеточной подвижности.
|
| issn |
0233-7657 |
| url |
https://nasplib.isofts.kiev.ua/handle/123456789/152987 |
| citation_txt |
Generation of HEK-293 stable cell lines with disrupted expression of ribosomal protein S6 kinase (S6K1) isoforms using the CRISPR/Cas9 genome editing system / I.V. Zaiets, A.S. Sivchenko, A.I. Khoruzhenko, V.V. Filonenko // Вiopolymers and Cell. — 2017. — Т. 33, № 5. — С. 356-366. — Бібліогр.: 39 назв. — англ. |
| work_keys_str_mv |
AT zaietsiv generationofhek293stablecelllineswithdisruptedexpressionofribosomalproteins6kinases6k1isoformsusingthecrisprcas9genomeeditingsystem AT sivchenkoas generationofhek293stablecelllineswithdisruptedexpressionofribosomalproteins6kinases6k1isoformsusingthecrisprcas9genomeeditingsystem AT khoruzhenkoai generationofhek293stablecelllineswithdisruptedexpressionofribosomalproteins6kinases6k1isoformsusingthecrisprcas9genomeeditingsystem AT filonenkovv generationofhek293stablecelllineswithdisruptedexpressionofribosomalproteins6kinases6k1isoformsusingthecrisprcas9genomeeditingsystem AT zaietsiv stvorennâstabílʹnihlíníiklítinhek293zporušenoûekspresíêûízoformkínaziribosomnogobílkas6s6k1zadopomogoûsistemiredaguvannâgenomacrisprcas9 AT sivchenkoas stvorennâstabílʹnihlíníiklítinhek293zporušenoûekspresíêûízoformkínaziribosomnogobílkas6s6k1zadopomogoûsistemiredaguvannâgenomacrisprcas9 AT khoruzhenkoai stvorennâstabílʹnihlíníiklítinhek293zporušenoûekspresíêûízoformkínaziribosomnogobílkas6s6k1zadopomogoûsistemiredaguvannâgenomacrisprcas9 AT filonenkovv stvorennâstabílʹnihlíníiklítinhek293zporušenoûekspresíêûízoformkínaziribosomnogobílkas6s6k1zadopomogoûsistemiredaguvannâgenomacrisprcas9 AT zaietsiv sozdaniestabilʹnyhliniikletokhek293snarušennoiékspressieiizoformkinazyribosomnogobelkas6s6k1pripomoŝisistemyredaktirovaniâgenomacrisprcas9 AT sivchenkoas sozdaniestabilʹnyhliniikletokhek293snarušennoiékspressieiizoformkinazyribosomnogobelkas6s6k1pripomoŝisistemyredaktirovaniâgenomacrisprcas9 AT khoruzhenkoai sozdaniestabilʹnyhliniikletokhek293snarušennoiékspressieiizoformkinazyribosomnogobelkas6s6k1pripomoŝisistemyredaktirovaniâgenomacrisprcas9 AT filonenkovv sozdaniestabilʹnyhliniikletokhek293snarušennoiékspressieiizoformkinazyribosomnogobelkas6s6k1pripomoŝisistemyredaktirovaniâgenomacrisprcas9 |
| first_indexed |
2025-11-30T13:42:10Z |
| last_indexed |
2025-11-30T13:42:10Z |
| _version_ |
1850857739463426048 |